CN106138294B - 一种翻白草总黄酮的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种翻白草总黄酮的制备方法，包括：（1）利用翻白草原料制备提取液；（2）将提取液经合并、浓缩、稀释、静置冷却、过滤后，滤液直接过聚酰胺柱进行洗脱；（3）将流出液合并、浓缩、稀释、后通过大孔树脂柱进行再次洗脱；（4）将流出液进行脱色、抽滤、浓缩、喷雾干燥后得到翻白草总黄酮。本发明制备方法简单，其致使最终得到的翻白草总黄酮具有含量高、外观性状良好的优势，适宜工业化大生产，促进了翻白草在传统中药中的应用价值。

Description

一种翻白草总黄酮的制备方法
技术领域
本发明涉及一种翻白草总黄酮的制备方法，属于中药成分提取技术领域。
背景技术
翻白草，为蔷薇科委陵菜属植物翻白草的带根全草。《本草纲目》载其：气味甘，微苦，性平，无毒；有清热解毒、凉血止血功效，主治肺热咳喘、泻痢、咳血、痈肿疮毒等。近年来民间流行用翻白草治疗糖尿病并取得一定疗效。现有研究表明，翻白草具有降血糖作用，且主要是与其所含的黄酮类成分有关，而黄酮类成分也是翻白草中最为主要的一类成分之一。
然而，目前对于翻白草黄酮类成分的研究，尤其是对于翻白草总黄酮的提取纯化方面的研究还少有报道，而对于其应用的研究也多局限于降血糖作用方面。
王琦等在其论文“翻白草中的黄酮类成分”中，采用70％乙醇提取，利用硅胶、Sephadex LH-20、ODS柱层析等方法分离并鉴定了9个黄酮类化合物。与其类似的还有洪凌等在其论文“翻白草黄酮类化学成分研究”中，也是利用硅胶、Sephadex LH-20、ODS柱层析等方法分离并鉴定了7个黄酮类化合物。上述的提取工艺都是运用乙醇提取之后通过反复运用硅胶柱、凝胶柱以及制备色谱的方法来进行分离并最终得到翻白草黄酮类成分，然而，该方法不仅操作复杂、填料及仪器设备昂贵、耗时耗财外，而且处理量非常小，只能适合于实验室研究，无法运用于大生产之中。
而专利申请号为201210168098.2的发明专利“一种提取、纯化翻白草总黄酮的工艺”则公开了一种提取、纯化翻白草总黄酮的工艺，主要是采用翻白草为原料，以乙醇为溶剂提取，经过大孔树脂柱吸附、解吸工艺提取翻白草总黄酮。上述发明专利虽然采用了一种大孔吸附树脂处理的方法，但是仅仅通过大孔树脂柱处理几乎不可能将脂溶性杂质等大多数杂质成分除去掉，难以达到预期的要求。
综合上述文献及专利的情况来看，以目前的研究水平不仅不足以提供一种适合于工业化大生产要求的，用于提取纯化并最终得到含量高、外观性状良好的翻白草总黄酮的制备工艺，而且还拘泥于个别应用领域，阻碍了翻白草作为传统中药所应该发挥的应用价值。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种制备方法简单、产物含量高的翻白草总黄酮的制备方法。
本发明的技术方案为：
一种翻白草总黄酮的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）提取液的制备：取翻白草原料，加入浓度为50-95%的乙醇提取剂，且乙醇提取剂的加入重量为翻白草原料质量的5-20倍，然后在60-80℃的温度条件下回流提取2次，每次4小时，最后经过滤、洗涤得到提取液；
（2）聚酰胺柱处理：将步骤（1）得到的提取液合并并浓缩至无醇味后加水稀释至浓缩后物料的1-5倍体积，静置冷却后经硅藻土过滤，滤液直接过聚酰胺柱，并依次用纯化水和浓度为65%的乙醇洗脱液洗脱，收集乙醇洗脱液洗脱部分的流出液；
（3）大孔树脂柱处理：将步骤（2）中得到的乙醇洗脱部分的流出液合并（上述聚酰胺柱在各浓度梯度下洗脱时，均洗脱了6-10个柱体积（BV），因此处理需要合并同一个洗脱浓度的流出液样品）浓缩并加水稀释至浓缩后物料的的1-5倍体积后通过大孔树脂柱，依次用纯化水、浓度为20%的乙醇洗脱液和浓度为95%的乙醇洗脱液洗脱（各浓度梯度下洗脱时，均洗脱了4-15个柱体积（BV）），收集乙醇洗脱液洗脱部分的流出液；
（4）制备翻白草总黄酮：向步骤（3）中得到的流出液中加入活性炭脱色后，抽滤，并将滤液浓缩至无醇味，再经喷雾干燥后得到翻白草总黄酮。
进一步，步骤（1）中，所述的乙醇提取剂的加入重量优选为翻白草原料质量的8倍。
且步骤（1）中，所述的乙醇提取剂的浓度优选为60-80%。进一步优选为所述的乙醇提取剂的浓度为60%。
此外，步骤（1）中，回流温度优选为65℃。
而在步骤（2）中，所述的聚酰胺柱中的聚酰胺的粒径为100-200目，聚酰胺的使用重量为翻白草原料的重量的1-3倍，且聚酰胺柱的径高比为1:12-1:5，而上样流速和洗脱流速均为1-4 BV/h。
且所述的大孔树脂柱中的大孔树脂的使用重量为翻白草原料的重量的1-5倍，且大孔树脂柱的径高比为1:12-1:5，而上样流速和洗脱流速均为1-4 BV/h。
更进一步，步骤（3）中，所述的大孔树脂柱中的大孔树脂为D101、DM130、HPD-100、HPD-400、HPD-600、AB-8中的任一种。进一步优选为HPD-400。
本发明的有益效果为：本发明制备方法简单，其致使最终得到的翻白草总黄酮具有含量高、外观性状良好的优势，适宜工业化大生产，促进了翻白草在传统中药中的应用价值。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细的说明。
在以下实施例中，所使用的聚酰胺柱中的聚酰胺的粒径为100-200目，聚酰胺的使用重量为翻白草原料的重量的1倍，且聚酰胺柱的径高比为1:7，而上样流速和洗脱流速均为2 BV/h。 而所使用的大孔树脂柱中的大孔树脂的使用重量为翻白草原料的重量的2倍，且大孔树脂柱的径高比为1:7，而上样流速和洗脱流速均为2 BV/h。
实施例1：
首先将原料翻白草2kg加入到16kg浓度为60%的乙醇提取剂中，在65℃的温度条件下回流4小时，然后经过滤、洗涤得到提取液；滤渣再次加入上述等量等浓度的乙醇提取液中继续回流4小时，过滤，合并两次提取液。将得到的提取液首先浓缩至无醇味，然后加水稀释后（加水体积为浓缩液体积的2倍，）静置冷却，再经硅藻土过滤后，滤液经过聚酰胺柱，依次用纯化水和浓度为65%的乙醇洗脱液洗脱，收集乙醇洗脱部分的流出液。将流出液加水稀释后（加水体积为浓缩液体积的2倍，）过HPD-400大孔树脂柱，再次用纯化水、浓度分别为20%的乙醇洗脱液和95%的乙醇洗脱液洗脱，并收集浓度为95%的乙醇洗脱液洗脱部分的流出液。最后将流出液加入活性炭脱色后，趁热抽滤，并将滤液浓缩至无醇味，经喷雾干燥后得到黄色粉末状的物质62.5g，以芦丁为对照品，运用紫外分光光度法检测，翻白草总黄酮含量达到95.3%。
实施例2：
首先将原料翻白草2kg加入到10kg浓度为50%的乙醇提取剂中，在60℃的温度条件下回流4小时，然后经过滤、洗涤得到提取液；滤渣再次加入上述等量等浓度的乙醇提取液中继续回流4小时，过滤，合并两次提取液。将得到的提取液首先浓缩至无醇味，然后加水稀释后（加水体积为浓缩液体积的3倍，）静置冷却，再经硅藻土过滤后，滤液经过聚酰胺柱，依次用纯化水和浓度为65%的乙醇洗脱液洗脱，收集乙醇洗脱部分的流出液。将流出液加水稀释后（加水体积为浓缩液体积的3倍）过D101大孔树脂柱，再次用纯化水、浓度分别为20%的乙醇洗脱液和95%的乙醇洗脱液洗脱，并收集浓度为95%的乙醇洗脱部分的流出液。最后将流出液加入活性炭脱色后，趁热抽滤，并将滤液浓缩至无醇味，经喷雾干燥后得到黄色粉末状的物质56.5g，以芦丁为对照品，运用紫外分光光度法检测，总黄酮含量达到84.2%。
实施例3：
首先将原料翻白草2kg加入到40kg浓度为95%的乙醇中，在80℃的温度条件下回流4小时，然后经过滤、洗涤得到提取液；滤渣再次加入上述等量等浓度的乙醇提取液中继续回流4小时，过滤，合并两次提取液。将得到的提取液首先浓缩至无醇味，然后加水稀释后（加水体积为浓缩液体积的5倍）静置冷却，再经硅藻土过滤后，滤液经过聚酰胺柱，依次用纯化水和浓度为65%的乙醇洗脱液洗脱，收集乙醇洗脱部分的流出液。将流出液加水稀释后（加水体积为浓缩液体积的5倍）过HPD-600大孔树脂柱，再次用纯化水、浓度分别为20%的乙醇洗脱液和95%的乙醇洗脱液洗脱，并收集浓度为95%的乙醇洗脱部分的流出液。最后将流出液加入活性炭脱色后，趁热抽滤，并将滤液浓缩至无醇味，经喷雾干燥后得到黄色粉末状的物质65.0g，以芦丁为对照品，运用紫外分光光度法检测，总黄酮含量达到88.6%。
以上具体实施方式不以任何形式限制本发明，凡是以等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。

Claims (3)

1.一种翻白草总黄酮的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）提取液的制备：取翻白草原料，加入浓度为60%的乙醇提取剂，且乙醇提取剂的加入重量为翻白草原料质量的8倍，然后在65℃的温度条件下回流提取2次，每次4小时，最后经过滤、洗涤得到提取液；
（2）聚酰胺柱处理：将步骤（1）得到的提取液合并并浓缩至无醇味后加水稀释至浓缩后物料的1-5倍体积，静置冷却后经硅藻土过滤，滤液直接过聚酰胺柱，并依次用纯化水和浓度为65%的乙醇洗脱液进行洗脱，收集乙醇洗脱液洗脱部分的流出液；
（3）大孔树脂柱处理：将步骤（2）中得到的乙醇洗脱部分的流出液合并浓缩并加水稀释至浓缩后物料的1-5倍体积后通过大孔树脂柱，所述的大孔树脂柱中的大孔树脂为HPD-400,依次用纯化水、浓度为20%的乙醇洗脱液和浓度为95%的乙醇洗脱液洗脱，收集95%的乙醇洗脱液洗脱部分的流出液；
（4）制备翻白草总黄酮：向步骤（3）中得到的流出液中加入活性炭脱色后，抽滤，并将滤液浓缩至无醇味，再经喷雾干燥后得到翻白草总黄酮。
2.根据权利要求1所述的一种翻白草总黄酮的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述的聚酰胺柱中的聚酰胺的粒径为100-200目，聚酰胺的使用重量为翻白草原料的重量的1-3倍，且聚酰胺柱的径高比为1:12-1:5，而上样流速和洗脱流速均为1-4 BV/h。
3.根据权利要求1所述的一种翻白草总黄酮的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述的大孔树脂柱中的大孔树脂的使用重量为翻白草原料的重量的1-5倍，且大孔树脂柱的径高比为1:12-1:5，而上样流速和洗脱流速均为1-4 BV/h。
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CN103027979A (zh) * 2012-05-28 2013-04-10 济宁医学院 一种提取、纯化翻白草总黄酮的工艺
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