CN105237537B - 一种制备苦豆子中苦参碱和槐定碱的方法 - Google Patents

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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
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    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/22—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed systems contains four or more hetero rings

Abstract

本发明提供一种采用大孔吸附树脂制备苦豆子中苦参碱、槐定碱，包括用含有还原剂的酸性极性有机溶剂水溶液从苦豆子中提取苦豆子总碱液，碱化后，用大孔吸附树脂吸附至饱和，用水洗去未被树脂吸附的残留料液和水溶性杂质，再用极性有机溶剂水溶液进行目标产物的洗脱，滤液经减压回收溶剂，纯化得到苦参碱粗提物、槐定碱粗提物；苦参碱粗提物、槐定碱粗提物通过结晶和重结晶纯化后得到苦参碱精品、槐定碱精品。本发明成功之处在于将大孔吸附树脂应用于苦豆子生物碱的分离，工艺简单、安全无毒、生产成本低，可用于工业生产，具有巨大的经济效益和较大的推广性。

Description

一种制备苦豆子中苦参碱和槐定碱的方法
技术领域
本发明涉及苦豆子中的药用活性成分的制备方法，具体涉及苦豆子中的药用活性成分苦参碱和槐定碱的制备方法。
背景技术
苦豆子（Sophoraalopecuroides L），异名布亚（维名），为豆科槐属植物苦豆子的全草及种子，是我国西北地区常用中药材。其药用部位是根、茎、全草及种子，味苦性寒，具有清热解毒、祛风燥湿、止痛杀虫等功效。苦豆子种子中生物碱含量较高，约8．11％(质量分数)，主要有苦参碱、苦豆碱、槐果碱、槐定碱等。
近年来国内外研究表明总生物碱或其单体生物碱有多方面的生物活性，苦豆子生物碱在抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗心率失常、免疫调节等方面具有重要的药理活性。早在1930年，来源于苦豆子中的苦参碱就被列入《美国药典》。40年后，我国自主研制的治疗腹泻新药苦豆子生物碱制剂－“苦豆子片”，被正式载入1977年版《中国药典》，现改名为“克泻灵片”。此外，苦豆子中苦参素、槐定碱等在药物领域也得到了有效开发利用，目前临床应用，苦参碱治疗妇科炎症、苦参素注射液治疗慢性乙型病毒性肝炎均取得很好的疗效，我国有乙肝患者和病毒携带者近一亿人，治疗乙肝的药物需求量很大，市场前景极为广阔。槐定碱和苦豆子总碱注射液用于治疗肿瘤的研究也已开发成功。
目前，苦豆子生物碱提取主要采用酸水浸提，辅助超声波或者微波等方法。根据各单体生物碱的PH值不同或者极性的不同，多采用液液萃取方法对其进行分离纯化。上述方法的萃取溶剂使用大量的毒性溶剂，生产成本高，操作步骤繁杂，且苦豆子单体生物碱的含量较低。曾有文献报道利用大孔吸附树脂分离得到苦豆子总碱，再通过硅胶柱色谱进行纯化，以结晶和重结晶的方法得到槐定碱和苦参碱。本发明对上述其工艺进行优化，仅用大孔吸附树脂对苦豆子总碱进行分离得到槐定碱粗提物和苦参碱粗提取，通过一定的结晶与重结晶的方法得到槐定碱精品和苦参碱精品。既简化了工艺流程，同时大量降低生产成本，提高苦豆子生物碱的产量，因此更适合于工业化生产。
发明内容
本发明采用一种以大孔吸附树脂分离纯化苦参碱、槐定碱的制备方法，优化以大孔吸附树脂分离纯化苦参碱、槐定碱的工艺，简化实验流程，大大降低生产成本。提供一种高效、安全、低成本、高纯度适用于企业工业化生产的制备方法，改变现有生产工艺毒性大，生产成本高，操作繁杂，含量低等不足。
本发明通过以下技术方案来实现：
一种采用大孔吸附树脂分离纯化苦豆子中苦参碱、槐定碱的制备方法，其特征在于：用含有还原剂的酸性极性有机溶剂水溶液从苦豆子中提取苦豆子总碱浸膏，碱化后，用大孔吸附树脂吸附至饱和，用水洗去未被树脂吸附的残留料液和水溶性杂质，再用极性有机溶剂水溶液进行目标产物的洗脱，滤液经减压回收溶剂，纯化得到苦参碱粗提物、槐定碱粗提物；苦参碱粗提物、槐定碱粗提物通过结晶和重结晶纯化后得到苦参碱精品、槐定碱精品。
提取苦豆子总碱的制备方法是：以苦豆子为原料，将苦豆子粉碎，用10-15倍苦豆子粉末干重（w/w）的50%-90%的酸性极性有机溶剂水溶液，极性有机溶剂水溶液中加入过量还原剂，于50-90℃条件下提取1-3次，每次1-3个小时，合并三次滤液，然后减压浓缩，回收有机溶剂干燥，得到浸膏，即为苦豆子总碱浸膏。
所述大孔吸附树脂分离纯化的方法是：苦豆子总碱浸膏为原料，加重量比1:2-4的50%-80%的极性有机溶剂水溶液进行溶解，加碱液调节PH=9-10，过滤，然后采用大孔吸附树脂富集吸附至饱和，先用不少于2倍量的水（v/v）洗去非生物碱的大极性杂质，1-4倍树脂量的20%的极性有机溶剂水溶液以1-3倍树脂量/小时的流速(v/v)洗去极性大的生物碱杂质。再用1-3倍树脂量的30-40%的极性有机溶剂水溶液以1-3倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质，滤液在-0.06～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回流，浓缩即得槐定碱粗提物。再用1-5倍树脂量的50%-70%的极性有机溶剂水溶液以1-3倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质滤液在-0.06～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回流，浓缩即得苦参碱粗提物。
槐定碱粗提物和苦参碱粗提物的纯化工艺是：将槐定碱粗提物碱化PH11-13，用有机溶剂萃取后蒸干得到槐定碱粗品，槐定碱粗品加石油醚进行重结晶得槐定碱精品；苦参碱粗提物加水搅拌后，静置滤出除沉淀。减压浓缩得苦参碱粗品。将苦参碱粗品碱化后甲苯萃取，减压回收的苦参碱粗品，加石油醚重结晶得到苦参碱精品。
其中酸性极性有机溶剂中采用是强酸，可采用盐酸、硫酸中的任意一种。
所述的极性有机溶剂溶液中含有还原剂：所述的还原剂为硫代硫酸钠、亚硫酸钠、抗坏血酸、亚硫酸氢钠和焦亚硫酸钠中的一种。
大孔吸附树脂可以是非极性吸附树脂、中等极性大孔吸附树脂、极性大孔吸附树脂中的一种。可采用D3520、D4006、D4020、H103、X-5、HP10、HP20、XAD-7、SP850、SP825、SP700、SP207、X-5AB-8、D-101中的一种。
优化工艺操作步骤为：
（1）苦豆子总碱浸膏制备：以苦豆子为原料，将苦豆子粉碎，用10-15倍苦豆子粉末干重（w/w）的PH=2-3的50%-90%乙醇水溶液，乙醇水溶液中加入过量还原剂，于50-90℃条件下提取1-3次，每次1-3个小时，合并三次滤液，然后减压浓缩，回收有机溶剂干燥，得到浸膏，即为苦豆子总碱浸膏；
（2）苦豆子总碱浸膏中，加重量比1:2-4的50%-80%的乙醇水溶液进行溶解，加氨水调节PH=9-10，过滤，然后采用大孔吸附树脂富集吸附至饱和，先用不少于2倍量的水（v/v）洗去非生物碱的大极性杂质，1-4倍树脂量的20%的乙醇水溶液以1-3倍树脂量/小时的流速(v/v)洗去极性大的生物碱杂质。再用1-3倍树脂量的30-40%的乙醇水溶液以1-3倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质，滤液在-0.06～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回流，浓缩即得槐定碱提取物，再用3-5倍树脂量的45%-70%的乙醇水溶液以1-3倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质，滤液在-0.06～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回流，浓缩即得苦参碱提取物；
（3）槐定碱精品的制备：将槐定碱提取物碱化pH＝11-13， 苯类试剂萃取后蒸干得到槐定碱粗品，槐定碱粗品加1－5倍量的石油醚进行重结晶得槐定碱精品；
苦参碱精品的制备：苦参碱提取物加水搅拌后，静置滤除沉淀，减压浓缩得苦参碱粗品，将苦参碱粗品碱化至pH＝9-11后甲苯萃取，萃取3－5次，减压回收，加1-5倍量石油醚重结晶得到苦参碱精品。
其中酸性乙醇中采用是强酸，可采用盐酸、硫酸中的任意一种。
苦豆子总碱浸膏制备过程中所需还原剂采用硫代硫酸钠、亚硫酸钠、抗坏血酸、亚硫酸氢钠和焦亚硫酸钠中的一种
槐定碱粗提物碱化和苦参碱粗品碱化过程所用到的碱，可采用强碱和弱碱，例如氢氧化钠、氢氧化钾、氨水。
大孔吸附树脂可以是非极性吸附树脂、中等极性大孔吸附树脂、极性大孔吸附树脂中的一种。可采用D3520、D4006、D4020、H103、X-5、HP10、HP20、XAD-7、SP850、SP825、SP700、SP207、X-5AB-8、D-101中的任意一种。
槐定碱精品的制备中苯类试剂可采用苯，甲苯。
本发明的优点在于：
1、本发明采用酸性乙醇提取苦豆子生物碱，与单独乙醇提取、单独酸水提取、先乙醇提取后酸化比较，增大了苦豆子总碱、槐定碱和苦参碱含量；
2、本发明优化了大孔吸附树脂分离纯化槐定碱、苦参碱的生产工艺。与现有技术相比，本发明采用大孔吸附树脂对苦豆子总碱进行梯度洗脱，得到槐定碱粗品和苦参碱粗品，通过一定的结晶与重结晶的方法得到槐定碱精品和苦参碱精品。本发明采用大孔吸附树脂分离目标产物，取代了液液萃取工艺，更加高效，安全，增大了槐定碱和苦参碱的纯度；
3、现有技术相比，本发明提取溶剂未采用氯仿，甲苯等毒性大、价格昂贵的有机溶剂。本发明采用价格低廉、无毒的乙醇，降低了生产成本和毒性；
4、本发明仅采用大孔树脂对苦豆子中槐定碱和苦参碱进行分离，省去硅胶色谱柱的分离，简化工艺流程，更有利于企业工业化生产。
实例一、
（1）取苦豆子全草，粉碎后过12目筛子筛取苦豆子粉末，用10倍苦豆子粉末干重（w/w）的PH=3的70%乙醇水溶液，乙醇水溶液中加入过量亚硫酸氢钠，于60℃条件下提取3次，每次1个小时，合并三次滤液，然后减压浓缩，回收有机溶剂干燥，得到浸膏，即为苦豆子总碱浸膏；
（2）苦豆子总碱浸膏为原料，加重量比1:2的70%的乙醇水溶液进行溶解，加氨水调节PH=9，过滤，然后采用大孔吸附树脂AB-8树脂富集吸附至饱和，先用不少于2倍量的水（v/v）洗去非生物碱大极性杂质，2倍树脂量的20%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗去极性大的生物碱杂质。再用2倍树脂量的30%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质，滤液在-0.08MPa、50℃条件下，减压回流，浓缩即得槐定碱提取物。再用3倍树脂量的60%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质滤液在-0.09MPa、50℃条件下，经减压回流，浓缩即得苦参碱提取物；
（3） 将槐定碱提取物加20%的氢氧化钠溶液碱化至pH＝11，用甲苯萃取3次，蒸干得到槐定碱粗品。槐定碱粗品加1倍量石油醚进行重结晶得到槐定碱精品，纯度达98.37%；
（4）将苦参碱提取物，加3倍水搅拌洗涤，静置后过滤，滤出沉淀。沉淀加2倍水搅拌洗涤，静置后过滤，合并两次溶液。经减压回流，浓缩即得苦参碱粗品。苦参碱粗品碱化PH=9，甲苯萃取3次，将萃取液合并经减压回收，得到苦参碱粗品。加3倍量石油醚进行重结晶，得到苦参碱精品，纯度达97.32%。
实例二、
（1）取苦豆子全草，粉碎后过12目筛子筛取苦豆子粉末，用15倍苦豆子粉末干重（w/w）的PH=2的70%乙醇水溶液，乙醇水溶液中加入过量硫代硫酸钠，于60℃条件下提取3次，每次1个小时，合并三次滤液，然后减压浓缩，回收有机溶剂干燥，得到浸膏，即为苦豆子总碱浸膏；
（2）苦豆子总碱浸膏为原料，加重量比1:2的70%乙醇水溶液进行溶解，加氨水调节PH=10，过滤，然后采用D-101树脂富集吸附至饱和，先用不少于2倍量的水（v/v）洗去非生物碱大极性杂质，2倍树脂量的20%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗去极性大的生物碱杂质。再用2倍树脂量的35%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质，滤液在-0.08MPa、50℃条件下，经减压回流，浓缩即得槐定碱提取物。用4倍树脂量的55%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质滤液在-0.09MPa、50℃条件下，经减压回流，浓缩即得苦参碱提取物；
（3） 将槐定碱提取物加20%的氢氧化钠溶液碱化至pH＝12，用苯类试剂萃取3次，蒸干得到槐定碱粗品。槐定碱粗品加1倍量石油醚进行重结晶得到槐定碱精品，纯度达98.26%；
（4） 将苦参碱提取物，加3倍水搅拌洗涤，静置后过滤，滤出沉淀。沉淀加2、倍水搅拌洗涤，静置后过滤，合并两次溶液。经减压回流，浓缩即得苦参碱粗品。苦参碱粗品碱化pH＝10，甲苯萃取4次，将萃取液合并经减压回收，得到苦参碱粗品。加2倍量石油醚进行重结晶，得到苦参碱精品，纯度达97.52%。
实例三
（1）取苦豆子全草，粉碎后过12目筛子筛取苦豆子粉末，用10倍苦豆子粉末干重（w/w）的PH=2的70%的乙醇水溶液，乙醇水溶液中加入过量硫代硫酸钠，于60℃条件下提取3次，每次1个小时，合并三次滤液，然后减压浓缩，回收有机溶剂干燥，得到浸膏，即为苦豆子总碱浸膏；
（2）苦豆子总碱浸膏为原料，加重量比1:2的PH=3的60%乙醇水溶液进行溶解，加氨水调节PH=9，过滤，然后采用大孔吸附树脂SP850富集吸附至饱和，先用不少于2倍量的水（v/v）洗去非生物碱大极性杂质，1倍树脂量的20%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗去极性大的生物碱杂质。再用2倍树脂量的40%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质滤液在-0.09MPa、50℃条件下，经减压回流，浓缩即得槐定碱提取物。再用3倍树脂量的70%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质滤液在-0.09MPa、50℃条件下，经减压回流，浓缩即得苦参碱取提物；
（3）将槐定碱提取物加15%的氢氧化钠溶液碱化至pH＝11，用苯类试剂萃取3次，蒸干得到槐定碱粗品。槐定碱粗品加2倍量石油醚进行重结晶得到槐定碱精品，纯度达98.24%；
（4）将苦参碱提取物，加3倍水搅拌洗涤，静置后过滤，滤出沉淀。沉淀加3倍水搅拌洗涤，静置后过滤，合并两次溶液。经减压回流，浓缩即得苦参碱粗品。苦参碱粗品碱化PH=11，甲苯萃取5次，将萃取液合并经减压回收，得到苦参碱粗品。加2倍量石油醚进行重结晶，得到苦参碱精品，纯度达99.32%。
实例四、
（1） 取苦豆全草，粉碎后过12目筛子筛取苦豆子粉末，用12倍苦豆子粉末干重（w/w）的PH=3的80%乙醇水溶液，乙醇水溶液中加入过量亚硫酸氢钠，于60℃条件下提取3次，每次1个小时，合并三次滤液，然后减压浓缩，回收有机溶剂干燥，得到浸膏，即为苦豆子总碱浸膏；
（2）苦豆子总碱浸膏为原料，加重量比1:2的60%的乙醇水溶液进行溶解，加氨水调节PH=10，过滤，然后采用SP700树脂富集吸附至饱和，先用不少于2倍量的水（v/v）洗去非生物碱大极性杂质，3倍树脂量的20%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗去极性大的生物碱杂质。再用3倍树脂量的35%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质滤液在-0.09MPa、50℃条件下，经减压回流，浓缩即得槐定碱提取物。再用4倍树脂量的70%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质滤液在-0.09MPa、50℃条件下，经减压回流，浓缩即得苦参碱提取物；
（3）将槐定碱提取物加20%的氢氧化钠溶液碱化至pH＝11，用苯萃取3次，蒸干得到槐定碱粗品。槐定碱粗品加2倍量石油醚进行重结晶得到槐定碱精品，纯度达98.74%；
（4）将苦参碱提取物，加3倍水搅拌洗涤，静置后过滤，滤出沉淀。沉淀加3倍水搅拌洗涤，静置后过滤，合并两次溶液。经减压回流，浓缩即得苦参碱粗品。苦参碱粗品碱化pH＝11，甲苯萃取4次，将萃取液合并经减压回收，得到苦参碱粗。加1倍量石油醚进行重结晶，得到苦参碱精品，纯度达98.62%。
实例五、
（1）取苦豆子全草，粉碎后过12目筛子筛取苦豆子粉末，用12倍苦豆子粉末干重（w/w）的PH=2的80%乙醇水溶液，乙醇水溶液中加入过量焦亚硫酸钠，于60℃条件下提取3次，每次1个小时，合并三次滤液，然后减压浓缩，回收有机溶剂干燥，得到浸膏，即为苦豆子总碱浸膏；
（2）苦豆子总碱浸膏为原料，加重量比1:2的60%的乙醇水溶液进行溶解，加氨水调节PH=9，过滤，然后采用AB-8树脂富集吸附至饱和，先用不少于2倍量的水（v/v）洗去非生物碱大极性杂质，2倍树脂量的20%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗去极性大的生物碱杂质。再用3倍树脂量的30%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质滤液在-0.09MPa、50℃条件下，经减压回流，浓缩即得槐定碱提取物。再用4倍树脂量的65%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质滤液在-0.09MPa、50℃条件下，经减压回流，浓缩即得苦参碱提取物；
（3） 将槐定碱提取物加10%的氢氧化钠溶液碱化至pH＝13，用甲苯萃取3次，蒸干得到槐定碱粗品。槐定碱粗品加2倍量石油醚进行重结晶得到槐定碱精品，纯度达97.41%；
（4） 将苦参碱提取物，加3倍水搅拌洗涤，静置后过滤，滤出沉淀。沉淀加2-3倍水搅拌洗涤，静置后过滤，合并两次溶液。经减压回流，浓缩即得苦参碱粗品。苦参碱粗品碱化pH＝10，甲苯萃取3次，将萃取液合并经减压回收，得到苦参碱粗品。加1倍量石油醚进行重结晶，得到苦参碱精品，纯度达99.01%。
实例六、
（1）取苦豆子全草，粉碎后过12目筛子筛取苦豆子粉末，用15倍苦豆子粉末干重（w/w）的PH=3的80%乙醇水溶液，乙醇水溶液中加入过量硫代硫酸钠，于60℃条件下提取3次，每次1个小时，合并三次滤液，然后减压浓缩，回收有机溶剂干燥，得到浸膏，即为苦豆子总碱浸膏；
（2）苦豆子总碱浸膏为原料，加重量比1:2的70%的乙醇水溶液进行溶解，加氨水调节PH=9，过滤，然后采用SP207树脂富集吸附至饱和，先用不少于2倍量的水（v/v）洗去非生物碱大极性杂质，1倍树脂量的20%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗去极性大的生物碱杂质。再用1倍树脂量的40%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质，滤液在-0.08MPa、50℃条件下，经减压回流，浓缩即得槐定碱提取物。再用3倍树脂量的670%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质滤液在-0.09MPa、50℃条件下，经减压回流，浓缩即得苦参碱提取物；
（3） 将槐定碱提取物加20%的氢氧化钠溶液碱化至pH＝12，用苯类试剂萃取2次，蒸干得到槐定碱粗品。槐定碱粗品加2倍量石油醚进行重结晶得到槐定碱精品，纯度达96.35%；
（4） 将苦参碱提取物，加2倍水搅拌洗涤，静置后过滤，滤出沉淀。沉淀加3倍水搅拌洗涤，静置后过滤，合并两次溶液。经减压回流，浓缩即得苦参碱粗品。苦参碱粗品碱化pH＝11，甲苯萃取4次，将萃取液合并经减压回收，得到苦参碱粗品。加2倍量石油醚进行重结晶，得到苦参碱精品，纯度达98.47%。
实例七、
（1）取苦豆子全草，粉碎后过12目筛子筛取苦豆子粉末，用15倍苦豆子粉末干重（w/w）的PH=3的80%乙醇水溶液，乙醇水溶液中加入过量亚硫酸氢钠，于60℃条件下提取3次，每次1个小时，合并三次滤液，然后减压浓缩，回收有机溶剂干燥，得到浸膏，即为苦豆子总碱浸膏；
（2）苦豆子总碱浸膏为原料，加重量比1:2的60%的乙醇水溶液进行溶解，加氨水调节PH=9，过滤，然后采用D3520树脂富集吸附至饱和，先用不少于2倍量的水（v/v）洗去非生物碱大极性杂质，2倍树脂量的20%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗去极性大的生物碱杂质。，再用2倍树脂量的40%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质滤液在-0.09MPa、50℃条件下，经减压回流，浓缩即得槐定碱提取物。再用4倍树脂量的65%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质滤液在-0.09MPa、50℃条件下，经减压回流，浓缩即得苦参碱提取物；
（3） 将槐定碱提取物加15%的氢氧化钠溶液碱化至pH＝11，用甲苯萃取2-3次，蒸干得到槐定碱粗品。槐定碱粗品加2倍量石油醚进行重结晶得到槐定碱精品，纯度达97.57%；
（4） 将苦参碱提取物，加2-3倍水搅拌洗涤，静置后过滤，滤出沉淀。沉淀加2倍水搅拌洗涤，静置后过滤，合并两次溶液。经减压回流，浓缩即得苦参碱粗品。苦参碱粗品碱化pH＝11，甲苯萃取4次，将萃取液合并经减压回收，得到苦参碱粗品。加3倍量石油醚进行重结晶，得到苦参碱精品，纯度达98.87%。
实例八、
（1）取苦豆子全草，粉碎后过12目筛子筛取苦豆子粉末，用15倍苦豆子粉末干重（w/w）的PH=2的70%乙醇水溶液，乙醇水溶液中加入过量焦亚硫酸钠，于60℃条件下提取3次，每次1个小时，合并三次滤液，然后减压浓缩，回收有机溶剂干燥，得到浸膏，即为苦豆子总碱浸膏；
（2）苦豆子总碱浸膏为原料，加重量比1:2的70%的乙醇水溶液进行溶解，加氨水调节PH=9，过滤，然后采用大孔吸附树脂AB-8富集吸附至饱和，先用不少于2倍量的水（v/v）洗去非生物碱大极性杂质，2倍树脂量的20%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗去极性大的生物碱杂质。再用2倍树脂量的30%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质，滤液在-0.08MPa、50℃条件下，经减压回流，浓缩即得槐定碱提取物。再用4倍树脂量的70%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质滤液在-0.09MPa、50℃条件下，经减压回流，浓缩即得苦参碱提取物；
（3） 将槐定碱提取物加10%的氢氧化钠溶液碱化至pH＝13，用苯萃取3次，蒸干得到槐定碱粗品。槐定碱粗品加2倍量石油醚进行重结晶得到槐定碱精品，纯度达97.89%；
（4）将苦参碱提取物，加2倍水搅拌洗涤，静置后过滤，滤出沉淀。沉淀加2倍水搅拌洗涤，静置后过滤，合并两次溶液。经减压回流，浓缩即得苦参碱粗品。苦参碱粗品碱化pH＝11，甲苯萃取5次，将萃取液合并经减压回收，得到苦参碱粗品。加2倍量石油醚进行重结晶，得到苦参碱精品，纯度达99.01%。
实例九、
（1） 取苦豆子全草，粉碎后过12目筛子筛取苦豆子粉末，用15倍苦豆子粉末干重（w/w）的PH=3的75%乙醇水溶液，乙醇水溶液中加入过量硫代硫酸钠，于80℃条件下提取3次，每次1个小时，合并三次滤液，然后减压浓缩，回收有机溶剂干燥，得到浸膏，即为苦豆子总碱浸膏；
（2）苦豆子总碱浸膏为原料，加重量比1:2的60%的乙醇水溶液进行溶解，加氨水调节PH=9，过滤，然后采用SP207树脂富集吸附至饱和，先用不少于2倍量的水（v/v）洗去非生物碱大极性杂质，3倍树脂量的20%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗去极性大的生物碱杂质。用2倍树脂量的35%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质，滤液在-0.08MPa、50℃条件下，经减压回流，浓缩即得槐定碱提取物。再用3倍树脂量的70%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质滤液在-0.09MPa、50℃条件下，经减压回流，浓缩即得苦参碱提取物；
（3） 将槐定碱提取物加20%的氢氧化钠溶液碱化至pH＝13，用苯萃取2次，蒸干得到槐定碱粗品。槐定碱粗品加2倍量石油醚进行重结晶得到槐定碱精品，纯度达98.18%；
（4） 将苦参碱提取物，加2倍水搅拌洗涤，静置后过滤，滤出沉淀。沉淀加2-3倍水搅拌洗涤，静置后过滤，合并两次溶液。经减压回流，浓缩即得苦参碱粗品。苦参碱粗品碱化pH＝11，甲苯萃取4次，将萃取液合并经减压回收，得到苦参碱粗品。加3倍量石油醚进行重结晶，得到苦参碱精品，纯度达98.94%。
实例十、
（1）取苦豆子全草，粉碎后过12目筛子筛取苦豆子粉末，用10倍苦豆子粉末干重（w/w）的PH=2的80%乙醇水溶液，乙醇水溶液中加入过量亚硫酸氢钠，于60℃条件下提取3次，每次1个小时，合并三次滤液，然后减压浓缩，回收有机溶剂干燥，得到浸膏，即为苦豆子总碱浸膏；
（2）苦豆子总碱浸膏为原料，加重量比1:2的60%的乙醇水溶液进行溶解，加氨水调节PH=10，过滤，然后采用SP700树脂富集吸附至饱和，先用不少于2倍量的水（v/v）洗去非生物碱大极性杂质，2倍树脂量的20%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗去极性大的生物碱杂质。再用2倍树脂量的40%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质滤液在-0.09MPa、50℃条件下，经减压回流，浓缩即槐定碱提取物。再用5倍树脂量的60%的乙醇水溶液以1倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质滤液在-0.09MPa、50℃条件下，经减压回流，浓缩即得苦参碱提取物；
（3） 将槐定碱提取物加10%的氢氧化钠溶液碱化至pH＝12，用甲苯萃取2-3次，蒸干得到槐定碱粗品。槐定碱粗品加2倍量石油醚进行重结晶得到槐定碱精品，纯度达98.13%；
（4） 将苦参碱提取物，加2倍水搅拌洗涤，静置后过滤，滤出沉淀。沉淀加3倍水搅拌洗涤，静置后过滤，合并两次溶液。经减压回流，浓缩即得苦参碱粗品。苦参碱粗品碱化pH＝9，甲苯萃取5次，将萃取液合并经减压回收，得到苦参碱粗品。加2倍量石油醚进行重结晶，得到苦参碱精品，纯度达99.26%。
提取工艺优选
采用三种不同的溶剂如酸性乙醇水，乙醇水和酸水提取苦豆子生物碱，并比较其苦豆子总碱、苦参碱、槐定碱提取率。包括以下步骤：
1、提取方法：
采用实施例1中的提取方法进行，仅将提取溶剂进行替换。提取溶剂分别为：PH=3的70%乙醇溶液、70%乙醇水、PH=3的酸水，一共四组试验，具体见表1，其中第四组试验为将70%乙醇水提取后进行酸化处理；经提取得苦豆子总碱浸膏；
2、样品测定
高效液相色谱法(HPLC)测定苦豆子总碱浸膏中总生物碱及单体生物碱的浓度与纯度。柱型C18柱，流动相为V甲醇：V水：V三乙胺= 0.55：0.45：0.0002，柱温30℃，流速1mL／min，检测波长215 nm，进样体积10μL。生物碱浓度与纯度的计算采用外标法。按外标法以峰面积计算。3批样品的测定结果见表1
结果：酸性乙醇即PH=3的70%乙醇提取所得苦豆子总碱、苦参碱和槐定碱的提取率远高于单独醇提取，酸水提取以及醇提取后酸化的方法，酸性乙醇中的强酸促使生物碱成盐，增大生物碱的溶出，因此增大苦豆子总碱浸膏中总碱、苦参碱、槐定碱的含量。

Claims (12)

1.一种采用大孔吸附树脂分离纯化苦豆子中苦参碱、槐定碱的制备方法，其特征在于：用含有还原剂的酸性极性有机溶剂水溶液从苦豆子中提取苦豆子总碱，得到苦豆子总碱浸膏；
采用大孔吸附树脂分离纯化制备槐定碱粗提物和苦参碱粗提物：苦豆子总碱浸膏为原料，加重量比1:2-4的50%-80%的极性有机溶剂水溶液进行溶解，加碱液调节PH=9-10，过滤，然后采用大孔吸附树脂富集吸附至饱和，先用不少于2倍量的水（v/v）洗去非生物碱的大极性杂质，1-4倍树脂量的20%的极性有机溶剂水溶液以1-3倍树脂量/小时的流速(v/v)洗去极性大的生物碱杂质；再用1-3倍树脂量的30-40%的极性有机溶剂水溶液以1-3倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质，滤液在-0.06～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回流，浓缩，即得槐定碱粗提物；再用1-5倍树脂量的50%-70%的极性有机溶剂水溶液以1-3倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质，滤液在-0.06～-0.09MPa、50～65℃条件下经减压回流，浓缩，即得苦参碱粗提物；
苦参碱粗提物、槐定碱粗提物分别通过结晶和重结晶纯化后得到苦参碱精品、槐定碱精品。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：苦豆子总碱浸膏的制备方法是：以苦豆子为原料，将苦豆子粉碎，用10-15倍苦豆子粉末干重（w/w）的50%-90%的酸性极性有机溶剂水溶液，酸性极性有机溶剂水溶液中加入过量还原剂，于50-90℃条件下提取1-3次，每次1-3个小时，合并3次滤液，然后减压浓缩，回收有机溶剂干燥，得到浸膏。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其中酸性极性有机溶剂中采用是强酸。
4.根据权利要求3所述的制备方法，强酸为盐酸、硫酸中的任意一种。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的还原剂为硫代硫酸钠、亚硫酸钠、抗坏血酸、亚硫酸氢钠和焦亚硫酸钠中的任意一种。
6.根据权利要求1-5任一所述的制备方法，其特征在于：大孔吸附树脂是非极性吸附树脂、极性大孔吸附树脂中的任意一种。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：大孔吸附树脂为D3520、D4006、D4020、H103、X-5、HP10、HP20、XAD-7、SP850、SP825、SP700、SP207、X-5AB-8、D-101中的任意一种。
8.根据权利要求1-5任一所述的制备方法，其特征在于：槐定碱粗提物和苦参碱粗提物的纯化工艺是：将槐定碱粗提物碱化PH11-13，用有机溶剂萃取后蒸干得到槐定碱粗品，槐定碱粗品加石油醚进行重结晶得槐定碱精品；
苦参碱粗提物加水搅拌后，静置滤出除沉淀，减压浓缩得苦参碱粗品；将苦参碱粗品碱化后甲苯萃取，减压回收的苦参碱粗品加石油醚重结晶，得到苦参碱精品。
9.根据权利要求1-5任一所述的制备方法，其特征在于所有的极性有机溶剂均为乙醇水溶液。
10.根据权利要求1所述的制备方法：
（1）苦豆子总碱浸膏：以苦豆子为原料，将苦豆子粉碎，用10-15倍苦豆子粉末干重（w/w）的PH=2-3的50%-90%乙醇水溶液，乙醇水溶液中加入过量还原剂，于50-90℃条件下提取1-3次，每次1-3个小时，合并3次滤液，然后减压浓缩，回收有机溶剂干燥，得到浸膏；
（2）苦豆子浸膏中，加重量比1:2-4的50%-80%的乙醇水溶液进行溶解，加氨水调节PH=9-10，过滤，然后采用大孔吸附树脂富集吸附至饱和，先用不少于2倍量的水（v/v）洗去非生物碱的大极性杂质，1-4倍树脂量的20%的乙醇水溶液以1-3倍树脂量/小时的流速(v/v)洗去极性大的生物碱杂质；再用1-3倍树脂量的30-40%的乙醇水溶液以1-3倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质，滤液在-0.06～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回流，浓缩即得槐定碱提取物，再用3-5倍树脂量的45%-70%的乙醇水溶液以1-3倍树脂量/小时的流速(v/v)洗脱目标物质，滤液在-0.06～-0.09MPa、50～65℃条件下，经减压回流，浓缩即得苦参碱提取物；
（3）槐定碱精品的制备：将槐定碱提取物碱化pH＝11-13， 苯类试剂萃取后蒸干得到槐定碱粗品，槐定碱粗品加1－5倍量的石油醚进行重结晶得槐定碱精品；
苦参碱精品的制备：苦参碱提取物加水搅拌后，静置滤除沉淀，减压浓缩得苦参碱粗品，将苦参碱粗品碱化至pH＝9-11后甲苯萃取，萃取3－5次，减压回收，加1-5倍量石油醚重结晶得到苦参碱精品。
11.根据权利要求10所述的制备方法：其特征在于，
PH=2-3的50%-90%乙醇水溶液使用的是强酸；
苦豆子总碱浸膏制备过程中所需还原剂采用硫代硫酸钠、亚硫酸钠、抗坏血酸、亚硫酸氢钠和焦亚硫酸钠中的一种；
槐定碱精品的制备过程中槐定碱粗提物碱化和苦参碱精品的制备过程中苦参碱粗品碱化所用到的碱为强碱或弱碱；
大孔吸附树脂是非极性吸附树脂、极性大孔吸附树脂中的一种。
12.根据权利要求11所述的制备方法：其特征在于，其中酸性乙醇中采用盐酸、硫酸中的任意一种；槐定碱粗提物碱化和苦参碱粗品碱化过程所用到的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氨水；大孔吸附树脂是D3520、D4006、D4020、H103、X-5、HP10、HP20、XAD-7、SP850、SP825、SP700、SP207、X-5AB-8、D-101中的任意一种。
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