WO2015096725A1 - 端基具有亲脂性结构的线性脂肽、其制备方法及用途 - Google Patents

端基具有亲脂性结构的线性脂肽、其制备方法及用途 Download PDF

Info

Publication number
WO2015096725A1
WO2015096725A1 PCT/CN2014/094766 CN2014094766W WO2015096725A1 WO 2015096725 A1 WO2015096725 A1 WO 2015096725A1 CN 2014094766 W CN2014094766 W CN 2014094766W WO 2015096725 A1 WO2015096725 A1 WO 2015096725A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
pam
lipopeptide compound
cancer
radiation
day
Prior art date
Application number
PCT/CN2014/094766
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
刘克良
韩寒
葛常辉
周宁
许笑宇
孟庆斌
孙芳芳
王文龙
田洋
Original Assignee
中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所
中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所, 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 filed Critical 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所
Publication of WO2015096725A1 publication Critical patent/WO2015096725A1/zh

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/07—Tetrapeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/542—Carboxylic acids, e.g. a fatty acid or an amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/543—Lipids, e.g. triglycerides; Polyamines, e.g. spermine or spermidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/16—Emollients or protectives, e.g. against radiation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1019—Tetrapeptides with the first amino acid being basic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids

Definitions

  • the invention relates to the field of medicinal chemistry, in particular to a linear lipopeptide having a lipophilic structure of a terminal group, a preparation method thereof and use for preparing a medicament for resisting radiation damage.
  • Radiation can cause radiation sickness such as intestinal, brain and bone marrow. Radiation-induced destruction of the lymph and hematopoietic system is the leading cause of sepsis and death. After being exposed to radiation, the body is more susceptible to infection by external microorganisms and is accompanied by progressive lymph node, spleen and bone marrow atrophy. With the increasing use of the nuclear industry and radiation applications, radiation protection has received increasing attention. Especially in the field of medicine, patients undergoing diagnosis and chemoradiotherapy are directly exposed to radiation and cannot use physical protection. About 70% of patients with malignant tumors in China need radiation therapy, and radiation therapy often produces different degrees of side effects. Some patients are forced to terminate effective treatment due to severe radiation damage.
  • the clinical use of radiation damage prevention and treatment drugs mainly include sulfur compounds, hormones, botanicals, cytokines and the like.
  • sulfur-containing compounds which mainly play a role in the prevention and treatment of radiation damage by capturing or scavenging free radicals in the body, and are usually effective before being irradiated.
  • the disadvantage of the sulfur-containing radiation protective agent is that the toxic and side effects are obvious, and the anti-radiation activity is exhibited only when the poisoning dose is reached, and the effective action time is short.
  • WR-2721 Ammonia Phosphate
  • TLRs Toll-like receptors
  • TLRs are a class of receptors that play an important role in the natural immune system. They are named after their similarity to the Toll gene and were discovered in 1997. To date, TLRs have been found to express 11 species in humans and 13 species in mice. In the innate immune response, TLRs can activate innate immune responses by identifying pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) such as lipopolysaccharide (LPS), lipoprotein, and pathogenic microbial genetic material nucleic acids. .
  • PAMPs pathogen-associated molecular patterns
  • CBLB502 is a polypeptide (protein) drug derived from a part of the Salmonella flagellin. The substance selectively interacts with TLR5 on the cell surface. As a Toll-like receptor agonist, CBLB502 activates the TLR signaling pathway, activates downstream NF-KB nuclear transcription factors, and promotes the expression of immune-related cytokines. Burdelya et al. found that CBLB502 can protect the blood system and gastrointestinal system of rats and rhesus monkeys from damage and significantly improve their survival before the rats and rhesus monkeys receive systemic and lethal radiation. rate.
  • Lipoproteins are one of the major components of bacterial cell walls and they are a natural class of TLRs agonists. Although the lipoproteins of different species have no sequence homology, they have an Acyl-Dhc(Acyl) 2 structure at the N-terminus, as shown in the following formula, wherein Acyl represents a long-chain fatty acyl group.
  • CBLB612 (shown below) is another radiation damage protectant developed by Cleveland Corporation of the United States, which is structurally a typical lipopeptide compound. As an effective hematopoietic stem cell mobilizer, CBLB612 can accelerate the process of chemoradiotherapy and bone marrow donation during bone marrow transplantation. The recovery of hematopoietic function is expected to develop into a new type of radiation damage protection agent.
  • CBLB502 and CBLB612 are Toll-like receptor agonists. Compared with existing anti-radiation-injured drugs, CBLB502 and CBLB612 have novel mechanism, definite curative effect and low toxic and side effects, indicating the development of anti-radiation-damaging drugs targeting Toll-like receptors. Feasibility and effectiveness. However, CBLB502 is a protein drug that is harsh in terms of production, storage and use. Although CBLB612 is a decapeptide, the solubility of the compound is poor.
  • the present invention provides linear lipopeptides having a lipophilic structure of terminal groups, which are simpler in structure than CBLB612, or superior to CBLB612 in anti-radiation damage activity, and further enhance lipopeptides by introducing hydrophobic amino acids into the polypeptide sequence. Lipophilic.
  • the invention specifically includes the following aspects:
  • a first aspect of the invention relates to a lipopeptide compound which is linked by a lipophilic structural unit to a linear polypeptide chain via an amide bond, the lipophilic structural unit being located at the N-terminus or C-terminus of the linear polypeptide chain, the structure of which is I or Formula II:
  • FM represents a lipophilic structural unit
  • a lipopeptide compound according to any one of the first aspects of the invention, wherein the lipophilic structure The element (FM) is selected from the group consisting of Formula III to Formula VI, palmitic acid (acyl) and myristic acid (acyl).
  • R represents H or a linear alkanoyl or amino (acid) acyl group having 5 to 20 carbons
  • C 15 H 31 CO represents palmitoyl (Pam), and the configuration of the two chiral carbons is R, R.
  • a compound of the formula III can form a lipopeptide having a lipophilic structure (FM) at the N-terminus by forming an amide bond at the N-terminal amino group of the peptide chain (PC) with a carboxyl group thereof;
  • the compound of the formula III can form a lipopeptide having a lipophilic structure (FM) at the C-terminus by forming an amide bond between its amino group and the carboxyl group at the C-terminus of the peptide chain (PC).
  • FM lipophilic structure
  • the compound of the formula IV to formula VI forms an amide bond with an amino group at the N-terminus of the peptide chain (PC) through its carboxyl group, thereby obtaining a lipopeptide having a lipophilic structure (FM) at the N-terminus.
  • the compound of the formula IV is also represented by (CH 3 ) 3 N + Cl-CH 2 CO-Dhc(Pam) 2 .
  • the compound of the formula V is also represented by Pam-Lys (Pam).
  • the compound of the formula VI is cholesterol succinic acid monoester, which is also represented by (Cholesterol-COCH 2 CH 2 COOH).
  • C 15 H 31 CO represents palmitoyl (Pam), and the configuration of the two chiral carbons is R, R.
  • Formula VII is also represented by Dhc(Pam) 2 .
  • -CONH- in the formulae I and II is to make the connection key expression clearer, wherein -CO and NH- belong to FM and PC, or PC and FM, respectively.
  • a lipopeptide compound according to any one of the first aspects of the invention wherein the PC is selected from the group consisting of SSEESNDK (SEQ ID NO: 1), VQGEESNDK (SEQ ID NO: 2), KDNSEEGQV (SEQ ID NO: 3), SKDNSEEGQV (SEQ ID NO: 4), RRRR (SEQ ID NO: 5), KKKK (SEQ ID NO: 6), SKKKK (SEQ ID NO: 7), SSKKKK (SEQ ID NO: 8), SKSKKKK (SEQ ID NO: 9),
  • SSEESNDK SEQ ID NO: 1
  • VQGEESNDK SEQ ID NO: 2
  • KDNSEEGQV SEQ ID NO: 3
  • SKDNSEEGQV SEQ ID NO: 4
  • RRRR SEQ ID NO: 5
  • KKKK SEQ ID NO: 6
  • SKKKK SEQ ID NO: 7
  • SSKKKK SEQ ID NO: 8
  • SKSKKKK SEQ ID NO:
  • the Ahx is 6-aminocaproic acid
  • AhxA represents Ahx-A
  • A is alanine
  • Nal(2) is L- ⁇ -(2-naphthyl)- ⁇ -alanine (acid Acyl
  • Qal(3) is L-3-(3-quinolinyl)- ⁇ -alanine (acid) acyl
  • Biotin is biotin
  • K (Biotin) is L-N ⁇ -biotin lysine (acid) Acyl.
  • the PC is selected from the group consisting of
  • a lipopeptide compound according to any one of the first aspects of the invention which is selected from the group consisting of
  • a second aspect of the invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising the lipopeptide compound of any one of the first aspects of the invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier or excipient.
  • a third aspect of the invention relates to the use of the lipopeptide compound of any one of the first aspects of the invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for the manufacture of a medicament for the prevention and/or treatment of radiation-induced damage.
  • the radiation is ionizing radiation and/or ultraviolet radiation.
  • the damage is acute radiation damage and/or chronic radiation damage; preferably, the acute radiation damage is, for example, a radioactive burn; preferably, the chronic radiation
  • the damage is for example selected from the group consisting of cataracts, deformities, teratogenesis, skin cancer, lung cancer, thyroid cancer, breast cancer, bone cancer, hematopoietic disorders, such as leukemia.
  • a fourth aspect of the invention relates to the lipopeptide compound of any one of the first aspects of the invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for use in the preparation of an immune response for enhancing an organism or for preventing or treating Use in the treatment of drugs related to immune-related diseases.
  • the immune-related diseases are, for example, selected from the group consisting of HIV infection, various immune-related malignant tumors, chronic hepatitis and cirrhosis, bronchitis, bronchial asthma, tuberculosis, aplastic anemia, thrombocytopenia, and virality. Keratitis, viral conjunctivitis, allergic rhinitis, hyperthyroidism, juvenile diabetes, etc.
  • the malignant tumor is, for example, selected from the group consisting of gastric cancer, colon cancer, lung cancer, osteosarcoma, ovarian cancer, thyroid cancer, and hematopoietic tumor (such as leukemia).
  • the malignant tumor is early stage of malignancy.
  • lipopeptide compound according to any one of the first aspects of the invention may be used in combination with a chemotherapeutic drug and/or a radiation therapy when the disease is a malignant tumor.
  • the invention further relates to a vaccine adjuvant comprising the lipopeptide compound of any of the first aspects of the invention, optionally further comprising a pharmaceutically acceptable excipient and/or other vaccine excipient.
  • the invention further relates to the use of a lipopeptide compound according to any of the first aspects of the invention as a vaccine adjuvant for the preparation of a vaccine composition.
  • the invention further relates to the use of a lipopeptide compound of any of the first aspects of the invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for the manufacture of a medicament as a Toll-like receptor agonist.
  • the invention further relates to a method of preventing and/or treating radiation-induced damage comprising administering to a subject in need thereof a prophylactically and/or therapeutically effective amount of a lipopeptide compound of any of the first aspects of the invention or a pharmaceutical thereof The step of accepting the salt.
  • the radiation is ionizing radiation and/or ultraviolet radiation.
  • the damage is an acute radiation injury and/or a chronic radiation damage; preferably, the acute radiation damage is, for example, a radioactive burn; preferably, the chronic radiation damage is selected, for example, from a cataract, a deformity, a terat, a skin. Cancer, lung cancer, thyroid cancer, breast cancer, bone cancer, hematopoietic disorders, such as leukemia.
  • the invention further relates to a method of enhancing an immune response in an organism or preventing or treating an immune-related disease, the method comprising preventing and/or treating a subject in need thereof an effective amount of any one of the first aspects of the invention A step of a lipopeptide compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the immune-related diseases are, for example, selected from the group consisting of HIV infection, various immune-related malignant tumors, chronic hepatitis and cirrhosis, bronchitis, bronchial asthma, tuberculosis, aplastic anemia, thrombocytopenia, and virality. Keratitis, viral conjunctivitis, allergic rhinitis, hyperthyroidism, juvenile diabetes, etc.
  • the malignant tumor is selected from the group consisting of gastric cancer, colon cancer, lung cancer, osteosarcoma, ovarian cancer, thyroid cancer, and hematopoietic tumor (such as leukemia).
  • the malignant tumor is early stage of malignancy.
  • the lipopeptide compound of any of the first aspects of the invention may also be used in combination with a chemotherapeutic agent and/or radiation therapy when the disease is a malignant tumor.
  • the invention also relates to a method of activating a Toll-like receptor, the method comprising administering to a subject in need thereof an effective amount of a lipopeptide compound according to any one of the first aspects of the invention or any one of the second aspect of the invention The step of the pharmaceutical composition.
  • a lipopeptide compound according to any one of the first aspects of the invention for use in the prevention and/or treatment of radiation-induced damage.
  • the radiation is ionizing radiation and/or ultraviolet radiation.
  • the damage is acute radiation injury and/or chronic radiation damage;
  • the acute radiation damage is, for example, a radioactive burn;
  • the chronic radiation damage is selected, for example, from a cataract, a deformity, a teratology, a skin cancer, a lung cancer, a thyroid gland Cancer, breast cancer, bone cancer, hematopoietic disorders, such as leukemia.
  • a lipopeptide compound according to any one of the first aspects of the invention for use in enhancing an immune response of an organism or for preventing or treating an immune-related disease.
  • the immune-related diseases are, for example, selected from the group consisting of HIV infection, various immune-related malignant tumors, chronic hepatitis and cirrhosis, bronchitis, bronchial asthma, tuberculosis, Aplastic anemia, thrombocytopenia, viral keratitis, viral conjunctivitis, allergic rhinitis, hyperthyroidism, juvenile diabetes, etc.
  • the malignant tumor is selected from the group consisting of gastric cancer, colon cancer, lung cancer, osteosarcoma, ovarian cancer, thyroid cancer, and hematopoietic tumor (such as leukemia).
  • the malignant tumor is early stage of malignancy.
  • the lipopeptide compound of any of the first aspects of the invention may also be used in combination with a chemotherapeutic agent and/or radiation therapy when the disease is a malignant tumor.
  • a lipopeptide compound according to any one of the first aspects of the invention for use in activating a Toll-like receptor for use in activating a Toll-like receptor.
  • the radiation comprises ionizing radiation and/or ultraviolet radiation.
  • the damage caused by the radiation includes acute radiation damage caused by radiation, chronic radiation damage (for example, radiation damage caused by radiotherapy in a patient with malignant tumor), and the like, which may cause chronic skin damage, hematopoietic disorders, cataracts, and the like. Also included are white blood cells, lymphopenia (hematopoietic syndrome); nausea, vomiting, diarrhea (gastrointestinal syndrome); insomnia or lethargy, multiple dreams, memory loss, loss of appetite (neurological syndrome) and other symptoms.
  • the immune-related diseases include HIV infection, malignant tumors such as gastric cancer, colon cancer, lung cancer, osteosarcoma, ovarian cancer, thyroid cancer, hematopoietic tumors (such as leukemia), chronic hepatitis and cirrhosis, Bronchitis, bronchial asthma, tuberculosis, aplastic anemia, thrombocytopenia, viral keratitis, viral conjunctivitis, allergic rhinitis, hyperthyroidism, juvenile diabetes, etc.
  • malignant tumors such as gastric cancer, colon cancer, lung cancer, osteosarcoma, ovarian cancer, thyroid cancer, hematopoietic tumors (such as leukemia), chronic hepatitis and cirrhosis, Bronchitis, bronchial asthma, tuberculosis, aplastic anemia, thrombocytopenia, viral keratitis, viral conjunctivitis, allergic rhinitis, hyperthyroidism, juvenile diabetes
  • the linear alkanoyl group means C 5-20 alkyl-CO-, for example, C 10-20 alkyl-CO-, wherein the C 5-20 alkyl group or C 10-20 alkyl group Refers to a linear alkyl group having 5-20 or 10-20 carbon atoms, including, for example, undecyl, dodecyl, tridecyl, tetradecyl, etc., pentadecyl, and seventeen Alkyl and the like.
  • the amino(acid) acyl group means a natural or unnatural amino (acid) acyl group such as alanine (acid) acyl group, glutamic acid (acid) acyl group, lysine (acid) acyl group, glutamine. And a hydrazine (acid) acyl group, an aminohexanoyl (acid) acyl group, an L-3-quinoline alanine (acid) acyl group, an L-2-naphthyl alanine (acid) acyl group, and the like.
  • a natural or unnatural amino (acid) acyl group such as alanine (acid) acyl group, glutamic acid (acid) acyl group, lysine (acid) acyl group, glutamine.
  • a hydrazine (acid) acyl group an aminohexanoyl (acid) acyl group, an L-3-quinoline a
  • the pharmaceutically acceptable salt is, for example, an acid addition salt such as a hydrochloride, a hydrobromide, a sulfate, a methanesulfonate, a p-toluenesulfonate, a phosphate or an acetate. , citrate, succinate, lactate, tartrate, fumarate, malate, maleate. Salts such as sodium salts, potassium salts, magnesium salts and calcium salts may also be formed with the base, preferably acetate. Salts such as sodium salts, potassium salts, magnesium salts and calcium salts can also be formed with the bases.
  • an acid addition salt such as a hydrochloride, a hydrobromide, a sulfate, a methanesulfonate, a p-toluenesulfonate, a phosphate or an acetate.
  • the drug may be administered by intraperitoneal injection, intravenous injection, intramuscular injection or pulmonary administration.
  • composition as used herein is meant to include a product comprising specified quantities of each of the specified ingredients, as well as any product produced directly or indirectly from a specified amount of each specified combination of ingredients, as will be apparent to those skilled in the art from this disclosure.
  • “Pharmaceutical composition” has the meaning, and in some cases “composition” and “pharmaceutical composition” are used interchangeably.
  • the compositions of the present invention may contain from 0.1% by weight, or more suitably from 10% to 60% by weight of active ingredient. Where a unit dosage is included in the component, each unit preferably contains from 1 to 500 mg of the active ingredient.
  • the dosage and method of use of the compounds of the invention depend on a number of factors, including the age, weight, sex, natural health, nutritional status of the compound, the strength of the compound, the time of administration, the rate of metabolism, the severity of the condition, and
  • the subjective judgment of the treating physician may be, for example, 10-1000 ⁇ g/kg/day, 100-500 ⁇ g/kg/day.
  • the amino acid is the raw material
  • DIC/HOBT is the condensing agent
  • 25% piperidine/DMF is the Fmoc deprotecting reagent.
  • the C-terminal amino acid of the peptide chain to be synthesized is first coupled to a solid phase carrier, and then the amino acid is used as an amino component to remove the amino Fmoc protecting group, and then coupled with an excess of N-Fmoc protected amino acid to extend the peptide chain.
  • Fmoc-Cystine-OtBu is obtained by sequentially treating L-Cystine (cystine) with amino acid and carboxyl group by Fmoc and tert-butyl ester; and then reducing disulfide by zinc/acetic acid reduction.
  • L-Cystine cystine
  • Fmoc and tert-butyl ester reducing disulfide by zinc/acetic acid reduction.
  • nucleophilic ring opening with R-glycidol (Glycidol) to obtain Fmoc-Dhc-OtBu
  • palmitoylation of bishydroxyl with EDC/DMAP as condensing agent and finally removal of tert-butyl ester by TFA to obtain Fmoc-Dhc ( Pam) 2 -OH.
  • the present invention provides a class of lipopeptide compounds which not only comprise a lipopeptide having a lipophilic structure at the N-terminus, but also move the lipophilic structure from the N-terminus to the C-terminus of the peptide chain while obtaining lipophilicity.
  • a lipopeptide with a structure at the C-terminus is also moved.
  • the lipopeptide of the invention has certain anti-radiation damage protection activity and has good prospects for drug development.
  • Figure 17 shows the results of LK-SF365 activity evaluation.
  • mice survival rate that is, the survival number of mice
  • Abscissa the number of observation days after radiation
  • the dose of WR-2721 was 150 mg/kg.
  • amino acids and derivatives thereof used in the examples are commercially available or can be prepared according to methods of the literature.
  • Fmoc protected amino acid Alanine Ala
  • Asparagine Asn N Fmoc-Asn(Trt)-OH
  • Aspartic acid Asp D
  • Fmoc-Glu(OtBu)-OH Glutamate
  • Glu E Fmoc-Glu(OtBu)-OH
  • Fmoc-Cystine-OH (3.4g, 5.0mmol) was dissolved in tert-butanol (25mL), pyridine (10 mL), a mixed solution of methylene chloride (25mL) and stirring at room temperature was added dropwise POCl 3 (2.6mL), several temperature The temperature reached 40 ° C in a minute and reflux occurred, keeping the reaction solution slightly boiling, and the remaining POCl 3 was added dropwise.
  • Fmoc-Cystine-OtBu (5.75g, 7.2mmol) was dissolved in dichloromethane (44mL), cooled to 0 °C, Zn powder was added under stirring (1.88g, 29mmol) with CH 3 OH- freshly prepared concentrated HCl- concentrated H 2 SO 4 mixed solution (100:7:1, 21.76 mL) was maintained at 0 ° C for 30 min, R-Glycidol (4.8 mL, 72 mmol) was added, and the reaction was continued at 40 ° C for 3 hours, and the remaining Zn powder was removed by filtration, and the filtrate was concentrated under reduced pressure.
  • Palmitic acid (3.2 g, 12.3 mmol), DCC (2.6 g, 5.12 mmol) was dissolved in 100 ml of chloroform and stirred at 0 ° C for 1 h, then DMAP (1.4 g, 11.4 mmol) and L-Lys-O-Bzl (TosOH) 2 (3 g, 12.4 mmol) was stirred at 0 ° C for 2.5 h, then at room temperature for 20 h, filtered, washed with an appropriate amount of DCM, and the filtrate was washed with distilled water, diluted hydrochloric acid, distilled water and then NaHCO 3 A precipitate is formed when the saturated aqueous solution is washed, and then acidified with concentrated hydrochloric acid, the organic solvent is distilled off, water is added, and the precipitated white precipitate is filtered, washed with water, and dried. The compound was easy to absorb water and dried to obtain 2.74 g of a solid, and the yield was 76%.
  • 0.2 g (0.1 mmol) of wang resin with a loading of 0.5 mmol/g was weighed into a solid phase reactor, DCM was swelled for 20 minutes, solvent was removed, and Fmoc-Lys(Boc)-OH (0.23 g, 0.5 mmol) was added.
  • Fmoc protection was removed (25% piperidine/DMF solution was added, reaction was carried out for 5 minutes, the solution was removed; 25% piperidine/DMF solution was added, reaction was carried out for 25 minutes, and the solution was removed), and the resin was washed. Ninhydrin resin test: if it is positive, wash the resin; if it is negative, repeat the Fmoc protection operation.
  • Example 5 The synthesis and cleavage of the peptide resin were as in Example 4, the purification of the crude peptide and the product purity analysis conditions are shown in Table 5 of Example 5.
  • Example 5 The synthesis and cleavage of the peptide resin were as in Example 4, the purification of the crude peptide and the product purity analysis conditions are shown in Table 5 of Example 5.
  • Example 5 The synthesis and cleavage of the peptide resin were as in Example 4, the purification of the crude peptide and the product purity analysis conditions are shown in Table 5 of Example 5.
  • Example 5 The synthesis and cleavage of the peptide resin were as in Example 4, the purification of the crude peptide and the product purity analysis conditions are shown in Table 5 of Example 5.
  • Example 5 The synthesis and cleavage of the peptide resin were as in Example 4, the purification of the crude peptide and the product purity analysis conditions are shown in Table 5 of Example 5.
  • Example 5 The synthesis and cleavage of the peptide resin were as in Example 4, the purification of the crude peptide and the product purity analysis conditions are shown in Table 5 of Example 5.
  • Example 5 The synthesis and cleavage of the peptide resin were the same as in Example 4: after removing the Fmoc protection of Dhc(Pam) 2 , and then synthesizing with the betaine [(CH 3 ) 3N + Cl-CH 2 COOH] to complete the synthesis of the peptide resin.
  • the crude peptide purification and product purity analysis conditions are shown in Table 5 of Example 5.
  • the synthesis and cleavage of the peptide resin were the same as those in Example 4, purification of the crude peptide and product purity analysis. See Table 3 of Example 5; in this example, the first amino acid starting material for the resin was Fmoc-Lys(Biotin)-OH.
  • Example 5 The synthesis and cleavage of the peptide resin were as in Example 4, the purification of the crude peptide and the product purity analysis conditions are shown in Table 5 of Example 5.
  • Example 5 The synthesis and cleavage of the peptide resin were as in Example 4, the purification of the crude peptide and the product purity analysis conditions are shown in Table 5 of Example 5.
  • Example 5 The synthesis and cleavage of the peptide resin were as in Example 4, the purification of the crude peptide and the product purity analysis conditions are shown in Table 5 of Example 5.
  • Example 5 The synthesis and cleavage of the peptide resin were as in Example 4, the purification of the crude peptide and the product purity analysis conditions are shown in Table 5 of Example 5.
  • Example 5 The synthesis and cleavage of the peptide resin were as in Example 4, the purification of the crude peptide and the product purity analysis conditions are shown in Table 5 of Example 5.
  • Example 5 The synthesis and cleavage of the peptide resin were as in Example 5, the purification of the crude peptide and the product purity analysis conditions are shown in Table 5 of Example 5.
  • Example 5 The synthesis and cleavage of the peptide resin were as in Example 5, the purification of the crude peptide and the product purity analysis conditions are shown in Table 5 of Example 5.
  • Example 5 The synthesis and cleavage of the peptide resin were as in Example 5, the purification of the crude peptide and the product purity analysis conditions are shown in Table 5 of Example 5.
  • Example 5 The synthesis and cleavage of the peptide resin were the same as in Example 4.
  • the introduction of the last non-natural amino acid employed L-N-palmitoyl- ⁇ -(2-naphthyl)- ⁇ -alanine (Pam-Nal(2)-OH).
  • the crude peptide purification and product purity analysis conditions are shown in Table 5 of Example 5.
  • Example 5 The synthesis and cleavage of the peptide resin were as in Example 5, the purification of the crude peptide and the product purity analysis conditions are shown in Table 5 of Example 5.
  • Example 5 The synthesis and cleavage of the peptide resin were as in Example 5, the purification of the crude peptide and the product purity analysis conditions are shown in Table 5 of Example 5.
  • Example 5 The synthesis and cleavage of the peptide resin were as in Example 5, the purification of the crude peptide and the product purity analysis conditions are shown in Table 5 of Example 5.
  • Example 5 The synthesis and cleavage of the peptide resin were as in Example 5, the purification of the crude peptide and the product purity analysis conditions are shown in Table 5 of Example 5.
  • Example 5 The synthesis and cleavage of the peptide resin were as in Example 4, the purification of the crude peptide and the product purity analysis conditions are shown in Table 5 of Example 5.
  • Dosage 150 ⁇ g / kg; 450 ⁇ g / kg;
  • test drug 150 ⁇ g / kg; 450 ⁇ g / kg;
  • Dosing time 1 hour before irradiation
  • Mode of administration subcutaneous injection, 0.3 ml / only; diluted solution is PBS.
  • Evaluation index The survival rate of the test mice was observed within 30 days.
  • Figure 1-17 shows the comparison of mouse survival rates under 8.5 Gy irradiation.
  • Table 4-20 shows the specific numerical results of the survival rate of mice under 8.5 Gy irradiation (in order to save space, the results are not exactly the same as before, for example, if the 15th to 30th days are identical, only the 15th day and the For 30 days of results, the intermediate results are shown in one row).
  • Drug name WR2721 PBS H6101 H6101 LK-SF320 LK-SF320 dose 3mg / only 3 ⁇ g/only 9 ⁇ g / only 3 ⁇ g/only 9 ⁇ g / only Day 1 10 10 10 10 10 10 10 Day 2 10 10 9 10 10 9 Day 3 10 10 9 10 10 9 Day 4 10 10 9 10 10 9 Day 5 10 9 9 9 10 9 Day 6 10 6 9 8 10 9 Day 7 10 6 9 7 10 9 Day 8 9 5 9 7 10 9 Day 9 9 4 9 7 9 8 Day 10 9 4 9 7 9 8 Day 11 9 4 8 7 9 8
  • Drug name WR2721 PBS H6101 H6101 LK-SF340 LK-SF340 dose 3mg / only 3 ⁇ g/only 9 ⁇ g / only 3 ⁇ g/only 9 ⁇ g / only Day 1 10 10 10 10 10 10 10 Day 2 10 10 10 10 10 10 10 10 Day 3 10 10 9 10 10 10 10 Day 4 10 10 9 10 10 10 Day 5 10 9 8 10 10 10 Day 6 10 7 8 9 10 10 Day 7 10 3 8 8 10 10 Day 8 10 3 8 10 10 Day 9 10 3 7 8 10 8 Day 10 10 3 7 8 10 8 Day 11 10 3 7 8 9 6 Day 12 9 3 6 8 8 4 Day 13 9 3 6 8 8 3 Day 14 9 3 5 8 8 3 Day 15 9 2 5 8 8 3 Days 16-29 9 2 5 8 8 3 Day 30 9 2 5 8 8 3
  • Drug name WR2721 PBS H6101 H6101 LK-SF341 LK-SF341 dose 3mg / only 3 ⁇ g/only 9 ⁇ g / only 3 ⁇ g/only 9 ⁇ g / only Day 1 10 10 10 10 10 10 10 Day 2 10 10 10 10 10 10 10 10 Day 3 10 10 9 10 10 10 10 Day 4 10 10 9 10 10 10 Day 5 10 9 8 10 10 10 Day 6 10 7 8 9 10 9 Day 7 10 3 8 9 9 Day 8 10 3 8 9 8 Day 9 10 3 7 8 7 8 Day 10 10 3 7 8 5 7 Day 11 10 3 7 8 5 3 Day 12 9 3 6 8 3 2 Day 13 9 3 6 8 3 2 Day 14 9 3 5 8 3 2 Day 15 9 2 5 8 2 2 Days 16-29 9 2 5 8 2 2 Day 30 9 2 5 8 2 2 2
  • Drug name WR2721 PBS H6101 H6101 LK-SF344 LK-SF344 dose 3mg / only 3 ⁇ g/only 9 ⁇ g / only 3 ⁇ g/only 9 ⁇ g / only Day 1 10 10 10 10 10 10 10 Day 2 10 10 10 10 10 10 10 10 Day 3 10 10 9 10 10 10 10 Day 4 10 10 9 10 10 10 Day 5 10 9 8 10 10 10 Day 6 10 7 8 9 10 10 Day 7 10 3 8 8 10 10 Day 8 10 3 8 10 10 Day 9 10 3 7 8 9 8 Day 10 10 3 7 8 9 7 Day 11 10 3 7 8 8 5 Day 12 9 3 6 8 4 3 Day 13 9 3 6 8 3 3 Day 14 9 3 5 8 2 1 Day 15 9 2 5 8 2 0 Days 16-29 9 2 5 8 2 0 Day 30 9 2 5 8 2 0
  • Drug name WR2721 PBS H6101 H6101 LK-SF345 LK-SF345 dose 3mg / only 3 ⁇ g/only 9 ⁇ g / only 3 ⁇ g/only 9 ⁇ g / only Day 1 10 10 10 10 10 10 10 Day 2 10 10 10 10 10 10 10 10 Day 3 10 10 9 10 10 10 10 Day 4 10 10 9 10 10 10 Day 5 10 9 8 10 10 10 Day 6 10 7 8 9 8 10 Day 7 10 3 8 8 10 Day 8 10 3 8 8 9 Day 9 10 3 7 8 6 9 Day 10 10 3 7 8 5 9 Day 11 10 3 7 8 4 7 Day 12 9 3 6 8 3 7 Day 13 9 3 6 8 1 3 Day 14 9 3 5 8 1 3 Day 15 9 2 5 8 0 3 Days 16-29 9 2 5 8 0 3 Day 30 9 2 5 8 0 3
  • Drug name WR2721 PBS H6101 H6101 LK-SF361 LK-SF361 dose 3mg / only 3 ⁇ g/only 9 ⁇ g / only 3 ⁇ g/only 9 ⁇ g / only Day 1 10 10 10 10 10 10 10 Day 2 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 Day 3 10 10 9 10 10 9 Day 4 10 10 9 10 10 9 Day 5 10 9 8 10 7 8 Day 6 10 7 8 9 6 7 Day 7 10 3 8 3 7 Day 8 10 3 8 1 2 Day 9 10 3 7 8 0 1 Day 10 10 3 7 8 0 0 Day 11 10 3 7 8 0 0 Day 12 9 3 6 8 0 0 Day 13 9 3 6 8 0 0 Day 14 9 3 5 8 0 0 Day 15 9 2 5 8 0 0 Days 16-29 9 2 5 8 0 0 Day 30 9 2 5 8 0 0 0
  • Drug name WR2721 PBS H6101 H6101 LK-SF362 LK-SF362 dose 3mg / only 3 ⁇ g/only 9 ⁇ g / only 3 ⁇ g/only 9 ⁇ g / only Day 1 10 10 10 10 10 10 10 Day 2 10 10 10 10 10 10 10 10 Day 3 10 10 9 10 10 10 10 Day 4 10 10 9 10 10 10 Day 5 10 9 8 10 9 9 Day 6 10 7 8 9 9 6 Day 7 10 3 8 9 4 Day 8 10 3 8 8 2 Day 9 10 3 7 8 6 1 Day 10 10 3 7 8 4 0 Day 11 10 3 7 8 4 0 Day 12 9 3 6 8 4 0 Day 13 9 3 6 8 2 0 Day 14 9 3 5 8 2 0 Day 15 9 2 5 8 2 0 Days 16-29 9 2 5 8 2 0 Day 30 9 2 5 8 2 0
  • Drug name WR2721 PBS H6101 H6101 LK-SF365 LK-SF365 dose 3mg / only 3 ⁇ g/only 9 ⁇ g / only 3 ⁇ g/only 9 ⁇ g / only Day 1 10 10 10 10 10 10 10 Day 2 10 10 10 10 9 10 Day 3 10 10 9 10 8 9
  • the lipopeptides of the present invention have significant anti-radiation damage activity.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

提供了一种端基具有亲脂性结构的线性脂肽、其制备方法及其用于制备抗辐射损伤的药物的用途。所述脂肽由一个亲脂性结构单元与一条线性多肽链通过酰胺键相连，亲脂性结构单元位于线性多肽链的N-末端或C-末端。该脂肽具有显著的辐射损伤防护活性。

Description

端基具有亲脂性结构的线性脂肽、其制备方法及用途 技术领域
本发明涉及药物化学领域，具体涉及端基具有亲脂性结构的线性脂肽、其制备方法及用于制备抗辐射损伤的药物的用途。
背景技术
辐射可引起肠型、脑型和骨髓型等放射病。辐射诱发的淋巴及造血系统破坏是导致败血症和死亡的主要原因。机体受到辐射后更易受到外界微生物的感染并伴有进行性的淋巴结、脾及骨髓等组织器官萎缩。随着核工业和辐射应用的日渐广泛，辐射防护越来越受到人们的关注。特别是在医药领域，接受诊断和放化疗的患者，都是直接暴露在辐射之下，无法采用物理防护。我国约有70％恶性肿瘤患者需要放射线治疗，伴随着放射治疗经常会产生不同程度的副反应，有的病人由于放射损伤非常严重被迫终止有效的治疗。
目前，临床使用的辐射损伤防治药物主要包括含硫化合物、激素类、植物药、细胞因子等。研究最广泛和较深入的是含硫类化合物，这类药物主要通过捕获或清除体内自由基发挥辐射损伤防治作用，通常在受到辐照前使用才有效。含硫辐射防护剂的缺点是毒副作用明显，只有在达到中毒剂量时才显示出抗辐射活性，有效作用时间较短。WR-2721(氨磷汀)是目前FDA唯一批准上市的辐射损伤防护剂，即属于含硫类化合物。由于该药物发挥疗效时所需剂量接近于出现毒性的剂量，可以引起低血压、恶心、呕吐等副作用且半衰期短、价格昂贵，使其在临床上的使用受到限制。雌激素类与含硫类效价相当，但其有效剂量却为生理浓度的上千倍，长期使用副作用不易克服。细胞因子类价格昂贵，难以常温保存，还有药物普遍具有严重的副作用。中草药类疗效肯定，但系复方，有效单体的结构不明确，使其在临床上的使用受到限制。因此寻找作用机制新颖、疗效确切、低毒、质量可控的新型抗辐射药物一直是药物化 学领域的研究热点之一。
近年来，出现了以Toll样受体(Toll-like receptors，TLRs)为靶标开发辐射损伤防护药物的研究，而且取得了不错的进展。
TLRs是一类在天然免疫系统发挥重要作用的受体，因其与Toll基因的相似性而得名，发现于1997年。迄今为止，已经发现的TLRs在人类体内共表达11种，小鼠体内13种。TLRs在天然免疫应答中可通过识别病原微生物的相关分子模式(pathogen associated molecular patterns，PAMPs)如脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)、脂蛋白(lipoprotein)、病原微生物遗传物质核酸等，激活先天性免疫应答。
CBLB502是一种多肽(蛋白)药物，源于沙门氏菌鞭毛蛋白的一部分。该物质能够选择性与细胞表面的TLR5作用，作为Toll样受体激动剂，CBLB502可以激活TLR信号转导通路，启动下游的NF-KB核转录因子，促进与免疫相关的细胞因子的表达。Burdelya等人研究发现：在大鼠和恒河猴接受全身性、致死性射线照射前给予CBLB502，可以保护大鼠和恒河猴的血液系统及胃肠道系统免受损伤并显著提高他们的生存率。
脂蛋白(lipoprotein)是细菌细胞壁的主要组成成分之一，它们是一类天然的TLRs激动剂。不同种属细菌的脂蛋白虽然没有序列同源性，但它们的N-端都具有Acyl-Dhc(Acyl)2结构，如下式所示，其中Acyl表示长链脂肪酰。
Figure PCTCN2014094766-appb-000001
大量研究表明这一结构对保持脂肽的免疫调节活性至关重要。人们合成的多数N-端带有Acyl-Dhc(Acyl)2结构的脂肽，在一定程度上都保留了促有丝分裂活性。
CBLB612(如下式所示)是美国Cleveland公司在研的另一种辐射损伤保护剂，结构上属于典型的脂肽化合物。作为一种有效的造血干细胞动员剂，CBLB612可以加速放化疗过程以及骨髓移植术中骨髓捐献 者造血功能的恢复，有望发展成为一种新型辐射损伤保护剂。
Figure PCTCN2014094766-appb-000002
CBLB502与CBLB612均是Toll样受体激动剂，与现有抗辐射损伤药物相比具有作用机制新颖、疗效确切、毒副作用低等特点，显示了以Toll样受体为靶点开发抗辐射损伤药物的可行性及有效性。但CBLB502属于蛋白类药物，在生产、储存及使用方面条件较为苛刻。而CBLB612虽然是一种十肽，但该化合物的溶解性较差。
发明内容
本发明提供了端基具有亲脂性结构的线性脂肽，它们在结构上比CBLB612简单，或者在抗辐射损伤活性方面优于CBLB612，并且通过在多肽序列中引入疏水性氨基酸进一步提高了脂肽的亲脂性。本发明具体包括以下几方面：
本发明第一方面涉及一种脂肽化合物，其由一个亲脂性结构单元与一条线性多肽链通过酰胺键相连，亲脂性结构单元位于线性多肽链的N-末端或C-末端，其结构如式I或式II所示：
FM-CONH-PC-X           PC-CONH-FM-X
    式I                   式II
其中，FM表示亲脂性结构单元，
PC表示多肽链，为含有n个氨基酸残基的线性多肽，n＝2-30，所包含的氨基酸残基可以是天然或非天然氨基酸；
X＝OH或NH2，
当X＝OH时，表示脂肽化合物的C末端为羧酸形式(-COOH)；
当X＝NH2时，表示脂肽化合物的C末端为酰胺形式(-CONH2)；
或其药学上可接受的盐。
根据本发明第一方面任一项的脂肽化合物，其中所述亲脂性结构单 元(FM)选自式III～式VI、棕榈酸(酰)和肉豆蔻酸(酰)，
Figure PCTCN2014094766-appb-000003
其中
R表示H或含有5至20个碳的直链烷酰基或氨基(酸)酰基；
C15H31CO表示棕榈酰(Pam)，两个手性碳的构型组合为R，R。
在本发明中，式III化合物通过其羧基与肽链(PC)N-端的氨基形成酰胺键，可获得亲脂性结构(FM)位于N-末端的脂肽；
当R＝H时，式III化合物通过其氨基与肽链(PC)C-端的羧基形成酰胺键，可获得亲脂性结构(FM)位于C-末端的脂肽。
在本发明中，式IV～式VI化合物通过其羧基与肽链(PC)N-端的氨基形成酰胺键，从而获得亲脂性结构(FM)位于N-末端的脂肽。
在本发明中，式IV化合物也表示为(CH3)3N+Cl-CH2CO-Dhc(Pam)2。
在本发明中，式V化合物也表示为Pam-Lys(Pam)。
在本发明中，式VI化合物为胆固醇丁二酸单酯，也表示为(Cholesterol-COCH2CH2COOH)。
根据本发明第一方面任一项的脂肽化合物，式III所示的亲脂性结构单元(FM)如式VII所示：
Figure PCTCN2014094766-appb-000004
其中C15H31CO表示棕榈酰(Pam)，两个手性碳的构型组合为R，R。
在本发明中，式VII也表示为Dhc(Pam)2。
在本发明中，式I和式II中的-CONH-是为了使连接键表述更清楚，其中的-CO和NH-分别属于FM和PC、或者PC和FM。
根据本发明第一方面任一项的脂肽化合物，所述PC选自SSEESNDK(SEQ ID NO：1)、VQGEESNDK(SEQ ID NO：2)、KDNSEEGQV(SEQ ID NO：3)、SKDNSEEGQV(SEQ ID NO：4)、RRRR(SEQ ID NO：5)、KKKK(SEQ ID NO：6)、SKKKK(SEQ ID NO：7)、SSKKKK(SEQ ID NO：8)、SKSKKKK(SEQ ID NO：9)、SKSSNA(SEQ ID NO：10)、SYEESYDYK(SEQ ID NO：11)和SSYEESYDYK(SEQ ID NO：12)中的一种或几种，在上述多肽的N端和/或C端可以连接或不连接一个或多个小分子化合物，所述小分子化合物为疏水性的天然或非天然氨基酸或其它疏水性分子及其组合，例如Qal(3)、AhxA、Ahx、β-Ala、Nal(2)、Biotin。
在本发明中，所述Ahx为6-氨基己酸，AhxA表示Ahx-A，其中A是丙氨酸，Nal(2)为L-β-(2-萘基)-α-丙氨(酸)酰，Qal(3)为L-3-(3-喹啉基)-α-丙氨(酸)酰，Biotin为生物素，K(Biotin)为L-Nε-生物素赖氨(酸)酰。
在本发明的具体实施方案中，所述PC选自：
Qal(3)-SSEESNDK-OH；
VQGEESNDK；
AhxA-VQGEESNDK；
Ahx-VQGEESNDK；
β-Ala-VQGEESNDK；
Nal(2)-VQGEESNDK；
KDNSEEGQV；
SKKKK(Biotin)；
RRRR；
KKKK；
SKKKK；
SSKKKK；
SK-SKKKK；
SYEESYDYK；
SSYEESYDYK；
SKSSNA。
根据本发明第一方面任一项的脂肽化合物，其选自：
Dhc(Pam)2-Qal(3)-SSEESNDK-OH(LK-SF307)；
Dhc(Pam)2-Ahx-A-VQGEESNDK-OH(LK-SF308)；
Dhc(Pam)2-Ahx-VQGEESNDK-OH(LK-SF309)；
Dhc(Pam)2-Ahx-β-Ala-VQGEESNDK-OH(LK-SF311)；
Cholesterol-OCOCH2CH2CO-VQGEESNDK-OH(LK-SF315)；
KDNSEEGQV-Dhc(Pam)2-OH(LK-SF317)；
VQGEESNDK-Dhc(Pam)2OH(LK-SF318)；
(CH3)3N+Cl-CH2CO-Dhc(Pam)2-VQGEESNDK-OH(LK-SF320)；
Dhc(Pam)2-SKKKK(Biotin)-OH(LK-SF329)；
Dhc(Pam)2-RRRR-NH2(LK-SF330)；
Cholesterol-OCOCH2CH2CO-SKKKK-OH(LK-SF339)；
Cholesterol-OCOCH2CH2CO-S-SKKKK-OH(LK-SF340)；
Pam-Lys(Pam)-S-SKKKK-OH(LK-SF341)；
Cholesterol-OCOCH2CH2CO-SK-SKKKK-OH(LK-SF342)；
Pam-Lys(Pam)-SKKKK-OH(LK-SF343)；
Cholesterol-OCOCH2CH2CO-SYEESYDYK-NH2(LK-SF344)；
Pam-SYEESYDYK-NH2(LK-SF345)；
Cholesterol-OCOCH2CH2CO-S-SYEESYDYK-NH2(LK-SF346)；
Pam-Nal(2)-VQGEESNDK-OH(LK-SF353)；
Cholesterol-OCOCH2CH2CO-SKSSNA-NH2(LK-SF356)；
Pam-KDNSEEGQV-NH2(LK-SF361)；
Cholesterol-OCOCH2CH2CO-KDNSEEGQV-NH2(LK-SF362)；
Dhc(Pam)2-S-KDNSEEGQV-NH2(LK-SF365)；
Dhc(Pam)2-KKKK-OH(LK-SF370)。
本发明第二方面涉及药物组合物，其含有本发明第一方面任一项的脂肽化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明第三方面涉及本发明第一方面任一项的脂肽化合物或其药学上可接受的盐在制备用于预防和/或治疗辐射引起的损伤的药物中的用途。
根据本发明第三方面任一项所述的用途，其中，所述辐射为电离辐射和/或紫外线辐射。
根据本发明第三方面任一项所述的用途，其中，所述损伤为急性放射性损伤和/或慢性放射性损伤；优选地，所述急性放射性损伤例如为放射性烧伤；优选地，所述慢性放射性损伤例如选自白内障、畸形、畸胎、皮肤癌、肺癌、甲状腺癌、乳腺癌、骨癌、造血障碍，例如白血病。
本发明第四方面涉及本发明第一方面任一项的脂肽化合物或其药学上可接受的盐在制备用于增强生物体的免疫应答或者用于预防或治 疗与免疫相关的疾病的药物中的用途。
具体地，所述与免疫相关的疾病例如选自HIV感染、各种与免疫相关的恶性肿瘤、慢性肝炎及肝硬化、支气管炎、支气管哮喘、肺结核、再生障碍性贫血、血小板减少症、病毒性角膜炎、病毒性结膜炎、过敏性鼻炎、甲状腺机能亢进、青少年糖尿病等。
具体地，其中所述恶性肿瘤例如选自胃癌、结肠癌、肺癌、骨肉瘤、卵巢癌、甲状腺癌、造血系统肿瘤(如白血病)。优选地，所述恶性肿瘤为恶性肿瘤早期。
根据本发明第四方面任一项所述的用途，当所述疾病为恶性肿瘤时，本发明第一方面任一项的脂肽化合物还可以与化疗药物和/或放疗联用。
本发明还涉及疫苗佐剂，其包含本发明第一方面任一项的脂肽化合物，任选的，还包含药用辅料和/或其它疫苗辅料。
本发明还涉及本发明第一方面任一项的脂肽化合物作为疫苗佐剂在制备疫苗组合物中的用途。
本发明还涉及本发明第一方面任一项的脂肽化合物或其药学上可接受的盐在制备作为Toll样受体激动剂的药物中的用途。
本发明还涉及预防和/或治疗辐射引起的损伤的方法，所述方法包括给有需要的受试者预防和/或治疗有效量的本发明第一方面任一项的脂肽化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
具体地，所述辐射为电离辐射和/或紫外线辐射。
具体地，所述损伤为包括急性放射性损伤和/或慢性放射性损伤；优选地，所述急性放射性损伤例如为放射性烧伤；优选地，所述慢性放射性损伤例如选自白内障、畸形、畸胎、皮肤癌、肺癌、甲状腺癌、乳腺癌、骨癌、造血障碍，例如白血病。
本发明还涉及增强生物体的免疫应答或者预防或治疗与免疫相关的疾病的方法，所述方法包括给有需要的受试者预防和/或治疗有效量的本发明第一方面任一项的脂肽化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
具体地，所述与免疫相关的疾病例如选自HIV感染、各种与免疫相关的恶性肿瘤、慢性肝炎及肝硬化、支气管炎、支气管哮喘、肺结核、再生障碍性贫血、血小板减少症、病毒性角膜炎、病毒性结膜炎、过敏性鼻炎、甲状腺机能亢进、青少年糖尿病等。
具体地，其中所述恶性肿瘤选自胃癌、结肠癌、肺癌、骨肉瘤、卵巢癌、甲状腺癌、造血系统肿瘤(如白血病)。优选地，所述恶性肿瘤为恶性肿瘤早期。
在本发明的一个实施方案中，当所述疾病为恶性肿瘤时，本发明第一方面任一项的脂肽化合物还可以与化疗药物和/或放疗联用。
本发明还涉及一种激活Toll样受体的方法，所述方法包括向有需要的受试者给予有效量的本发明第一方面任一项的脂肽化合物或本发明第二方面任一项所述的药物组合物的步骤。
根据本发明第一方面任一项的脂肽化合物，其用于预防和/或治疗辐射引起的损伤。
具体地，其中，所述辐射为电离辐射和/或紫外线辐射。
具体地，其中，所述损伤为急性放射性损伤和/或慢性放射性损伤；所述急性放射性损伤例如为放射性烧伤；所述慢性放射性损伤例如选自白内障、畸形、畸胎、皮肤癌、肺癌、甲状腺癌、乳腺癌、骨癌、造血障碍，例如白血病。
本发明第一方面任一项的脂肽化合物，其用于增强生物体的免疫应答或者用于预防或治疗与免疫相关的疾病。
具体地，所述与免疫相关的疾病例如选自HIV感染、各种与免疫相关的恶性肿瘤、慢性肝炎及肝硬化、支气管炎、支气管哮喘、肺结核、 再生障碍性贫血、血小板减少症、病毒性角膜炎、病毒性结膜炎、过敏性鼻炎、甲状腺机能亢进、青少年糖尿病等。
具体地，其中所述恶性肿瘤选自胃癌、结肠癌、肺癌、骨肉瘤、卵巢癌、甲状腺癌、造血系统肿瘤(如白血病)。优选地，所述恶性肿瘤为恶性肿瘤早期。
在本发明的一个实施方案中，当所述疾病为恶性肿瘤时，本发明第一方面任一项的脂肽化合物还可以与化疗药物和/或放疗联用。
根据本发明第一方面任一项的脂肽化合物，其用于激活Toll样受体。
在本发明中，所述辐射包括电离辐射和/或紫外线辐射。所述辐射引起的损伤包括由辐射所引起的急性放射性损伤、慢性放射性损伤(例如恶性肿瘤患者因放疗导致的辐射损伤)等，所述慢性放射性损伤可能导致慢性皮肤损伤、造血障碍、白内障等，还包括白细胞、淋巴细胞降低(造血综合征)；恶心、呕吐、腹泻(胃肠综合征)；失眠或嗜睡、多梦、记忆力减退、食欲不振(神经综合征)等症状。
在本发明中，所述与免疫相关的疾病包括HIV感染、恶性肿瘤，例如胃癌、结肠癌、肺癌、骨肉瘤、卵巢癌、甲状腺癌、造血系统肿瘤(如白血病)、慢性肝炎及肝硬化、支气管炎、支气管哮喘、肺结核、再生障碍性贫血、血小板减少症、病毒性角膜炎、病毒性结膜炎、过敏性鼻炎、甲状腺机能亢进、青少年糖尿病等。
在本发明中，所述直链烷酰基是指C5-20烷基-CO-，例如C10-20烷基-CO-，其中所述C5-20烷基或C10-20烷基是指具有5-20个或10-20个碳原子的直链烷基，例如包括十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基等、十五烷基、十七烷基等。
在本发明中，所述氨基(酸)酰基是指天然或非天然的氨基(酸)酰基，例如丙氨(酸)酰基、谷氨(酸)酰基、赖氨(酸)酰基、谷氨酰胺、缬氨(酸)酰基、氨基己(酸)酰基、L-3-喹啉丙氨(酸)酰基、L-2-萘基丙氨(酸)酰基等。
在本发明中，所述药学上可接受的盐例如为酸加成盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、磷酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、富马酸盐、苹果酸盐、马来酸盐。也可与碱类形成盐如：钠盐、钾盐、镁盐和钙盐等，优选乙酸盐。也可与碱类形成盐如：钠盐、钾盐、镁盐和钙盐等。
在本发明中，所述药物的给药途径可以是腹腔注射、静脉注射、肌肉注射或肺局部给药。
本文所用的术语“组合物”意指包括包含指定量的各指定成分的产品，以及直接或间接从指定量的各指定成分的组合产生的任何产品，本领域技术人员根据该解释可类似明了“药物组合物”所具有的含义，并且在某些情况下“组合物”与“药物组合物”可以互换使用。依据给药方式的不同，本发明组合物中可以含有重量比0.1％，或更合适的重量比10-60％的活性组分。但组分中包含单位剂量时，每个单位最好包含1-500毫克活性成分。
另外需要指出，本发明化合物的使用剂量和使用方法取决于诸多因素，包括患者的年龄、体重、性别、自然健康状况、营养状况、化合物的活性强度、服用时间、代谢速率、病症的严重程度以及诊治医师的主观判断，例如可以为10-1000μg/kg/天，100-500μg/kg/天。
在本发明中，脂肽的合成采用标准的Fmoc固相肽合成策略：Rink amide树脂(X＝NH2的脂肽)或wang树脂(X＝OH的脂肽)做为固相载体，Fmoc保护氨基酸为原料，DIC/HOBT为缩合剂，25％哌啶/DMF为Fmoc脱保护试剂。先将所要合成的肽链的C端氨基酸偶联到固相载体上，然后以此氨基酸作为氨基组份脱去氨基Fmoc保护基后，再同过量的N-Fmoc保护氨基酸耦合来延长肽链。重复(缩合-洗涤-脱保护-洗涤-下一轮缩合)操作直至得到目标肽链。三氟乙酸进行肽链从树脂上的切割，粗肽经制备型反相HPLC纯化最终获得目标脂肽。
在本发明的具体实施方案中，用于固相肽合成中构建N(C)-端脂肪性区域的分子模块的合成如下所示：
Fmoc-Dhc(Pam)2-OH的合成路线：
Figure PCTCN2014094766-appb-000005
在本发明的具体实施方案中，以L-Cystine(胱氨酸)为原料，依次对氨基和羧基进行Fmoc及叔丁酯保护制得Fmoc-Cystine-OtBu；再经锌/乙酸还原断裂二硫键，与R-缩水甘油(Glycidol)亲核开环得到Fmoc-Dhc-OtBu；以EDC/DMAP为缩合剂对双羟基进行棕榈酰化，最后TFA脱除叔丁酯，制得Fmoc-Dhc(Pam)2-OH。
Pam-Lys(Pam)-OH的合成路线：
Figure PCTCN2014094766-appb-000006
Cholesterol-OCOCH2CH2COOH的合成：
Figure PCTCN2014094766-appb-000007
本发明提供了一类脂肽化合物，这些脂肽化合物不但包含N-端具有亲脂性结构的脂肽，而且将亲脂性结构由N-端移至肽链的C-端，同时获得了亲脂性结构位于C-端的脂肽。
本发明的脂肽具有一定的抗辐射损伤保护活性，具有良好的药物开发前景。
附图说明
图1LK-SF307活性评价结果；
图2LK-SF311活性评价结果；
图3LK-SF315活性评价结果；
图4LK-SF317活性评价结果；
图5LK-SF318活性评价结果；
图6LK-SF320活性评价结果；
图7LK-SF340活性评价结果；
图8LK-SF341活性评价结果；
图9LK-SF342活性评价结果；
图10LK-SF343活性评价结果；
图11LK-SF344活性评价结果；
图12LK-SF345活性评价结果；
图13LK-SF346活性评价结果；
图14LK-SF356活性评价结果；
图15LK-SF361活性评价结果；
图16LK-SF362活性评价结果；
图17LK-SF365活性评价结果。
以上各图的图例说明：
纵坐标：小鼠存活率，即小鼠的存活数，
横坐标：辐射后的观察天数，
WR-2721的给药剂量为150mg/kg。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领 域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
用于实施例中的氨基酸及其衍生物是市售的或可根据文献的方法制得。
全文使用下列缩写：
DCM 二氯甲烷
DMF 二甲基甲酰胺
DIC 二异丙基碳二酰亚胺
HOBT 1-羟基苯并三氮唑
DMAP N，N-二甲基-4-氨基吡啶
Diox 1，4-二氧六环
TFA 三氟乙酸
EDT 乙二硫醇
m-Cresol 间甲酚
Ahx 6-氨基己酸
Biotin D-生物素
Pam 棕榈酰(酸)
天然氨基酸缩写及其对应的用于Fmoc策略固相肽合成的原料(保护氨基酸)见下表：
表1 天然氨基酸缩写及对应的商品化Fmoc保护氨基酸
氨基酸 三字母缩写 单字母缩写 Fmoc保护氨基酸
丙氨酸 Ala A Fmoc-Ala-OH
精氨酸 Arg R Fmoc-Arg(Pbf)-OH
天冬酰胺 Asn N Fmoc-Asn(Trt)-OH
天冬氨酸 Asp D Fmoc-Glu(OtBu)-OH
谷氨酸 Glu E Fmoc-Glu(OtBu)-OH
谷氨酰胺 Gln Q Fmoc-Gln(Trt)-OH
甘氨酸 Gly G Fmoc-Gly-OH
赖氨酸 Lys K Fmoc-Lys(Boc)-OH
丝氨酸 Ser S Fmoc-Ser(OtBu)-OH
缬氨酸 Val V Fmoc-Val-OH
酪氨酸 Tyr Y Fmoc-Tyr(OBzl)-OH
1H-NMR由VarianUNITYINOVA600超导核磁共振仪测定；MS由API3000型液质联用仪测定；旋光度由PE-243B型旋光仪测定。
实施例1 N-芴甲氧羰基-R-(2，3-双棕榈酰氧基丙基)-R-半胱氨酸(Fmoc-Dhc(Pam)2-OH)的合成
1.1 Fmoc-Cystine-OH
L-Cystine(5.0g，20.8mmol)溶于Na2CO3水溶液(11g Na2CO3+200mLH2O)，加入Diox(100mL)，室温搅拌下分批加入Fmoc-Cl(10.67g，41.24mmol)，约耗时1小时，加毕，继续搅拌3.5小时，以浓HCl调反应液pH＝2-3，过滤得到的白色沉淀，压干，水洗两次，压干，P2O5/真空干燥，得白色粉末14.65g(理论产量：14.24g)，收率100％计用于下步反应；Rf＝0.28(CH2C12∶CH3OH＝8∶1)。
1.2 Fmoc-Cystine-OtBu
Fmoc-Cystine-OH(3.4g，5.0mmol)溶于叔丁醇(25mL)、吡啶(10mL)、二氯甲烷(25mL)的混合溶液，室温搅拌下滴加POCl3(2.6mL)，温度几分钟内达到40℃并出现回流，保持反应液微沸，滴加完剩余的POCl3。室温反应过夜，将反应液倒入100mL的冰水混合物中充分搅拌，减压蒸除部分反应液，余物以EtOAc×3次萃取，合并有机相，依次以饱和Na2CO3、乙酸乙酯(5∶1)纯化，得白色泡状固体，P2O5真空干燥后称重3.2g，收率：80％；Rf＝0.43(石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1)；H-NMR(CDCl3)δ：1.48(s，18H)，3.20-3.21(m，4H)，4.2(t，2H)，4.35-4.38(m，4H)，4.57-4.58(m，2H)，5.74(d，2H)，7.26-7.2(t，2H)，7.36-7.40(t，2H)，7.57-7.62(d，2H)，7.73-7.75(d，2H)。
1.3 Fmoc-Dhc-OtBu
Fmoc-Cystine-OtBu(5.75g，7.2mmol)溶于二氯甲烷(44mL)，冷却至0℃，搅拌下加入Zn粉(1.88g，29mmol)与新鲜配制的CH3OH-浓HCl-浓H2SO4混合液(100∶7∶1，21.76mL)维持0℃反应30min，加入R-Glycidol(4.8mL，72mmol)，40℃继续反应3小时，过滤除去剩余的Zn粉，滤液减压浓缩，加入适量水，以EtOAc×3次萃取，合并有机相，依次以水、饱和NaCl洗涤有机相，无水MgSO4干燥，减压蒸除溶剂，所得粗品经硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶2与3∶1)纯化，得粘稠透明液体4.6g，收率：67％，Rf＝0.50(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶2)；直接用于下步反应。
1.4 Fmoc-Dhc(Pam)2-OtBu
Fmoc-Dhc-OtBu(4.6g，9.72mmol)溶于二氯甲烷(83mL)，冰水浴冷却搅拌下依次加入EDC.HCl(4.6g，9.72mmol)、棕榈酸(5.23g，20.4mmol)、DMAP(0.42g，3.4mmol)，维持冰水浴反应30min，再室温反应4-6小时，减压蒸除二氯甲烷，加入适量水，以EtOAc×3次萃取，合并有机相，依次以稀盐酸、水、饱和NaCl洗涤有机相，无水MgSO4干燥，减压蒸除溶剂，所得粗品经硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝8∶1)纯化，得白色蜡状固体7.2g，收率：78％，Rf＝0.79(石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1)。
1.5 Fmoc-Dhc(Pam)2-OH
Fmoc-Dhc(Pam)2-OtBu(7.64g，8.05mmol)加入TFA(65mL)，室温搅拌1小时，减压蒸干TFA，加入EtOAc(25mL)加热溶解所得油状物，置冰箱冷藏室放置析晶，过滤，少量乙醚洗涤，压干，P2O5/真空干燥，得白色固体5.5g，收率：76.6％，Rf＝0.67(CH2Cl2∶CH3OH＝8∶1)；mp 84-86℃，比旋度[α]11.0°(c＝0.58，CHCl3，23℃)，H-NMR(CDCl3)δ：0.88(t，6H)，1.26(s，48H)，1.6(m，4H)，2.30(m，4H)，2.77(m，2H)，3.12(m，2H)，4.16(dd，1H)，4.40(m，2H)，4.67(t，1H)，4.35(dd，1H)，5.17(t，1H)，5.79(m，1H)，7.3(t，2H)，7.40(t，2H)，7.61(d，2H)，7.7(d，2H)。
实施例2 L-Nα，Nε-双棕榈酰赖氨酸(Pam-Lys(Pam)-OH)的合成
2.1 L-Lys-O-Bzl.2TosOH
将L-Lys-OH(10.2g，0.07mol)和对甲基苯磺酸(29.4g，0.15mol)溶解在苯甲醇(30ml，0.28mol)和苯(60ml，)中[60]，在100℃下，分水回流6h，反应液温度降至室温时，减压蒸除苯，加入约400ml乙醚，析出固体，过滤，压干固体，用甲醇(60ml)/乙醚(100ml)在-4℃下重结晶，得白色固体24.41g，收率：60％；mp 147-150℃。
2.2 Pam-Lys-(Pam)-O-Bzl
将棕榈酸(3.2g，12.3mmol)，DCC(2.6g，5.12mmol)溶于100ml氯仿中，在0℃下搅拌1h，再加入DMAP(1.4g，11.4mmol)和L-Lys-O-Bzl(TosOH)2(3g，12.4mmol)在0℃下搅拌2.5h，再在室温下反应20h，过滤，用适量的DCM洗涤，合并滤液，滤液依次用蒸馏水、稀盐酸、蒸馏水洗涤，再以NaHCO3饱和水溶液洗涤时产生沉淀，再以浓盐酸调至酸性，蒸除有机溶剂，加水，过滤析出的白色沉淀，水洗，压干。该化合物为胶状物易吸水，干燥，得固体2.74g，收率：76％。
2.3 Pam-Lys(Pam)-OH
将Pam-Lys-(Pam)-O-Bzl(1.52g，2.13mmol)溶解在43ml混合溶液氯仿/甲醇(10/7，v/v)中，再加入1N NaOH溶液3.4ml，室温下搅拌4h，加入1N HCl直至反应液pH为3。过滤，分别用蒸馏水、甲醇洗涤，压干，干燥，得固体0.75，收率：90％，TLC∶氯仿/甲醇(4/1)∶Rf＝0.45。
实施例3 丁二酸胆固醇单酯(Cholesterol-OCOCH2CH2COOH)的合成
胆固醇(33g，85.35mmol)、丁二酸酐(26g，260mmol)、DMAP(1.7g，13.93mmol)加入氯仿(300mL)、DMSO(30mL)与吡啶(170mL)的混合溶剂中，回流搅拌反应3小时，冷却至室温，加入适量氯仿稀释，有机相用水连续洗涤两次，无水硫酸镁干燥，滤除干燥剂，减压蒸出溶剂，得固体粗品，甲醇-乙腈重结晶，真空干燥，得白色固体36g，收率：71.53％，m.p.168-170℃。
实施例4 Dhc(Pam)2-VQGEESNDK-OH(CBLB612)的合成茚三酮检测试剂的配制及树脂检测：
A.0.01M氰化钾水溶液1mL于新蒸吡啶49mL中(吡啶的处理：加入茚三酮(1g/500mL)进行蒸馏)；
B.溶解2.5g茚三酮于50mL绝对无水乙醇中；
C.重蒸苯酚40g溶于绝对无水乙醇10mL中。
蘸取少量树脂于小试管中滴加A、B、C各两滴，并作空白对照，于110℃加热5min，树脂蓝色、溶液蓝色-紫色为阳性；树脂无色透明，溶液黄色为阴性。
4.1 肽树脂的合成
4.1.1 第一个氨基酸的接入
称取载量为0.5mmol/g的wang树脂0.2g(0.1mmol)放入固相反应器，DCM溶胀树脂20分钟，抽除溶剂，加入Fmoc-Lys(Boc)-OH(0.23g，0.5mmol)、HOBT(0.0675g，0.5mmol)DIC(0.063g，0.5mmol)与催化量的DMAP，加入DMF/DCM，室温反应12小时，抽除溶液，洗涤树脂(依次以DMF×3次、DCM×3次洗涤树脂)，重复上述耦合反应投料，再室温反应12小时，洗涤树脂。封闭树脂(目的：对树脂上未反应的羟基乙酰化。操作：加入乙酸酐与DIEA各0.2ml，加入DCM，反应30分钟，洗涤树脂)。脱除Fmoc保护(加入25％哌啶/DMF溶液，反应5分钟，抽除溶液；再加入25％哌啶/DMF溶液，反应25分钟，抽除溶液)，洗涤树脂。茚三酮树脂检测：如为阳性，洗涤树脂；如为阴性，重复脱除Fmoc保护操作。
4.1.2 肽链的延伸
加入Fmoc-Asp(OtBu)-OH(0.123g，0.3mmol)、HOBT(0.045g，0.33mmol)、DIC(0.04g，0.33mmol)，加入DMF/DCM，室温反应4小时，洗涤树脂，茚三酮树脂检测：如为阴性，洗涤树脂；如为阴性，重复本步骤Fmoc-Asp(OtBu)-OH的缩合。脱除Fmoc保护，洗涤树脂。茚三酮树脂检测：如为阳性，洗涤树脂；如为阴性，重复脱除Fmoc保 护操作。然后重复耦联(投料物质量比为保护氨基酸∶DIC∶HOBT∶树脂载量＝3∶3.3∶3.3∶1)、脱除Fmoc保护操作，接入第三个氨基酸Fmoc-Asn(Trt)-OH，以此循环，依次再接入Fmoc-Ser(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Dhc(Pam)2-OH。并脱除最后接入氨基酸的Fmoc保护，洗涤树脂，干燥后备用。
4.1.3肽树脂的裂解
冰浴下，将干燥好的肽树脂与新鲜配制的裂解液(TFA∶EDT∶m-Cresol∶Thioanisole∶H2O＝9∶0.25∶0.25∶0.25∶0.25)混合，投量比为：10mL裂解液/g肽树脂。维持冰浴搅拌30分钟，再室温搅拌1.5小时。减压蒸除TFA，余物加入预冷的无水乙醚，搅拌析出沉淀，过滤，固体以无水乙醚洗涤数次，直至固体粉末松散不在再粘连，弃去乙醚洗液，更换抽滤瓶，再以30％乙酸分次充分浸泡洗涤固体粉末，收集滤液，冷冻干燥，得CBLB612粗产品。
4.1.4 粗肽的纯化
CBLB612粗肽溶于最小体积的磷酸缓冲液(pH＝8)，以制备型HPLC纯化，条件如下：
表2 CBLB612纯化及分析条件
Figure PCTCN2014094766-appb-000008
Figure PCTCN2014094766-appb-000009
收集合并相应纯度的流份，减压蒸出乙腈，剩余水溶液冷冻干燥得CBLB612纯肽，纯度(HPLC)：95％，Rt＝11.3min，MS(m/z)(ESI)1658.9([M+H]+)，理论分子值：1659.03。
实施例5 Dhc(Pam)2-RRRR-NH2(LK-SF330)的合成
以Rinkamide树脂代替Wang树脂，肽树脂的合成、裂解及粗肽的纯化同实施例4。由于商品化Rinkamide树脂的氨基为Fmoc保护形式，因此树脂溶胀后，应先进行脱除Fmoc保护及洗涤树脂操作再接入第一个氨基酸。
粗肽的纯化及产品分析条件见表3
表3 其它脂肽的纯化及分析条件
Figure PCTCN2014094766-appb-000010
Figure PCTCN2014094766-appb-000011
LK-SF330：纯度(HPLC)：88％，Rt＝12.0min，MS(m/z)649.1([M+2H]2+/2)，理论分子值：1296.8。
实施例6 Dhc(Pam)2-Qal(3)-SSEESNDK-OH(LK-SF307)的合成
肽树脂的合成、裂解同实施例4，粗肽的纯化及产品纯度分析条件见实施例5表3。
LK-SF307：纯度(HPLC)：97.0％，Rt＝12.8min，MS(m/z)1747.7([M+H]+)，874.1([M+2H]2+/2)，理论分子值：1746。
实施例7 Dhc(Pam)2-Ahx-A-VQGEESNDK-OH(LK-SF308)的合成
肽树脂的合成、裂解同实施例4，粗肽的纯化及产品纯度分析条件见实施例5表3。
LK-SF308：纯度(HPLC)：97.0％，Rt＝12.8min，MS(m/z)1844.4([M+H]+)，1866.5([M+Na]+)，1882.9.5([M+K+)，理论分子值：1843.27。
实施例8 Dhc(Pam)2-Ahx-VQGEESNDK-OH(LK-SF309)的合成
肽树脂的合成、裂解同实施例4，粗肽的纯化及产品纯度分析条件见实施例5表3。
LK-SF309：纯度(HPLC)：97.3％，Rt＝12.9min，MS(m/z)1773.4([M+H]+)，1795.4([M+Na]+)，1811.7([M+K+)，理论分子值：1772.19。
实施例9 Dhc(Pam)2-Ahx-β-Ala-VQGEESNDK-OH(LK-SF311)的合成
肽树脂的合成、裂解同实施例4，粗肽的纯化及产品纯度分析条件见实施例5表3。
LK-SF311：纯度(HPLC)：99.3％，Rt＝13.0min，MS(m/z)866.1([M+2H]2+/2)，理论分子值：1730.11。
实施例10Cholesterol-OCOCH2CH2CO-VQGEESNDK-OH(LK-SF315)的合成
肽树脂的合成、裂解同实施例4，粗肽的纯化及产品纯度分析条件见实施例5表3。
LK-SF315：纯度(HPLC)：99.4％，Rt＝11.1min，MS(m/z)1474.8([M+H]+)，1796.9([M+Na]+)，1513.0([M+K+)，理论分子值：1473.71。
实施例11 KDNSEEGQV-Dhc(Pam)2-OH(LK-SF317)的合成
肽树脂的合成、裂解同实施例4，粗肽的纯化及产品纯度分析条件见实施例5表3。
LK-SF317：纯度(HPLC)：94.0％，Rt＝13.2min，MS(m/z)829.8([M+H]2+/2)，理论分子值：1657。
实施例12 VQGEESNDK-Dhc(Pam)2-OH(LK-SF318)的合成
肽树脂的合成、裂解同实施例4，粗肽的纯化及产品纯度分析条件见实施例5表3。LK-SF318：纯度(HPLC)：90.0％，Rt＝12.8min，MS(m/z)830.0([M+H]2+/2)，理论分子值：1657。
实施例13 (CH3)3N+Cl-CH2CO-Dhc(Pam)2-VQGEESNDK-OH(LK-SF320)的合成
肽树脂的合成、裂解同实施例4：脱除Dhc(Pam)2的Fmoc保护后，再与甜菜碱【(CH3)3N+Cl-CH2COOH】缩合完成肽树脂的合成。粗肽的纯化及产品纯度分析条件见实施例5表3。
LK-SF320：纯度(HPLC)：99.0％，Rt＝12.6min，MS(m/z)880.0([M+H]2+/2)，理论分子值：1759.17。
实施例14 Dhc(Pam)2-SKKKK(Biotin)-OH(LK-SF329)的合成
肽树脂的合成、裂解同实施例4，粗肽的纯化及产品纯度分析条件见实施例5表3；本例中接入树脂的第一个氨基酸原料采用Fmoc-Lys(Biotin)-OH。
LK-SF329：纯度(HPLC)：99.0％，Rt＝12.1min，MS(m/z)750.0([M+2H]2+/2)，理论分子值：1498.1。
实施例15 Cholesterol-OCOCH2CH2CO-SKKKK-OH(LK-SF339)的合成
肽树脂的合成、裂解同实施例4，粗肽的纯化及产品纯度分析条件见实施例5表3。
LK-SF339：纯度(HPLC)：98.0％，Rt＝9.8min，MS(m/z)1087.4([M+H]+)，544.4([M+2H]2+/2)，理论分子值：1086.09。
实施例16 Cholesterol-OCOCH2CH2CO-S-SKKKK-OH(LK-SF340)的合成
肽树脂的合成、裂解同实施例4，粗肽的纯化及产品纯度分析条件见实施例5表3。
LK-SF340：纯度(HPLC)：90.0％，Rt＝9.6min，MS(m/z)1174.6([M+H]+)，理论分子值：1173.60。
实施例17 Pam-Lys(Pam)-SSKKKK-OH(LK-SF341)的合成
肽树脂的合成、裂解同实施例4，粗肽的纯化及产品纯度分析条件见实施例5表3。
LK-SF341：纯度(HPLC)：99.5％，Rt＝11.1min，MS(m/z)1310.6([M+H]+)，656.4([M+2H]2+/2)，理论分子值：1309.35。
实施例18Cholesterol-OCOCH2CH2CO-SKSKKKK-OH(LK-SF342)的合成
肽树脂的合成、裂解同实施例4，粗肽的纯化及产品纯度分析条件见实施例5表3。
LK-SF342：纯度(HPLC)：99.0％，Rt＝9.3min，MS(m/z)652.1([M+2H]2+/2)，理论分子值：1301.22。
实施例19 Pam-Lys(Pam)-SKKKK-OH(LK-SF343)的合成
肽树脂的合成、裂解同实施例4，粗肽的纯化及产品纯度分析条件见实施例5表3。
LK-SF343：纯度(HPLC)：96.5％，Rt＝11.1min，MS(m/z)612.5([M+2H]2+/2)，理论分子值：1222.32。
实施例20 Cholesterol-OCOCH2CH2CO-SYEESYDYK-NH2(LK-SF344)的合成
肽树脂的合成、裂解同实施例5，粗肽的纯化及产品纯度分析条件见实施例5表3。
LK-SF344：纯度(HPLC)：99.7％，Rt＝11.5min，MS(m/z)1649.2([M+H]+)，理论分子值：1650.94。
实施例21 Pam-SYEESYDYK-NH2(LK-SF345)的合成
肽树脂的合成、裂解同实施例5，粗肽的纯化及产品纯度分析条件见实施例5表3。
LK-SF345：纯度(HPLC)：92.3％，Rt＝8.1min，MS(m/z)1421.4([M+H]+)，711.3([M+2H]2+/2)，理论分子值：1420.21。
实施例22 Cholesterol-OCOCH2CH2CO-SSYEESYDYK-NH2(LK-SF346)的合成
肽树脂的合成、裂解同实施例5，粗肽的纯化及产品纯度分析条件见实施例5表3。
LK-SF346：纯度(HPLC)：93.5％，Rt＝11.4min，MS(m/z)1736.6([M+H]+)，理论分子值：1738.02。
实施例23 Pam-Nal(2)-VQGEESNDK-OH(LK-SF353)的合成
肽树脂的合成、裂解同实施例4，最后一个非天然氨基酸的引入采用L-N-棕榈酰-β-(2-萘基)-α-丙氨酸(Pam-Nal(2)-OH)。粗肽的纯化及产品纯度分析条件见实施例5表3。
LK-SF353：纯度(HPLC)：82.0％，Rt＝10.5min，MS(m/z)1441.6([M+H]+)，理论分子值：1440.71。
实施例24 Cholesterol-OCOCH2CH2CO-SKSSNA-NH2(LK-SF356)的合成
肽树脂的合成、裂解同实施例5，粗肽的纯化及产品纯度分析条件见实施例5表3。
LK-SF351：纯度(HPLC)：96.9％，Rt＝11.5min，MS(m/z)1061.8([M+H]+)，理论分子值：1060.9。
实施例25 Pam-KDNSEEGQV-NH2(LK-SF361)的合成
肽树脂的合成、裂解同实施例5，粗肽的纯化及产品纯度分析条件见实施例5表3。
LK-SF361：纯度(HPLC)：97.0％，Rt＝8.9min，MS(m/z)1239.6([M+H]+)，理论分子值：1241.69。
实施例26 Cholesterol-OCOCH2CH2CO-KDNSEEGQV-NH2(LK-SF362)的合成
肽树脂的合成、裂解同实施例5，粗肽的纯化及产品纯度分析条件见实施例5表3。
LK-SF362：纯度(HPLC)：78.0％，Rt＝11.8min，MS(m/z)1470.8([M+H]+)，理论分子值：1472.2。
实施例27 Dhc(Pam)2-SKDNSEEGQV-NH2(LK-SF365)的合成
肽树脂的合成、裂解同实施例5，粗肽的纯化及产品纯度分析条件见实施例5表3。
LK-SF365：纯度(HPLC)：96.0％，Rt＝12.2min，MS(m/z)1743.8([M+H]+)，理论分子值：1744.5。
实施例28 Dhc(Pam)2-KKKK-OH(LK-SF370)的合成
肽树脂的合成、裂解同实施例4，粗肽的纯化及产品纯度分析条件见实施例5表3。
LK-SF370：纯度(HPLC)：99.6％，Rt＝11.8min，MS(m/z)1181.9([M+H]+)，理论分子值：1183.72。
实施例29 新结构脂肽抗辐射损伤活性评价
实验条件及评价指标：
实验动物：18-22g雄性ICR小鼠；
对照药：(1)CBLB612(H6101)
给药剂量：150μg/kg；450μg/kg；
(2)WR-2721(氨磷汀，amifostine)，大连美罗制药厂给药剂量150mg/kg；上述(1)、(2)为阳性对照。
(3)PBS，pH＝7.4，作为阴性对照。
受试药物给药剂量：150μg/kg；450μg/kg；
辐射损伤动物模型照射剂量：8.5Gy；剂量率：178cGy/min；
给药时间：照射前1小时；
给药方式：皮下注射，0.3ml/只；稀释溶液为PBS。
各实验组动物样本数：10只/组；
评价指标：观察30天内受试小鼠的存活率。
活性评价结果：
(1)8.5Gy照射下小鼠存活率对比
给药剂量：WR-2721：150mg/Kg；本发明药物150μg/Kg或450μg/Kg。
图1-17为8.5Gy照射下小鼠存活率对比。表4-20为8.5Gy照射下小鼠存活率的具体数值结果(为了节省篇幅，未显示结果与之前完全相同的天数，例如如果第15-30天完全相同，则仅显示第15天和第30天的结果，中间的结果在一行内显示)。
表4 LK-SF307给药小鼠照射后存活数
Figure PCTCN2014094766-appb-000012
Figure PCTCN2014094766-appb-000013
表5 LK-SF311给药小鼠照射后存活数
Figure PCTCN2014094766-appb-000014
表6 LK-SF315给药小鼠照射后存活数
Figure PCTCN2014094766-appb-000015
Figure PCTCN2014094766-appb-000016
表7 LK-SF317给药小鼠照射后存活数
Figure PCTCN2014094766-appb-000017
Figure PCTCN2014094766-appb-000018
表8 LK-SF318给药小鼠照射后存活数
Figure PCTCN2014094766-appb-000019
Figure PCTCN2014094766-appb-000020
表9 LK-SF320给药小鼠照射后存活数
药物名称 WR2721 PBS H6101 H6101 LK-SF320 LK-SF320
剂量 3mg/只   3μg/只 9μg/只 3μg/只 9μg/只
第1天 10 10 10 10 10 10
第2天 10 10 9 10 10 9
第3天 10 10 9 10 10 9
第4天 10 10 9 10 10 9
第5天 10 9 9 9 10 9
第6天 10 6 9 8 10 9
第7天 10 6 9 7 10 9
第8天 9 5 9 7 10 9
第9天 9 4 9 7 9 8
第10天 9 4 9 7 9 8
第11天 9 4 8 7 9 8
第12天 9 4 7 7 9 8
第13天 9 4 7 7 8 8
第14天 9 4 7 7 8 8
第15天 9 3 7 7 7 8
第16天 9 2 7 7 7 8
第17-29天 9 2 7 7 5 8
第30天 9 2 7 7 4 8
表10 LK-SF340给药小鼠照射后存活数
药物名称 WR2721 PBS H6101 H6101 LK-SF340 LK-SF340
剂量 3mg/只   3μg/只 9μg/只 3μg/只 9μg/只
第1天 10 10 10 10 10 10
第2天 10 10 10 10 10 10
第3天 10 10 9 10 10 10
第4天 10 10 9 10 10 10
第5天 10 9 8 10 10 10
第6天 10 7 8 9 10 10
第7天 10 3 8 8 10 10
第8天 10 3 8 8 10 10
第9天 10 3 7 8 10 8
第10天 10 3 7 8 10 8
第11天 10 3 7 8 9 6
第12天 9 3 6 8 8 4
第13天 9 3 6 8 8 3
第14天 9 3 5 8 8 3
第15天 9 2 5 8 8 3
第16-29天 9 2 5 8 8 3
第30天 9 2 5 8 8 3
表11 LK-SF341给药小鼠照射后存活数
药物名称 WR2721 PBS H6101 H6101 LK-SF341 LK-SF341
剂量 3mg/只   3μg/只 9μg/只 3μg/只 9μg/只
第1天 10 10 10 10 10 10
第2天 10 10 10 10 10 10
第3天 10 10 9 10 10 10
第4天 10 10 9 10 10 10
第5天 10 9 8 10 10 10
第6天 10 7 8 9 10 9
第7天 10 3 8 8 9 9
第8天 10 3 8 8 9 8
第9天 10 3 7 8 7 8
第10天 10 3 7 8 5 7
第11天 10 3 7 8 5 3
第12天 9 3 6 8 3 2
第13天 9 3 6 8 3 2
第14天 9 3 5 8 3 2
第15天 9 2 5 8 2 2
第16-29天 9 2 5 8 2 2
第30天 9 2 5 8 2 2
表12 LK-SF342给药小鼠照射后存活数
Figure PCTCN2014094766-appb-000021
Figure PCTCN2014094766-appb-000022
表13 LK-SF343给药小鼠照射后存活数
Figure PCTCN2014094766-appb-000023
Figure PCTCN2014094766-appb-000024
表14 LK-SF344给药小鼠照射后存活数
药物名称 WR2721 PBS H6101 H6101 LK-SF344 LK-SF344
剂量 3mg/只   3μg/只 9μg/只 3μg/只 9μg/只
第1天 10 10 10 10 10 10
第2天 10 10 10 10 10 10
第3天 10 10 9 10 10 10
第4天 10 10 9 10 10 10
第5天 10 9 8 10 10 10
第6天 10 7 8 9 10 10
第7天 10 3 8 8 10 10
第8天 10 3 8 8 10 10
第9天 10 3 7 8 9 8
第10天 10 3 7 8 9 7
第11天 10 3 7 8 8 5
第12天 9 3 6 8 4 3
第13天 9 3 6 8 3 3
第14天 9 3 5 8 2 1
第15天 9 2 5 8 2 0
第16-29天 9 2 5 8 2 0
第30天 9 2 5 8 2 0
表15 LK-SF345给药小鼠照射后存活数
药物名称 WR2721 PBS H6101 H6101 LK-SF345 LK-SF345
剂量 3mg/只   3μg/只 9μg/只 3μg/只 9μg/只
第1天 10 10 10 10 10 10
第2天 10 10 10 10 10 10
第3天 10 10 9 10 10 10
第4天 10 10 9 10 10 10
第5天 10 9 8 10 10 10
第6天 10 7 8 9 8 10
第7天 10 3 8 8 8 10
第8天 10 3 8 8 8 9
第9天 10 3 7 8 6 9
第10天 10 3 7 8 5 9
第11天 10 3 7 8 4 7
第12天 9 3 6 8 3 7
第13天 9 3 6 8 1 3
第14天 9 3 5 8 1 3
第15天 9 2 5 8 0 3
第16-29天 9 2 5 8 0 3
第30天 9 2 5 8 0 3
表16 LK-SF346给药小鼠照射后存活数
Figure PCTCN2014094766-appb-000025
Figure PCTCN2014094766-appb-000026
表17 LK-SF356给药小鼠照射后存活数
Figure PCTCN2014094766-appb-000027
Figure PCTCN2014094766-appb-000028
表18 LK-SF361给药小鼠照射后存活数
药物名称 WR2721 PBS H6101 H6101 LK-SF361 LK-SF361
剂量 3mg/只   3μg/只 9μg/只 3μg/只 9μg/只
第1天 10 10 10 10 10 10
第2天 10 10 10 10 10 10
第3天 10 10 9 10 10 9
第4天 10 10 9 10 10 9
第5天 10 9 8 10 7 8
第6天 10 7 8 9 6 7
第7天 10 3 8 8 3 7
第8天 10 3 8 8 1 2
第9天 10 3 7 8 0 1
第10天 10 3 7 8 0 0
第11天 10 3 7 8 0 0
第12天 9 3 6 8 0 0
第13天 9 3 6 8 0 0
第14天 9 3 5 8 0 0
第15天 9 2 5 8 0 0
第16-29天 9 2 5 8 0 0
第30天 9 2 5 8 0 0
表19 LK-SF362给药小鼠照射后存活数
药物名称 WR2721 PBS H6101 H6101 LK-SF362 LK-SF362
剂量 3mg/只   3μg/只 9μg/只 3μg/只 9μg/只
第1天 10 10 10 10 10 10
第2天 10 10 10 10 10 10
第3天 10 10 9 10 10 10
第4天 10 10 9 10 10 10
第5天 10 9 8 10 9 9
第6天 10 7 8 9 9 6
第7天 10 3 8 8 9 4
第8天 10 3 8 8 8 2
第9天 10 3 7 8 6 1
第10天 10 3 7 8 4 0
第11天 10 3 7 8 4 0
第12天 9 3 6 8 4 0
第13天 9 3 6 8 2 0
第14天 9 3 5 8 2 0
第15天 9 2 5 8 2 0
第16-29天 9 2 5 8 2 0
第30天 9 2 5 8 2 0
表20 LK-SF365给药小鼠照射后存活数
药物名称 WR2721 PBS H6101 H6101 LK-SF365 LK-SF365
剂量 3mg/只   3μg/只 9μg/只 3μg/只 9μg/只
第1天 10 10 10 10 10 10
第2天 10 10 10 10 9 10
第3天 10 10 9 10 8 9
第4天 10 10 9 10 4 7
第5天 10 9 8 10 0 4
第6天 10 7 8 9 0 3
第7天 10 3 8 8 0 2
第8天 10 3 8 8 0 2
第9天 10 3 7 8 0 2
第10天 10 3 7 8 0 2
第11天 10 3 7 8 0 2
第12天 9 3 6 8 0 2
第13天 9 3 6 8 0 2
第14天 9 3 5 8 0 2
第15天 9 2 5 8 0 2
第16-29天 9 2 5 8 0 2
第30天 9 2 5 8 0 2
从图4-20、表4-20可以看出，本发明的脂肽具有显著的抗辐射损伤活性。
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。

Claims (34)

  1. 一种脂肽化合物，其由一个亲脂性结构单元与一条线性多肽链通过酰胺键相连，亲脂性结构单元位于线性多肽链的N-末端或C-末端，其结构如式I或式II所示，
    FM-CONH-PC-X PC-CONH-FM-X
    式I  式II
    其中，FM表示亲脂性结构单元，
    PC表示多肽链，为含有n个氨基酸残基的线性多肽，n＝2-30，所包含的氨基酸残基可以是天然或非天然氨基酸，
    X＝OH或NH2，
    当X＝OH时，表示脂肽化合物的C末端为羧酸形式(-COOH)；
    当X＝NH2时，表示脂肽化合物的C末端为酰胺形式(-CONH2)；
    或其药学上可接受的盐。
  2. 权利要求1的脂肽化合物，其中所述亲脂性结构单元(FM)选自式III～式VI、棕榈酸(酰)和肉豆蔻酸(酰)，
    Figure PCTCN2014094766-appb-100001
    Figure PCTCN2014094766-appb-100002
    其中
    R表示H或含有5至20个碳的直链烷酰基或氨基(酸)酰基；
    C15H31CO表示棕榈酰(Pam)，两个手性碳的构型组合为R，R。
  3. 权利要求2的脂肽化合物，其中式III所示的亲脂性结构单元(FM)如式VII所示：
    Figure PCTCN2014094766-appb-100003
    其中C15H31CO表示棕榈酰(Pam)，两个手性碳的构型组合为R，R。
  4. 权利要求1的脂肽化合物，其中所述PC选自SSEESNDK、VQGEESNDK、KDNSEEGQV、SKDNSEEGQV、RRRR、KKKK、SKKKK、SSKKKK、SKSKKKK、SKSSNA、SYEESYDYK和SSYEESYDYK中的一种或几种，在上述多肽的N端和/或C端可以连接或不连接一个或多个小分子化合物，所述小分子化合物为疏水性的天 然或非天然氨基酸或其它疏水性分子及其组合，例如Qal(3)、AhxA、Ahx、β-Ala、Nal(2)、Biotin、OH、NH2。
  5. 权利要求4的脂肽化合物，所述PC选自：
    Qal(3)-SSEESNDK-OH；
    VQGEESNDK；
    AhxA-VQGEESNDK；
    Ahx-VQGEESNDK；
    β-Ala-VQGEESNDK；
    Nal(2)-VQGEESNDK；
    KDNSEEGQV；
    SKKKK(Biotin)；
    RRRR；
    KKKK；
    SKKKK；
    SSKKKK；
    SK-SKKKK；
    SYEESYDYK；
    SSYEESYDYK；
    SKSSNA。
  6. 权利要求1-5任一项的脂肽化合物，其选自：
    Dhc(Pam)2-Qal(3)-SSEESNDK-OH；
    Dhc(Pam)2-Ahx-A-VQGEESNDK-OH；
    Dhc(Pam)2-Ahx-VQGEESNDK-OH；
    Dhc(Pam)2-Ahx-β-Ala-VQGEESNDK-OH；
    Cholesterol-OCOCH2CH2CO-VQGEESNDK-OH；
    KDNSEEGQV-Dhc(Pam)2-OH；
    VQGEESNDK-Dhc(Pam)2OH；
    (CH3)3N+Cl-CH2CO-Dhc(Pam)2-VQGEESNDK-OH；
    Dhc(Pam)2-SKKKK(Biotin)-OH；
    Dhc(Pam)2-RRRR-NH2；
    Cholesterol-OCOCH2CH2CO-SKKKK-OH；
    Cholesterol-OCOCH2CH2CO-S-SKKKK-OH；
    Pam-Lys(Pam)-S-SKKKK-OH；
    Cholesterol-OCOCH2CH2CO-SK-SKKKK-OH；
    Pam-Lys(Pam)-SKKKK-OH；
    Cholesterol-OCOCH2CH2CO-SYEESYDYK-NH2；
    Pam-SYEESYDYK-NH2；
    Cholesterol-OCOCH2CH2CO-S-SYEESYDYK-NH2；
    Pam-Nal(2)-VQGEESNDK-OH；
    Cholesterol-OCOCH2CH2CO-SKSSNA-NH2；
    Pam-KDNSEEGQV-NH2；
    Cholesterol-OCOCH2CH2CO-KDNSEEGQV-NH2；
    Dhc(Pam)2-S-KDNSEEGQV-NH2；和
    Dhc(Pam)2-KKKK-OH。
  7. 药物组合物，其含有权利要求1-6任一项的脂肽化合物，以及药学上可接受的载体或赋形剂。
  8. 权利要求1-6任一项的脂肽化合物在制备用于预防和/或治疗辐射引起的损伤的药物中的用途。
  9. 权利要求8所述的用途，其中，所述辐射为电离辐射和/或紫外线辐射。
  10. 权利要求8或9所述的用途，其中，所述损伤为急性放射性损伤和/或慢性放射性损伤；优选地，所述急性放射性损伤例如为放射性烧伤； 优选地，所述慢性放射性损伤例如选自白内障、畸形、畸胎、皮肤癌、肺癌、甲状腺癌、乳腺癌、骨癌、造血障碍，例如白血病。
  11. 权利要求1-6任一项的脂肽化合物在制备用于增强生物体的免疫应答或者用于预防或治疗与免疫相关的疾病的药物中的用途。
  12. 权利要求11所述的用途，其中，所述与免疫相关的疾病例如选自HIV感染、各种与免疫相关的恶性肿瘤、慢性肝炎及肝硬化、支气管炎、支气管哮喘、肺结核、再生障碍性贫血、血小板减少症、病毒性角膜炎、病毒性结膜炎、过敏性鼻炎、甲状腺机能亢进、青少年糖尿病。
  13. 权利要求12所述的用途，其中所述恶性肿瘤选自胃癌、结肠癌、肺癌、骨肉瘤、卵巢癌、甲状腺癌、造血系统肿瘤(如白血病)。
  14. 权利要求11-13任一项所述的用途，当所述疾病为恶性肿瘤时，权利要求1-6任一项的脂肽化合物与化疗药物和/或放疗联用。
  15. 疫苗佐剂，其包含权利要求1-6任一项的脂肽化合物，任选的，还包含药用辅料和/或其它疫苗辅料。
  16. 权利要求1-6任一项的脂肽化合物在制备作为Toll样受体激动剂的药物中的用途。
  17. 权利要求1-6任一项的脂肽化合物作为疫苗佐剂的用途。
  18. 权利要求1-6任一项的脂肽化合物作为疫苗佐剂在制备疫苗组合物中的用途。
  19. 一种预防和/或治疗辐射引起的损伤的方法，所述方法包括向有 需要的受试者给予有效量的权利要求1-6任一项的脂肽化合物或权利要求7所述的药物组合物的步骤。
  20. 权利要求19所述的方法，其中，所述辐射为电离辐射和/或紫外线辐射。
  21. 权利要求19或20所述的方法，其中，所述损伤为急性放射性损伤和/或慢性放射性损伤；优选地，所述急性放射性损伤例如为放射性烧伤；优选地，所述慢性放射性损伤例如选自白内障、畸形、畸胎、皮肤癌、肺癌、甲状腺癌、乳腺癌、骨癌、造血障碍，如白血病。
  22. 一种增强生物体的免疫应答或者预防或治疗与免疫相关的疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者给予有效量的权利要求1-6任一项的脂肽化合物或权利要求7所述的药物组合物的步骤。
  23. 权利要求22所述的方法，其中，所述与免疫相关的疾病例如选自HIV感染、各种与免疫相关的恶性肿瘤、慢性肝炎及肝硬化、支气管炎、支气管哮喘、肺结核、再生障碍性贫血、血小板减少症、病毒性角膜炎、病毒性结膜炎、过敏性鼻炎、甲状腺机能亢进、青少年糖尿病等。
  24. 权利要求23所述的方法，其中所述恶性肿瘤选自胃癌、结肠癌、肺癌、骨肉瘤、卵巢癌、甲状腺癌、造血系统肿瘤(如白血病)。
  25. 权利要求22-24任一项所述的方法，当所述疾病为恶性肿瘤时，权利要求1-6任一项的脂肽化合物与化疗药物和/或放疗联用。
  26. 一种激活Toll样受体的方法，所述方法包括向有需要的受试者给予有效量的1-6任一项的脂肽化合物或权利要求7所述的药物组合物的步骤。
  27. 权利要求1-6任一项的脂肽化合物，其用于预防和/或治疗辐射引起的损伤。
  28. 权利要求27所述的脂肽化合物，其中，所述辐射为电离辐射和/或紫外线辐射。
  29. 权利要求27或28所述的脂肽化合物，其中，所述损伤为急性放射性损伤和/或慢性放射性损伤；优选地，所述急性放射性损伤例如为放射性烧伤；优选地，所述慢性放射性损伤例如选自白内障、畸形、畸胎、皮肤癌、肺癌、甲状腺癌、乳腺癌、骨癌、造血障碍，如白血病。
  30. 权利要求1-6任一项的脂肽化合物，其用于增强生物体的免疫应答或者用于预防或治疗与免疫相关的疾病。
  31. 权利要求30所述的脂肽化合物，其中，所述与免疫相关的疾病例如选自HIV感染、各种与免疫相关的恶性肿瘤、慢性肝炎及肝硬化、支气管炎、支气管哮喘、肺结核、再生障碍性贫血、血小板减少症、病毒性角膜炎、病毒性结膜炎、过敏性鼻炎、甲状腺机能亢进、青少年糖尿病等。
  32. 权利要求31所述的脂肽化合物，其中所述恶性肿瘤选自胃癌、结肠癌、肺癌、骨肉瘤、卵巢癌、甲状腺癌、造血系统肿瘤(如白血病)。
  33. 权利要求30-32任一项所述的脂肽化合物，当所述疾病为恶性肿瘤时，权利要求1-6任一项的脂肽化合物与化疗药物和/或放疗联用。
  34. 权利要求1-6任一项的脂肽化合物，其用于激活Toll样受体。
PCT/CN2014/094766 2013-12-27 2014-12-24 端基具有亲脂性结构的线性脂肽、其制备方法及用途 WO2015096725A1 (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310740373.8A CN104744563B (zh) 2013-12-27 2013-12-27 端基具有亲脂性结构的线性脂肽、其制备方法及用途
CN201310740373.8 2013-12-27

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2015096725A1 true WO2015096725A1 (zh) 2015-07-02

Family

ID=53477556

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CN2014/094766 WO2015096725A1 (zh) 2013-12-27 2014-12-24 端基具有亲脂性结构的线性脂肽、其制备方法及用途

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN104744563B (zh)
WO (1) WO2015096725A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109678910B (zh) * 2016-01-25 2021-09-07 沈阳药科大学 一种化合物及其应用以及一种铂类配合物及其脂质体
CN112851755B (zh) * 2021-01-13 2023-09-01 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种线性脂肽化合物及其制备方法与应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101631850A (zh) * 2007-01-09 2010-01-20 克里夫兰生物实验室公司 增加和转移造血干细胞的方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101631850A (zh) * 2007-01-09 2010-01-20 克里夫兰生物实验室公司 增加和转移造血干细胞的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WANG, WENLONG.: "Anti-radiation Drug Screening from Structural Anologue of Lipopeptide H6101and Mechanism Research Chinese Master's Dissertations Full-text Database", MEDICINE AND HEALTH SCIENCES, 15 March 2014 (2014-03-15) *

Also Published As

Publication number Publication date
CN104744563B (zh) 2019-02-26
CN104744563A (zh) 2015-07-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPS60120900A (ja) Ｌｈｒｈアゴニストとして有用なｌｈｐｈ　同族体ノナペプチドおよびデカペプチド
CN114685646B (zh) 一种多肽侧链类似物的制备方法及其应用
WO2023288019A2 (en) Lipidated peptide inhibitors of interleukin-23 receptor
CN113549129B (zh) 一种d-构型抗肿瘤肽及其制备方法和应用
KR20240034223A (ko) 인터류킨-23 수용체의 바이사이클릭 펩티드 억제제
WO2021164677A1 (zh) 一种抗合胞病毒膜融合抑制剂
WO2023288028A2 (en) Peptide inhibitors of interleukin-23 receptor
AU2016328916A1 (en) Cyclic polypeptides, method for obtaining said polypeptides and the therapeutic use thereof
US20030158110A1 (en) Vasoactive intestinal peptide analogs
WO2015096725A1 (zh) 端基具有亲脂性结构的线性脂肽、其制备方法及用途
KR100405009B1 (ko) 바이싸이클릭타치키닌길항제,그의약제,및약제학적조성물로사용하는그의용도
CA2405704C (en) Bombesin analogs for treatment of cancer
US11866518B2 (en) Bicyclic peptide ligands specific for TSLP
AU671118B2 (en) Tachykinin antagonist tricyclic compounds, preparation of same and pharmaceutical compositions containing such compounds
US6596692B1 (en) Substance P analogs for the treatment of cancer
CA2405724C (en) Substance p analogs for the treatment of cancer
CN106146624B (zh) 定点共价交联的天然n肽类的hiv-1抑制剂
CN116789750B (zh) 预防和/或治疗宫颈癌的多肽及其应用
CN113024635B (zh) 一类订书肽化合物及其药物组合物的用途
CN116785402B (zh) 预防和/或治疗乳腺癌的多肽及其应用
PT99850B (pt) Processo para a preparacao de novos peptideos com efeito insulinico
WO2023202654A1 (zh) 化合物及用途
US6989371B1 (en) Bombesin analogs for treatment of cancer
CN106317209B (zh) 共价交联的n肽抑制剂
CN117229356A (zh) 基于A4K14-Citropin 1.1的芳香硫醚订书肽类抗肿瘤活性化合物、制备方法及应用

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 14874836

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase
122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 14874836

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1