CN106132403B

CN106132403B - 喷雾干燥制剂

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Publication number: CN106132403B
Application number: CN201480067999.XA
Authority: CN
Inventors: L·S·吉斯曼
Original assignee: Individual
Current assignee: ZISMAN, Lawrence, S.; Gilead Sciences Inc
Priority date: 2013-10-11
Filing date: 2014-10-10
Publication date: 2020-04-28
Anticipated expiration: 2034-10-10
Also published as: CN111743901A; AU2022203611A1; EP3054937A4; JP2016534153A; JP6823095B2; JP6483714B2; EP3054937A1; JP2019089830A; CA2926793C; WO2015054574A1; AU2014331796B2; US9925184B2; CA2926793A1; AU2020202556A1; EP3054937B1; US20180193336A1; ES2959419T3; CN106132403A; US20160235742A1; JP2021063119A

Abstract

本文公开了用于预防和治疗与异常受体酪氨酸激酶(RTK)活性相关的增生性疾病的化合物、组合物、方法及其制剂。本文描述的治疗性制剂更具体地涉及与血管和肺部病症相关的RTK的非选择性抑制。

Description

喷雾干燥制剂

相关申请的交叉引用

本申请要求2013年10月11日提交的美国临时申请号61/889,887的优先权，该申请的全部内容通过引用全文并入于此。

政府资助研究的声明

本发明是根据美国国立卫生研究院授予的基金1R43HL102946-01和2R44HL102946-02在美国政府支持下做出的。美国政府拥有本发明的某些权利。

技术领域

本发明总体上涉及与蛋白激酶活性相关的疾病的治疗和预防。具体地，本发明技术涉及蛋白激酶抑制剂的治疗性制剂以及用于治疗或预防肺和血管状况、癌症和其他病症的方法。

背景技术

提供以下背景讨论仅仅是为了帮助读者理解本发明，而并不必然描述或构成现有技术。

受体酪氨酸激酶(RTK)是调节细胞和组织的再生、重塑、发育和分化的跨膜多肽。参见，例如，Mustonen等人,J.Cell Biology 129,895-898(1995)；van der Geer等人.AnnRev.Cell Biol.10,251-337(1994)。多肽配体生长因子和细胞因子除了激活RTK之外，还能够诱导RTK外部结构域的构象变化，这导致受体二聚化。Lymboussaki,Dissertation,Univ.of Helsinki,Mol./Cancer Bio Lab and Dept.of Pathology,Haartman Institute(1999)；Ullrich等人,Cell 61,203-212(1990)。而且，同源RTK受体-配体结合导致受体在特定酪氨酸残基上的转磷酸化和激酶催化域的后续激活，从而能够实现底物磷酸化以及相关信号级联的激活。同上。

然而，异常RTK活性与多种疾病状况相关，并且某些RTK抑制剂的全身性递送已经显示出对特定疾病状况的功效。已经采用针对该目的的包括鼠野百合碱(MCT)模型系统在内的体内试验来确定推定的RTK抑制剂是否将起到治疗剂的作用。然而，关于临床前候选药物功效，MCT模型由于该系统无法证实某些人类疾病表型，例如在症状上与此类疾病共病的新生内膜和/或丛状病变的形成而受到批评。因此，该模型是不完善的系统，它可能使人类疾病的病因学和病理学指征混淆。因此，新的或补充的模型系统对于准确且有效的药物开发是必要的。

随着第一代RTK抑制剂例如伊马替尼的开发和施用，RTK通过获得某些突变已形成了抑制剂抗性。参见，例如，Shah等人,Science,305,395-402(2004)。例如，在某些激酶抑制剂例如伊马替尼难治的患病患者中，已经表明疏水袋“看门残基(gatekeeper residue)”频繁拥有突变。参见Pao等人,PLos Med.2(3):e73(2005)。已经对于ABL，即，在T315残基处，以及在KIT、PDGFRα、EGFR和其他激酶中的类似位置处鉴定到此类突变。同上。因此，对于预防和治疗具有异常RTK活性的疾病，需要在表型上类似于人类疾病病理学的模型系统中开发的新的具有较优功效的RTK抑制剂。

发明内容

在一个方面，本发明提供了用于治疗受试者的肺部病症的非选择性激酶受体抑制方法，该方法包括：向该受试者施用治疗有效量的结构1的化合物，该化合物的互变异构体、对映体、同分异构体或立体异构体，该化合物、该化合物的互变异构体、对映体、同分异构体或立体异构体的药学上可接受的盐，或其任何混合物，其中结构1具有下式：

并且其中X独立地选自C、N、O、S或-CN；

R¹、R²和R³可以是相同的或不同的，并且独立地选自H、C、N、O、S、Cl、Br、F、I、-CN、-NO₂、-OH、-CH₃、-CF₃、-C-N-C-基团、-C-N-C(＝O)-基团、-C(＝O)R⁸基团、-N-C(＝O)R⁸基团、-C-N-C(＝O)R⁸基团、取代的和未取代的R⁸基团、被R⁹、R¹⁰和R¹¹中的一个或多个所取代的取代的和未取代的R⁸基团、取代的和未取代的脒基(amidinyl)基团、取代的和未取代的胍基基团、取代的和未取代的伯、仲和叔烷基基团、取代的和未取代的芳基基团、取代的和未取代的烯基基团、取代的和未取代的炔基基团、取代的和未取代的杂环基基团、取代的和未取代的氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的二烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的二芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基基团、取代的和未取代的杂环基烷基基团、取代的和未取代的氰基基团、取代的和未取代的嘧啶基基团、取代的和未取代的氰基(芳基)基团、取代的和未取代的氰基(杂环基)基团，以及取代的和未取代的氰基-嘧啶基基团；

R⁴、R⁵、R⁶和R⁷可以是相同的或不同的，并且独立地选自H、Cl、Br、F、I、-CN、-NO₂、-OH、-CH₃、-CF₃、-NH₂、-C≡N、-C＝N基团、-C-N-C-基团、-C-N-C(＝O)-基团、-C-N-C(＝O)-C-F、-C-N-C(＝O)-C＝C、取代的和未取代的烷基基团、取代的和未取代的芳基基团、取代的和未取代的杂环基基团、烷氧基基团、芳氧基基团、取代的和未取代的杂环基烷基基团、取代的和未取代的氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的二烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的二芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基基团、取代的和未取代的芳基氨基基团、取代的和未取代的二烷基氨基基团、取代的和未取代的二芳基氨基基团、取代的和未取代的(烷基)(芳基)氨基基团、-C(＝O)H、-C(＝O)-烷基基团、-C(＝O)-芳基基团、-C(＝O)O-烷基基团、-C(＝O)O-芳基基团、-C(＝O)NH₂、-C(＝O)NH(烷基)基团、-C(＝O)NH(芳基)基团、-C(＝O)N(烷基)₂基团、–C(＝O)-芳基基团、-C(＝O)NH₂、-C(＝O)NH(烷基)基团、-C(＝O)NH(芳基)基团、-C(＝O)N(烷基)₂基团、-C(＝O)N(芳基)₂基团、-C(＝O)N(烷基)(芳基)基团、-C(＝O)O-烷基基团、-C(＝O)O-芳基基团、-C(＝O)-杂环基基团、-C(＝O)-O-杂环基基团、-C(＝O)NH(杂环基)基团、-C(＝O)-N(杂环基)₂基团、–C(＝O)-N(烷基)(杂环基)基团、-C(＝O)-N(芳基)(杂环基)基团、取代的和未取代的杂环基氨基烷基基团、取代的和未取代的羟基烷基基团、取代的和未取代的烷氧基烷基基团、取代的和未取代的芳氧基烷基基团，以及取代的和未取代的杂环基氧基烷基基团、取代的和未取代的二杂环基氨基烷基、取代的和未取代的(杂环基)(烷基)氨基烷基、取代的和未取代的(杂环基)(芳基)氨基烷基、取代的和未取代的烷氧基烷基基团、取代的和未取代的羟基烷基基团、取代的和未取代的芳氧基烷基基团，以及取代的和未取代的杂环基氧基烷基基团；-(烷基)(芳基)氨基烷基基团、-C(＝O)-杂环基基团、-C(＝O)-O-杂环基基团、-C(＝O)NH(杂环基)基团、-C(＝O)-N(杂环基)₂基团、-C(＝O)-N(烷基)(杂环基)基团、-C(＝O)-N(芳基)(杂环基)基团、取代的和未取代的杂环基氨基烷基基团、取代的和未取代的羟基烷基基团、取代的和未取代的烷氧基烷基基团、取代的和未取代的芳氧基烷基基团，以及取代的和未取代的杂环基氧基烷基基团、-NH(烷基)基团、-NH(芳基)基团、-N(烷基)₂基团、-N(芳基)₂基团、-N(烷基)(芳基)基团、-NH(杂环基)基团、-N(杂环基)(烷基)基团、-N(杂环基)(芳基)基团、-N(杂环基)₂基团、取代的和未取代的烷基基团、取代的和未取代的芳基基团、取代的和未取代的烷氧基基团、取代的和未取代的芳氧基基团、取代的和未取代的杂环基基团、-NHOH、-N(烷基)OH基团、-N(芳基)OH基团、-N(烷基)O-烷基基团、-N(芳基)O-烷基基团、-N(烷基)O-芳基基团以及-N(芳基)O-芳基基团；

R⁸选自R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、H、不存在、-C＝C、取代的和未取代的杂环基基团、取代的和未取代的芳基基团、取代的和未取代的杂环基(R⁹)基团、取代的和未取代的杂环基(R¹⁰)基团、取代的和未取代的杂环基(R¹¹)基团、取代的和未取代的杂环基(R⁹)(R¹⁰)基团、取代的和未取代的杂环基(R⁹)(R¹¹)基团、取代的和未取代的杂环基(R¹⁰)(R¹¹)基团、取代的和未取代的杂环基(R⁹)(R¹⁰)(R¹¹)基团、取代的和未取代的-C(＝O)-杂环基(R⁹)基团、取代的和未取代的-C(＝O)-杂环基(R¹⁰)基团、取代的和未取代的-C(＝O)-杂环基(R¹¹)基团、取代的和未取代的-C(＝O)-杂环基(R⁹)(R¹⁰)基团、取代的和未取代的-C(＝O)-杂环基(R⁹)(R¹¹)基团、取代的和未取代的-C(＝O)-杂环基(R¹⁰)(R¹¹)基团、取代的和未取代的-C(＝O)-杂环基(R⁹)(R¹⁰)(R¹¹)基团、取代的和未取代的芳基(R⁹)基团、取代的和未取代的芳基(R¹⁰)基团、取代的和未取代的芳基(R¹¹)基团、取代的和未取代的芳基(R⁹)(R¹⁰)基团、取代的和未取代的芳基(R⁹)(R¹¹)基团、取代的和未取代的芳基(R¹⁰)(R¹¹)基团、取代的和未取代的芳基(R⁹)(R¹⁰)(R¹¹)基团、取代的和未取代的-C(＝O)-芳基(R⁹)基团、取代的和未取代的-C(＝O)-芳基(R¹⁰)基团、取代的和未取代的-C(＝O)-芳基(R¹¹)基团、取代的和未取代的-C(＝O)-芳基(R⁹)(R¹⁰)基团、取代的和未取代的-C(＝O)-芳基(R⁹)(R¹¹)基团、取代的和未取代的-C(＝O)-芳基(R¹⁰)(R¹¹)基团，以及取代的/未取代的-C(＝O)-芳基(R⁹)(R¹⁰)(R¹¹)基团；

R⁹、R¹⁰和R¹¹可以是相同的或不同的，并且独立地选自不存在、H、Cl、Br、F、I、-CN、-NO₂、-OH、-CH₃、-CF₃、-NH₂、-C(＝O)-、-C-N-R¹²、-C≡N、-C-N-C基团、-C-N-C(＝O)-基团、-C-N-C(＝O)-C-F、-C-N-C(＝O)-C＝C、-C＝N基团、取代的和未取代的烷基基团、取代的和未取代的芳基基团、取代的和未取代的杂环基基团、烷氧基基团、芳氧基基团、取代的和未取代的杂环基烷基基团、取代的和未取代的氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的二烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的二芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基基团、取代的和未取代的芳基氨基基团，以及取代的和未取代的二烷基氨基基团、取代的和未取代的氨基烷基基团、取代的和未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基基团、取代的和未取代的芳基氨基基团、取代的和未取代的二烷基氨基基团、取代的和未取代的二芳基氨基基团、取代的和未取代的(烷基)(芳基)氨基基团、-C(＝O)H、-C(＝O)-烷基基团、-C(＝O)-芳基基团、-C(＝O)O-烷基基团、-C(＝O)O-芳基基团、-C(＝O)NH₂、-C(＝O)NH(烷基)基团、-C(＝O)NH(芳基)基团、-C(＝O)N(烷基)₂基团、–C(＝O)-芳基基团、-C(＝O)NH₂、-C(＝O)NH(烷基)基团、-C(＝O)NH(芳基)基团、-C(＝O)N(烷基)₂基团、-C(＝O)N(芳基)₂基团、-C(＝O)N(烷基)(芳基)基团、-C(＝O)O-烷基基团、-C(＝O)O-芳基基团、-C(＝O)-杂环基基团、-C(＝O)-O-杂环基基团、-C(＝O)NH(杂环基)基团、-C(＝O)-N(杂环基)₂基团、–C(＝O)-N(烷基)(杂环基)基团、-C(＝O)-N(芳基)(杂环基)基团、取代的和未取代的杂环基氨基烷基基团、取代的和未取代的氰基基团、取代的和未取代的嘧啶基基团、取代的和未取代的氰基(芳基)基团、取代的和未取代的氰基(杂环基)基团，以及取代的和未取代的氰基-嘧啶基基团；

R¹²选自不存在、H、Cl、Br、F、I、-CN、-NO₂、-OH、-CH₃、-CF₃、-NH₂、-C(＝O)-、-C-N-R¹²、-C≡N、-C-N-C基团、-C-N-C(＝O)-基团、-C-N-C(＝O)-C-F、-C-N-C(＝O)-C＝C、-C＝N基团、-C(＝O)-基团、-C(＝O)-C-基团、-C(＝O)-C＝C、-S(＝O)₂-基团、-S(＝O)₂-C-基团、-S(＝O)₂-C＝C-基团、-S(＝O)₂-C＝C-CH₃、烷氧基基团、芳氧基基团、取代的和未取代的脒基基团、取代的和未取代的胍基基团、取代的和未取代的伯、仲和叔烷基基团、取代的和未取代的芳基基团、取代的和未取代的烯基基团、取代的和未取代的炔基基团、取代的和未取代的杂环基基团、取代的和未取代的氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的二烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的二芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基基团、取代的和未取代的杂环基烷基基团、取代的和未取代的氰基基团、取代的和未取代的嘧啶基基团、取代的和未取代的氰基(芳基)基团、取代的和未取代的氰基(杂环基)基团，以及取代的和未取代的氰基-嘧啶基基团；

Q¹选自直接键、H、C、Cl、Br、F、I、-CN、-NO₂、-CH₃、-CF₃、-NH₂、-C(＝O)-、-C-N-R¹²、-C≡N、-C-N-C基团、-C-N-C(＝O)-基团、-C-N-C(＝O)-C-F、-C-N-C(＝O)-C＝C、-C＝N基团、-C(＝O)-基团、-C(＝O)-C-基团、-C(＝O)-C＝C、-CF₃、-C≡N、-C-N-C-基团、-C-N-C(＝O)-基团、-C-N-C(＝O)-C-F、-C-N-C(＝O)-C＝C、-OH、烷氧基基团、芳氧基基团、取代的和未取代的烷基基团、取代的和未取代的芳基基团、取代的和未取代的杂环基基团、烷氧基基团、芳氧基基团、甲氧基基团、二甲氧基基团、甲氧基苯酚、甲氧基苯酚基团、二甲氧基苯酚、二甲氧基苯酚基团、二甲氧基苯、二甲氧基苯基团、甲氧基甲基苄基基团、取代的和未取代的芳烷基基团、-NH₂、取代的和未取代的杂环基烷基基团、取代的/未取代的氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的二烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的二芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基基团、取代的和未取代的芳基氨基基团，以及取代的和未取代的二烷基氨基基团、取代的和未取代的氰基基团、取代的和未取代的嘧啶基基团、取代的和未取代的氰基(芳基)基团、取代的和未取代的氰基(杂环基)基团，以及取代的和未取代的氰基-嘧啶基基团；

Q²选自不存在、H、Q¹、Q¹(Q³)、-OH、烷氧基基团、芳氧基基团；并且

Q³选自不存在、直接键、H、C、Cl、Br、F、I、-CN、-NO₂、-CH₃、-CF₃、-NH₂、-C(＝O)-、-C-N-R¹²、-C≡N、-C-N-C基团、-C-N-C(＝O)-基团、-C-N-C(＝O)-C-F、-C-N-C(＝O)-C＝C、-C＝N基团、-C(＝O)-基团、-C(＝O)-C-基团、-C(＝O)-C＝C、-CF₃、-C≡N、-C-N-C-基团、-C-N-C(＝O)-基团、-C-N-C(＝O)-C-F、-C-N-C(＝O)-C＝C、-OH、烷氧基基团、烷氧基基团、芳氧基基团、甲氧基基团、二甲氧基基团、甲氧基苯酚、甲氧基苯酚基团、二甲氧基苯酚、二甲氧基苯酚基团、二甲氧基苯、二甲氧基苯基团、取代的和未取代的烷基基团、取代的和未取代的芳基基团，以及取代的和未取代的杂环基基团。前述段落(即[0009])的内容在下文中称为“QXR”。

在说明性实施方案中，R⁸的结构具有下式：

其中X独立地选自C、N、O、S和-CN；

R⁹、R¹⁰和R¹¹可以是相同的或不同的，并且独立地选自H、C、N、O、S、Cl、Br、F、I、-CN、-NO₂、-OH、-CH₃、-CF₃、-NH₂、-C(＝O)-、-C-N-R¹²、-C≡N、-C-N-C(＝O)-C-F、-C-N-C(＝O)-C＝C、取代的和未取代的烷基基团、取代的和未取代的芳基基团、取代的和未取代的杂环基基团、-OH、烷氧基基团、芳氧基基团、取代的和未取代的杂环基烷基基团、取代的和未取代的氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的二烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的二芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基基团、取代的和未取代的芳基氨基基团，以及取代的和未取代的二烷基氨基基团、取代的和未取代的氰基基团、取代的和未取代的嘧啶基基团、取代的和未取代的氰基(芳基)基团、取代的和未取代的氰基(杂环基)基团，以及取代的和未取代的氰基-嘧啶基基团；并且

R¹²选自-C(＝O)-基团、-C(＝O)-C-基团、-C(＝O)-C＝C、-S(＝O)₂-基团、-S(＝O)₂-C-基团、-S(＝O)₂-C＝C-基团、-S(＝O)₂-C＝C-CH₃、-OH、烷氧基基团、芳氧基基团、取代的和未取代的脒基基团、取代的和未取代的胍基基团、取代的和未取代的伯、仲和叔烷基基团、取代的和未取代的芳基基团、取代的和未取代的烯基基团、取代的和未取代的炔基基团、取代的和未取代的杂环基基团、取代的和未取代的氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的二烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的二芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基基团、取代的和未取代的杂环基烷基基团、取代的和未取代的氰基基团、取代的和未取代的嘧啶基基团、取代的和未取代的氰基(芳基)基团、取代的和未取代的氰基(杂环基)基团，以及取代的和未取代的氰基-嘧啶基基团。前述段落(即[0010])的内容在下文中称为“QXR2”。

在说明性实施方案中，R⁸的结构选自如下所示的A组。

在说明性实施方案中，Q¹或Q²的结构选自如下所示的B组、-CH₃、-OH、-O-CH₃、-C-N-C(＝O)-C＝C和-C-N-C(＝O)-C-F。

B组结构

在一些实施方案中，结构1的化合物为如以下C组中所示的结构2、2a、3、4或5的化合物。

C组结构

在说明性实施方案中，结构1、2、2a、3、4或5的化合物口服、静脉内、皮下、经皮、腹膜内或通过吸入施用。在说明性实施方案中，所述激酶受体为受体酪氨酸激酶(RTK)，并且其中该RTK为血小板衍生生长因子受体(PDGFR)。在说明性实施方案中，该PDGFR为血小板衍生生长因子受体-α(PDGFR-α)或血小板衍生生长因子受体-β(PDGFR-β)或两者。在说明性实施方案中，该PDGFR为选自PDGFR-αα、PDGFR-ββ和PDGFR-αβ或其任意组合的同二聚体或异二聚体。在说明性实施方案中，PDGFR的抑制在治疗肺部病症中是有效的，其中该肺部病症为肺动脉高压(PAH)、与丛状和/或新生内膜病变相关的PAH、与肺纤维化和/或进行性血管退化相关的PAH、异常成纤维细胞和/或成肌纤维细胞增殖，或与异常内皮细胞增殖相关的肺血管病症，或其任意组合。

在说明性实施方案中，所述抑制为PDGFR-α和PDGFR-β两者的联合抑制。在说明性实施方案中，所述抑制通过调节同源底物相互作用阻止PDGFR-α和PDGFR-β两者的活化。在说明性实施方案中，该同源底物选自PDGFAA、PDGFBB和PDGFAB或其任意组合。在说明性实施方案中，所述肺部病症选自肺动脉高压(PAH)、与丛状和/或新生内膜病变相关的PAH、与肺纤维化和/或进行性血管退化相关的PAH、异常成纤维细胞和/或成肌纤维细胞增殖以及与异常内皮细胞增殖相关的肺血管病症。

在说明性实施方案中，所述PAH选自原发性PAH、特发性PAH、遗传性PAH、难治性PAH、BMPR2、ALK1、与遗传性出血性毛细血管扩张相关的内皮糖蛋白、与遗传性出血性毛细血管扩张无关的内皮糖蛋白、药物诱发的PAH和毒素诱发的PAH、与系统性硬化、混合性结缔组织病、HIV、肝炎和/或门静脉高压相关的PAH。

在说明性实施方案中，所述PAH继发于肺高压、先天性心脏病、低氧、慢性溶血性贫血、新生儿持续性肺高压、肺静脉闭塞病(PVOD)、肺毛细血管血管瘤病(PCH)、左心脏病肺高压、收缩期功能障碍、舒张期功能障碍、瓣膜病、肺病、间质性肺病、肺纤维化、血吸虫病、慢性阻塞性肺病(COPD)、睡眠呼吸障碍、肺泡通气不足病症、长期高原暴露(chronicexposure to high altitude)、发育异常、慢性血栓栓塞性肺高压(CTEPH)、不明多因素机制的肺高压、血液病、骨髓增生性病症、脾切除术、全身性病症、结节病、肺朗格汉斯细胞组织细胞增生症、淋巴管平滑肌瘤病、神经纤维瘤病、血管炎、代谢障碍、糖原贮积病、戈谢病、甲状腺病症、肿瘤阻塞、纤维性纵隔炎和/或接受透析的慢性肾衰竭。

在说明性实施方案中，所述肺部病症与异常的：右心室收缩压(RVSP)、肺动脉压、心输出量、右心室(RV)肥大和/或肺动脉(PA)肥大相关。在说明性实施方案中，结构1的化合物针对激酶受体具有小于300nM的IC₅₀。在说明性实施方案中，该激酶受体为血小板衍生生长因子受体-α(PDGFR-α)或血小板衍生生长因子受体-β(PDGFR-β)或两者，并且其中所述肺部病症为肺动脉高压。在说明性实施方案中，所述抑制通过非共价相互作用而发生。在说明性实施方案中，所述抑制通过共价相互作用而发生。

在一个方面，本发明提供了治疗受试者的肺动脉高压(PAH)的方法，该方法包括：通过向该受试者施用结构1的化合物，该化合物的互变异构体、对映体、同分异构体或立体异构体，该化合物、该化合物的互变异构体、对映体、同分异构体或立体异构体的药学上可接受的盐，或其任何混合物，来调节血小板衍生生长因子受体-α(PDGFR-α)或血小板衍生生长因子受体-β(PDGFR-β)或两者的一个或多个下游靶标的磷酸化状态，其中该下游靶标为由于PDGFR-α和/或PDGFR-β活化而磷酸化的任何底物，其中该下游靶标选自AKT、PDGFR、STAT3、ERK1和ERK2，或PDGFR-α和/或PDGFR-β的任何其他下游靶标，并且其中结构1的化合物具有下式：

结构1

其中X独立地选自C、N、O、S或-CN；

R¹、R²和R³可以是相同的或不同的，并且独立地选自H、C、N、O、S、Cl、Br、F、I、-CN、-NO₂、-OH、-CH₃、-CF₃、-C-N-C-基团、-C-N-C(＝O)-基团、-C(＝O)R⁸基团、-N-C(＝O)R⁸基团、-C-N-C(＝O)R⁸基团、取代的和未取代的R⁸基团、被R⁹、R¹⁰和R¹¹中的一个或多个所取代的取代的和未取代的R⁸基团、取代的和未取代的脒基基团、取代的和未取代的胍基基团、取代的和未取代的伯、仲和叔烷基基团、取代的和未取代的芳基基团、取代的和未取代的烯基基团、取代的和未取代的炔基基团、取代的和未取代的杂环基基团、取代的和未取代的氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的二烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的二芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基基团、取代的和未取代的杂环基烷基基团、取代的和未取代的氰基基团、取代的和未取代的嘧啶基基团、取代的和未取代的氰基(芳基)基团、取代的和未取代的氰基(杂环基)基团，以及取代的和未取代的氰基-嘧啶基基团；

其中R⁸的结构具有下式：

并且其中X独立地选自C、N、O、S或-CN；

R⁹、R¹⁰和R¹¹可以是相同的或不同的，并且独立地选自H、C、N、O、S、Cl、Br、F、I、-CN、-NO₂、-OH、-CH₃、-CF₃、-NH₂、-C(＝O)-、-C-N-R¹²、-C≡N、-C-N-C(＝O)-C-F、-C-N-C(＝O)-C＝C、取代的和未取代的烷基基团、取代的和未取代的芳基基团、取代的和未取代的杂环基基团、-OH、烷氧基基团、芳氧基基团、取代的和未取代的杂环基烷基基团、取代的和未取代的氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的二烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的二芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基基团、取代的和未取代的芳基氨基基团，以及取代的和未取代的二烷基氨基基团、取代的和未取代的氰基基团、取代的和未取代的嘧啶基基团、取代的和未取代的氰基(芳基)基团、取代的和未取代的氰基(杂环基)基团，以及取代的和未取代的氰基-嘧啶基基团；

R¹²选自-C(＝O)-基团、-C(＝O)-C-基团、-C(＝O)-C＝C、-S(＝O)₂-基团、-S(＝O)₂-C-基团、-S(＝O)₂-C＝C-基团、-S(＝O)₂-C＝C-CH₃、-OH、烷氧基基团、芳氧基基团、取代的和未取代的脒基基团、取代的和未取代的胍基基团、取代的和未取代的伯、仲和叔烷基基团、取代的和未取代的芳基基团、取代的和未取代的烯基基团、取代的和未取代的炔基基团、取代的和未取代的杂环基基团、取代的和未取代的氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的二烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的二芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基基团、取代的和未取代的杂环基烷基基团、取代的和未取代的氰基基团、取代的和未取代的嘧啶基基团、取代的和未取代的氰基(芳基)基团、取代的和未取代的氰基(杂环基)基团，以及取代的和未取代的氰基-嘧啶基基团；并且

其中Q¹或Q²的结构选自-CH₃、-OH、-O-CH₃、-C-N-C(＝O)-C＝C、-C-N-C(＝O)-C-F、

前述段落(即[0019])的全部内容在下文中称为“QXR3”。

在说明性实施方案中，R⁸的结构选自以上在概述中提到的A组结构。在说明性实施方案中，所述调节为与施用前受试者中的PSR相比，受试者中的磷酸化STAT3/总STAT3、二磷酸化ERK1/总ERK1、二磷酸化ERK2/总ERK2、单磷酸化ERK1/总ERK1、磷酸化PDGFR/总PDGFR、或磷酸化AKT/总AKT或其任意组合的减少。在说明性实施方案中，结构1的化合物与AKT在残基Thr308和/或Ser473处相互作用，或其中结构1的化合物与选自LYS627、VAL607、GLU644、MET648、HIS816、LEU809、ASP836、CYS814、ILE834、CYS835、PHE937、LYS634、VAL614、GLU651、MET655、HIS824、LEU817、ASP844、CYS822、ILE842、VAL658、ILE647、HIS816、ARG836、LYS634、GLU651、ALA632、HIS824、MET655、ARG825、CYS843、THR874、ARG817、VAL815、LEU651、LEU809、ILE657、THR681、ILE654、ARG825、ASP826、LEU658、LEU825、PHE837、LEU658、HIS824、CYS814、ILE654、ASP844、ILE842和/或CYS843或其任意组合的PDGFR-α、PDGFR-β、PDGFR-αα、PDGFR-ββ和/或PDGFR-αβ氨基酸中的一种或多种相互作用。

在一些实施方案中，结构1的化合物为选自以上在概述中提到的C组结构的化合物。在说明性实施方案中，所述抑制通过非共价相互作用而发生。在说明性实施方案中，所述抑制通过共价相互作用而发生。在说明性实施方案中，结构1的化合物，该化合物的互变异构体、对映体、同分异构体或立体异构体，该化合物、该化合物的互变异构体、对映体、同分异构体或立体异构体的药学上可接受的盐，或其任何混合物，通过非选择性抑制选自AKT、c-Kit和/或PDGFR的受体酪氨酸激酶(RTK)来治疗一种或多种与过度增殖、瘤形成、发育不全、过度增生、发育不良、化生(metaplasia)、分化异常(prosoplasia)、粘连形成(desmoplasia)、血管发生、炎症、免疫状态、代谢、肺功能和心血管功能相关的疾病，其中结构1如下：

结构1

其中X、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷(以及其中包含的R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹和R¹²)、Q¹和Q²(以及其中包含的Q³)选自如上文提到的“XRQ3”。

在说明性实施方案中，R⁸的结构选自以上在概述中提到的A组结构。在一些实施方案中，所述化合物为选自以上在概述中提到的C组结构的结构。

在说明性实施方案中，结构1的化合物口服、静脉内、皮下、经皮、腹膜内或通过吸入施用。在说明性实施方案中，所述疾病选自癌症、转移性癌症、HIV、肝炎、PAH、原发性PAH、特发性PAH、遗传性PAH、难治性PAH、BMPR2、ALK1、与遗传性出血性毛细血管扩张相关的内皮糖蛋白、与遗传性出血性毛细血管扩张无关的内皮糖蛋白、药物诱发的PAH，和毒素诱发的PAH、与系统性硬化相关的PAH，和混合性结缔组织病、肺高压、先天性心脏病、低氧、慢性溶血性贫血、新生儿持续性肺高压、肺静脉闭塞病(PVOD)、肺毛细血管血管瘤病(PCH)、左心脏病肺高压、收缩期功能障碍、舒张期功能障碍、瓣膜病、肺病、间质性肺病、肺纤维化、血吸虫病、COPD、睡眠呼吸障碍、肺泡通气不足病症、长期高原暴露、发育异常、慢性血栓栓塞性肺高压(CTEPH)、不明多因素机制的肺高压、血液病、骨髓增生性病症、脾切除术、全身性病症、结节病、肺朗格汉斯细胞组织细胞增生症、淋巴管平滑肌瘤病、神经纤维瘤病、代谢障碍、糖原贮积病、戈谢病、甲状腺病症、肿瘤阻塞、纤维性纵隔炎以及接受透析的慢性肾衰竭。

在说明性实施方案中，所述盐为氯化物、盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、二甲磺酸盐、甲苯磺酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、双乙酸盐、柠檬酸盐或双盐酸盐。在说明性实施方案中，所述抑制通过非共价相互作用而发生。在一些实施方案中，所述抑制通过共价相互作用而发生。在一些实施方案中，结构1的化合物针对激酶受体具有小于300nM的IC₅₀。在说明性实施方案中，所述治疗方法导致改善的运动能力、改善的功能级别、减少的呼吸短促、减少的住院、减少的对肺移植的需要、减少的对心房间隔切开术的需要以及增加的寿命或总存活期中的一种或多种。在一些实施方案中，所述改善的运动能力为增加的6分钟的步行距离。在合适的实施方案中，改善的功能级别为从IV级到III、II或I级的改善，或从III级到II或I级的改善，或从II级到I级的改善。

在一些实施方案中，公开了适于吸入以便递送有效剂量用于疾病治疗的具有赋形剂亮氨酸的PK10571的喷雾干粉制剂(游离碱或盐形式)。在某些实施方案中，描述了适于吸入的具有赋形剂海藻糖和亮氨酸的PK10571的喷雾干粉制剂(游离碱或盐形式)，以便递送有效剂量用于疾病的治疗。在一些实施方案中，非选择性PDGF受体激酶抑制剂(针对PDGFRα受体和PDGFRβ受体具有大约相等的效力)被描述为适于吸入以便递送有效剂量用于疾病治疗的具有亮氨酸或亮氨酸/海藻糖的配制的喷雾干粉，其中该疾病为WHO第1组肺动脉高压；该疾病为WHO第3组PAH(与肠肺疾病或肺纤维化相关的PAH)。

在一个方面，本发明为一种组合物，其包含赋形剂和结构1的非选择性受体酪氨酸激酶(RTK)抑制剂化合物，该化合物的互变异构体、对映体、同分异构体或立体异构体，该化合物、该化合物的互变异构体、对映体、同分异构体或立体异构体的药学上可接受的盐，或其任何混合物，其中所述组合物为干粉，并且其中结构1具有下式：

结构1

其中X独立地选自C、N、O、S或-CN；

R¹、R²和R³可以是相同的或不同的，并且独立地选自H、C、N、O、S、Cl、Br、F、I、-CN、-NO₂、-OH、-CH₃、-CF₃、-C-N-C-基团、-C-N-C(＝O)-基团、-C(＝O)R⁸基团、-N-C(＝O)R⁸基团、-C-N-C(＝O)R⁸基团、N-C(＝O)-N-R⁸、取代的和未取代的R⁸基团、取代的和未取代的脲基团、被R⁹、R¹⁰和R¹¹中的一个或多个所取代的取代的和未取代的R⁸基团、取代的和未取代的脒基基团、取代的和未取代的胍基基团、取代的和未取代的伯、仲和叔烷基基团、取代的和未取代的芳基基团、取代的和未取代的烯基基团、取代的和未取代的炔基基团、取代的和未取代的杂环基基团、取代的和未取代的氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的二烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的二芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基基团、取代的和未取代的杂环基烷基基团、取代的和未取代的氰基基团、取代的和未取代的嘧啶基基团、取代的和未取代的氰基(芳基)基团、取代的和未取代的氰基(杂环基)基团，以及取代的和未取代的氰基-嘧啶基基团；

R⁴、R⁵、R⁶和R⁷可以是相同的或不同的，并且独立地选自H、Cl、Br、F、I、-CN、-NO₂、-OH、-CH₃、-CF₃、-NH₂、-C≡N、-C＝N基团、-C-N-C-基团、-C-N-C(＝O)-基团、-C-N-C(＝O)-C-F、-C-N-C(＝O)-C＝C、取代的和未取代的烷基基团、取代的和未取代的芳基基团、取代的和未取代的杂环基基团、烷氧基基团、芳氧基基团、取代的和未取代的杂环基烷基基团、取代的和未取代的氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的二烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的二芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基基团、取代的和未取代的芳基氨基基团、取代的和未取代的二烷基氨基基团、取代的和未取代的二芳基氨基基团、取代的和未取代的(烷基)(芳基)氨基基团、-C(＝O)H、-C(＝O)-烷基基团、-C(＝O)-芳基基团、-C(＝O)O-烷基基团、-C(＝O)O-芳基基团、-C(＝O)NH₂、-C(＝O)NH(烷基)基团、-C(＝O)NH(芳基)基团、-C(＝O)N(烷基)₂基团、–C(＝O)-芳基基团、-C(＝O)NH₂、-C(＝O)NH(烷基)基团、-C(＝O)NH(芳基)基团、-C(＝O)N(烷基)₂基团、-C(＝O)N(芳基)₂基团、-C(＝O)N(烷基)(芳基)基团、-C(＝O)O-烷基基团、-C(＝O)O-芳基基团、-C(＝O)-杂环基基团、-C(＝O)-O-杂环基基团、-C(＝O)NH(杂环基)基团、-C(＝O)-N(杂环基)₂基团、–C(＝O)-N(烷基)(杂环基)基团、-C(＝O)-N(芳基)(杂环基)基团、取代的和未取代的杂环基氨基烷基基团、取代的和未取代的羟基烷基基团、取代的和未取代的烷氧基烷基基团、取代的和未取代的芳氧基烷基基团，以及取代的和未取代的杂环基氧基烷基基团、取代的和未取代的二杂环基氨基烷基、取代的和未取代的(杂环基)(烷基)氨基烷基、取代的和未取代的(杂环基)(芳基)氨基烷基、取代的和未取代的烷氧基烷基基团、取代的和未取代的羟基烷基基团、取代的和未取代的芳氧基烷基基团，以及取代的和未取代的杂环基氧基烷基基团；-(烷基)(芳基)氨基烷基基团、-C(＝O)-杂环基基团、-C(＝O)-O-杂环基基团、-C(＝O)NH(杂环基)基团、-C(＝O)-N(杂环基)₂基团、-C(＝O)-N(烷基)(杂环基)基团、-C(＝O)-N(芳基)(杂环基)基团、取代的和未取代的杂环基氨基烷基基团、取代的和未取代的羟基烷基基团、取代的和未取代的烷氧基烷基基团、取代的和未取代的芳氧基烷基基团，以及取代的和未取代的杂环基氧基烷基基团、-NH(烷基)基团、-NH(芳基)基团、-N(烷基)₂基团、-N(芳基)₂基团、-N(烷基)(芳基)基团、-NH(杂环基)基团、-N(杂环基)(烷基)基团、-N(杂环基)(芳基)基团、-N(杂环基)₂基团、取代的和未取代的烷基基团、取代的和未取代的芳基基团、取代的和未取代的烷氧基基团、取代的和未取代的芳氧基基团、取代的和未取代的杂环基基团、-NHOH、-N(烷基)OH基团、-N(芳基)OH基团、-N(烷基)O-烷基基团、-N(芳基)O-烷基基团、-N(烷基)O-芳基基团以及-N(芳基)O-芳基基团；其中R⁸的结构具有下式：

并且其中X独立地选自C、N、O、S或-CN；

R¹²选自-C(＝O)-基团、-C(＝O)-C-基团、-C(＝O)-C＝C、-S(＝O)₂-基团、-S(＝O)₂-C-基团、-S(＝O)₂-C＝C-基团、-S(＝O)₂-C＝C-CH₃、-OH、烷氧基基团、芳氧基基团、取代的和未取代的脒基基团、取代的和未取代的胍基基团、取代的和未取代的伯、仲和叔烷基基团、取代的和未取代的芳基基团、取代的和未取代的烯基基团、取代的和未取代的炔基基团、取代的和未取代的杂环基基团、取代的和未取代的氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的二烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的二芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基基团、取代的和未取代的杂环基烷基基团、取代的和未取代的氰基基团、取代的和未取代的嘧啶基基团、取代的和未取代的氰基(芳基)基团、取代的和未取代的氰基(杂环基)基团，以及取代的和未取代的氰基-嘧啶基基团；并且其中Q¹或Q²的结构选自B组结构、-CH₃、-OH、-O-CH₃、-C-N-C(＝O)-C＝C和-C-N-C(＝O)-C-F以及Cl(氯化物)。

在一些实施方案中，所述干粉为喷雾干燥粉末。在说明性实施方案中，所述化合物在图表A/图1中列出。在说明性实施方案中，所述受体酪氨酸激酶选自AKT、c-Kit和血小板衍生生长因子受体(PDGFR)。在说明性实施方案中，所述受体酪氨酸激酶为PDGFR。在说明性实施方案中，所述PDGFR为血小板衍生生长因子受体-α(PDGFR-α)或血小板衍生生长因子受体-β(PDGFR-β)或两者。在说明性实施方案中，所述PDGFR为选自PDGFR-αα、PDGFR-ββ和PDGFR-αβ或其任意组合的同二聚体或异二聚体。在说明性实施方案中，所述赋形剂包含疏水性氨基酸。在说明性实施方案中，所述疏水性氨基酸选自：色氨酸、酪氨酸、亮氨酸、三亮氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸。

在说明性实施方案中，所述疏水性氨基酸为亮氨酸。在说明性实施方案中，所述疏水性氨基酸为L-亮氨酸。在说明性实施方案中，所述疏水性氨基酸以所述组合物的20-60重量％或更高和/或10-95重量％的量存在。在说明性实施方案中，所述赋形剂包含碳水化合物填充剂。在说明性实施方案中，所述碳水化合物填充剂选自：乳糖、甘露醇、海藻糖、棉子糖或麦芽糊精。在说明性实施方案中，所述碳水化合物填充剂为海藻糖。在说明性实施方案中，所述赋形剂包含疏水性氨基酸和碳水化合物填充剂。在说明性实施方案中，所述赋形剂包含亮氨酸和海藻糖。在说明性实施方案中，所述干粉包含质量中值空气动力学直径小于或等于约5μm的颗粒。在说明性实施方案中，至少50％的颗粒具有小于约5μm的质量中值空气动力学直径。

在说明性实施方案中，至少50％的颗粒具有小于约3μm的质量中值空气动力学直径。在说明性实施方案中，至少50％的颗粒具有小于约3μm的质量中值空气动力学直径。在说明性实施方案中，所述干粉具有按水重量计低于约5％的水分含量。在说明性实施方案中，所述干粉基本为无定形的。在说明性实施方案中，所述干粉具有大于50摄氏度的玻璃化转变温度。在说明性实施方案中，所述干粉具有大于90摄氏度的玻璃化转变温度。在说明性实施方案中，重建的粉末的pH大于3。在说明性实施方案中，在动脉或静脉血浆中的中值T_MAX值为1-60分钟。在说明性实施方案中，AUC值的范围为100000-400000ng/ml*min。在说明性实施方案中，所述化合物的平均最大血浆浓度(C_MAX)在约100-3000ng/ml的范围内。

在说明性实施方案中，通过吸入递送时所述化合物的终末半衰期在100-300分钟的范围内。在说明性实施方案中，释放的剂量为40％或更多。

在说明性实施方案中，经由吸入的生物利用率为约10％或更大。在说明性实施方案中，所述盐为氯化物、盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、二甲磺酸盐、甲苯磺酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、双乙酸盐、柠檬酸盐或双盐酸盐。在说明性实施方案中，所述组合物被配制成游离碱。在说明性实施方案中，结构1的化合物针对激酶受体具有小于300nM的IC₅₀。在说明性实施方案中，所述赋形剂为磷脂。在说明性实施方案中，所述赋形剂为1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)。在说明性实施方案中，所述赋形剂为与一定量的氯化钙组合以达到可接受的玻璃化转变温度的DSPC。在说明性实施方案中，至少50％的颗粒具有小于约3μm的质量中值空气动力学直径。在说明性实施方案中，所述干粉通过干粉吸入器递送。

在一个方面，本发明为治疗疾病的方法，该方法包括：(a)选择需要治疗的受试者；以及(b)施用治疗有效量的喷雾干燥颗粒的干粉制剂，该颗粒由包含疏水性赋形剂的原料制备，该疏水性赋形剂选自乳糖、甘露醇、海藻糖、棉子糖、麦芽糊精、色氨酸、酪氨酸、亮氨酸、三亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸和DSPC或其任意组合，其中该颗粒包含结构1的非选择性受体酪氨酸激酶(RTK)抑制剂化合物，该化合物的互变异构体、对映体、同分异构体或立体异构体，该化合物、该化合物的互变异构体、对映体、同分异构体或立体异构体的药学上可接受的盐，或其任何混合物，其中结构1具有下式：

结构1

其中X独立地选自C、N、O、S或-CN；

R¹、R²和R³可以是相同的或不同的，并且独立地选自H、C、N、O、S、Cl、Br、F、I、-CN、-NO₂、-OH、-CH₃、-CF₃、-C-N-C-基团、-C-N-C(＝O)-基团、-C(＝O)R⁸基团、-N-C(＝O)R⁸基团、-C-N-C(＝O)R⁸、N-C(＝O)-N-R⁸基团、取代的和未取代的R⁸基团、被R⁹、R¹⁰和R¹¹中的一个或多个所取代的取代的和未取代的R⁸基团、取代的和未取代的脒基基团、取代的和未取代的脲基团、取代的和未取代的胍基基团、取代的和未取代的伯、仲和叔烷基基团、取代的和未取代的芳基基团、取代的和未取代的烯基基团、取代的和未取代的炔基基团、取代的和未取代的杂环基基团、取代的和未取代的氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的二烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的二芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基基团、取代的和未取代的杂环基烷基基团、取代的和未取代的氰基基团、取代的和未取代的嘧啶基基团、取代的和未取代的氰基(芳基)基团、取代的和未取代的氰基(杂环基)基团，以及取代的和未取代的氰基-嘧啶基基团；

并且其中X独立地选自C、N、O、S或-CN；

R¹²选自-C(＝O)-基团、-C(＝O)-C-基团、-C(＝O)-C＝C、-S(＝O)₂-基团、-S(＝O)₂-C-基团、-S(＝O)₂-C＝C-基团、-S(＝O)₂-C＝C-CH₃、-OH、烷氧基基团、芳氧基基团、取代的和未取代的脒基基团、取代的和未取代的胍基基团、取代的和未取代的伯、仲和叔烷基基团、取代的和未取代的芳基基团、取代的和未取代的烯基基团、取代的和未取代的炔基基团、取代的和未取代的杂环基基团、取代的和未取代的氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的二烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的二芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基基团、取代的和未取代的杂环基烷基基团、取代的和未取代的氰基基团、取代的和未取代的嘧啶基基团、取代的和未取代的氰基(芳基)基团、取代的和未取代的氰基(杂环基)基团，以及取代的和未取代的氰基-嘧啶基基团；并且其中Q¹或Q²的结构选自B组结构、-CH₃、-OH、-O-CH₃、-C-N-C(＝O)-C＝C以及-C-N-C(＝O)-C-F。

在说明性实施方案中，所述化合物在图表A/图1中列出。在说明性实施方案中，所述受体酪氨酸激酶选自AKT、c-Kit和血小板衍生生长因子受体(PDGFR)。在说明性实施方案中，所述受体酪氨酸激酶为PDGFR。在说明性实施方案中，所述PDGFR为血小板衍生生长因子受体-α(PDGFR-α)或血小板衍生生长因子受体-β(PDGFR-β)或两者。在说明性实施方案中，所述PDGFR为选自PDGFR-αα、PDGFR-ββ和PDGFR-αβ或其任意组合的同二聚体或异二聚体。在说明性实施方案中，所述赋形剂包含亮氨酸和海藻糖。在说明性实施方案中，所述干粉包含质量中值空气动力学直径小于或等于约5μm的颗粒。在说明性实施方案中，至少40％的颗粒具有小于约3μm的质量中值空气动力学直径。在说明性实施方案中，所述干粉具有按水重量计低于约5％的水分含量。在说明性实施方案中，所述干粉基本为无定形的。

在说明性实施方案中，重建的粉末的pH大于3。在说明性实施方案中，所述中值T_MAX值为1-60分钟或更长时间。在说明性实施方案中，所述中值AUC值为100000-400000ng/ml*min。在说明性实施方案中，所述化合物的平均最大血浆浓度(C_MAX)在约100-3000ng/ml的范围内。在说明性实施方案中，通过吸入递送时所述化合物的半衰期在100-300分钟的范围内。在说明性实施方案中，释放的量为40％或更多。在说明性实施方案中，经由吸入的生物利用率为10％或更大。在说明性实施方案中，所述干粉封装在胶囊中。在说明性实施方案中，所述盐为氯化物、盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、二甲磺酸盐、甲苯磺酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、双乙酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、溴酸盐或双盐酸盐。在说明性实施方案中，所述组合物被配制成游离碱。在说明性实施方案中，结构1的化合物针对激酶受体具有小于300nM的IC₅₀。在说明性实施方案中，所述干粉组合物通过肺部给药而施用于受试者。

在说明性实施方案中，使用干粉吸入器施用所述干粉组合物。在说明性实施方案中，所述干粉吸入器为基于胶囊的干粉吸入器。在说明性实施方案中，所述基于胶囊的干粉吸入器为单剂量吸入器。在说明性实施方案中，所述疾病为肺动脉高压(PAH)，并且该PAH选自原发性PAH、特发性PAH、遗传性PAH、难治性PAH、BMPR2、ALK1、与遗传性出血性毛细血管扩张相关的内皮糖蛋白、与遗传性出血性毛细血管扩张无关的内皮糖蛋白、药物诱发的PAH和毒素诱发的PAH、与系统性硬化、混合性结缔组织病、HIV、肝炎以及门静脉高压相关的PAH。

在说明性实施方案中，所述PAH继发于肺高压、先天性心脏病、低氧、慢性溶血性贫血、新生儿持续性肺高压、肺静脉闭塞病(PVOD)、肺毛细血管血管瘤病(PCH)、左心脏病肺高压、收缩期功能障碍、舒张期功能障碍、瓣膜病、肺病、间质性肺病、肺纤维化、血吸虫病、慢性阻塞性肺病(COPD)、睡眠呼吸障碍、肺泡通气不足病症、长期高原暴露、发育异常、慢性血栓栓塞性肺高压(CTEPH)、不明多因素机制的肺动脉高压、血液病、骨髓增生性病症、脾切除术、全身性病症、结节病、肺朗格汉斯细胞组织细胞增生症、淋巴管平滑肌瘤病、神经纤维瘤病、血管炎、代谢障碍、糖原贮积病、戈谢病、甲状腺病症、肿瘤阻塞、纤维性纵隔炎和接受透析的慢性肾衰竭。

在说明性实施方案中，所述疾病选自癌症、转移性癌症、HIV、肝炎、PAH、原发性PAH、特发性PAH、遗传性PAH、难治性PAH、BMPR2、ALK1、与遗传性出血性毛细血管扩张相关的内皮糖蛋白、与遗传性出血性毛细血管扩张无关的内皮糖蛋白、药物诱发的PAH和毒素诱发的PAH、与系统性硬化相关的PAH，和混合性结缔组织病、肺动脉高压、先天性心脏病、低氧、慢性溶血性贫血、新生儿持续性肺高压、肺静脉闭塞病(PVOD)、肺毛细血管血管瘤病(PCH)、左心脏病肺高压、收缩期功能障碍、舒张期功能障碍、瓣膜病、肺病、间质性肺病、肺纤维化、血吸虫病、COPD、睡眠呼吸障碍、肺泡通气不足病症、长期高原暴露、发育异常、慢性血栓栓塞性肺高压(CTEPH)、不明多因素机制的肺高压、血液病、骨髓增生性病症、脾切除术、全身性病症、结节病、肺朗格汉斯细胞组织细胞增生症、淋巴管平滑肌瘤病、神经纤维瘤病、血管炎、代谢障碍、糖原贮积病、戈谢病、甲状腺病症、肿瘤阻塞、纤维性纵隔炎以及接受透析的慢性肾衰竭。

在说明性实施方案中，所述治疗包括改善受试者的世界卫生组织(WHO)功能性PAH分级，并且其中所述改善为从IV级到III、II或I级的改善，或从III级到II或I级的改善，或从II级到I级的改善。在说明性实施方案中，所述抑制对于治疗以下疾病中的一种或多种是有效的：肺部病症、肺动脉高压(PAH)、与丛状和/或新生内膜病变相关的PAH、与肺纤维化和/或进行性血管退化相关的PAH、与间质性肺病或肺纤维化相关的PAH、异常成纤维细胞和/或成肌纤维细胞增殖，或与异常内皮细胞增殖相关的肺血管病症，或其任意组合。

在一个方面，本发明为制备喷雾干燥颗粒的干粉制剂的方法，该方法包括：(a)准备原料，该原料包含：(i)结构1的非选择性受体酪氨酸激酶(RTK)抑制剂化合物，该化合物的互变异构体、对映体、同分异构体或立体异构体，该化合物、该化合物的互变异构体、对映体、同分异构体或立体异构体的药学上可接受的盐，或其任何混合物；以及(ii)选自色氨酸、酪氨酸、亮氨酸、三亮氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸的疏水性赋形剂，诸如乳糖、甘露醇、海藻糖、棉子糖、麦芽糊精或其任意组合的糖，或含有或不含氯化钙的磷脂如DSPC；以及(b)将所述原料喷雾干燥以提供所述制剂，其中所述颗粒包含疏水性赋形剂，疏水性赋形剂和糖的组合，或含有或不含氯化钙的磷脂，以及结构1的非选择性受体酪氨酸激酶(RTK)抑制剂化合物，该化合物的互变异构体、对映体、同分异构体或立体异构体，该化合物、该化合物的互变异构体、对映体、同分异构体或立体异构体的药学上可接受的盐，或其任何混合物，其中结构1具有下式：

结构1

其中X独立地选自C、N、O、S或-CN；

R¹、R²和R³可以是相同的或不同的，并且独立地选自H、C、N、O、S、Cl、Br、F、I、-CN、-NO₂、-OH、-CH₃、-CF₃、-C-N-C-基团、-C-N-C(＝O)-基团、-C(＝O)R⁸基团、-N-C(＝O)R⁸基团、-C-N-C(＝O)R⁸基团、N-C(＝O)-N-R⁸、取代的和未取代的R⁸基团、被R⁹、R¹⁰和R¹¹中的一个或多个所取代的取代的和未取代的R⁸基团、取代的和未取代的脲基团、取代的和未取代的脒基基团、取代的和未取代的胍基基团、取代的和未取代的伯、仲和叔烷基基团、取代的和未取代的芳基基团、取代的和未取代的烯基基团、取代的和未取代的炔基基团、取代的和未取代的杂环基基团、取代的和未取代的氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的二烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的二芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基基团、取代的和未取代的杂环基烷基基团、取代的和未取代的氰基基团、取代的和未取代的嘧啶基基团、取代的和未取代的氰基(芳基)基团、取代的和未取代的氰基(杂环基)基团，以及取代的和未取代的氰基-嘧啶基基团；

并且其中X独立地选自C、N、O、S或-CN；

R¹²选自-C(＝O)-基团、-C(＝O)-C-基团、-C(＝O)-C＝C、-S(＝O)₂-基团、-S(＝O)₂-C-基团、-S(＝O)₂-C＝C-基团、-S(＝O)₂-C＝C-CH₃、-OH、烷氧基基团、芳氧基基团、取代的和未取代的脒基基团、取代的和未取代的胍基基团、取代的和未取代的伯、仲和叔烷基基团、取代的和未取代的芳基基团、取代的和未取代的烯基基团、取代的和未取代的炔基基团、取代的和未取代的杂环基基团、取代的和未取代的氨基烷基基团、取代的和未取代的烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的二烷基氨基烷基基团、取代的和未取代的芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的二芳基氨基烷基基团、取代的和未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基基团、取代的和未取代的杂环基烷基基团、取代的和未取代的氰基基团、取代的和未取代的嘧啶基基团、取代的和未取代的氰基(芳基)基团、取代的和未取代的氰基(杂环基)基团，以及取代的和未取代的氰基-嘧啶基基团；并且其中Q¹或Q²的结构选自B组结构、-CH₃、-OH、-O-CH₃、-C-N-C(＝O)-C＝C和-C-N-C(＝O)-C-F。在说明性实施方案中，结构1的化合物为在图表A/图1中列出的化合物。在说明性实施方案中，结构1的化合物为在图表A/图1中列出的化合物。在说明性实施方案中，所述疾病选自实质性肺病、间质性肺病、肺纤维化以及与肺纤维化相关的肺动脉高压。在说明性实施方案中，采用一种或多种结构1的化合物治疗所述疾病。

附图说明

图1显示了示出伊马替尼和PK10453(结构2)的IC₅₀浓度的图。图1A显示了伊马替尼针对PDGFRα的IC₅₀为71nM，而图1B显示了PK10453针对PDGFRα的IC₅₀为35nM。图1C进一步显示了伊马替尼针对PDGFRβ的IC₅₀为607nM，而图1D显示了PK10453针对PDGFRβ的IC₅₀为10.1nM。

图2显示了In Cell Western(ICW)试验的图和图像，其证明了在人胚肺成纤维细胞中，与伊马替尼相比，PK10453(结构2)针对PDGFBB刺激的AKT在Ser473和Thr308处的磷酸化有较低的IC₅₀。图2A-B显示了在HLF中pAKT(S473)和pAKT(T308)的PDGFAA刺激分别被PK10453(■)和伊马替尼(▲)阻断，它们具有0.3-0.6μM的相当的IC₅₀。图2C显示了pAKT(Ser473)的PDGFBB刺激被PK10453(■)阻断，与伊马替尼(▲)的1.8μM相比，其IC₅₀为0.13μM。图2D显示了pAKT(Thr308)的PDGFBB刺激被PK10453(■)阻断，与伊马替尼(▲)的3.25μM相比，其IC₅₀为0.43μM。图2E显示了PDGFAA和PDGFBB刺激的AKT磷酸化的ICW的示例，PK10453相对于伊马替尼。800nm处的信号被颜色编码为绿色并且代表磷蛋白特异性信号；700nm处的信号被颜色编码为红色并且代表来自总AKT的信号。如图所示，将800和700nm处的信号叠加(§p<0.01；*p<0.001)。

图3示出了在PK10453(结构2)和IR780示踪剂吸入2min后冷冻的大鼠肺切片(右上叶、中叶和下叶)的荧光图像。在800nm(绿色)处进行图像获取，其为IR780检测的λ，而在700nm(红色)获取的图像代表组织自发荧光。示出了数字标尺间隔(1cm)。

图4显示了静脉内(IV)和吸入(INH)PK10453(结构2)的图形数据。图4A为关于IV施用的PK10453以及作为时间的函数的在肺和血浆中的相关浓度的药代动力学(PK)图。图4B为关于INH施用的PK10453以及随时间在肺和血浆中的相关水平的PK图。

图5示出了在MCT和MCT+PN模型系统中PK10453(结构2)对右心室(RV)收缩压和RV肥大的影响。图5A为显示在MCT模型中PK10453对RV收缩压的影响的图，其中C(n＝3)、V(n＝2)、D2(n＝6)、D4(n＝6)和D8(n＝5)分别表示对照、载体、每日三次持续两周的2min暴露、4min暴露和8min暴露时间。星号(*)表示p<0.001，而章节符号(§)表示p<0.05。图5B为显示在MCT模型中PK10453对RV肥大的影响的图，其中在施用MCT三周之后开始吸入治疗。C、D2、D4和D8分别表示对照、每日三次持续两周的2、4和8min暴露时间。星号(*)表示p<0.001。图5C为显示在大鼠MCT模型中PK10453对RV收缩压(RVSP)的影响的图：PK10453与伊马替尼的比较；#p<0.01。图5D显示了在PK10453、伊马替尼和载体的MCT模型中的管腔/中膜(media)比：载体(V，n＝4)：0.55±0.1；PK10453(D8，n＝12)：0.94±0.08；伊马替尼(I8，n＝5)：0.99±0.07；§p<0.05，#p<0.01。

图6显示了在大鼠MCT+PN模型中的遥测术研究的图。图6A为显示在能走动的受试者中采用MCT+PN模型系统及PK10453随时间测得的肺动脉收缩压的图。V(n＝5)和D4(n＝6)分别表示载体和每日三次暴露于PK10453(结构2)4min。星号(*)表示p<0.001，而章节符号(§)表示p<0.01。图6B为显示在能走动的受试者中采用MCT+PN模型系统及伊马替尼随时间测得的肺动脉收缩压的图。V＝载体；I＝伊马替尼(p＝NS)。

图7表示涉及在大鼠MCT+PN模型中的血液动力学和形态测定分析的图。图7A显示了RV收缩压：V(n＝9)RVS，75.7±7.1mm Hg，D4组(n＝10)RVS 40.4±2.7mm Hg，D8(n＝8)RVS 43±3.0mm Hg(p<0.001，V相对于D4以及V相对于D8)。图7B显示了通过用PK10453(结构2)治疗减轻了RV肥大；(RV+IVS)/LV比：V(n＝11)；D4(n＝13)；D8(n＝7)；*p<0.001，§p<0.05。图7C显示了大鼠MCT+PN模型，与PK10453D4(n＝6)和载体(n＝6)相比，D8(n＝5)治疗组中的管腔面积/中膜面积比更大；*p<0.0001，D8相对于V，D8相对于D4。图7D显示了闭塞分析，其在用于管腔/中膜比分析的相同动物样品上进行。该闭塞分析显示了D8组中2级(>50％闭塞)病变的显著下降(#p<0.01)。

图8经由PK10453治疗的样本的肺动脉肥大和管腔内细胞增殖的40X显微图像示出了PK10453(结构2)对大鼠MCT+PN模型中新生内膜病变的效果。图8A显示了新生内膜病变的显微图像。图8B显示了PK10453治疗的受试者的图像。图8C显示了载体处理的动物的磷酸PDGFRβ(pPDGFRβ)染色，而图8D显示了PK10453(D8)治疗的动物的pPDGFRβ染色。

图9是显示管腔面积:中膜面积的图，经使用MCT+PN模型，与载体(n＝6)相比，在D4(n＝6)和D8(n＝5)治疗组中的管腔面积:中膜面积增大。符号(§)为p＝0.032(D4相对于V)，符号

为p＝0.028(D8相对于D4)，而星号(*)表示p＝0.00014(D8相对于V)。

图10示出了MCT+PN样品的免疫组织化学评价。图10A显示了pSTAT3定位于载体处理的内皮细胞和血管周细胞的细胞核。图10B显示了来自用结构2治疗的受试者的肺pSTAT3核信号。

图11涉及载体处理的动物(MCT+PN模型)在40X下的免疫组织化学染色的αSMC肌动蛋白、三色(Trichrome)和vWF染色，其显示了在肺小动脉中包含0、1和2级新生内膜和增生性病变的内皮和成肌纤维细胞的混合群体：0级病变的特征为早期管腔内内皮细胞增殖，和中膜中血管平滑肌细胞的存在(图11A，αSMC染色；图11D，三色；图11G，vWF)。1-2级病变具有大量的管腔内成肌纤维细胞样细胞、一些内皮细胞和中间层的部分纤维化(图11B，αSMC；图11E，三色；图11H，vWF)。晚期2级病变的特征为大量的管腔内成肌纤维细胞样细胞和内皮细胞增殖以及中间层的完全纤维化置换(图11C，αSMC；图11F，三色；图11I，vWF)。长箭头指向具有增生性病变的管腔内空间，而短箭头指向肺小动脉的中间层。

图12显示了在大鼠MCT+PN模型中的40X PDGFR信号传导。图12A-F显示了肺小动脉中的PDGFAA(A)；PDGFBB(B)；总PDGFRα(C)；总PDGFRβ(D)；磷酸PDGFRα(pPDGFRα；E)；和pPDGFRβ(F)。与PDGFAA、PDGFRα和pPDGFRα相比，PDGFBB、PDGFRβ，尤其是pPDGFRβ的信号强度较大。在新生内膜增生性和血管周病变中，pPDGFRβ信号强烈，呈鹅卵石图案。在血管中间层中信号强度相对较低。箭头指向具有增生性病变的血管腔(载玻片来自载体处理)。

图13显示了使用大鼠MCT+PN模型系统在较大的肺小动脉中pPDGFRα和pPDGFRβ的比较。图13A和13B分别显示了中膜中pPDGFRα信号的20X和40X的免疫组织化学，其中箭头指向对pPDGFRα呈阳性的平滑肌细胞。图13C和13D分别显示了pPDGFRβ的20X和40X成像，与以上相反，其在中膜中几乎不具有信号。在血管周细胞(左上-图13C和13D)和内皮细胞中注意到pPDGFRβ的信号。

图14显示了针对MCT+PN模型所显示的NanoPro免疫测定。图14A显示了用载体处理的pAKT(Thr308)和总AKT。图14B显示了用PK10453处理的pAKT(Thr308)和总AKT，而图14C显示了用载体处理的pAKT(Ser473)和总AKT。图14D显示了用PK10453处理的pAKT(Ser473)和总AKT，而图14E显示肺提取物中的pAKT(Thr308)/AKT比在组间没有显著差异(V＝载体；D4＝持续2周每日3次4分钟暴露，D8＝持续两周每日3次8分钟暴露，p＝NS)。图14F表示D8组相对于载体的肺提取物中的pAKT(Ser473)/AKT比(V，n＝5；D4，n＝4；D8，n＝5)，§p<0.05，D8相对于V。

图15揭示了在MCT+PN模型中采用针对pSTAT3和STAT3的NanoPro免疫测定lumogram的实验的结果。图15A为载体处理的受试者的图。图15B为PK10453(结构2)处理的受试者的图。图15C显示了PK10453处理的图，该处理降低了使用MCT+PN模型的受试者(n＝4)肺中的pSTAT3/STAT3，其中V表示载体，D4表示每日三次4min暴露时间，而D8表示每日三次持续两周的8min暴露时间；对于PK10453，每日3次持续两周。星号(*)表示p＝0.009，而章节符号(§)表示p＝0.024。

图16显示了在MCT+PN模型中采用针对磷酸ERK1/2(pERK1/2)和总ERK1/2的NanoPro免疫测定lumogram的实验的结果。图16A显示了载体处理的受试者的pERK1/2。图16B显示了PK10453处理的受试者的pERK1/2。图16C显示了载体处理的受试者的总ERK1/2。图16D显示了PK10453处理的受试者的总ERK1/2，其中PK10453降低了ppERK1/ERK1。图16E显示了所示的受试者的ppERK1/ERK1。图16F显示了所示的pERK2/ERK2。图16G显示了肺中所示的ppERK2/ERK2。图16H显示了肺中所示的pERK2/ERK2。每组n＝4，而V表示载体，D4表示每日三次4min暴露时间，并且D8表示PK10453(结构2)的每日三次持续两周的8min暴露时间。星号(*)p≤0.0005；§p＝0.045。

图17为显示伊马替尼、PK10453(结构2)和PK10571(结构2a)对人胚肺成纤维细胞中PDGFAA与PDGFBB刺激的ERK1和ERK2磷酸化的影响的图示。参见图17A-D。

图18A-D为PK化合物的图示：PK10453(结构2)、PK10467(结构3)、PK10468(结构4)、PK10569(结构5)和PK10571(结构2a)，其显示与伊马替尼相比，所有PK化合物对于抑制人胚肺成纤维细胞中PDGFBB刺激的AKT磷酸化都具有较低的IC₅₀浓度。

图19是施用载体和经PK10453(结构2)处理的受试者中受试者体重的图示，其中正方形表示经载体处理的(n＝10)，三角形表示PK10453 D4组(n＝10)，而菱形表示PK10453D8组(n＝6)。

图20是表示来自植入腹主动脉中的发射机的PAC40遥测发射机数据的图，该发射机用于在用载体(n＝3)或PK10453(n＝3)处理的能走动的MCT暴露的受试者中监测七天全身血压。

图21是显示用来测定SDD中PK10571浓度的校准曲线的图。浓度以μg/mL表示。

图22显示了PK04的MDSC的示例，其显示玻璃化转变温度(Tg)为101℃。

图23是含有PK10571和L-亮氨酸的PK004 SDD的扫描电子显微照片。形态为带窝的球形。

图24是含有PK10571与海藻糖和亮氨酸赋形剂的PK61914 SDD的扫描电子显微照片。形态为波状/脊状球形。

图25显示了针对PDGFRα与β激酶结构域的IC50。针对β同种型，PK10453和10571比伊马替尼更强。

图26显示了在人肺成纤维细胞中PDGF BB刺激的pAKT。一式两份进行针对每个浓度的每个测定。PK10453 IC50 0.15μM。PK10571 IC50 0.05μM。如我们最近在PulmonaryCirculation中发表的文献所示，伊马替尼抑制PDGFBB刺激的AKT磷酸化的IC50为1.8μM。

图27是与仅MCT模型相比在MCT+PN模型中肺动脉高压发展的时程。A.开始药物处理的PK10453研究时间(参见Pulm Circ 2014 8(1):82-102)。B.在MCT+PN模型中开始处理的PK10571 SDD研究时间。C.对于仅MCT模型典型的开始时间。经由遥测术监测能走动大鼠的PA压获得数据。(注意：未显示第11天MCT+PN模型的数据)。

图28是显示在用吸入的PK10571(n＝5)处理的MCT+PN大鼠处理组中PA压随时间降低的图。压力数据来自PA中的PAC40遥测植入物。载体组为n＝7，但4只载体动物在处理的第2天与第4天之间死亡。细节参见正文。数据以平均值±SE显示。*p≤0.05重复测量ANOVA(注意：第1天PK10571相对于载体p＝NS)；药物组除了1只动物之外，第6天的数据文件丢失，因此这一数据点不能用于分析。(处理的第1天＝MCT后第21天；肺切除术后第31天)。

图29是显示MCT+PN模型中的PK10571的图：给药前和给药后(约1小时)。显示了第1-6天处理的数据。在处理早期给药后(即，到第4天)看到肺动脉收缩压的短暂降低，尽管这一短暂的剂量效应似乎在处理中随后减小，同时总PA收缩压下降。这些数据表明了PK10571的血管舒张和抗增殖作用，后者可能更重要。

图30是显示在PAH的SU5416/低氧/常氧模型中吸入的PK10571的功效的图。NL＝正常对照；H1＝SU5416+1周低氧；H2/N2＝SU5416+2周低氧和12天常氧，其中在11天常氧期间每日两次吸入载体(常氧第2天开始使用载体)；H3/N2＝SU5416+3周低氧和2周常氧；H2/N2+D＝SU5416+2周低氧和12天常氧，并在11天常氧期间采用每日两次吸入的PK10571进行处理。(常氧第2天开始药物处理)。与载体处理的动物(H2/N2)相比，吸入的PK10571导致RV收缩末期压力显著降低。H2/N2与H3/N2组之间没有显著差异。统计分析：用于多重比较的具有Bonferroni校正的ANOVA。

图31是显示SU5416/低氧(2周)/常氧(12天)，在用PK10571每日两次处理的n＝3动物中连续监测的PA压的图。在从低氧室取出后的那天(第2天)开始处理。根据我们的经验，在从低氧室中取出并置于标准大气压后的前24小时内存在PA压的初始下降。因此，我们在从低氧室中取出后的第2天开始药物处理，并继续处理10天。在第12天，对动物施以安乐死并收获组织。显示了每日给药前的PA收缩压(蓝色)和给药后约1小时的PA收缩压(橙色)。采用用于多重比较的重复测量ANOVA和Bonferroni校正来进行统计分析。*p<0.0001，第6、7、9-12天相对于第2天和第4天。其他的显著性比较：

第1天相对于第2、4、5-12天，p<0.0001；第5天相对于第11天，p＝0.002。

图32是在PAH的SU5416/低氧/常氧模型中用硝普钠处理后的肺动脉血管系统的3D显微CT。载体处理的动物在左侧。PK10571处理的动物在右侧。分辨率：20微米。

图33是与亮氨酸赋形剂一起喷雾干燥的PK10571的扫描电子显微照片。

图34显示了采用NGI级联冲击器(cascade Impactor)测定质量中值空气动力学直径：T＝“喉”；PS＝预分离器。1-8＝NGI级联冲击器的阶段。MMAD＝质量中值空气动力学直径；GSD＝几何标准差。这里，PK10571与1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)一起进行喷雾干燥，其中所观察到的PK013 PK10571-DPSC(S142533)的玻璃化转变温度为67℃。

图35显示了具有DSPC赋形剂的PK10571的扫描电子显微照片。

图36是显示PK10571/DSPC喷雾干燥粉末的颗粒大小分布的图。在60L/min下使用NGI级联冲击器4sec。HPMC胶囊装入单剂量吸入器中。MMAD＝2.5微米GSD 1.6。

图37是表示化合物命名、结构和分子量(MW)的图表。

图38是显示化合物针对PDGFRα的IC50数据的图。

图39是显示化合物针对PDGFRβ的IC50数据的图，其中：PK105R＝PK10571外消旋混合物；PK105＝PK10571；PK19＝PK1019；PK23＝PK1023；PK24＝PK1024。

图40示出了与总PDGFrβ一起剥离并重新探测的pPDGFrβ(Y751；图40A；Y1021；图40B)和β-肌动蛋白。

图41是显示通过吸入向患有野百合碱肺切除术诱发的与肺纤维化相关的肺高压的Sprague Dawley大鼠递送PK10571干粉的图。

图42是在大鼠野百合碱加肺切除术模型中，相比于经PK10453处理的动物，来自经载体处理的动物的肺切片的三色染色。蓝色表示胶原。

具体实施方式

肺动脉高压(PAH)是一种与高发病率和死亡率相关的罕见疾病。据报道，通过采用目前可用的标准疗法，特发性PAH(iPAH)患者的三年存活率为84％，但在硬皮病继发性PAH患者中仅为49％。^1-3虽然近来在PAH的血管舒张剂治疗中有所进展，但仍需要更有效的治疗。^4-15包括PK10571的本发明化合物是高效的血小板衍生生长因子受体(PDGFR)抑制剂。PDGFR是一种酪氨酸激酶受体，当被其激动剂激活时诱导细胞增殖。^17-19已证明增加的PDGFR信号传导在PAH的发病机理中发挥作用，并且已证明对该途径的抑制改善了PAH患者的心肺血液动力学^20-22。近来针对PAH的口服伊马替尼的III期试验(适度的PDGFR和ABL抑制剂)满足了其主要终点²³。然而，口服施用的伊马替尼与包括胃肠道副作用、骨髓抑制和出血增加在内的显著的全身副作用相关²⁴。

用于直接肺部递送的PK10571(结构X)和相关化合物，例如也称作喷雾干燥分散体(SDD)的喷雾干燥粉末(SDP)，其开发使得治疗适应证对于此类药物具有较低的系统性―治疗上有效的―剂量和改善的治疗窗。当相应地施用时，在肺中存在与静脉内施用相比高45倍的药物水平，即45倍的治疗优势。¹⁶诸如PK10571的化合物针对PDGFR受体具有类似的效力和选择性(诸如PK10453(结构Y))，在PDGFBB信号传导的基于细胞的试验中具有更大的效力，对健康的肺动脉内皮通透性或屏障功能没有不良作用，具有比PK10453更长的体内半衰期，以及更优的临床前功效。参见图21-26。

开发用于PAH的吸入治疗的药物需要注意特定的配制要求，例如，药物产品必须配制成当吸入时产生可沉积在肺中的稳定的可吸入颗粒。而且，对于PAH，沉积的药物还必须对肺血管发挥作用，并且特别是对肺动脉和小动脉发挥作用。制剂还应当通过降低肺动脉压、减小肺血管阻力或减少肺或循环中疾病的病理表现如肺纤维化发挥治疗作用。

功效在患者中以多种指标表现出来，例如包括PDGF AA、PDGF BB或PDGF AB在内的生物标志物，如通过心导管插入术测得的肺血管阻力和/或肺高压的减小，如通过超声心动描记术测得的肺的减小，如通过超声心动描记术或MRI测得的右心室功能的改善，如通过PET扫描测得的降低的肺代谢活性，如通过六分钟步行距离测得的提高的运动能力，心肺运动试验，增加的到达临床恶化的时间，提高的存活率，减少的住院次数，减少的对添加附加药物用于治疗的需要，减少的对肺移植的需要，和/或减少的对心房间隔切开术的需要。

本发明还特别涉及起到激酶抑制剂的作用的新类型的化合物。同样地，本文公开了使用此类化合物预防和治疗疾病状况的方法。如以下进一步详述的，本发明进一步涉及所述化合物的药物制剂，其针对需要激酶抑制剂的受试者，例如患有血管疾病、增生性病症、癌症和相关疾病或状况的患者，具有预防和/或治疗适应证。以下提供了在本说明书中使用的某些术语的定义。除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语通常具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。

除非本文内容另有明确规定，如在本说明书和所附权利要求中所使用的，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数引用物。例如，提到“一个氨基酸”包括两个或更多个氨基酸的组合，等等。而且，如本文所用的，以下缩写具有如下详述的某种含义。

如本文所用的，“约”将被本领域普通技术人员所理解，并且将根据其被使用的上下文而在一定程度上变化。如使用本领域普通技术人员不清楚的术语，考虑到其被使用的上下文，“约”将意指可达列举值加或减10％。

如本文所用的，以下PK化合物和结构名称可在整个申请中互换使用：PK10453＝结构2；PK10571＝结构2a；PK10467＝结构3；PK10468＝结构4；PK10569＝结构5。

如本文所用的，向一个受试者或多个受试者“施用”药剂或药物，例如一种或多种激酶抑制剂化合物，包括向受试者引入或递送化合物以行使其预期功能的任何途径。可通过任何合适的途径进行施用，包括口服、鼻内、吸入、肠胃外(静脉内、肌内、腹膜内或皮下)、直肠或局部。施用包括自我施用和由另一方施用。还应理解，如所述的医学状况的治疗或预防的各种模式旨在意指“基本的”，其包括总的以及小于总的治疗或预防，并且其中获得了一些生物学上或医学上相关的结果。

如本文所用的，在比较两个或更多个样品、对治疗的反应或药物的上下文中，术语“可比的”或“相应的”是指在所述比较中分别使用的样品、反应、治疗和药物的类型相同。例如，一个样品中的AKT(pAKT)的磷酸化状态或水平可与另一个样品中的磷酸化状态或水平进行比较。在一些实施方案中，可比的样品可在不同时间从相同的个体获得。在其他实施方案中，可比的样品可从不同的个体例如患者和健康个体获得。通常，可比的样品为了对照目的用公共因子进行归一化。

如本文所用的，术语“组合物”是指具有指定量的指定成分的产品，以及由指定量的指定成分的组合直接或间接产生的任何产品。

如本文所用的，术语“药物”、“化合物”、“活性剂”、“药剂”、“活性物”、“药物组合物”、“药物制剂”和“药理学活性剂”可互换使用，并指适于施用并且在疾病或异常生理状况的治疗中具有有益的生物效应、适当地具有治疗作用的带电荷或不带电荷的任何化学化合物、复合物或组合物，尽管所述作用也可能本质上是预防性的。所述术语还包括本文具体提到的那些活性剂的药学上可接受的药理学活性衍生物，包括但不限于盐、酯、酰胺、前药、活性代谢物、类似物等。当使用术语“活性剂”、“药理学活性剂”和“API”(活性药物成分)时，或当具体指明特定的活性剂时，应当理解，申请人意在包括活性剂本身以及药学上可接受的、药理学活性盐、酯、酰胺、前药、代谢物、类似物等。

如本文所用的，术语组合物的“有效量”或“药学有效量”或“治疗有效量”为足以达到所需的治疗和/或预防效果的量，例如，导致预防或减少与被治疗的疾病相关的症状的量。向受试者施用的本发明组合物的量将依赖于疾病的类型和严重性，以及个体的特征，诸如总体健康、年龄、性别、体重和对药物的耐受性。其还将依赖于疾病的程度、严重性和类型。技术人员将能够根据这些和其他因素确定合适的剂量。本发明的组合物还可与一种或多种附加的治疗性化合物联合施用。

如本文所用的，当涉及激酶抑制剂时，术语“不可逆的”或“不可逆地”意指激酶、酪氨酸激酶和/或RTK的活性的抑制剂，该抑制剂与这样的激酶共价地即永久地结合或缔合。

如本文所用的，术语“肿瘤性疾病”指任何种类和起源的癌症及其前期阶段。相应地，术语“肿瘤性疾病”包括由术语“瘤形成”、“赘生物”、“癌症”、“初癌”或“肿瘤”确定的主题。肿瘤性疾病通常表现为导致特定细胞群的异常水平的异常细胞分裂。同样地，由于内皮细胞的单克隆扩充可以指肺小动脉内皮细胞的“赘生物”，因此PAH也包括在前述术语中。而且，引起肿瘤性疾病的异常细胞分裂通常是在细胞中固有的，并且不是针对感染或炎症的正常生理反应。在一些实施方案中，使用本文提供的方法诊断的肿瘤性疾病包括癌。

如本文所用的，当涉及激酶抑制剂或受体激酶抑制剂时，术语“非选择性”意指激酶、酪氨酸激酶、结构域和/或RTK的活性的抑制剂，它对于单一激酶、受体、酪氨酸激酶、RTK或结构域即同源靶标不是唯一特异性的，但在抑制单一激酶、受体、酪氨酸激酶、RTK、结构域等的上下文的范围内，例如，对于PDGFR，所述抑制剂就所述激酶、受体、酪氨酸激酶、RTK、结构域等的亲和力和/或IC₅₀浓度而言是非特异性的。例如，通过抑制PDGFR-β和PDGFR-α同种型两者，PK10453(结构2)非选择性地靶向PDGFR，然而针对受体同种型例如PDGFR-β可能仍具有较低的IC₅₀。

如本文所用的，术语“药学上可接受的盐”包括含有无机碱、有机碱、无机酸、有机酸或碱性或酸性氨基酸的盐。作为无机碱的盐，本发明包括，例如，碱金属如钠或钾；碱土金属如钙和镁或铝；以及氨。作为有机碱的盐，本发明包括，例如，三甲胺、三乙胺、吡啶、甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺和三乙醇胺。作为无机酸的盐，本发明包括，例如，盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸和磷酸。作为有机酸的盐，本发明包括，例如，甲酸、乙酸、三氟乙酸、富马酸、草酸、酒石酸、马来酸、乳酸、柠檬酸、琥珀酸、苹果酸、甲磺酸、苯磺酸和对甲苯磺酸。作为碱性氨基酸的盐，本发明包括，例如，精氨酸、赖氨酸和鸟氨酸。酸性氨基酸包括，例如，天冬氨酸和谷氨酸。

如本文所用的，术语“参考水平”指可用于比较目的的感兴趣的物质水平。在一些实施方案中，参考水平可以是作为取自对照受试者的样品的剂量水平平均值的指定的组合物剂量。在其他实施方案中，参考水平可以是相同受试者在不同时间(例如，施用的时程)的水平，诸如在2、4、6、8和10分钟(min)等的水平。

如本文所用的，术语“治疗”或“处理”或“缓和”指治疗性处理以及预防性或防范性措施两者，其中目的在于预防或减缓(减轻)目标病理状况或病症。如果在根据本发明的方法接受治疗剂之后，受试者表现出特定疾病或状况的一个或多个体征和症状的可观察和/或可测量的减少或不存在，则受试者的病症被成功地“治疗”。

如本文所用的，术语“未取代的烷基”指不含杂原子的烷基基团。因此，该词组包括直链烷基基团，诸如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基等。该词组还包括直链烷基基团的支链同分异构体，包括但不限于通过举例方式提供的以下基团：–CH(CH₃)₂、-CH(CH₃)(CH₂CH₃)、-CH(CH₂CH₃)₂、-C(CH₃)₃、-C(CH₂CH₃)₃、-CH₂CH(CH₃)₂、-CH₂CH(CH₃)(CH₂CH₃)、-CH₂CH(CH₂CH₃)₂、-CH₂C(CH₃)₃、-CH₂C(CH₂CH₃)₃、-CH(CH₃)CH(CH₃)(CH₂CH₃)、-CH₂CH₂CH(CH₃)₂、-CH₂CH₂CH(CH₃)(CH₂CH₃)、-CH₂CH₂CH(CH₂CH₃)₂、-CH₂CH₂C(CH₃)₃、-CH₂CH₂C(CH₂CH₃)₃、-CH(CH₃)CH₂CH(CH₃)₂、-CH(CH₃)CH(CH₃)CH(CH₃)₂、-CH(CH₂CH₃)CH(CH₃)CH(CH₃)(CH₂CH₃)和其他基团。该词组还包括环状烷基基团，诸如环烷基基团，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基，并且这样的环被如上所定义的直链和支链烷基基团所取代。该词组还包括多环烷基基团，诸如但不限于金刚烷基、降冰片基和二环[2.2.2]辛基，以及被如上所定义的直链和支链烷基基团所取代的这样的环。因此，词组未取代的烷基基团包括伯烷基基团、仲烷基基团和叔烷基基团。未取代的烷基基团可以与母体化合物中的一个或多个碳原子、氧原子、氮原子和/或硫原子键合。优选的未取代的烷基基团包括具有1至20个碳原子的直链和支链烷基基团以及环状烷基基团。更优选地，此类未取代的烷基基团具有1至10个碳原子，而甚至更优选地，此类基团具有1至5个碳原子。在一些实施方案中，未取代的烷基基团包括具有1至3个碳原子的直链和支链烷基基团，并且包括甲基、乙基、丙基和–CH(CH₃)₂。

如本文所用的，术语“取代的烷基”指其中一个或多个与碳或氢连接的键被与非氢和非碳原子连接的键所替代的如上所定义的未取代的烷基基团，该非氢和非碳原子诸如但不限于，卤化物中的卤素原子如F、Cl、Br和I；诸如羟基基团、烷氧基基团、芳氧基基团和酯基的基团中的氧原子；诸如巯基基团、烷基和芳基硫化物基团、砜基团、磺酰基基团和亚砜基团的基团中的硫原子；诸如胺、酰胺、烷基胺、二烷基胺、芳基胺、烷基芳基胺、二芳基胺、N-氧化物、酰亚胺和烯胺的基团中的氮原子；诸如三烷基甲硅烷基基团、二烷基芳基甲硅烷基基团、烷基二芳基甲硅烷基基团和三芳基甲硅烷基基团的基团中的硅原子；以及各种其他基团中的其他杂原子。取代的烷基基团还包括其中一个或多个与碳或氢原子连接的键被与杂原子连接的键所替代的基团，该杂原子例如是羰基、羧基和酯基中的氧；诸如亚胺、肟、腙和腈的基团中的氮。在合适的实施方案中，取代的烷基基团尤其包括其中一个或多个与碳或氢原子连接的键被一个或多个与氟原子连接的键所替代的烷基基团。取代的烷基基团的一个实例是三氟甲基基团和含有三氟甲基基团的其他烷基基团。其他烷基基团包括其中一个或多个与碳或氢原子连接的键被与氧原子连接的键所替代，使得取代的烷基基团含有羟基、烷氧基、芳氧基基团或杂环基氧基基团的那些基团。另外其他的烷基基团包括具有胺、烷基胺、二烷基胺、芳基胺、(烷基)(芳基)胺、二芳基胺、杂环基胺、(烷基)(杂环基)胺、(芳基)(杂环基)胺或二杂环基胺基团的烷基基团。

如本文所用的，术语“未取代的芳基”指不含杂原子的芳基基团。因此，举例而言，该术语包括但不限于诸如苯基、联苯基、蒽基、萘亚甲基(naphthenyl)的基团。虽然词语“未取代的芳基”包括含有稠环如萘的基团，但它不包括具有与一个环成员键合的其他基团如烷基或卤代基团的芳基基团，因为芳基基团如甲苯基在本文中被认为是如下所述的取代的芳基基团。未取代的芳基基团可以与一个或多个碳、氧、氮和/或硫原子键合。

如本文所用的，术语“取代的芳基基团”之于未取代的芳基基团具有与取代的烷基基团之于未取代的烷基基团相同的含义。然而，取代的芳基基团还包括其中一个芳香碳与以上所述的一个非碳或非氢原子键合的芳基基团，并且还包括其中芳基基团的一个或多个芳香碳与如本文定义的取代的和/或未取代的烷基、烯基或炔基基团键合的芳基基团。这包括其中芳基基团的两个碳原子与烷基、烯基或炔基基团的两个原子键合以限定稠环体系(例如，二氢萘基或四氢萘基)的键合排列。因此，术语“取代的芳基”包括但不限于甲苯基和羟基苯基等。

如本文所用的，术语“未取代的烯基”指直链和支链以及环状基团，诸如关于如上定义的未取代的烷基基团所描述的那些基团，但是存在至少一个在两个碳原子之间的双键。非限制性实例包括乙烯基、-CH＝C(H)(CH₃)、-CH＝C(CH₃)₂、-C(CH₃)＝C(H)₂、-C(CH₃)＝C(H)(CH₃)、-C(CH₂CH₃)＝CH₂、环己烯基、环戊烯基、环己二烯基、丁二烯基、戊二烯基和己二烯基等。

如本文所用的，术语“取代的烯基”之于未取代的烯基基团具有与取代的烷基基团之于未取代的烷基基团相同的含义。取代的烯基基团包括其中非碳或非氢原子与双键键合至另一个碳的碳键合的烯基基团，以及其中一个非碳/非氢原子与没有参与碳双键的碳键合的那些烯基基团。

如本文所用的，术语“未取代的炔基”指直链和支链基团，诸如关于如上定义的未取代的烷基基团所描述的那些基团，但是存在至少一个在两个碳原子之间的三键。实例包括但不限于-C≡C(H)、-C≡C(CH₃)、-C≡C(CH₂CH₃)、-C(H₂)C≡C(H)、-C(H)₂C≡C(CH₃)和-C(H)₂C≡C(CH₂CH₃)等。

如本文所用的，术语“取代的炔基”之于未取代的炔基基团具有与取代的烷基基团之于未取代的烷基基团相同的含义。取代的炔基基团包括其中非碳或非氢原子与三键键合至另一个碳的碳键合的炔基基团，以及其中非碳或非氢原子与没有参与碳三键的碳键合的那些炔基基团。

如本文所用的，术语“未取代的芳烷基”指如上定义的未取代的烷基基团其中的氢键或碳键被与如上定义的芳基基团连接的键所替代的未取代的烷基基团。例如，甲基(-CH₃)是一种未取代的烷基基团。如果甲基基团的氢原子被与苯基基团连接的键所替代，诸如，如果甲基的碳与苯的碳相键合，则该化合物为未取代的芳烷基基团，即，苄基基团。因此，该术语包括但不限于诸如苄基、二苯甲基和1-苯乙基(-CH(C₆H₅)(CH₃))等基团。

如本文所用的，术语“取代的芳烷基”之于未取代的芳烷基基团具有与取代的芳基基团之于未取代的芳基基团相同的含义。然而，取代的芳烷基基团还包括其中该基团的烷基部分的碳键或氢键被与非碳或非氢原子连接的键所替代的基团。取代的芳烷基基团的非限制性实例包括-CH₂C(＝O)(C₆H₅)和-CH₂(2-甲基苯基)等。

如本文所用的，术语“未取代的杂环基”指芳香和非芳香环化合物，包括单环、二环和多环化合物，诸如但不限于奎宁环基(quinuclidyl)，其含有3个或更多个环成员，其中一个或多个环成员是杂原子，诸如但不限于N、O和S。杂环基基团的实例包括但不限于：含有1至4个氮原子的不饱和3至8元环，诸如但不限于吡咯基、吡咯啉基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、二氢吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三唑基(例如，4H-1,2,4-三唑基、1H-1,2,3-三唑基、2H-1,2,3-三唑基等)、四唑基(例如，1H-四唑基、2H-四唑基等)；含有1至4个氮原子的饱和3至8元环，诸如但不限于吡咯烷基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基；含有1至4个氮原子的缩合的不饱和杂环基团，诸如但不限于吲哚基、异吲哚基、吲哚啉基、吲哚嗪基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基、吲唑基、苯并三唑基；含有1至2个氧原子和1至3个氮原子的不饱和3至8元环，诸如但不限于噁唑基、异噁唑基、噁二唑基，例如，1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基等；含有1至2个氧原子和1至3个氮原子的饱和3至8元环，诸如但不限于吗啉基；含有1至2个氧原子和1至3个氮原子的不饱和的缩合杂环基团，例如，苯并噁唑基、苯并噁二唑基、苯并噁嗪基，例如2H-1,4-苯并噁嗪基等；含有1至3个硫原子和1至3个氮原子的不饱和3至8元环，诸如但不限于噻唑基、异噻唑基、噻二唑基，例如，1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基等；含有1至2个硫原子和1至3个氮原子的饱和3至8元环，诸如但不限于噻唑烷基(thiazolodinyl)；含有1至2个硫原子的饱和和不饱和3至8元环，诸如但不限于噻吩基、二氢二噻英基、二氢二亚硫酰基(dihydrodithionyl)、四氢噻吩、四氢噻喃；含有1至2个硫原子和1至3个氮原子的不饱和的缩合杂环，诸如但不限于苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并噻嗪基(例如2H-1,4-苯并噻嗪基等)、二氢苯并噻嗪基，例如，2H-3,4-二氢苯并噻嗪基等；含有氧原子的不饱和3至8元环，诸如但不限于呋喃基；含有1至2个氧原子的不饱和的缩合杂环，诸如苯并二氧戊环基，例如，1,3-苯并二氧戊环基等；含有氧原子和1至2个硫原子的不饱和3至8元环，诸如但不限于二氢氧硫杂环己二烯基；含有1至2个氧原子和1至2个硫原子的饱和3至8元环，诸如1,4-氧硫杂环己烷；含有1至2个硫原子的不饱和的缩合环，诸如苯并噻吩基、苯并二噻英基(benzodithiinyl)；以及含有氧原子和1至2个氧原子的不饱和的缩合杂环，诸如苯并氧硫杂环己二烯基。杂环基基团还包括以上所述的那些基团，其中环中的一个或多个S原子与一个或两个氧原子双键键合(亚砜和砜)。例如，杂环基基团包括四氢噻吩氧化物和四氢噻吩1,1-二氧化物。优选的杂环基基团含有5或6个环成员。更优选的杂环基基团包括吗啉、哌嗪、哌啶、吡咯烷、咪唑、吡唑、1,2,3-三唑、1,2,4-三唑、四唑、噻吩、硫代吗啉、其中硫代吗啉的S原子与一个或多个O原子键合的硫代吗啉、吡咯、高哌嗪、噁唑烷-2-酮、吡咯烷-2-酮、噁唑、奎宁环、噻唑、异噁唑、呋喃和四氢呋喃。

如本文所用的，术语“取代的杂环基”指这样的如上所定义的未取代的杂环基基团，其中如上文关于取代的烷基基团和取代的芳基基团所述的，一个或多个环成员与非氢原子键合。实例包括但不限于2-甲基苯并咪唑基、5-甲基苯并咪唑基、5-氯苯并噻唑基、N-烷基哌嗪基基团如1-甲基哌嗪基、哌嗪-N-氧化物、N-烷基哌嗪N-氧化物、2-苯氧基-噻吩和2-氯嘧啶基等。此外，取代的杂环基基团还包括其中与非氢原子连接的键是与碳原子连接的键的杂环基基团，该碳原子为取代的和未取代的芳基、取代的和未取代的芳烷基或未取代的杂环基基团的一部分。实例包括但不限于1-苄基哌啶基、3-苯基硫代吗啉基、3-(吡咯烷-1-基)-吡咯烷基和4-(哌啶-1-基)-哌啶基。基团诸如N-烷基取代的哌嗪基团如N-甲基哌嗪、取代的吗啉基团和哌嗪N-氧化物基团如哌嗪N-氧化物和N-烷基哌嗪N-氧化物是一些取代的杂环基基团的实例。基团诸如取代的哌嗪基团如N-烷基取代的哌嗪基团如N-甲基哌嗪等、取代的吗啉基团和N-氧化物基团是一些适合于各种“R”基团的取代的杂环基基团的实例。

如本文所用的，术语“未取代的杂环基烷基”指如上定义的未取代的烷基基团其中的氢键或碳键被与如上定义的杂环基基团连接的键所替代的未取代的烷基基团。例如，甲基(-CH₃)是一种未取代的烷基基团。如果甲基基团的氢原子被与杂环基基团连接的键所替代，例如如果甲基的碳与吡啶的碳2(与吡啶的N键合的一个碳)或吡啶的碳3或碳4键合，则该化合物为未取代的杂环基烷基基团。

如本文所用的，术语“取代的杂环基烷基”之于未取代的杂环基烷基基团具有与取代的芳烷基基团之于未取代的芳烷基基团相同的含义。然而，取代的杂环基烷基基团还包括这样的基团，其中非氢原子与该杂环基烷基基团的杂环基基团中的杂原子诸如但不限于哌啶基烷基基团的哌啶环中的氮原子键合。此外，取代的杂环基烷基基团还包括这样的基团，其中该基团的烷基部分的碳键或氢键被与取代的和未取代的芳基或取代的和未取代的芳烷基基团连接的键所替代。

如本文所用的，术语“未取代的烷基氨基烷基”指这样的如上定义的未取代的烷基基团，其中碳键或氢键被连接与氢原子和如上定义的未取代的烷基基团键合的氮原子的键所替代。例如，甲基(-CH₃)是一种未取代的烷基基团。如果甲基基团的氢原子被连接与氢原子和乙基基团键合的氮原子的键所替代，则所得化合物为未取代的烷基氨基烷基基团–CH₂-N(H)(CH₂CH₃)。

如本文所用的，术语“取代的烷基氨基烷基”指这样的如上定义的未取代的烷基氨基烷基基团，不同之处在于其中一个或多个与一个或两个烷基基团中的碳或氢原子连接的键被与如上文关于取代的烷基基团所述的非碳或非氢原子连接的键所替代，但是与在所有烷基氨基烷基基团中的氮原子连接的键本身不能使所有烷基氨基烷基基团成为取代。

如本文所用的，术语“未取代的二烷基氨基烷基”指如上定义的未取代的烷基基团，其中碳键或氢键被连接与两个其他如上定义的未取代的烷基基团键合的氮原子的键所替代。

如本文所用的，术语“取代的二烷基氨基烷基”指这样的如上定义的未取代的二烷基氨基烷基基团，其中一个或多个与一个或多个烷基基团中的碳或氢原子连接的键被连接如关于取代的烷基基团所述的非碳和非氢原子的键所替代。与在所有二烷基氨基烷基基团中的氮原子连接的键本身不能使所有二烷基氨基烷基基团成为取代的。

如本文所用的，术语“未取代的烷氧基”指其中与氢原子连接的键被与如上定义的未取代的烷基基团的碳原子连接的键所替代的羟基基团(-OH)。如本文所用的，术语“取代的烷氧基”指其中与氢原子连接的键被与如上定义的取代的烷基基团的碳原子连接的键所替代的羟基基团(-OH)。

如本文所用的，术语“未取代的杂环基氧基”指其中与氢原子连接的键被与其他如上定义的未取代的杂环基基团的环原子连接的键所替代的羟基基团(-OH)。如本文所用的，术语“取代的杂环基氧基”指其中与氢原子连接的键被与其他如上定义的取代的杂环基基团的环原子连接的键所替代的羟基基团(-OH)。如本文所用的，术语“未取代的杂环基氧基烷基”指其中碳键或氢键被氧键所替代的如上定义的未取代的烷基基团，该氧键与未取代的杂环基基团键合。

如本文所用的，术语“取代的杂环基氧基烷基”指这样的如上定义的未取代的杂环基氧基烷基基团，其中与杂环基氧基烷基基团的烷基基团的碳或氢基团连接的键与如上文关于取代的烷基基团所述的非碳和非氢原子键合，或其中杂环基氧基烷基基团的杂环基基团为如上定义的取代的杂环基基团。

如本文所用的，术语“未取代的杂环基烷氧基”指这样的如上定义的未取代的烷基基团，其中碳键或氢键被连接与母体化合物键合的氧原子的键所替代，并且其中该未取代的烷基基团的另一个碳键或氢键与如上定义的未取代的杂环基基团键合。如本文所用的，术语“取代的杂环基烷氧基”指这样的如上定义的未取代的杂环基烷氧基基团，其中与该杂环基烷氧基基团的烷基基团的碳或氢基团连接的键与如上文关于取代的烷基基团所述的非碳和非氢原子键合，或其中该杂环基烷氧基基团的杂环基基团为如上定义的取代的杂环基基团。此外，取代的杂环基烷氧基基团还包括这样的基团，其中与该基团的烷基部分连接的碳键或氢键可被一个或多个另外的取代的和未取代的杂环所取代。

如本文所用的，术语“未取代的芳基氨基烷基”指其中碳键或氢键被连接与至少一个如上定义的未取代的芳基基团键合的氮原子的键所替代的如上定义的未取代的烷基基团。

如本文所用的，术语“取代的芳基氨基烷基”指这样的如上定义的未取代的芳基氨基烷基基团，不同之处在于其中芳基氨基烷基基团的烷基基团为如上定义的取代的烷基基团，或芳基氨基烷基基团的芳基基团为取代的芳基基团，但是与在所有芳基氨基烷基基团中的氮原子连接的键本身不会使所有芳基氨基烷基基团成为取代的。然而，取代的芳基氨基烷基基团不包括这样的基团，在该基团中与该基团的氮原子键合的氢被非碳和非氢原子所替代。

如本文所用的，术语“未取代的杂环基氨基烷基”指这样的如上定义的未取代的烷基基团，其中碳键或氢键被连接与至少一个如上定义的未取代的杂环基基团键合的氮原子的键所替代。如本文所用的，术语“取代的杂环基氨基烷基”指这样的如上定义的未取代的杂环基氨基烷基基团，其中杂环基基团为如上定义的取代的杂环基基团和/或烷基基团为如上定义的取代的烷基基团。与在所有杂环基氨基烷基基团中的氮原子连接的键本身不能使所有杂环基氨基烷基基团成为取代的。

如本文所用的，术语“未取代的烷基氨基烷氧基”指这样的如上定义的未取代的烷基基团，其中碳键或氢键被连接与母体化合物键合的氧原子的键所替代，并且其中该未取代的烷基基团的另一个碳键或氢键与氮原子键合，该氮原子与氢原子和如上定义的未取代的烷基基团键合。

如本文所用的，术语“取代的烷基氨基烷氧基”指这样的如上定义的未取代的烷基氨基烷氧基基团，其中连接与键合至母体化合物的氧原子键合的烷基基团的碳或氢原子的键被一个或多个与如上文关于取代的烷基基团所讨论的非碳和非氢原子连接的键所替代，和/或如果与氨基基团键合的氢与非碳和非氢原子键合，和/或如果与胺的氮键合的烷基基团与如上文关于取代的烷基基团所述的非碳和非氢原子键合。在所有烷基氨基烷氧基基团中胺和烷氧基官能团的存在本身不能使所有此类基团成为取代的烷基氨基烷氧基基团。

如本文所用的，术语“未取代的二烷基氨基烷氧基”指这样的如上定义的未取代的烷基基团，其中碳键或氢键被连接与母体化合物键合的氧原子的键所替代，并且其中该未取代的烷基基团的另一个碳键或氢键与氮原子键合，该氮原子与两个其他类似或不同的如上定义的未取代的烷基基团键合。

如本文所用的，术语“取代的二烷基氨基烷氧基”指这样的如上定义的未取代的二烷基氨基烷氧基基团，其中连接与键合至母体化合物的氧原子键合的烷基基团的碳或氢原子的键被一个或多个与如上文关于取代的烷基基团所讨论的非碳和非氢原子连接的键所替代，和/或如果一个或多个与胺的氮键合的烷基基团与如上文关于取代的烷基基团所述的非碳和非氢原子键合。在所有二烷基氨基烷氧基基团中胺和烷氧基官能团的存在本身不能使所有此类基团成为取代的二烷基氨基烷氧基基团。

如本文所用的，关于羟基基团、胺基团和巯基基团的术语“受保护的”指这些官能团受到本领域技术人员已知的保护基团的保护而免于不期望的反应的形式，该保护基团例如是在Protective Groups in Organic Synthesis,Greene,T.W.；Wuts,P.G.M.,JohnWiley&Sons,New York,NY,(第3版,1999)中阐述的那些，并可使用其中所阐述的程序添加或去除。受保护的羟基基团的实例包括但不限于，甲硅烷基醚，诸如通过羟基基团与诸如但不限于叔丁基二甲基氯硅烷、三甲基氯硅烷、三异丙基氯硅烷、三乙基氯硅烷的试剂反应而获得的那些；取代的甲基和乙基醚，诸如甲氧基甲基醚、甲硫基甲基醚、苄氧基甲基醚、叔丁氧基甲基醚、2-甲氧基乙氧基甲基醚、四氢吡喃基醚、1-乙氧基乙基醚、烯丙基醚、苄基醚；酯，诸如但不限于苯甲酰甲酸酯、甲酸酯、乙酸酯、三氯乙酸酯和三氟乙酸酯。受保护的胺基团的非限制性实例包括酰胺，诸如甲酰胺、乙酰胺、三氟乙酰胺和苯甲酰胺；酰亚胺，诸如邻苯二甲酰亚胺和二硫代琥珀酰亚胺；等等。受保护的巯基基团的非限制性实例包括硫醚，诸如S-苄基硫醚和S-4-皮考基硫醚；取代的S-甲基衍生物，诸如半硫代缩醛、二硫代缩醛和氨基硫代缩醛等。

概述

已发现多种化合物在治疗某些疾病如癌症中是有用的。例如，

(甲磺酸伊马替尼或“伊马替尼”)是在治疗慢性髓样白血病(CML)和胃肠道间质瘤(GIST)中显示出功效的化合物。其他的实验药物包括分别用于治疗肾细胞癌和白血病的索拉非尼和PNU-166196。尽管已经在开发用于治疗某些癌症的药物组合物方面取得重要进展，但仍需要新的化合物、组合物、治疗方法和用于开发药物的模型系统，来预防和/或治疗癌症和其他疾病，例如，肺血管疾病如肺动脉高压(PAH)。特别地，血小板衍生生长因子(PDGF)受体酪氨酸激酶是PAH的具有吸引力的治疗靶标。PDGF信号传导途径在人特发性PAH(iPAH)和该疾病的动物模型中被激活。例如，与对照受试者相比，来自iPAH患者的小肺动脉中PDGFA、PDGFB、PDGFRα和PDGFRβmRNA表达增加，并且蛋白质印迹分析显示在PAH肺中PDGFRβ的蛋白质表达显著增加。

PDGFRα抑制剂伊马替尼抑制PASMC的迁移。伊马替尼还降低了RVSP，并改善了PAH的大鼠MCT模型中的存活率。在难治性PAH患者的若干病例报告中，已观察到对伊马替尼的良好反应。参见Ghofrani等人,“Imatinib in pulmonary arterial hypertensionpatients with inadequate response to established therapy.”Am J Respir CritCare Med.Vol.182:1171-7(2010)。IMPRES试验检查了伊马替尼在重度PAH患者中的效果，显示了六分钟步行距离和心肺血液动力学的改善。然而，口服的伊马替尼可能与包括胃肠疼痛和骨髓抑制在内的全身性副作用相关。参见Paniagua等人,“Imatinib for thetreatment of rheumatic diseases.”Nat Clin Pract Rheumatol；Vol 3:190-1(2007)。为了改善治疗窗，即，增强功效并减少全身性副作用，本发明人采用吸入递送用于PAH的激酶抑制剂。

此外，伊马替尼是使用体内鼠MCT模型系统开发的，该系统是关于临床前候选药物功效评估的不完善的系统，这至少是因为其关于表达某些人类疾病表型例如与PAH相关的新生内膜和/或丛状病变的发展是不可靠的。Cool等人,“Pathogenesis and evolution ofplexiform lesions in pulmonary hypertension associated with scleroderma andhuman immunodeficiency virus infection.”Hum Pathol.28:434-442(1997)。因此，在更具侵袭性的呈现人类疾病表型的模型中检查激酶抑制剂的效果对于更准确地反映该人类疾病的病理学，并因此开发用于有效治疗人类疾病的新一代化合物和组合物是必要的。

本发明人在进一步将本发明的化合物和疗法与伊马替尼进行比较时，已经采用了这样的模型。如以下进一步详述的，本发明人使用鼠野百合碱(MCT)加肺切除术(PN)模型系统(MCT+PN)进行功效研究。该模型赋予人类疾病例如PAH的新生内膜和/或丛状病变特征。为达到这一目的，例如，PAH的病理特征由小前毛细血管的肺小动脉中的同心的和丛状病变组成。参见Cool等人(1997)；和Tuder等人,“Plexiform lesion in severe pulmonaryhypertension:association with glomeruloid lesion.”Am J Pathol 159:382-383(2001)。同心病变由新生内膜细胞的增殖引起，它堵塞了血管腔。据报道，这些同心阻塞性新生内膜病变由成肌纤维细胞和/或内皮细胞组成。参见，例如，Yi等人,Am J Respir CritCare Med 162:1577-86(2000)。

此外，已经在丛原PAH中发现了由T细胞、B细胞和巨噬细胞组成的血管周浸润物。参见Sakagami,“In vivo,in vitro and ex vivo models to assess pulmonaryabsorption and disposition of inhaled therapeutics for systemic delivery.”AdvDrug Deliv Rev58:1030-1060(2006)。而且，丛状病变的特征在于对内皮细胞标志物染色的紊乱的血管通道，并且在来自特发性和/或原发性PAH患者的肺样品中的此类病变由内皮细胞的单克隆扩充组成。Lee等人,“Monoclonal endothelial cell proliferation ispresent in primary but not secondary pulmonary hypertension.”J ClinInvest101:927-934(1998)。因此，这种类型的PAH实质上是肺小动脉内皮细胞的“癌症”(参见以上)，这至少是因为在该疾病的初期或早期，正常内皮细胞的急性凋亡损失可导致凋亡抗性内皮细胞的出现和克隆扩充。Lee等人(1998)。与PAH相关的瘤形成过程经由MCT+PN模型测定不仅提供了PAH的激酶抑制剂治疗，而且提供了新的化合物、组合物和方法的开发，其与先前使用较差的模型系统产生的激酶抑制剂相比具有较优的功效、效力和更宽的抑制谱，其对于RTK抑制可能具有窄的选择性，以用于治疗肿瘤性疾病。如以下进一步描述的，药物-激酶同源性建模确保了此类抑制剂，包括例如其非选择性不可逆衍生物，靶向易受影响的激酶结构域以达到最佳功效。

化合物合成

在一个方面，本发明提供了结构I化合物的合成，该化合物使用以下部分中描述的和在WO 2008/058341(其通过引用全文并入于此并用于所有目的，如同其在本文中充分阐述)中公开的程序容易地合成。而且，结构I的化合物通常由起始材料如二卤代杂环进行制备。第一步为亲核芳香取代以生成单氨基-单卤代中间体。通常通过向在诸如乙醇、异丙醇、叔丁醇、二氧杂环己烷、THF、DMF、乙氧基乙醇、甲苯或二甲苯等溶剂中的二卤代杂环中添加伯胺或仲胺来进行亲核芳香取代。该反应通常在升高的温度下在过量胺或非亲核碱如三乙胺或二异丙基乙胺或无机碱如碳酸钾或碳酸钠的存在下发生。

或者，可以通过过渡金属催化的胺化反应引入氨基取代基。用于此类转化的典型催化剂包括Pd(OAc)₂/P(t-Bu)₃、Pd₂(dba)₃/BINAP和Pd(OAc)₂/BINAP。这些反应通常在室温至回流的温度下，在诸如甲苯或二氧杂环己烷的溶剂中，在诸如碳酸铯或叔丁醇钠或叔丁醇钾的碱的存在下进行。参见，例如，Hartwig和Angew,Chem.Int.Ed 37,2046(1998)。这些化合物的合成的第一步中采用的胺商购获得或使用本领域技术人员公知的方法制备。而且，α-烷基苄基胺可通过肟的还原来制备。典型的还原剂包括氢化铝锂，在炭载钯催化剂的存在下的氢气，在盐酸的存在下的Zn，在路易斯酸如TiCb、ZrCU、NiCl₂和MoO₃的存在下的硼氢化钠，或具有Amberlyst H1 5离子交换树脂和LiCl的硼氢化钠。α-烷基苄基胺还可以通过相应的酮的还原胺化来制备。用于这种转化的典型方法为Leuckart-Wallach反应，尽管也使用催化条件(HCO₂NH₄、[(CH₃)₅C₅RhCl₂]₂)或其他程序，例如NH₄OAc、Na(CN)BH₃。α-烷基苄基胺还可由相应的α-烷基苄醇制备。这样的方法包括将羟基衍生为甲磺酸酯或甲苯磺酸酯并用氮亲核体如邻苯二甲酰亚胺或叠氮化物进行置换，使用常规的合成方法将该氮亲核体转化为伯胺；或者，在类似Mitsunobu的条件下用合适的氮亲核体置换羟基。可通过在诸如甲醇的溶剂中用还原剂如硼氢化钠还原相应的酮来制备α-烷基苄醇。或者，可通过向苯甲醛衍生物添加烷基金属物质(如格氏试剂)获得α-烷基苄醇，这通常在室温或低于室温的温度下在诸如四氢呋喃的溶剂中进行。可使用以上概述的方法由手性α-烷基苄醇制备高光学纯度的α-烷基苄基胺。可通过相应酮的手性还原获得手性α-烷基苄醇。

上述由二卤代杂环和胺形成的单氨基-单卤代中间体随后可进一步官能化。例如，在胺取代基具有额外的官能团的情况下，该官能团可使用本领域技术人员公知的方法进行衍生化或官能化。例如，游离的伯胺基团可以进一步官能化为酰胺、磺胺或尿素官能团，或可以烷基化以生成仲胺或叔胺衍生物。用于形成酰胺的优选方法包括使用诸如二环己基碳二亚胺、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺或羰二咪唑的偶合试剂在诸如二氯甲烷、四氢呋喃或1,4-二氧杂环己烷的溶剂中将胺与羧酸偶合。或者，在胺反应之前酸组分可通过转化为酰基氯(使用亚硫酰氯、草酰氯、二(三氯甲基)碳酸酯或氰尿酰氯)或混合的酸酐物质(使用例如氯甲酸叔丁酯或氯甲酸异丙酯)或活性酯中间体(如N-羟基琥珀酰亚胺基、五氟苯基或对硝基苯基酯)而被活化。

随后可使单氨基-单氯代中间体在钯介导的交叉偶合反应中与适当官能化的偶合配偶体反应，以用可替代的部分替换卤素原子。典型的偶合配偶体为有机硼酸或酯。关于Suzuki偶合、有机锡化合物(organostannanes)、Stille偶合、格氏试剂、Kumada偶合、有机锌物质和Negishi偶合，分别参见，例如，Miyaura和Suzuki,Chem Rev.952457(1995)；Stille,Chem.,Int.Ed.Engl 25,508(1986)；Kumada等人,Org.Synth.Coll.Vol.6,407(1998)；以及Negishi,J.Organomet.Chem.653,34(2002)。Suzuki偶合为优选的偶合方法，并且通常在诸如DME、THF、DMF、乙醇、丙醇、甲苯或1,4-二氧杂环己烷的溶剂中在诸如碳酸钾、氢氧化锂、碳酸铯、氢氧化钠、氟化钾或磷酸钾等碱的存在下进行。该反应可以在升高的温度下进行，并且采用的钯催化剂可以选自Pd(PPh₃)₄、Pd(OAc)₂、[PdCl₂(dppf)]、Pd₂(dba)₃/P(t-Bu)₃。

还可使用与以上概述的条件类似的条件使单氨基-单氯代中间体经历第二次亲核芳香取代反应。本领域技术人员将理解针对以上合成所描述的反应的顺序可以在某些情况下改变，并且在针对以上所述反应的某些情况下某些官能团可能需要衍生化，即，被保护，从而以合理的产率和效率继续进行。保护官能团的类型是本领域技术人员公知的。可使用本领域技术人员公知的技术将由以上所述的反应顺序形成的产物进一步衍生化。离去基团可以是任何合适的已知类型，如在March,“Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms and Structure.”第4版.pp 352-7,John Wiley&Sons,NY(1992)中公开的那些。在一些实施方案中，该离去基团为卤素，例如，氯。

激酶

蛋白激酶是催化蛋白质中特定残基的磷酸化的酶家族。这样的酶通常分为三类，优先将丝氨酸和/或苏氨酸残基磷酸化的那些酶，优先将酪氨酸残基磷酸化的那些酶，和将酪氨酸和Ser/Thr残基均磷酸化的那些酶。因此，蛋白激酶是负责将细胞外信号(包括细胞因子对其受体的作用)转导至细胞核以触发各种生物事件的信号转导途径中的关键元素。蛋白激酶在正常细胞生理学中的许多作用包括细胞周期控制，包括增殖、分化、代谢、凋亡、细胞运动性、有丝分裂发生、转录、翻译和其他信号过程。

血小板衍生生长因子受体激酶(PDGFR)是RTK的一种类型。PDGFR的序列可见于GenBank，登录号为NM-002609(mRNA)和NP-002600(蛋白质)，并且已经至少在以下文献中描述：Matsui等人,“Isolation of a novel receptor cDNA establishes the existenceof two PDGF receptor genes”Science 243(4892):800-804(1989)；Claesson-Welsh,L.等人.“cDNA cloning and expression of a human platelet-derived growth factor(PDGF)receptor specific for B-chain-containing PDGF molecules”Mol.Cell.Biol.8(8):3476-3486(1988)；以及Gronwald等人.PNAS.85(10):3435-3439(1988)。

此外，PDGFR的同源结合配体PDGF是间叶细胞起源的细胞如成纤维细胞、平滑肌细胞和胶质细胞的强促有丝分裂因子。PDGF是通常由通过二硫键连接的两条多肽链A和B构成的32kDa蛋白质异二聚体。除了PDGF AB异二聚体之外，还存在PDGF的两种同二聚体形式(AA和BB)。在血液凝结和血小板粘附过程中，PDGF在损伤的血管部位处从颗粒中释放，提示PDGF可能在血管的修复中发挥作用。PDGF可刺激动脉平滑肌细胞从动脉的中间层迁移至内膜层，在内膜层中肌细胞可以增殖。由PDGF的所有同种型诱导的细胞增殖通过配体与PDGF受体的结合来介导。如上所详述的，PDGF受体属于III类酪氨酸激酶家族，并且包含被称为A型(或α型)和B型(或β型)的两种受体亚型。PDGF受体家族的其他成员包括CSF-IR、cKIT和FLT3。这两种PDGF受体同种型可以通过它们显著不同的配体结合特异性来区分。PDGFβ受体只结合B链(同种型BB和AB)，而PDGFα受体可结合PDGF的所有形式(含有A和/或B链的同种型)。由于PDGF相关过程对内皮细胞和血管平滑肌的增殖的重要性，存在PDGFRβ激酶抑制剂对例如疾病预防和治疗有用的一系列病理过程。

在从胶质母细胞瘤到前列腺癌的大量不同的实体瘤中已经证明了PDGF表达。在这些不同的肿瘤类型中，PDGF信号传导的生物作用可以从癌细胞生长的自分泌刺激到涉及相邻间质和血管发生的更精细的旁分泌相互作用不等。因此，用小分子抑制PDGFR激酶活性可干扰肿瘤生长、血管发生、具有肿瘤病因学的疾病、免疫和炎性疾病、包括癌症和涉及新生血管发生的疾病在内的过度增生性疾病、肾脏和肾疾病、骨重建疾病、代谢疾病、血管疾病和肺血管疾病如PAH。由PDGF介导、因而涉及其同源受体的其他疾病包括，例如，再狭窄，包括血管成形术、粥样斑块切除术或其他有创性斑块去除方法之后的冠状动脉再狭窄，以及相同操作之后的肾或外周动脉再狭窄；与其他形式的急性损伤相关的血管增生现象和纤维化，诸如与成人呼吸窘迫综合征相关的肺纤维化，与肾炎相关的肾脏纤维化，与Kawasake病相关的冠状动脉狭窄，和与其他动脉炎如Takayasha病相关的血管变窄；预防静脉移植物变窄；预防由移植器官中的平滑肌细胞迁移和增殖加速引起的变窄以及其他纤维化过程，如硬皮病和肌纤维变性，以及抑制肿瘤细胞增殖。

c-Kit为属于PDGF受体家族的另一种受体酪氨酸激酶，并且一般在造血祖细胞、肥大细胞和生殖细胞中表达。c-kit表达已涉及多种癌症，包括肥大细胞白血病、生殖细胞肿瘤、小细胞肺癌、GIST、急性髓性白血病(AML)、神经母细胞瘤、黑素瘤、卵巢癌、乳腺癌。Smolich等人,Blood,97(5)1413-21。

细胞外信号调节的蛋白激酶1和2(ERK1/2)是可以介导细胞增殖和凋亡的促分裂原活化蛋白(MAP)激酶超家族的成员。已经深入地研究了控制细胞增殖的Ras-Raf-MEK-ERK信号级联，但涉及ERK1/2介导的细胞死亡的机理在很大程度上是未知的。ERK1/2转位至细胞核，但也可以保留在胞质溶胶中。ERK1/2的胞质保留阻止其接近负责促有丝分裂响应的转录因子底物。此外，胞质ERK1/2除了抑制细胞核中的存活和增殖信号之外，还增强一些凋亡前体蛋白如细胞质中的DAP激酶的催化活性。进一步确定胞质ERK1/2及其胞质底物增强细胞死亡的功能的研究对于利用该途径开发针对癌症和慢性炎性疾病的有效治疗将是必要的。

STAT3是STAT蛋白质家族的成员，其通常响应于细胞因子和生长因子而起作用。STAT家族成员被受体相关激酶磷酸化，随后形成同二聚体或异二聚体，该同二聚体或异二聚体转位至细胞核，在那里充当转录激活物。STAT3通过响应包括IFN、EGF、IL5、IL6、HGF、LIF和BMP2在内的多种细胞因子和生长因子磷酸化而活化。该蛋白质介导多种基因响应于细胞刺激的表达，并因此在许多细胞过程如细胞生长和凋亡中发挥关键作用。已证实小GTP酶Rac1结合并调节该蛋白质的活性，而已证实PIAS3抑制STAT3。

AKT(也称为PKB)参与代谢、细胞存活、运动性、转录和细胞周期进展的调节。AKT属于蛋白激酶超家族的AGC亚家族，它在人类中由多于500个成员组成。AKT亚家族包含三个哺乳动物同种型，Akt1、Akt2和Akt3，它们是不同基因的产物，并共享包含以下三个功能域的保守结构：N末端普列克底物蛋白同源(PH)域、中心激酶域和含有疏水性基序(HM)磷酸化位点[FxxF(S/T)Y]的C末端调节域。

激酶抑制剂

在一个方面，本发明提供了抑制受试者的激酶例如酪氨酸激酶如RTK的化合物和方法，和/或治疗受试者中由激酶例如酪氨酸激酶如RTK介导或与之相关的生物状况的方法。在一些实施方案中，所述激酶为Cdc2激酶、AKT、c-Kit、c-ABL、ERK1/2、STAT3、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3、PDGFR-αα、PDGFR-ββ、PDGFR-αβ、FLT-3、Fyn、Lck、Tie-2、GSK-3、Cdk2、Cdk4、MEK1、NEK-2、CHK2、CK1ε、Raf、CHK1、Rsk2、FMS(CSF-IR)、KDR、EphA2、EphA3、EphA8、FLTl、FLT4、HCK、PTK5、RET、SYK、DDRl、DDR2和PAR-1。同样地，在一些实施方案中，所述激酶为酪氨酸激酶如Cdc2激酶、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3、PDGFR-αα、PDGFR-ββ、PDGFR-αβ、FLT-3、Fyn、Lck和/或Tie-2。所述方法包括向受试者施用结构I的化合物、该化合物的互变异构体、该化合物的药学上可接受的盐、该互变异构体的药学上可接受的盐，或它们的混合物。

先前，已表明多种吲哚基取代的化合物抑制一种或多种激酶，如WO 01/29025、WO01/62251和WO 01/62252中所公开的。同样地，最近WO 01/28993中公开了多种苯并咪唑基化合物。据报道，这样的化合物能够抑制、调制和/或调节受体型和非受体酪氨酸激酶的信号转导。所公开的化合物中的一些含有与吲哚基或苯并咪唑基基团键合的喹诺酮片段。还报道了4-羟基喹诺酮和4-羟基喹啉衍生物的合成。例如，Ukrainets等人已公开了3-(苯并咪唑-2-基)-4-羟基-2-氧代-1,2-二氢喹啉的合成。Ukrainets等人,Tet.Lett.42,7747-48(1995)也已公开了其他4-羟基喹诺酮和含硫类似物如1H-2-氧代-3-(2-苯并咪唑基)-4-羟基喹啉的合成、抗惊厥和抗甲状腺活性。Ukrainets等人,Khimiya GeterotsiklicheskikhSoedinii,1,105-108(1993)。而且，其他化合物，例如4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮，已被描述为口服生物可用的苯并咪唑-喹啉酮，其显示出对驱动内皮和肿瘤细胞增殖的受体酪氨酸激酶的抑制。如WO2005/047244中公开的，对FGFR1、FGFR3、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3、PDGFRβ、c-Kit、p60src和FLT-3这九种酪氨酸激酶显示出抑制作用。然而，该化合物在药学上可接受的剂量下不能显著抑制EGFR家族激酶或胰岛素受体激酶。

此外，如US 2011/0190313中描述的，如US 2006/0154936中公开的4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)-N-[4-甲基-3-(4-吡啶-3-基)嘧啶-2-基氨基)苯基]-苯甲酰胺(伊马替尼)抑制PDGFRα和β激酶、Abl、DDR和c-KIT。然而，US 2011/0190313的第[0117]段表明，虽然伊马替尼在6个月的时间段内显示安全且耐受良好，但与安慰剂相比，在随机分配至伊马替尼组的患者中主要功效参数(6MWD)并没有改善，尽管次要终点显著改善。因此，如以下进一步详述的，至少由于先前的限制、抗性疾病表型和对于更有效的激酶例如RTK抑制的需求，存在对于抑制激酶例如酪氨酸激酶如RTK的化合物的持续需求。参见US 2008/0268460。

此外，在Frey等人(1998)中报道的小分子显示通过与表皮生长因子受体(EGFR)共价相互作用而不可逆地抑制该受体，同时将该分子的ATP结合袋中的半胱氨酸残基烷基化。实际上，Leproult等人,“Cysteine Mapping in Conformationally Distinct KinaseNucleotide Binding Sites:Application to the Design of Selective CovalentInhibitors.”J.Med.Chem.54,1347–1355(2011)公开了一种设计不可逆抑制剂的方法是经由对存在于激酶的核苷酸结合位点中的半胱氨酸残基的系统分析而利用存在于靶蛋白中的半胱氨酸巯基的亲核性。这样的方法可以促进不可逆抑制(甚至当考虑不同的激酶构象时)，因此改善剂量和毒性。见上。

在Leproult等人(2011)中的半胱氨酸定位证明激酶是选择性共价抑制剂的潜在靶标。示出了激酶抑制剂伊马替尼的实例，在其苯环的对位添加了氯乙酰胺基团。对于Kit和PDGFα受体均显示了肽抑制剂加合物的形成。见上。然而，其他化合物不能显示类似的共价加合物。显示了氯乙酰胺作为亲电体的实例，它可以与半胱氨酸残基形成共价键。通用术语“弹头(warhead)”用于意指在抑制剂与靶蛋白激酶之间形成共价键的亲电阱(electrophilic trap)。氯乙酰胺作为亲电体可能反应性过大以至于不具有临床效用，并且可能由于该原因而具有毒性。然而，Leproult等人(2011)提出，亲电体的次于最优的定位可以解释为什么不能与其他较低反应性的弹头形成共价键。

本发明尤其提供了在RTK受体抑制剂上的不同弹头定位。在一些实施方案中，为了提高功效采用除了由Leproult等人(2011)描述的那些亲电体之外的亲电体。参见Barf等人(2012)和Oballa等人,“A generally applicable method for assessing theelectrophilicity and reactivity of diverse nitrile-containing compounds.”Bioorg Med Chem Lett 17:998-1002(2007)(描述了含腈亲电体)。此外，Diller等人,JMed Chem 46:4638-4647(2003)报道了基于VEGFR2的PDGFβ受体的同源性模型(55％同源性)。

关于本发明的一个方面，基于同源结构，例如，PDGFα和PDGFβ受体与c-Kit的同源性分别为59％和63％，本发明人先前通过使用RTK的同源模型而采用了分子对接。在一些实施方案中，在关于RTK抑制剂例如PDGFR抑制剂支架的多个位置处引入不同的亲电体，为进一步的生物化学分析提供了基础。为达到这一目的，可以分析抑制剂弹头相对于靶半胱氨酸残基的空间取向，以计算结合自由能和估算的K_i。在一些实施方案中，具有最低的结合自由能并且弹头与半胱氨酸残基最紧密地靠近的化合物提供了不可逆的非选择性RTK抑制剂。

因此，本发明提供了结构1的化合物，该化合物的对映体、同分异构体或立体异构体，该化合物、该化合物的互变异构体、对映体、同分异构体或立体异构体的药学上可接受的盐，或其任何混合物，它们与受体酪氨酸激酶(RTK)如PDGFR或c-Kit或两者共价相互作用。在一些实施方案中，该PDGFR选自如经由同源性建模所示的PDGFR-α、PDGFR-β、PDGFR-αα、PDGFR-ββ和PDGFR-αβ。

药物组合物

在一个方面，本发明提供了药物组合物，其包含至少一种结构1的化合物和药学上可接受的载体。本发明的组合物可含有如下描述的其他治疗剂，并且可以根据诸如药物配制领域公知的技术等技术，例如通过采用常规固体或液体载体或稀释剂以及适合于所需给药模式的类型的药物添加剂，例如赋形剂、粘合剂、防腐剂、稳定剂、调味剂等进行配制。

药物组合物通常被配制成与其预期给药途径相匹配。给药途径的实例包括肠胃外(例如，静脉内、皮内、腹膜内或皮下)、口服、吸入、经皮(局部)、眼内、离子电渗和经粘膜给药。用于肠胃外、皮内或皮下施用的溶液或悬浮液可包含以下组分：无菌稀释剂，如注射用水、盐水溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗菌剂，如苄醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，如乙二胺四乙酸；缓冲液，如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及用于调节张力的试剂，如氯化钠或右旋糖。可用酸或碱如盐酸或氢氧化钠调节pH。肠胃外制剂可封装在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。为了方便患者或治疗医师，给药制剂可提供于含有疗程的所有必需装备的药剂盒中。

本发明的化合物通过任何合适的手段施用，例如，诸如以片剂、胶囊、颗粒或粉末的形式口服；舌下；经颊；诸如通过皮下、静脉内、肌内、皮内(经皮)或脑池内注射或输注技术肠胃外给药，例如，作为无菌可注射水性或非水性溶液或悬浮液，诸如通过吸入喷雾或吹入经鼻给药，诸如以乳膏或软膏的形式局部给药，以溶液或悬浮液的形式经眼给药，以子宫托、棉塞或乳膏的形式经阴道给药，或者诸如以栓剂的形式经直肠给药，以含有无毒的药学上可接受的载体或稀释剂的单位剂量制剂施用。例如，所述化合物可以以适合于立即释放或延长释放的形式施用。可以通过使用包含本发明化合物的合适的药物组合物来实现立即释放或延长释放，或者通过使用诸如皮下植入物或渗透泵的装置来实现延长释放。

对于呼吸道施用，例如，吸入，包括鼻内施用，所述活性化合物可通过本领域用于施用至呼吸道的任何方法和制剂进行施用。因此，所述活性化合物可以以例如溶液、悬浮液的形式或作为干粉进行施用。根据本发明的这一方面的药剂还可以以气雾剂的形式直接施用于气道。对于作为气雾剂的使用，溶液或悬浮液形式的本发明化合物可以与合适的推进剂例如烃推进剂如丙烷、丁烷或异丁烷以及常规佐剂一起包装在加压的气雾剂容器中。本发明的物质还可以以非加压的形式施用，诸如在喷雾器或雾化器中。

可根据本发明使用的推进剂驱动的吸入气雾剂也可含有其他成分，如共溶剂、稳定剂、表面活性剂、抗氧化剂、润滑剂和pH调节剂。可根据本发明使用的根据本发明的推进剂驱动的吸入气雾剂可使用本领域已知的吸入器例如计量吸入器进行施用。作为另一个备选方案，本发明的药剂可以以肺表面活性剂制剂的形式施用于气道。肺表面活性剂制剂可包括外源性肺表面活性剂制剂(例如，

(Forest Laboratories)、

(Ross Products)和

(DEY,California,USA)或合成的肺表面活性剂制剂(例如，

(GlaxoWellcome Inc.)和ALEC)。这些表面活性剂制剂经由气道滴注(即，插管之后)或气管内施用。

作为进一步的备选方案，本发明的药剂可以以可吸入粉末的形式施用于气道。粉末制剂可包含生理学上可接受的赋形剂，如单糖(例如葡萄糖或阿拉伯糖)、二糖(例如乳糖、蔗糖和麦芽糖)、寡糖和多糖(例如葡聚糖)、多元醇(例如山梨糖醇、甘露醇、木糖醇)、盐(例如氯化钠、碳酸钙)或这些赋形剂彼此的混合物。优选地，使用单糖或二糖，而使用乳糖或葡萄糖是优选的，尤其是，但并非排他性地，以水合物的形式。

在根据本发明的可吸入粉末的范围内，赋形剂具有最高250μm，优选10至150μm，最优选15至80μm的最大平均颗粒大小。向上述赋形剂中添加平均颗粒大小为1至9μm的更细的赋形剂级分有时可能似乎是合适的。这些较细的赋形剂还选自上文列出的可能的赋形剂。最后，为了制备根据本发明的可吸入粉末，向赋形剂混合物中添加微粒化制剂，优选地平均颗粒大小为0.5至10μm。通过研磨和微粒化并最终将成分混合在一起而产生根据本发明的可吸入粉末的方法是根据现有技术可知的。

在包括鼻内制剂在内的用于施用至呼吸道的制剂中，通常经由微粒化技术等将活性化合物配置成具有小的颗粒大小，例如，大约5微米或更小。在一些实施方案中，使用活性化合物的持续释放制剂。在一些实施方案中，活性化合物作为自由流动的粉末经由吸入器通过经口吸入进行施用。

本发明的药物组合物和方法进一步包括如本文所述和/或本领域已知的额外的治疗活性化合物(第二药剂)，该治疗活性化合物通常与包含本发明的结构1的化合物的组合物共同用于治疗一种或多种病理状况。治疗剂的组合协同作用以实现本文所述的不同疾病、病症和/或状况的治疗或预防。这样的第二药剂包括但不限于，前列腺素类，内皮素拮抗剂，细胞质激酶抑制剂，受体激酶抑制剂，内皮素受体拮抗剂例如安贝生坦、波生坦和西他生坦，PDE5(PDE-V)抑制剂例如西地那非、他达拉非和伐地那非，钙通道阻滞剂例如氨氯地平、非洛地平、维拉帕米(varepamil)、地尔硫

和薄荷醇，前列环素，曲罗尼尔，伊洛前列素，贝前列素，一氧化氮，氧，肝素，华法林，利尿剂，地高辛，环孢菌素例如环孢菌素A，CTLA4-Ig，抗体如ICAM-3、抗-IL-2受体(抗-Tac)、抗-CD45RB、抗-CD2、抗-CD3(OKT-3)、抗-CD4、抗-CD80、抗-CD86，阻断CD40与gp39之间相互作用的药剂如对于CD40和/或gp39具有特异性的抗体(即CD 154)，由CD40和gp39(CD401g和CD8gp39)构建的融合蛋白，NF-κB功能的抑制剂如核转位抑制剂，如脱氧精胍菌素(DSG)，胆固醇生物合成抑制剂如HMG CoA还原酶抑制剂(洛伐他汀和辛伐他汀)，非甾体抗炎药(NSAID)如布洛芬、阿司匹林、对乙酰氨基酚、来氟米特、脱氧精胍菌素，环加氧酶抑制剂如塞来昔布，类固醇类如泼尼松龙或地塞米松，金化合物，β-激动剂如沙丁胺醇，LABA如沙美特罗，白三烯拮抗剂如孟鲁司特，抗增殖剂如氨甲蝶呤，FK506(他克莫司，普乐可复(Prograf))，霉酚酸酯，细胞毒性药物如硫唑嘌呤、VP-16、依托泊苷、氟达拉滨、多柔比星(doxorubin)、阿霉素、安吖啶、喜树碱、阿糖胞苷、吉西他滨、氟脱氧尿苷、美法仑和环磷酰胺，抗代谢物如氨甲蝶呤，拓扑异构酶抑制剂如喜树碱，DNA烷化剂如顺铂，激酶抑制剂如索拉非尼，微管毒物如紫杉醇，TNF-α抑制剂如替尼达普、抗-TNF抗体或可溶性TNF受体，羟基脲和雷帕霉素(西罗莫司或雷帕鸣(Rapamune))或其衍生物。

本发明的化合物还可以制备成药学上可接受的盐，但应当理解，至少在此类盐可用作制备药学上可接受的盐的中间体的意义上，非药学上可接受的盐也落在本发明的范围内。药学上可接受的盐的实例包括但不限于硫酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、双甲磺酸盐、甲苯磺酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、双乙酸盐、柠檬酸盐、双盐酸盐，药学上可接受的阳离子如钠、钾、锂、钙、镁、铵和烷基铵的盐；药学上可接受的无机酸如盐酸、正磷酸、硫酸、磷酸、硝酸、碳酸、硼酸、氨基磺酸和氢溴酸的酸加成盐；或药学上可接受的有机酸如乙酸、丙酸、丁酸、酒石酸、马来酸、羟基马来酸、富马酸、柠檬酸、乳酸、粘酸、葡糖酸、苯甲酸、琥珀酸、草酸、苯乙酸、甲磺酸、三卤代甲磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、羟乙磺酸、水杨酸、磺胺酸、天冬氨酸、谷氨酸、依地酸、硬脂酸、棕榈酸、油酸、月桂酸、泛酸、鞣酸、抗坏血酸、戊酸和乳清酸的盐。胺基团的盐还可以包含季铵盐，其中氨基氮原子携带合适的有机基团如烷基、烯基、炔基或芳烷基部分。可以通过常规手段形成所述盐，例如通过在所述盐在其中不可溶的溶剂或介质中，或在溶剂如通过真空或通过冷冻干燥去除的水中使化合物的游离碱形式与一个或多个当量的合适的酸反应，或通过在合适的离子交换树脂上将存在的盐的阴离子交换为另一种阴离子。在一些实施方案中，所述盐为硫酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、双甲磺酸盐、甲苯磺酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、双乙酸盐、柠檬酸盐或双盐酸盐。

在一些实施方案中，本发明的化合物以治疗有效量施用。这样的施用使得结构1的化合物会引起临床医生所寻找的与例如受试者的细胞、组织、体液相关的反应。在治疗或预防由激酶抑制例如RTK抑制介导或与之相关的状况中，施用合适的剂量水平。在一些实施方案中，以单一剂量或多剂量每天施用约0.01至500mg/kg受试者体重。一致地，在一些实施方案中剂量水平为约0.1至约250mg/kg每天，而在其他实施方案中，每天向受试者施用约0.5至约100mg/kg。合适的剂量水平包括例如约0.01至250mg/kg/天、约0.05至100mg/kg/天或约0.1至50mg/kg/天。在这一范围内，在一些实施方案中，剂量为约0.05至0.5、0.5至5或5至50mg/kg/天。对于口服施用，所述组合物以片剂形式提供，该片剂含有1.0至1000mg活性成分，包括但不限于1、5、10、15、20、25、50、75、100、150、200、250、300、400、500、600、750、800、900和1000mg活性成分。例如，针对正在接受治疗的受试者的剂量的治疗功效和/或症状调节，剂量可以选择为在这些范围的任何范围内的任何剂量。在一些实施方案中，本发明的化合物如在例如US 8257741、US 8263128、WO 2010/132827、WO 2010/102066、WO 2012/040502、WO 2012/031129和/或WO 2010/102065中所述通过吸入施用，每日1至20、1至15、1至10、1至5、1至4或1至3次或每日一次或两次。在一些实施方案中，本发明的化合物每日施用1至5次。

在一些实施方案中，单位剂量足以提供以下中的一个或多个：(a)当向受试者施用单位剂量时，所述化合物在受试者血浆中的C_max约为1至5000ng/mL，或所述化合物在受试者血液中的C_max约为1至5000ng/mL；以及(b)施用后24h，在受试者血浆中有约1至5000ng/mL的化合物，或向受试者施用后24h，在受试者血液中有约1至5000ng/mL的化合物。

在一些实施方案中，对于结构1的化合物，该化合物的互变异构体，该化合物的对映体、同分异构体或立体异构体，该化合物、该化合物的互变异构体、对映体、同分异构体或立体异构体的药学上可接受的盐，或其任何混合物，其治疗有效量与不良副作用无关。这样的不良副作用包括但不限于，与施用前的受试者相比，受试者的肺功能降低、全身血压升高或降低、免疫功能低下、骨髓抑制、贫血、低氧。

疾病的预防和治疗

在一个方面，本发明提供了结构1的化合物，该化合物的互变异构体，该化合物的对映体、同分异构体或立体异构体，该化合物、该化合物的互变异构体、对映体、同分异构体或立体异构体的药学上可接受的盐，或其任何混合物，用以治疗一种或多种疾病，其中结构1在本文中进行了描述。

相应地，本发明提供了抑制激酶例如酪氨酸激酶的化合物、组合物和方法，以及治疗由此类激酶介导或与之相关的生物状况的方法。例如，本发明提供了抑制一种或多种激酶的方法，该激酶例如是细胞分裂周期2激酶(Cdc2激酶)，c-Kit，c-ABL，p60src，AKT，VEGFR3，PDGFRα，PDGFRβ，PDGFR-αα，PDGFR-ββ，PDGFR-αβ，FGFR3，FLT-3，与SRC、FGR、YES(Fyn)相关的FYN癌基因激酶，淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(Lck)，具有Ig和EGF同源域的酪氨酸激酶(Tie-2)，FMS(CSF-IR)，KDR，EphA2，EphA3，EphA8，FLTl，FLT4，HCK，PTK5，RET，SYK，DDRl，DDR2，糖原合酶激酶3(GSK-3)，细胞周期蛋白依赖性激酶2(Cdk2)，细胞周期蛋白依赖性激酶4(Cdk4)，MEK1，NEK-2，CHK2，CK1ε，Raf，检查点激酶1(CHK1)，核糖体S6激酶2(Rsk2)和PAR-1。特别地，提供了抑制酪氨酸激酶的化合物、组合物和方法，该酪氨酸激酶例如是细胞分裂周期2激酶(Cdc2激酶)，ERK1/2，STAT3，AKT，c-Kit，c-ABL，p60src，VEGFR3，PDGFRα，PDGFRβ，PDGFR-αα，PDGFR-ββ，PDGFR-αβ、FGFR3，FLT-3，与SRC、FGR、YES(Fyn)相关的FYN癌基因激酶，淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(Lck)，具有Ig和EGF同源域的酪氨酸激酶(Tie-2)，FMS(CSF-IR)，KDR，EphA2，EphA3，EphA8，FLTl，FLT4，HCK，PTK5，RET，SYK，DDRl和DDR2。在一些实施方案中，所述酪氨酸激酶为受体酪氨酸激酶(RTK)，例如，提供了PDGFR、PDGFR-αα、PDGFR-ββ、PDGFR-αβ或c-Kit或其组合。

本发明还提供了治疗由激酶介导的或与之相关的生物状况的化合物、组合物和方法，该激酶例如是酪氨酸激酶，包括Cdc2激酶、c-Kit、AKT、c-ABL、ERK1/2、STAT3、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、FGFR3、PDGFR-αα、PDGFR-ββ、PDGFR-αβ、FLT-3、Fyn、Lck、Tie-2、GSK-3、Cdk2、Cdk4、MEK1、NEK-2、CHK2、CK1ε、Raf、CHK1、Rsk2、FMS(CSF-IR)、KDR、EphA2、EphA3、EphA8、FLTl、FLT4、HCK、PTK5、RET、SYK、DDRl、DDR2和PAR-1。特别地，本发明提供了治疗由酪氨酸激酶介导的或与之相关的生物状况的化合物、组合物和方法，该酪氨酸激酶包括但不限于Cdc2激酶、AKT、c-Kit、c-ABL、p60src、VEGFR3、PDGFRα、PDGFRβ、PDGFR-αα、PDGFR-ββ、PDGFR-αβ、FGFR3、FLT-3、Fyn、Lck、Tie-2、FMS(CSF-IR)、KDR、EphA2、EphA3、EphA8、FLTl、FLT4、HCK、PTK5、RET、SYK、DDRl和DDR2。在一些实施方案中，由一种或多种激酶介导或与之相关的疾病或状况是由RTK例如PDGFR、PDGFR-αα、PDGFR-ββ、PDGFR-αβ或c-Kit或其组合介导的。

由本发明的一种或多种激酶介导或与之相关的疾病或状况包括但不限于，PAH、原发性PAH、特发性PAH、遗传性PAH、难治性PAH，BMPR2、ALK1、与遗传性出血性毛细血管扩张相关的内皮糖蛋白、与遗传性出血性毛细血管扩张无关的内皮糖蛋白、药物诱发的PAH，和毒素诱发的PAH，关联于或继发于以下一种或多种病症的PAH：系统性硬化、混合性结缔组织病、癌症、难治性癌症、转移性癌症、瘤形成、发育不全、过度增生、发育不良、化生、异常分化、粘连形成、血管发生疾病、肺功能障碍、心血管功能障碍、HIV感染、肝炎、门静脉高压、肺高压、先天性心脏病、低氧、慢性溶血性贫血、新生儿持续性肺高压、肺静脉闭塞病(PVOD)、肺毛细血管血管瘤病(PCH)、左心脏病肺高压、收缩期功能障碍、舒张期功能障碍、瓣膜病、肺病、间质性肺病、肺纤维化、血吸虫病、慢性阻塞性肺病(COPD)、睡眠呼吸障碍、肺泡通气不足病症、长期高原低氧暴露、发育异常、慢性血栓栓塞性肺高压(CTEPH)、不明多因素机制的肺高压、血液病、骨髓增生性病症、脾切除术、全身性病症、结节病、肺朗格汉斯细胞组织细胞增生症、淋巴管平滑肌瘤病、神经纤维瘤病、血管炎、代谢障碍、糖原贮积病、戈谢病、甲状腺病症、肿瘤阻塞、纤维性纵隔炎和需要透析的慢性肾衰竭；以及诸如以下的疾病：肺高压、先天性心脏病、低氧、慢性溶血性贫血、新生儿持续性肺高压、肺静脉闭塞病(PVOD)、肺毛细血管血管瘤病(PCH)、左心脏病肺高压、收缩期功能障碍、舒张期功能障碍、瓣膜病、肺病、间质性肺病、肺纤维化、血吸虫病、慢性阻塞性肺病(COPD)、睡眠呼吸障碍、肺泡通气不足病症、长期高原低氧暴露、发育异常、慢性血栓栓塞性肺高压(CTEPH)、不明多因素机制的肺高压、血液病、骨髓增生性病症、脾切除术、全身性病症、结节病、肺朗格汉斯细胞组织细胞增生症、淋巴管平滑肌瘤病、神经纤维瘤病、血管炎、代谢障碍、糖原贮积病、戈谢病、甲状腺病症、肿瘤阻塞、纤维性纵隔炎、免疫和炎性疾病、过度增生性疾病、肾脏和肾疾病、骨重塑疾病、代谢疾病、血管疾病和接受透析的慢性肾衰竭。

在一个方面，本发明提供了通过向受试者施用治疗有效量的结构1的化合物、该化合物的互变异构体、该化合物的药学上可接受的盐、该互变异构体的药学上可接受的盐或它们的混合物，来治疗受试者的肺动脉高压(PAH)或受试者的与PAH相关的生物状况的方法，其中结构1的化合物在本文中描述。在一些实施方案中，由本发明的一种或多种激酶介导或与之相关的疾病或状况选自PAH、原发性PAH、特发性PAH、遗传性PAH、难治性PAH、药物诱发的PAH、毒素诱发的PAH和伴有继发性疾病的PAH。

肺动脉高压(PAH)是一种威及生命的疾病，其特征在于肺动脉压显著持续上升。该疾病导致右心室(RV)衰竭和死亡。当前用于治疗慢性肺动脉高压的治疗性方法主要提供症状缓解以及一定的预后改善。虽然假定其适用于所有治疗，但大多数方法的直接抗增殖作用的证据缺失。此外，大多数当前应用的药剂的使用受到不期望的副作用或不方便的给药途径的限制。高血压肺动脉的病理变化包括内皮损伤、血管平滑肌细胞(SMC)的增殖和过度收缩以及成纤维细胞增殖。而且，PAH患者状态可根据本领域已知的世界卫生组织(WHO)分类(NY协会功能分类之后修改的)进行评估。

在一些实施方案中，结构1的化合物治疗或预防先前治疗失败、尤其是在接受至少一种前列腺素类、内皮素拮抗剂或PDE V抑制剂之后失败的患者的PAH。在其他实施方案中，所述化合物治疗或预防受到更严重影响的患者，特别是具有II类至IV类功能状态或更严重的III类或IV类功能状态的患者的PAH。在进一步的实施方案中，所述化合物治疗或预防具有BMPR2突变的患者的PAH。

本发明提供了预防或治疗罹患以下疾病的受试者的方法：特发性或原发性肺高压，家族性高血压，继发于但不限于以下病症的肺高压：结缔组织病、先天性心脏缺陷(旁路)、肺纤维化、门静脉高压、HIV感染、镰状细胞病、药物和毒素(例如anorexigens、可卡因)、长期低氧、慢性阻塞性肺病、睡眠呼吸暂停和血吸虫病，与显著的静脉或毛细血管累及相关的肺高压(肺静脉闭塞性疾病、肺毛细血管血管瘤病)、与左心室功能障碍的程度不成比例的继发性肺高压，和/或新生儿、尤其是先前经历之前PAH治疗失败的受试者的持续性肺高压。

在一个方面，本发明提供了结构1的化合物，该化合物的互变异构体，该化合物的对映体、同分异构体或立体异构体，该化合物、该化合物的互变异构体、对映体、同分异构体或立体异构体的药学上可接受的盐，或其任何混合物，其用于治疗一种或多种与过度增殖、瘤形成、发育不全、过度增生、发育不良、化生、异常分化、粘连形成、血管发生、炎症、肺功能和心血管功能相关的疾病，其中结构1的化合物在本文中描述。

过度增生性疾病、免疫和炎性疾病、代谢疾病和血管疾病是本领域已知的，并且如通过引用整体并入本文的美国临时专利号61/751,217中描述的，此类疾病是本文所述的化合物和药剂的治疗靶标。

本发明的另一个方面涉及通过向受试者施用治疗有效量的结构1的化合物、该化合物的互变异构体、该化合物的药学上可接受的盐、该互变异构体的药学上可接受的盐或其混合物，来预防或降低受试者的升高的肺动脉压的方法，其中结构1的化合物在本文中描述。参见，例如，发明内容。在一些实施方案中，结构1的化合物治疗或预防与PAH相关的生物状况，例如，异常的：右心室收缩压(RVSP)；肺动脉压；心输出量；右心室(RV)肥大；和PA肥大。

在一些实施方案中，与施用前的受试者相比，结构1的化合物降低了受试者与右心室(RV)功能、肺动脉(PA)收缩压和/或心输出量中的一个或多个的增加有关的肺动脉压。在一些实施方案中，肺动脉压的降低与受试者的RV肥大、PA肥大、RVSP、持续PA压和中风风险中的一个或多个相比于施用前受试者的降低有关。在一些实施方案中，该降低至少为5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的降低。在一些实施方案中，该降低至少为40％的降低。

在一些实施方案中，肺动脉压的降低与受试者相比于施用前受试者的肺功能减弱和/或全身血压增加无关。测量肺功能和血压的方法是本领域已知的。在一个方面，本发明提供了治疗受试者的肺动脉高压(PAH)的方法，该方法包括：通过向所述受试者施用结构1的化合物，该化合物的互变异构体、对映体、同分异构体或立体异构体，该化合物、该化合物的互变异构体、对映体、同分异构体或立体异构体的药学上可接受的盐，或其任何混合物，来调节血小板衍生生长因子受体-α或血小板衍生生长因子受体-β或两者的一个或多个下游靶标的磷酸化状态(“PS”)，其中该下游靶标为由于PDGFR-α和/或PDGFR-β激活而磷酸化的任何底物，其中该下游靶标选自AKT、PDGFR、STAT3、ERK1和ERK2，或PDGFR-α和/或PDGFR-β的任何其他下游靶标，并且其中结构1的化合物在本文中描述。可使用本领域已知的技术例如Z-lyte激酶试验、Invitrogen Select

和本领域已知的其他激酶试验来确定蛋白质、激酶/受体的磷酸化状态谱。

在合适的实施方案中，激酶受体活性的调节是对激酶受体活性的抑制。PDGFR，即PDGFR-α、PDGFR-β、PDGFR-αα、PDGFR-ββ和PDGFR-αβ，和/或c-Kit，是在本发明的一些实施方案中被抑制的RTK的实例。在一些实施方案中，所述抑制至少为0.001％、0.01％、0.1％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％抑制。在一些实施方案中，PSR调节为对AKT、STAT3、ERK1、ERK2、PDGF和PDGFR即，PDGFR-αα、PDGFR-ββ和PDGFR-αβ中的一个或多个的调节。在一些实施方案中，PS的调节为相比于施用前受试者中的PS，受试者的磷酸化STAT3/总STAT3的减少。在一些实施方案中，所述减少至少为0.001％、0.01％、0.1％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％减少。在一些实施方案中，PS的调节为相比于施用前受试者的PS，受试者的二磷酸化ERK1/总ERK1的减少。在一些实施方案中，所述减少至少为0.001％、0.01％、0.1％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％减少。在其他实施方案中，PS的调节为相比于施用前受试者的PS，受试者的二磷酸化ERK2/总ERK2的减少。在一些实施方案中，所述减少至少为0.001％、0.01％、0.1％、1％、10％、50％、60％、70％、80％、85％、90％或95％减少。

在一些实施方案中，PS的调节为相比于施用前受试者的PS，受试者的单磷酸化ERK1/总ERK1的减少。在一些实施方案中，所述减少至少为0.001％、0.01％、0.1％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％减少。在一些实施方案中，PS的调节为相比于施用前受试者的PS，受试者的磷酸化PDGFR/总PDGFR的减少。在一些实施方案中，所述减少至少为0.001％、0.01％、0.1％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％减少。在一些实施方案中，PS的调节为相比于施用前受试者的PS，受试者的磷酸化AKT/总AKT的减少。在一些实施方案中，所述减少至少为0.001％、0.01％、0.1％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％减少。

实施例

通过以下实施例进一步说明本发明，这些实施例不应被解释为以任何方式进行限制。以下是对整个实施例中使用的材料和方法的描述，其说明RTK信号途径在人类疾病状况例如PAH和该疾病的动物模型中被激活。

材料。PK10453，(S)-N-(3-(1-((6-(4-羟基-3-甲氧基苯基)吡嗪-2-基)氨基)乙基)苯基)-5-甲基烟酰胺，即结构2，由Organix,Inc.(Woburn,MA)合成。人PA平滑肌细胞和细胞培养基从Cell Applications,Inc.获得。PDGFBB、对甲苯磺酸、氢氧化铵和IR780从Sigma Aldrich(St.Louis,Missouri)获得。甲磺酸伊马替尼从LC Laboratories(Woburn,MA)获得。人胚肺成纤维细胞(HLF)从Cell Applications,Inc.,San Diego获得。DMEM培养基从Mediatech(Manassas,VA.)获得。PDGFAA、PDGFBB和Glutamax从Life Technologies(Grand Island,NY)获得。对甲苯磺酸、氢氧化铵、IR780和野百合碱(C2401 Lot 031M1921V和LotSLBB7802V)从Sigma Aldrich(St.Louis,Missouri)获得。抗-磷酸-AKT(Ser 473)、抗-磷酸-AKT(Thr308)、泛-AKT(CST2920小鼠mAB和CST2965兔mAb)、抗-磷酸-ERK1/2、抗磷酸-STAT3和总STAT3抗体从Cell Signaling Technologies(Waltham,MA)获得。抗-总ERK1/2抗体从Protein Simple(CA)获得。抗von-Willebrand因子、肌动蛋白、磷酸-PDGFRα(Y754)和PDGFBB抗体从AbCam(Cambridge,MA)获得。针对PDGFAA(sc-128)、PDGFR-α(sc-338)、PDGFR-β(sc-432)和p-PDGFR-β(Tyr 1021)(sc-12909)的抗体从Santa CruzBiotechnology(CA)获得。680LT山羊抗小鼠IgG、IRDye 800W山羊抗兔IgG和Odyssey封闭缓冲液从Licor(Lincoln,NE)获得。

体外激酶试验。进行Z-lyte激酶试验以确定PK10453(结构2)对PDGFRα和PDGFRβ介导的磷酸化的抑制。模建十点滴定曲线来计算IC₅₀(Invitrogen Select

)。

PASMC增殖试验。人肺动脉平滑肌细胞(PASMC)从Cell Applications(San Diego,CA.)获得，并在96孔形式中生长至50％汇合。在用PDGFBB 50ng/ml和不同浓度的PK10453(结构2)刺激之前24小时，将细胞转换到无血清培养基中。处理24小时之后，进行CyquantNF细胞增殖试验

并用Cytofluor读板仪测量荧光信号。数据基于每个浓度的8个重复测量的平均值。

In cell Western(ICW)。为了比较PK10453(结构2)和伊马替尼对于PDGFBB和PDGFAA刺激的AKT磷酸化的抑制谱，根据Chen等人,“A cell-based immunocytochemicalassay for monitoring kinase signaling pathways and drug efficacy.”Analyticalbiochemistry；Vol.338:136-42(2005)的方法并加以修改，进行了ICW。将HLF维持在传代培养物中，该传代培养物在含有5％FBS和4mM Glutamax的DMEM中在37℃、5％CO₂下传代不超过6次。接种HLF，并使其在96孔板中生长至70-80％汇合，然后进行血清饥饿48小时。将细胞用指示浓度的药物(PK10453或伊马替尼)处理30min，然后暴露于10ng/ml PDGF AA或BB7.5min。将细胞在3.7％甲醛中固定，用0.1％Triton X-100洗涤，并用Odyssey封闭缓冲液处理90min。将蛋白质温育过夜，稀释的兔mAb与磷酸化AKT(Ser 473或Thr 308)之比为1:100，小鼠mAb与总Akt-泛-4040D之比为1:100。使用IRDye 680LT山羊抗小鼠IgG和IRDye800W山羊抗兔IgG缀合的抗体检测抗体。洗涤之后，使用Odyssey红外成像系统(LI-COR)对信号进行定量。将磷蛋白信号(800nm)相对于从每个孔获得的总蛋白质信号(700nm)进行归一化，平均并记录在同一板上进行的实验重复的结果。

动物。本研究使用雄性Sprague Dawley大鼠(体重320-330克；Taconic Inc.)。将动物置于12h光/暗周期的标准大鼠笼中，并且随意提供标准大鼠食物和水。根据NIH指南照料和使用动物。所有的动物方案均经Bassett Medical Center和Pulmokine IACUC批准。

制剂和气雾剂递送。将PK10453(结构2)以20mg/ml浓度溶解在1M对甲苯磺酸中。采用PARI喷雾器在12.5psi气压下进行雾化。气雾剂小滴被进入气雾剂气流的氨蒸气中和。随后颗粒在到达暴露室之前通过流过二氧化硅珠子柱体的孔环进行干燥。6端口暴露室为由Powerscope Inc.(Minneapolis,MN)定制设计并构建的仅鼻用暴露系统。每个端口的真空流速由流量计单独控制。在干燥柱的出口端口处采用Anderson(Mark II)级联冲击器测量气雾剂颗粒大小。质量中值空气动力学直径(MMAD)为2μm，并且相关的几何标准差(GSD)为1.6。将甲磺酸伊马替尼以20mg/ml溶解在水中，并通过PARI喷雾器递送，然后在吸入之前通过穿过二氧化硅珠子柱体的孔环进行干燥。

吸入剂量的估算。将经由Powerscope暴露室暴露于PK10453(结构2)4或8min(每组n＝6)的过滤器置于琥珀色玻璃小瓶中。将十二毫升的1:3(v/v)甲醇:乙腈添加至含有过滤器的每个小瓶中，在周期性混合下持续大约1hr，然后超声处理60秒。随后通过将10μL的未知过滤器提取物添加至990μL的1:3(v/v)甲醇:乙腈中将等份稀释100倍。将样品涡旋混合30秒，随后将100μL稀释的等份与100μL 172ng/mL的非化学相关的内标(PK18855)在1:1甲醇:水中合并，涡旋混合，并转移至自动进样器小瓶中以进行LC-MS/MS分析。将过滤器提取物与在100％甲醇(

Inc.)中制作的校准曲线进行比较。基于在4和8min暴露时间在过滤器上的PK10453(结构2)的平均总μg和通过每个过滤器的流速(0.8L/min)计算PK10453(结构2)的气雾剂浓度(μg/升空气)。采用PK10453的平均浓度/cm²滤纸(4和8min暴露的平均值)、通过体积描记术测得的平均每分钟通气量(0.15L/min)和估算的沉积分数0.1计算吸入剂量。伊马替尼8min剂量是基于重量分析。

成像。通过荧光成像评估吸入的PK10453(结构2)在肺中的空间分布。将近红外荧光示踪剂IR-780添加至喷雾器中的药物溶液中，以确保干燥的气雾剂颗粒含有药物和红外示踪剂两者。暴露两分钟之后，将动物置于全身麻醉下，经由气管造口术进行插管，并切出肺。经由肺动脉输注OCT/PBS，向肺吹入空气，并使肺在液氮的气相中冻结。将肺的一系列大约2mm的切片在Licor Odyssey成像仪上成像。

药代动力学研究。将PK10453(结构2)通过静脉内或吸入施用于动物，随后在时间0、10、20和60min对动物施以安乐死(每个时间点n＝3)。通过心脏穿刺采集血液样品，并切出肺。将肺匀浆化，并用乙腈:甲醇的1:3混合物萃取PK10453(结构2)。类似地，用乙腈:甲醇的1:3混合物萃取血浆。通过LC MS/MS(PharmOptima Inc.,Portage MI)测定药物。利用Excel用一阶指数曲线拟合数据。用积分梯形法确定AUC。

在大鼠MCT模型中的功效研究—在大鼠MCT模型中的PK10453(结构2)剂量响应研究。雄性Sprague Dawley大鼠接受MCT 60mg/kg IPMCT，并在3周后，通过吸入施用PK10453(结构2)或载体对照。研究了以下四组：载体对照(4min暴露)和每天三次暴露时间2min(D2)、4min(D4)或8min(D8)的PK10453(结构2)的三个处理组。这些方案施用两周。载体由如上所述用氨蒸气中和的雾化的1M对甲苯磺酸组成。对于每一剂量，测量通过将捕获的气雾剂颗粒溶解在水中而制备的溶液的pH，且其保持在5.5-6.0的范围内。在该研究结束时，测量RV收缩压，切开心室并称重。

在大鼠MCT模型中的功效研究—在大鼠MCT模型中的PK10453(结构2)对比伊马替尼。向雄性Sprague Dawley大鼠腹膜内给予MCT 60mg/kg。三周后，向指定组施用载体(1M对甲苯磺酸)、PK10453(在1M对甲苯磺酸中的20mg/ml游离碱形式的结构2)或甲磺酸伊马替尼(在喷雾器溶液中20mg/ml)，8min吸入暴露，每天三次持续两周。在该研究结束时，测量RVSP压；将肺和心脏在福尔马林中固定。为了测量RVSP，采用异氟烷使动物镇静，经由气管造口术插管，并用TOPOVENT压力调节的通气机(峰值吸气压18cm H₂O，PEEP 5cm)通气。胸骨切开术之后，经由RV顶端插入Scisense高保真度导管。

在大鼠MCT+PN模型中的功效研究。在大鼠中进行肺切除术和TRM53P遥测监视器向肺动脉中的植入(Telemetry Research,New Zealand and ADInstruments,Colorado)。MCT之后两周，每日三次施用PK10453(结构2)，持续1周。在MCT之后2周而非3周开始给药，因为在这一更具侵袭性的模型中，动物比在仅用MCT处理的动物更快发生PAH且更快发生疼痛(数据未示出)。这两组经历载体对照或PK10453(结构2)的4min暴露。每天早晨给药之前5min，在室内空气中对能走动的动物进行PA压的采样(基于动物设施的海拔估算的大气压力716mm Hg)。在方案4(伊马替尼对比载体)中，动物接受DSI PAC40发射机，然后腹膜内接受野百合碱50mg/kg(Lot SLBB7802V)。本研究使用较低剂量的MCT，因为尝试使用60mg/kg的这一批MCT时导致高比例的动物由于体重减轻和呼吸急促而需要早期进行安乐死。MCT腹膜内注射之后两周，施用载体(甲磺酸盐3mg/ml)或甲磺酸伊马替尼20mg/ml(在喷雾器溶液中)，8min暴露，每天三次持续9天。对于该方案，在每天早晨给药之前获取遥测数据，每日10min。

PV环的测量。在一个单独的动物组群中，如上所述建立MCT+PN模型，随后向药物处理组每天三次施用PK10453(结构2)4或8min。载体对照组每天三次进行4min暴露。处理14天后用进入系统(Scisense,Inc.)获得压力容积(PV)环，而采用异氟烷和100％FiO₂使大鼠处于全身麻醉。另外，或者在替代方案中，处理14天之后在每组中获得RV压。在每组的亚组中，在处理14天之后采用进入系统(高保真度导管FTE1918B,Scisense,Inc.)获得压力容积(PV)环。在诱导全身麻醉并经由气管造口术插管之后，将大鼠置于压力控制的通风机(TOPOVENT)上。全身麻醉剂由异氟烷和100％FiO₂组成，其中峰值吸气压设置在18cm，且PEEP为5cm H₂O。在RV中经由RV流出道采用进入导管进行左侧开胸术。

全身血压研究。在能走动的用MCT处理的大鼠中，用植入降主动脉中的DSI PAC40发射机研究PK10453(结构2)对全身血压的影响。在腹膜内施用MCT 60mg/kg之后三周，使动物吸入PK10453(结构2)或载体，每天3次，4min暴露，持续7天。在每天早晨给药之前记录血压。

体积描记术。采用EMKA双室体积描记器和IOX软件进行体积描记术。测得的参数包括呼吸频率、潮气量、每分钟通气量、峰值吸气和呼气流量以及气道阻力(SRaw)。在第一次数据采集之前使动物适应体积描记器三天。在药物的首次给药之前和研究结束时进行测量。

组织学和形态测定分析。在研究结束时，在全身麻醉下从通气的动物中取出心脏和肺。在压力之下通过主肺动脉输注肝素化的盐水。将右上叶立即结扎并置于液氮中，以进行蛋白质印迹和NanoPro 100测定分析。取出心脏，并将RV游离壁、室间隔和LV游离壁切开并称重。在压力之下通过肺动脉和气管两者输注缓冲的福尔马林(10％)。对以8μm切片的H&E染色的、福尔马林固定的组织进行形态测定分析。由对处理组不知情的技术人员采用Image J软件测量肺小动脉的中膜面积和管腔面积。每个切片对20个肺小动脉进行测量。测定管腔面积与总中膜面积之比。该比值将肺小动脉总面积的变化归一化。此外，根据Homma等人,“Involvement of RhoA/Rho kinase signaling in protection againstmonocrotaline-induced pulmonary hypertension in pneumonectomized rats bydehydroepiandrosterone.”Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol.Vol.295:L71-8(2008)的方法，在野百合碱加肺切除术研究(具体地，功效研究5)中进行闭塞分析。简而言之，毛细血管前小动脉没有新生内膜病变的迹象的被指定为0级，小于50％管腔闭塞的被指定为1级，以及大于50％闭塞的被指定为2级。对来自MCT+PN模型的肺切片进行Masson三色染色。

NanoPro免疫测定。用

免疫测定系统(Protein Simple/CellBiosciences,CA)测量磷酸化的ERK1/2和STAT同种型的相对差异。参见Fan等人,“Nanofluidic proteomic assay for serial analysis of oncoprotein activation inclinical specimens.”Nat Med 15:566-571(2009)。

免疫组织化学。用柠檬酸盐缓冲液(pH 6.0)或Tris-EDTA缓冲液(pH 9.0)进行抗原检索(retrieval)。针对以下靶标进行免疫组织化学：CD20(一种B细胞标志物)、CD3(一种T细胞标志物)、von Willebrand因子(vWF)、总STAT3、磷酸STAT3(Tyr705)、总PDGFR-α、总PDGFR-β和磷酸PDGFR-β。可获得PDGFR-α和磷-PDGFR-β的竞争肽。采用EXPOSE HRP/DAB试剂盒

进行信号检测。

统计分析。除非另有说明，数据以平均值±SEM呈现。使用了用于多组比较的具有Bonferroni校正的普通线性模型(SPSS 14.0)。显著性设置在p＝0.05水平。

实施例1–PK10453(结构2)的表征

体外激酶试验表明，在ATP K_m下PK10453针对PDGFR-α的IC₅₀为35nM，而针对PDGFR-β为10.1nM。在ATP K_m下伊马替尼针对PDGFR-α的IC₅₀为71nM，而针对PDGFR-β为607nM。参见图1。PK10453针对PDGFBB刺激的AKT在Ser473处的磷酸化的IC₅₀为0.13μM(p<0.01)，与之相比伊马替尼为1.8μM，如图2示出的ICW中所示。PK10453针对PDGFBB刺激的AKT在Thr308处的磷酸化的IC₅₀为0.43μM，与之相比伊马替尼为3.25μM(p<0.001)。PK10453和伊马替尼针对PDGFAA刺激的AKT磷酸化的IC₅₀浓度没有显著性差异。

估算的吸入剂量-PK10453(结构2)和伊马替尼。PK10453的平均浓度对于4min暴露为62.4±3.3μg/cm²滤纸，而对于8min暴露为137±7.0μg/cm²，其导致气雾剂浓度对于4min暴露为91.65μg/L空气而对于8min暴露为100.6μg/L空气。基于重量分析获得的伊马替尼的气雾剂浓度为167μg/L。假定沉积分数为0.1且大鼠体重为300g，PK10453的平均吸入剂量(8min)为大约20μg/kg，而伊马替尼为40μg/kg，如表1所示。由测得的PK10453(结构2)的浓度和在气雾剂中伊马替尼的重量分析、测得的每分钟通气量(MV)、估算的沉积分数0.1和大鼠体重300g计算估算的吸入剂量。

表1

吸入的PK10453(结构2)的肺分布和药代动力学。图3中示出了吸入具有IR780示踪剂的PK10453后肺切片的荧光图像，其中显示荧光强度在整个肺中分布良好。较暗线的网络起因于结缔组织，因此并不代表受疾病影响的气道。伊马替尼的空间分布是类似的(数据未示出)。

为进行药代动力学研究，将通过吸入施用时肺中的PK10453(结构2)浓度与采用静脉内施用所达到的浓度进行比较。如在Morén“Aerosols in medicine:principles,diagnosis,and therapy.”Amsterdam；New York:Elsevier.xx,429(1993)和Phalen等人,“Inhalation exposure methodology.”Environ Health Perspect 56:23-34(1984))中所描述的，通过比较呼吸和静脉内施用后作为时间的函数的药物浓度曲线图的AUC来估算吸入相对于静脉内施用的药代动力学优势R_d是可能的：

R_d＝[(AUC_肺/AUC_血浆)呼吸]/[(AUC_肺/AUC_血浆)IV]

将药代动力学数据模建为一阶指数曲线，并由该曲线计算AUC(参见表2)。图4示出了吸入或静脉内施用PK10453(结构2)后作为时间的函数的肺和血浆中的药物水平。该数据表明，吸入与静脉内施用的PK10453相比有45倍的优势(R_d＝44.6)。

表2

实施例2–MCT模型功效

图5A中示出了RVSP值。在载体组(n＝6)中，RVSP为80.4±2.6mm Hg。对于处理组，D2(n＝6)，51.4±6.5；D4(n＝6)，44.4±3.8；D8(n＝5)，37.1±4.5mm Hg(p<0.001)。正常对照组的RVSP为28.5±2.6mm Hg(n＝3)。与载体处理组相比，在D4组中RVSP降低44％，而在D8组中RVSP降低54％。由(RV+IVS)/LV重量之比测得的RV肥大的程度也显著降低。参见图5B。所述数据由这一比值表示，这是因为隔膜被RV和LV共用。然而，RV/(IVS+LV)之比的使用也显示了类似的结果。

此外，载体组有6只动物，但2只动物由于出血而没有获得准确的RV收缩末期压力。因此，在载体组中RV收缩压基于n＝4，且为57.9±7.6mm Hg。在PK10453(结构2)组(n＝12)中，RV收缩末期压力为36.3±2.6mm Hg，而在伊马替尼组(n＝6)中为31.8±1.8mm Hg(p＝0.001，载体相对于PK10453；p＝0.002，载体相对于伊马替尼，图5C)。相对于PK10453(99.5±10μl)和伊马替尼(81±4.3μl)，在载体组中的收缩末期容积较大(158±12.6μl)(p＝0.05，载体相对于PK10453；p＝0.014，载体相对于伊马替尼；p＝NS，PK10453相对于伊马替尼)。以下参数在组间没有显著性差异：舒张末期容积、射血分数、心输出量、搏出功。在MCT模型中，与载体相比，PK10453和伊马替尼均改善了管腔与中膜之比(载体(V，n＝4)：0.55±0.1；PK10453(D8，n＝12)：0.94±0.08；伊马替尼(I8，n＝5)：0.99±0.07；p<0.01，D8相对于V，p<0.05，I8相对于V，图5D)。

实施例3–在大鼠MCT+PN模型中的功效研究

遥测研究。描述了在大鼠MCT+PN模型中遥测研究的结果。在开始处理前第0天，载体组中的PA收缩压为41.0±11.7mm Hg，而PK10453(结构2)组中的PA收缩压为43.1±3.5mmHg(p＝NS)。处理五天之后，载体组中的PA收缩压为69.4±12.9mm Hg，而PK10453组中的PA收缩压显著降低为47.3±3.0mm Hg(p<0.01)。在处理第8天，载体组中的PA收缩压为83.5±8.5，而PK10453组中的PA收缩压显著降低为47.3±4.9mm Hg(p<0.001)。

在单独的PK10453(结构2)遥测研究中，在开始处理前第1天，载体组中的PA收缩压为47.4±10.2mm Hg，而PK10453组中的PA收缩压为43.1±3.5mm Hg(p＝NS)。处理五天后，载体组中的PA收缩压为67.4±11.4mm Hg，而PK10453组中的PA收缩压显著降低为47.2±3.0mm Hg(p＝0.03)。在处理第9天，载体组中的PA收缩压为92.8±9.1mm Hg，而PK10453组中的PA收缩压显著降低为50.5±7mm Hg(p＝0.03)。对于伊马替尼遥测研究(研究4)，在第1天，载体组中的PA收缩压为51.4±8.9mm Hg，而伊马替尼组中的PA收缩压为41.5±3.5mmHg。在处理第9天，载体组中的PA收缩压为80.4±14.2mm Hg，而伊马替尼组中的PA收缩压为75.1±7mm Hg(p＝NS)。参见图6。

在MCT+PN模型中RV压和PV环的测量；PK10453(结构2)剂量响应研究。在一个单独的动物组群中，如所述建立MCT+PN模型。在载体暴露以及采用每天三次4min(D4)和8min暴露(D8)的PK10453处理14天之后获得RV压。在载体组(n＝9)中，RV收缩压为75.7±7.1mmHg，在D4组(n＝10)中，RV收缩压为40.4±2.7mm Hg，而在D8MCT+PN组中，RV收缩压为43±3.0mm Hg(p<0.001，V相对于D4以及V相对于D8；图7A)。在每组的动物亚组(载体n＝3；D4n＝5，D8n＝4)中获得PV环。

实施例4–MCT+PNMCT+PN模型功效

PV环研究。与载体对照相比，D4和D8处理组中的RV收缩末期压力(ESP)均较低且RV射血分数(EF)较高。与载体组相比，D8组中的心输出量增加。参见表3。研究动物接受左侧肺切除术，接着7天后腹膜内施用MCT 60mg/kg。MCT施用后两周，每天三次通过吸入给予PK10453(结构2)或载体，持续两周。在这一时期结束时获得PV环。关于表3：V＝载体；D4＝4min吸入PK10453；D8＝8min吸入PK10453；每组n＝4；*p<0.001；**p≤0.01；§p<0.05，相对于V。

表3

PK10453(结构2)对RV肥大的影响。在大鼠MCT+PNMCT+PN模型中用PK10453处理导致RV肥大显著减轻。参见图7B。在载体组(n＝11)中的(RV+IVS)/LV比为0.88±0.05，在PK10453 D4组(n＝13)中的(RV+IVS)/LV比为0.62±0.04，而在PK10453 D8组(n＝7)中的(RV+IVS)/LV比为0.68±0.05(p<0.001，D4相对于V；p＝0.012，D8相对于V)。

肺小动脉组织学和形态学的分析。与D4或载体组相比，PK10453(结构2)处理的D8组中管腔面积与中膜面积之比(L/M)显著较高：D8(n＝5)L/M 0.72±0.05，D4(n＝6)L/M0.33±0.06，而载体对照V(n＝6):0.26±0.04(p<0.0001，D8相对于V，或D8相对于D4)。参见图7C。对用于管腔/中膜比测量的相同动物样品进行闭塞分析。该闭塞分析显示了在PK10453 D8处理组中2级闭塞病变的显著减轻(V(n＝6)41.5±7.1％，D4(n＝6)28.5±4.2％；D8 11.4±4.1％；p<0.01，D8相对于V；参见图7D)。图8A显示了在载体处理的动物(MCT+PN模型)中闭塞(2级)病变的H&E染色；与来自PK10453(D8)处理的动物的0级血管进行比较。参见图8B。图8C中示出了与图8D中来自PK10453(D8)处理的动物(MCT+PN模型)的0级病变相比，针对磷酸-PDGFRβ染色的2级病变的实例。针对磷酸PDGFRβ的染色显示了2级病变中鹅卵石图案的强烈信号。

如所述示出了肺小动脉肥大和管腔内细胞增殖性病变的进一步实例，而定量分析示于图9中。与载体相比，PK10453处理组中的管腔面积与中膜面积之比(L/M)显著较高，其中较高的剂量，D8(n＝4)L/M 1.17±0.07，较低的剂量，D4L/M 0.75±0.14，以及载体对照V(n＝6)：0.36±0.09(p＝0.032，D4相对于V；p＝0.00014，D8相对于V；p＝0.028，D8相对于D4)。内皮细胞标志物vWF显示信号主要在肺小动脉内。酪氨酸705磷酸STAT3抗体显示pSTAT3定位于内皮细胞和血管周细胞的细胞核。参见图10A；和图10B(采用PK10453处理)。

针对α-SMC肌动蛋白和vWf的三色和免疫组织化学。内皮细胞标志物vWF显示信号主要在肺小动脉内。并且进行针对大鼠MCT+PN中肺小动脉的血管SMC(αSMC肌动蛋白)、内皮细胞标志物(vWF)和三色染色的免疫组织化学，以进一步表征0、1和2级病变。0级病变的特征在于内皮细胞(EC)的早期新生内膜(管腔内)增殖，且在中膜中保留血管SMC；1-2级病变的特征在于混合的成肌纤维细胞样细胞(MF)和EC的新生内膜(管腔内)增殖/侵袭，伴随中间层中血管平滑肌细胞的部分损失；而晚期2级病变的特征在于大量的MF/EC管腔内增殖，伴随中间层中VSM细胞的完全损失和中膜的纤维化置换。参见图11A-I。

实施例5–针对PDGF信号传导的免疫组织化学

在毛细血管前肺小动脉中，通过PDGFR-β途径的信号传导占主导地位。存在PDGFAA配体和PDGFR-α的信号，但在量上低于PDGFBB和PDGFR-β的信号。在新生内膜细胞中和血管周细胞中，磷酸化的PDGFR-β(pPDGFR-β)具有鹅卵石外形，并且比毛细血管前肺小动脉中磷酸-PDGFR-α(PDGFR-α)的信号更强。在毛细血管前肺小动脉的中间层中检测到最小的pPDGFR-β或α的信号。参见图12A-F。在较大(>50μm)的血管中，在中间的VSM细胞中存在pPDGFR-α的信号。相比之下，pPDGFRβ中间层信号较低。参见图13A-D。

实施例6–

免疫测定和蛋白质印迹分析

图14中示出了pAKT/AKT的

免疫测定，且图15中示出了pSTAT3/STAT3。与载体相比，D4和D8组中的pSTAT3/STAT3比均显著降低。图16示出了吸入的PK10453(结构2)对肺匀浆中的ppERK1/ERK1、pERK1/ERK1、ppERK2/ERK2和pERK2/ERK2的影响。与载体相比，D4和D8组中的ppERK1/ERK1和pERK1/ERK1分别显著降低。

实施例7–PDGFAA刺激PDGFR-α，而PDGFBB结合并激活PDGFR-β。

图17示出了在人胚肺成纤维细胞中，伊马替尼、PK10453(结构2)和PK10571(结构2a)对PDGFAA与PDGFBB刺激的ERK1和ERK2磷酸化的影响。二磷酸化的ERK1与总ERK1之比(ppERK1/ERK1)随着PDGFAA或PDGFBB刺激而增加，并在1μM和10μM浓度的伊马替尼、PK10453和PK10571存在下显著减小。二磷酸化的ERK2与总ERK2之比(ppERK2/ERK2)随着PDGFAA或PDGFBB刺激(10ng/ml)而增加，并在1uM和10uM浓度的伊马替尼、PK10453和PK10571存在下显著减小。在PDGF BB刺激之后，与伊马替尼相比，二磷酸化的ERK1与总ERK1之比(ppERK1/ERK1)和二磷酸化的ERK2与总ERK2之比(ppERK2/ERK2)在1uM PK10453和PK10571存在下更有效地减小。因此，与伊马替尼相比，PK10453和PK10571是PDGF BB刺激的ERK1和ERK2磷酸化的更强的抑制剂。

特别地，并参见如上所述的图17A-D，与仅有无血清培养基的对照(SF)相比，人胚肺成纤维细胞的PDGFAA和PDGF BB(10ng/ml)刺激增大了ppERK1/ERK1和ppERK2/ERK。在减少PDGF AA刺激的ppERK1和ppERK2形成方面，伊马替尼、PK10453(结构2)和PK10571(结构2a)在1uM下同样有效(图17A和C)。然而，在减少PDGF BB刺激的ppERK1和ppERK2方面，PK10453和PK10571在1uM和10uM下更有效(图17B和D)。这些数据表明，在阻断通过PDGF受体β的信号转导方面，PK10453和PK10571比伊马替尼更有效。数据以平均值±SEM显示。PK10453和PK10571的不同效果在阻断ERK1与ERK2磷酸化方面更加突出。1uM的伊马替尼对抑制ppERK1形成没有影响，而1uM的PK10453和PK10571在减少PDGFBB刺激的ppERK1形成方面是有效的。PK10453＝结构2；PK10571＝结构2a。血小板衍生生长因子受体α＝PDGFR-alpha＝PDGFR-α＝PDGF受体α＝PDGFα受体。血小板衍生生长因子受体β＝PDGFR-beta＝PDGFR-β＝PDGF受体β＝PDGFβ受体。

实施例8–在成纤维细胞中，PK10453(结构2)、PK10467(结构3)、PK10468(结构4)、 PK10569(结构5)和PK10571(结构2a)与伊马替尼相比对于抑制PDGFBB刺激的AKT磷酸化具有较低的IC₅₀浓度

使用在细胞培养物中生长的人胚肺成纤维细胞作为在肺动脉高压、肺纤维化和相关病症中出现的成纤维细胞增殖模型。参见图18A-D。这些数据强调，与伊马替尼相比，PK10453、PK10467、PK10468、PK10569和PK10571是通过PDGFβ受体介导的信号转导的更强的抑制剂。这些数据表明了除了对PDGFα受体信号传导之外，对PDGFβ受体信号传导的有效抑制的重要性，这种抑制作为可用PK10453、PK10467、PK10468、PK10569和PK10571实现的对肺动脉高压、肺纤维化和相关病症的处理。如在上文和贯穿本申请所用的，PK化合物和结构名称可互换使用，如下：PK10453＝结构2；PK10571＝结构2a；PK10467＝结构3；PK10468＝结构4；PK10569＝结构5。参见图18A-D。

实施例9–体重、全身血压和体积描记术研究

与载体组相比，在处理组中存在体重下降速度较慢的趋势。参见图19。在处理的第七天，与MCT PK10453组(n＝3)中的131±10mmHg相比，MCT载体组(n＝3)中的心脏收缩压为111±21mmHg，如图20所示。在大鼠MCT+PNMCT+PN模型中，在施用PK10453/载体的第1天和第15天测量两室体积描记术。结果示于表4中。PK10453处理与相比于载体在4min暴露组(D4)中的吸气流量峰值(PIF)和呼气流量峰值(PEF)的显著改善以及每分钟通气量(MV)的较慢下降相关。

表4

缩写：PIF：吸气流量峰值；PEF：呼气流量峰值；TV：潮气量；MV：每分钟通气量；f：呼吸频率(每分钟呼吸次数)；SRaw：气道阻力*p<0.01，D4相对于V；§p＝0.02，D4相对于V。

实施例10–讨论和应用实施方案

已发现在人肺动脉高压(PAH)和该疾病的动物模型中PDGF信号途径被激活。该研究检验了这样一种假设：在PAH的大鼠野百合碱(MCT)模型和大鼠MCT加肺切除术(+PN)模型中，新型非选择性吸入的PDGF受体抑制剂PK10453(结构2)将降低肺高压。在大鼠MCT和大鼠MCT+PN模型中，对于每天三次持续两周的四(D4)和八(D8)分钟暴露，通过吸入递送的PK10453降低了右心室收缩压(RVSP)：载体MCT组(n＝6)RVSP为80.4±2.6mm Hg；在D4MCT组(n＝6)中，44.4±5.8mm Hg；在D8MCT组(n＝5)中，37.1±4.5mm Hg(p<0.001，相对于载体)；在载体MCT+PN组(n＝9)中RVSP为75.7±7.1mm Hg；在D4MCT+PN组(n＝10)中，40.4±2.7mmHg，在D8MCT+PN组(n＝8)中，43.0±3.0mm Hg(p<0.001)。在大鼠MCT+PN模型中，对肺动脉压的持续遥测监测还显示PK10453阻止了PAH的进展。通过吸入给予的伊马替尼在MCT模型中同样有效，但在MCT+PN模型中是无效的。

免疫组织化学显示，在MCT+PN模型中所见的新生内膜和血管周病变中，与PDGFα受体相比，PDGFβ受体的激活增加。显示伊马替尼对于PDGFα受体是选择性的，而与伊马替尼相比，PK10453对于抑制PDGFα和PDGFβ受体的激酶活性具有较低的IC₅₀。PK10453降低了来自MCT+PN动物的肺提取物中磷酸化的AKT(Ser473)与总AKT之比、磷酸化的STAT3(Y705)与总STAT3之比、二磷酸化的ERK1与总ERK1之比和单磷酸化的ERK1与总ERK1之比。简言之，当通过吸入递送时，PK10453显著减缓了大鼠MCT和MCT+PN模型中PAH的进展。因此，至少在PAH和相关疾病方面，PDGFα和PDGFβ受体的非选择性抑制相对于PDGFRα的选择性抑制具有治疗优势。

因此，并且首次，证明了当通过吸入施用时，新型非选择性PDGF受体抑制剂PK10453(结构2)在疾病的两种动物模型中降低了PAH的严重性：大鼠MCT和大鼠MCT+PN模型。如此，由于PK10453针对PDGFRα和PDGFRβ受体两者均高度有效，而伊马替尼对PDGFRα受体是选择性的，因此PK10453具有惊人的卓越功效。PK10453和伊马替尼在大鼠MCT模型中均是有效的，但在大鼠MCT+PN模型中，当通过吸入施用时，仅有PK10453降低了肺高压。这一差异作用的一个原因可能是由于在大鼠MCT+PN模型中，与PDGFRα受体相比，毛细血管前肺小动脉新生内膜病变中通过PDGFRβ受体的信号传导的过度激活。

因此，本发明数据表明，在大鼠MCT和大鼠MCT+PN模型中，当通过吸入递送时，新型非选择性PDGF受体抑制剂PK10453(结构2)阻止了PAH的进展。值得注意的是，这是报道在大鼠MCT+PN模型中PDGF受体抑制的功效的首次研究。在用PK10453处理的能走动的PAH(MCT+PN)动物中还发现了PA压的持续降低。伴随着这些模型中PA和RV收缩压的显著降低，还证明了RV肥大的减少和肺小动脉的管腔与中膜之比的改善。压力容积环显示，与对照动物相比，用PK10453处理的动物中有RV射血分数的改善、较高的心输出量和趋于较低的搏出功的趋势。在PK10453处理的动物的肺提取物中，pAKT(Ser473)/AKT、pSTAT3/STAT3、ppERK1/ERK1和pERK1/ERK1比显著降低。

由于PAH是基本上定位于肺的疾病，因此检验了以下假设：药物经由吸入直接施用至靶部位将提供药物的较高局部浓度(较大功效)和较低全身浓度(较低副作用)的优势。药代动力学研究证明了吸入递送与静脉内施用PK10453(结构2)相比45倍的优势。虽然在大鼠MCT模型中PK10453使RV收缩压降低了50％，但它对全身血压没有不良影响。此外，在2周过程中，吸入的PK10453没有不利地影响肺功能。

在大鼠MCT模型中，本发明人比较了吸入的PK10453与吸入的伊马替尼，并发现两者同样有效。这些结果与之前的报道(即，在大鼠MCT模型中，当全身递送时，PDGF受体抑制剂伊马替尼降低肺高压)一致。参见Schermuly等人,“Reversal of experimentalpulmonary hypertension by PDGF inhibition.”J Clin Invest；115:2811-21(2005)。然而，在大鼠MCT+PN模型中，虽然吸入的PK10453有效地降低了肺动脉压，但吸入的伊马替尼则不能。大鼠MCT+PN模型比仅MCT模型更具侵袭性的PAH模型，并且可以更准确地反映人类疾病的病理学。White等人,“Plexiform-like lesions and increased tissue factorexpression in a rat model of severe pulmonary arterial hypertension.”Am JPhysiol Lung Cell Mol Physiol；293:L583-90(2007)。针对抑制PDGF-α和-β受体的IC₅₀的体外测量显示，针对两个同种型，PK10453比伊马替尼更强，并且伊马替尼仅为PDGFRβ同种型的中度抑制剂。免疫组织化学证明，在大鼠MCT+PN模型中，新生内膜病变具有高水平的磷酸PDGFRβ，较少的pPDGFRα。这些发现解释了为什么对PDGFRβ和PDGFRα的非选择性抑制相比于对PDGFRα的选择性抑制提供了治疗优势。

对于高海拔诱发的肺高压的新生牛模型，本发明的数据与Panzhinskiy等人,“Hypoxia induces unique proliferative response in adventitial fibroblasts byactivating PDGFbeta receptor-JNK1 signaling.”Cardiovasc Res；95:356-65(2012)一致。在该模型中，显示了外膜成纤维细胞的广泛血管周增殖，并伴随pPDGFRβ的激活。这些病变类似于本研究在大鼠MCT+PN模型中观察到的图案。这些发现也与针对人类PAH报道的那些发现一致。Perros等人,“Platelet-derived growth factor expression and functionin idiopathic pulmonary arterial hypertension.”Am J Respir Crit Care Med；178:81-8(2008)，该文献描述了在PAH患者的肺动脉病变中PDGFA、PDGFB、PDGFRα、PDGFRβ和pPDGFRβ的分布。PDGFRα表达主要发现于过度增大的肺小动脉的肌肉中层内，而PDGFRβ和pPDGFRβ在丛状病变的内皮细胞中占主导地位。

以前在PAH的研究中并没有强调伊马替尼对于PDGFRα的选择性。据报道，伊马替尼对PDGFAA刺激的PDGFRα磷酸化的抑制为0.1μM；而对PDGFBB刺激的PDGFRβ磷酸化的抑制为0.38μM。参见，例如，Deininger等人,“The development of imatinib as a therapeuticagent for chronic myeloid leukemia.”Blood；105:2640-53(2005)。然而，在此确定，在[ATP]Km(app)下，伊马替尼对PDGFRα的选择性是-β受体的10倍(针对PDGFRα的IC₅₀为71nM，与之相比，针对PDGFRβ的IC₅₀为607nM)。大多数探索PDGFR途径的基于PAH相关细胞的研究采用了高剂量的伊马替尼(5-10μM)，因此排除了PDGFRα与β受体抑制之间的区别。

Wu等人,“Comprehensive dissection of PDGF-PDGFR signaling pathways inPDGFR genetically defined cells.”PLoS One；3:e3794(2008)检查了在遗传上定义的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中的PDGFR信号传导。MEF被工程化为仅表达PDGFRα、PDGFRβ、这两种受体，或两种受体都不表达。发现通过PDGFRα受体和PDGFRβ受体的信号传导具有共同的和不同的途径。三十三个基因集合明显地被PDGFRα激活，而15个被PDGFRβ激活。PDGFRα/β异二聚体激活了NFκB和IL-6信号传导的组分。钙通量途径被PDGFRα和PDGFRβ两者调节。参与血管发生的信号传导仅仅经由PDGFRβ途径调节。该发现与使用MCT+PN模型在毛细血管前肺小动脉的新生内膜病变中发现的磷酸PDGFRβ的选择性增加一致。

已发现在肺动脉平滑肌细胞和成纤维细胞中，而非肺动脉内皮细胞中，PDGFBB诱导AKT在Ser473处的磷酸化。参见Ogawa等人,“PDGF enhances store-operated Ca²⁺entryby upregulating STIM1/Orai1via activation of Akt/mTOR in human pulmonaryarterial smooth muscle cells.”Am J Physiol Cell Physiol；302:C405-11(2012)。增加的AKT(Ser473)磷酸化还发现于由慢性血栓栓塞性肺动脉高压患者的动脉内膜切除术获得的具有平滑肌表型的细胞中。参见Ogawa等人,“Inhibition of mTOR attenuatesstore-operated Ca²⁺entry in cells from endarterectomized tissues of patientswith chronic thromboembolic pulmonary hypertension.”Am J Physiol Lung CellMol Physiol；297:L666-76(2009)。在这些细胞中，PDGFBB刺激增加了经由AKT/mTOR途径的钙池操纵的钙进入。见上。

然而，在来自对照和野百合碱处理的大鼠的肺动脉平滑肌细胞中，伊马替尼(0.1μM)减少了胎牛血清刺激的Ser473AKT磷酸化，但对AKT在Thr30825处的磷酸化没有影响。在这一浓度下，伊马替尼可能经由PDGFα受体起作用。Wu等人(2008)发现，在无PDGFRβ和无PDGFRα的细胞系中，5μM的STI-571(伊马替尼)阻断PDGFBB刺激的AKT磷酸化(SER473)。本发明包括ICW来检查人胚肺成纤维细胞中PDGFAA和PDGFBB对AKT(Ser473)和AKT(Thr308)磷酸化的刺激。将伊马替尼引起的抑制与PDGFAA或PDGFBB刺激的AKT磷酸化的PK10453抑制进行比较，并发现PK10453更强。

此外，采用纳米流体蛋白质组学免疫测定来定量在MCT+PN动物的肺提取物中AKT、STAT3和ERK1/2的磷酸化种类。发现与载体相比，PK10453处理组中磷酸-AKT(Ser473)、磷酸-STAT3和ppERK1/ERK以及pERK1/ERK1显著降低。Schermuly等人(2008)证明，在PAH的大鼠MCT模型中伊马替尼使pERK1/2降低。Jasmin等人,“Short-term administration of acell-permeable caveolin-1 peptide prevents the development of monocrotaline-induced pulmonary hypertension and right ventricular hypertrophy.”Circulation；114:912-20(2006)已经表明了在大鼠MCT模型中STAT3的激活，并且Masri等人,“Hyperproliferative apoptosis-resistant endothelial cells in idiopathicpulmonary arterial hypertension.”Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol；293:L548-54(2007)发现STAT3在人特发性PAH中被激活。本发明的纳米流体蛋白质组学免疫测定以前用于检查伊马替尼在慢性髓性白血病(CML)中对pSTAT3和pERK1/2的影响。参见Fan等人,“Nanofluidic proteomic assay for serial analysis of oncoprotein activation inclinical specimens.”Nature medicine；15:566-71(2009)。该测定在区分蛋白质的单磷酸化同种型与二磷酸化同种型中有用。例如，对伊马替尼有反应的CML患者具有单磷酸化ERK214水平的显著降低。在此，ERK1同种型以及ERK1的二磷酸化形式和ERK1的单磷酸化形式在MCT肺切除的大鼠的肺中占主导地位。用PK10453处理显著降低了ppERK1/ERK和pERK1/ERK1。

根据Homma等人,“Involvement of RhoA/Rho kinase signaling in protectionagainst monocrotaline-induced pulmonary hypertension in pneumonectomized ratsby dehydroepiandrosterone.”Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol；295:L71-8(2008)的方法进行了闭塞分析。在大鼠MCT+PN模型中，较高剂量的吸入的PK10453与较少的2级闭塞病变相关。随后采用血管平滑肌细胞和内皮细胞的标志物通过免疫组织化学表征这些病变，并进行三色染色以将肌肉病变与纤维性病变区分开。已确定，新生内膜增生性1-2级病变包含成肌纤维细胞和内皮细胞。在晚期2级病变中存在血管中膜的纤维化置换。这些病变中的成肌纤维细胞的起源还不完全清楚。它们可能起源于血管周成纤维细胞或周细胞的浸润，起源于循环干细胞、常驻性祖细胞(resident progenitor cell)，或者作为内皮-间质转变的结果。参见Yeager等人,“Progenitor cells in pulmonary vascularremodeling.”Pulm Circ；1:3-16(2011)。虽然检测到这些病变，但是合理地提出，1型病变是可以进展到2型和3型的早期病变。在这一模型中，管腔内内皮细胞增殖，转变为成肌纤维细胞表型(和/或管腔被血管周细胞/成肌纤维细胞浸润)，并逐渐堵塞血管管腔。

Sakao等人,“Reversible or irreversible remodeling in pulmonaryarterial hypertension.”Am J Respir Cell Mol Biol；43:629-34(2010)已强调了将PAH中血管肌化的退化(逆向重塑)与潜在不可逆的内皮细胞增殖区分开的重要性。本文呈现的数据表明，在PAH中，通过PDGFRα途径的信号传导在较大的肺小动脉的血管重塑中发挥重要作用，而PDGFRβ途径在毛细血管前肺小动脉的增生性新生内膜病变中更加重要。用强烈阻断该同种型的PDGFR抑制剂(比伊马替尼更强)靶向PDGFRβ途径可能影响这些病变的进展。因此如果这样的病变在完全纤维化置换和血管退化之前得到处理，则这些病变可能存在可逆性。

总之，吸入的非选择性PDGF受体抑制剂PK10453(结构2)在PAH的MCT和MCT+PN大鼠模型中均有效。采用PK10453的处理与能走动的动物的肺动脉压的显著降低、右心室功能的改善以及RV肥大的减轻相关。组织学分析显示了在用PK10453处理的动物中肺小动脉管腔与中膜之比的改善以及AKT(Ser473)、STAT3和ERK1的磷酸化状态的减少。PK10453(结构2)对全身血压没有显著影响，并且PK10453对肺功能没有不良影响。与伊马替尼相反，PK10453对PDGFRα受体没有选择性，但对PDGFRα和β同种型均高度有效。由于在PAH的丛状病变中PDGFRβ途径比PDGFRα受体更加高度激活，因此非选择性PDGFR抑制剂例如PK10453针对PAH和相关疾病以及疾病途径具有功效。

实施例续

实施例A：具有作为赋形剂的亮氨酸的PK10571：PK10571在EtOH(以及最高1:1EtOH:H₂O混合物)中的溶解度为50mg/ml，但在中性pH下不溶于水。L-亮氨酸通常在水中具有最高25-30mg/ml的溶解度，而不溶于EtOH；L-亮氨酸在乙醇/水混合物中的一系列溶解度实验发现，在室温下对于1:1v:v EtOH:H₂O溶液，L-亮氨酸在5-10mg/ml(溶液)之间沉淀。用2:1EtOH:H₂O混合物获得更高的亮氨酸浓度，可达13mg/ml。考虑到PK10571在1:1v:v EtOH:H₂O中的溶解度为50mg/ml，在最终的粉末中亮氨酸赋形剂与API之比将为20-60％或更大。为了使表面上疏水性壳形成体(亮氨酸)的量最大化，需要更高的比率。

本领域技术人员可用多种方法制备具有所需的亮氨酸与PK10571之比的喷雾干燥粉末。一种方法利用内部混合法，在该方法中以单独的进料流(一个是ETOH而第二个是水性的)向喷嘴提供API和赋形剂。通过改变相对进料速度和/或进料浓度，调节赋形剂与API的质量比。另一种方法采用加热和“热启动”，使得待喷雾干燥的溶液被加热以将药物和赋形剂保持在溶液中。表5显示了内部混合法的结果。

喷雾干燥。在60-70℃的目标室出口温度和低于10％的计算出口相对饱和水平下操作喷雾干燥器，以产生具有低残余溶剂水平的粉末。雾化器设计和操作基于本领域技术人员已知的、以用于肺部递送的颗粒大小为目标的方法。如下所示，表5显示了用于生成具有可吸入特性的喷雾干燥粉末的多种PK10571与亮氨酸之比，使得可以向人或动物递送有效剂量以处理影响肺和/或肺血管系统的疾病。

表5.用于喷雾干燥具有亮氨酸的API(PK10571)的参数的实例。

ID	API	API浓度	API质量	Leu/API	ETOH+水	溶液	固体	溶液	目标粉末输出	批量粉末	API
													mg/ml	％TS	g/min	质量比	g/min	g/min	g/min		g	g	g
PK01	20	2	0.016	3.165	5.79	5.86	0.066	1.1	0.4	0.667	0.16
												PK02	20	2	0.02	2.009	4.995	5.055	0.06	1.2	0.4	0.667	0.22
PK03	20	2	0.04	1.013	5.975	6.055	0.08	1.3	0.4	0.667	0.331
												PK04	20	2	0.079	0.506	7.95	8.069	0.119	1.5	0.4	0.667	0.443
PK06	20	2	0.02	4.018	4.995	5.095	0.1	2	0.4	0.667	0.133
												PK06	20	2	0.04	2.025	5.975	6.095	0.12	2	0.4	0.667	0.22
PK07	20	2	0.079	1.013	7.95	8.109	0.159	2	0.4	0.667	0.331

缩写：EtOH＝乙醇；Leu＝L-亮氨酸；API＝活性药物成分，其为PK10571。

为了确定喷雾干燥粉末的特征，使用了多种测定。一种这样的测定是确定喷雾干燥粉末颗粒的质量中值空气动力学直径的级联冲击。采用新一代冲击器(NGI)级联冲击器测量PK01-PK07的颗粒大小分布。以下表6显示了含有PK10571和亮氨酸的喷雾干燥粉末的NGI级联冲击的结果。

表6

样品ID	T	PS	1	2	3	4	5	6	7	8	MMAD<sup>*</sup>	GSD
													PK01	3.35	0	3.299	20.42	12.39	8.37	2.74	2.67	20.57	90.21	NA
PK02	14.4	5.2	11.88	29.35	70.17	70.45	22.2	41.2	21.54	8.8	2.32	2.25
													PK03	11.83	13.73	13.87	15.06	64.56	195.81	114.82	16.77	14.88	15.04	1.95	1.57
PK04	12.22	7.59	11.7	16.67	55.65	147.69	78.49	10.3	9.66	7.75	2.07	1.58
													PK05	5.99	1.6	2.01	8.67	21.8	50.9	18.96	7.85	7.7	12.8	1.99	1.67
PK06	5.17	5.33	5.36	13.99	63.79	32.739	37.7	9.75	21.7	9.6	2.24	3.48
													PK07	14.22	12.27	12.09	28.54	90.35	128.21	40.052	23.7	19.37	16.14	2.32	1.76

缩写：T＝喉；PS＝预分离器；阶段1-8的结果以微克PK10571/ml溶剂表示，该溶剂用于溶解在NGI的每个阶段沉积的颗粒。MMAD＝质量中值空气动力学直径并以微米显示。GSD＝几何标准差。PK02-PK07的细颗粒分数为81-90％，其中截止值＜3μM。

实施例B.含有海藻糖和亮氨酸赋形剂的喷雾干燥的PK10571-在该实施例中，将PK10571以50mg/ml连同海藻糖20mg/ml和L-亮氨酸10mg/ml一起溶解于50％乙醇中。将溶液加热至40-45℃，在仍于40-45℃下加热的同时经0.2微米过滤器过滤并喷雾干燥。PK61014和PK61914是由PK10571、海藻糖和亮氨酸在50％乙醇中的溶液喷雾干燥的喷雾干燥粉末的名称。采用Yamato ADL311S喷雾干燥器进行喷雾干燥。溶液流速为0.5ml/min，入口T＝110℃；出口T＝60℃；使用在0.3mPA压力下的氮气作为喷雾干燥气体。该技术将与许多不同类型和型号的喷雾干燥器一起工作，该喷雾干燥器包括但不必限于Buchi喷雾干燥器、NIRO喷雾干燥器或Anhydrol喷雾干燥器。

NGI级联冲击在60L/min真空下进行4秒；使用具有装载10-20mg SDD的3号HPMC胶囊的单剂量干粉吸入器。通过NGI级联冲击，PK61914的MMAD和GSD为3.3±1.9。释放的剂量大于90％。截止值为3微米的细颗粒分数为63％。通过HPLC MS/MS测量喷雾干燥粉末中PK10571的浓度。分析以下SDD：PK61014、PK61914、PK62514、PK03、PK04、PK05。参见下文。

材料与方法：SDD由Pulmokine提供，乙腈从Sigma-Aldrich获得(目录号：34851-4L，批号：SHBD7868V)，水同样从Sigma-Aldrich获得(目录号：270733-4L，批号：SHBD7051V)。甲醇(目录号：34860-4L-R，批号：SHBD4483V)和甲酸(目录号：56302-10X1ML-F，批号：BCBM1129V)也从Sigma-Aldrich购买。

分析方法：电离设置如下：仪器：HSID升级的AB Sciex 3000 API MS；电离：电喷雾电离(ESI)；极性：阳性；电源电压：5000V；温度：375℃；气帘气体：10AU；碰撞气体：4AU；喷雾器气体(GS1)：10AU；加热器气体(GS2)：70psi。

单反应监测条件包括：转变：PK10571 470.0–239.2m/z去簇电势(DP)：16V；聚焦电势(FP)：60V；入口电势(EP)：7.5V；碰撞能(CE)：30V；碰撞室出口电势(CXP)：22V；停留时间：100msec。关于HPLC条件，采用注射体积为10μL的Agilent 1100 Series StackConfiguration。自动进样器托盘温度设置为20℃，流速为0.3mL/min。柱子为具有保护柱和串联(in-line)过滤器的100x 2.1mm Agilent Poroshell 120 SB-C18(2.7μM，

)，其中柱温箱为40℃。流动相为A-在水中的0.1％甲酸，B-在乙腈中的0.1％甲酸，其中梯度设置为0–3min，35％B；3-4min，65％B；4-4.5min，65％B；4.5-4.7min，35％B；以及4.7-6min，35％B。

样品制备：由PK10571的1mg/mL储备溶液在甲醇中制备标准品(100、50、10、5、1、0.5、0.1、0.05和0.01μg/mL)和质量控制样品(17、7和0.7μg/ml)。为进行SDD的分析，称取适量的粉末，并将其在甲醇中稀释，以便获得在标准曲线的线性范围内的可测量浓度。参见图21。

数据分析：通过对作为浓度(μg/mL)的函数的PK10571转变(470.0–239.2m/z)峰面积作图进行外部标准化。将采用最小二乘法制作的加权1/x²回归应用于标准品。用于生成标准曲线的入选标准被限定为变异系数(％CV)小于15％且准确度百分比在±15％内(除了在定量的下限以外)，其中％CV小于20％且准确度百分比在±20％内是可接受的。API含量被确定为分析的总SDD的重量百分比。如以下表7中所示，示出了PK10571校准物(在甲醇中)的线性度、精度和准确度数据，其中“*”表示定量的下限被确定为0.01μg/mL。如以下表8中所示，对于生成的各种SDD，确定PK10571的API含量分析。

使用调制差示扫描量热分析测量含有PK10571和亮氨酸的SDD和含有PK10571/海藻糖/亮氨酸的SDD的玻璃化转变温度。

使用装备有冷藏的冷却系统(RCS)的TA Instruments Q100差示扫描量热器进行调制DSC(MDSC)。吹扫气体为50mL/min的氮气。在铝密封盘中称入大约3-5mg材料，并将盖子气密密封。将样品冷却至-90℃，随后加热至300℃。使用常规MDSC在±1.5℃的幅度以及2℃/min的加热速率下将样品运行60秒的一段时间。使用TA Instruments UniversalAnalysis软件分析数据。如以下表9中所示，分析含有PK10571/亮氨酸或PK10571/亮氨酸/海藻糖的SDD的玻璃化转变温度，其中单一的转变温度表明是均质且稳定的SDD。参见图22，其示出了PK04的MDSC的一个实例，其中显示玻璃化转变温度(Tg)为101℃。图23和24分别示出了：含有PK10571和L-亮氨酸的PK004 SDD的扫描电子显微照片(SEM)，其中形态为带窝的球形(图23)；以及含有PK10571/海藻糖/亮氨酸的PK61914SDD的SEM，其中形态为波状/脊状球形(图24)。

图25示出了使用由PK10571和含有或不含海藻糖的赋形剂亮氨酸组成的喷雾干燥粉末处理肺动脉高压的实例，其中针对PDGFRα与β激酶结构域的IC50如本文进一步讨论。此外，如图25中所示，PK10453和10571针对β同种型比伊马替尼更强，其中PK10571针对PDGFRα和PDGFRβ同种型两者均有效。图26示出了人肺成纤维细胞中PDGF BB刺激的pAKT。针对每个浓度的每个测定一式两份进行。PK10453 IC50 0.15μM。PK10571IC50 0.05μM。如我们最近在Pulmonary Circulation中发表的文献所示，伊马替尼抑制PDGFBB刺激的AKT磷酸化的IC50为1.8μM。¹⁶

临床前功效。我们在大鼠MCT+PN模型中进行了吸入的PK10571的临床前功效研究。我们使用了MCT+PN模型，因为在该模型中，新生内膜肺小动脉增生性病变以与在人类疾病中观察到的方式类似的方式发生。在该实验中，药物处理晚于先前的PK10453研究开始。

在先前的研究中，PK10453在MCT注射后2周(肺切除术后3周)开始。在PK10571 SDD研究中，处理在MCT注射后3周(肺切除术后4周)开始。应注意，给予MCT的肺切除的大鼠发生了在MCT注射后两周开始的严重PAH。(在仅给予MCT的大鼠中，发生PAH需要更长的时间(即，3周))。在图27中，将在MCT+PN模型中肺高压发展的时程与仅MCT模型进行比较，该图显示了与仅MCT模型相比在MCT+PN模型中肺高压发展的时程。A.开始药物处理的PK10453研究时间(参见Pulm Circ 2014 8(1):82-102)。B.在MCT+PN模型中开始处理的PK10571SDD研究时间。C.对于仅MCT模型典型的开始时间。经由遥测术监测能走动大鼠的PA压获得数据。(注意：未显示第11天MCT+PN模型的数据)。参见图27。

PK10571 MCT+PN模型研究设计和表现。经由与CH Technologies暴露塔(Exposuretower)连接的Vilnius干粉发生器，通过每天两次仅经鼻吸入30分钟(平均)，向大鼠施用具有亮氨酸和海藻糖赋形剂的PK10571干粉。在肺中沉积的估算平均API剂量为0.25mg/kg(由气雾剂浓度和肺切除的大鼠的每分钟通气量的测量结果计算)，且估算的人类剂量当量(HED)为0.04mg/kg。大鼠MCT+PN模型是一种侵袭性非常强的PAH模型，并且载体处理的动物表现出高死亡率。这些动物的死亡方式未得到完全表征，但可能与RV衰竭相关。我们已经注意到，虽然在MCT注射之后两周的时间段内肺动脉压逐渐并渐进地升高，但在第三周动物可能进入“危险”期并突然死亡。在采用吸入的PK10571处理的组中，PA压随时间显著降低(在处理组中，第8天与第1天相比降低22％；第8天相对于第3天降低35％)。该发现证实了PK10571的疾病改变潜能。根据我们预设的标准，药物处理组中的一只动物因体重减轻而在第5天施以安乐死。参见图28。

这些数据表明，在疾病的侵袭性动物模型中，被配制成含有亮氨酸和海藻糖的干粉的PK10571在降低患有非常严重的PAH的动物的肺动脉压方面是有效的，并且提示了在该模型中的存活益处。参见图28。PK10571还可以被配制成含有亮氨酸而不含海藻糖的干粉。简言之，图28示出了在采用吸入的PK10571(n＝5)处理的MCT+PN大鼠处理组中PA压随时间的降低。压力数据来自PA中的PAC40遥测植入物。载体组为n＝7，但4只载体动物在处理的第2天与第4天之间死亡。详情参见正文。显示的数据为平均值±SE。*p≤0.05，重复测量ANOVA(注意：第1天PK10571相对于载体p＝NS)；除了1只动物以外，药物组的第6天的一些数据文件丢失，因此该数据点不能用于分析。(处理的第1天＝MCT后第21天；肺切除术后第31天)。参见图28。

实施例C，显示与1，2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)一起喷雾干燥的 PK10571：在此，PK011由1∶5比例的PK10571∶DSPC组成，在乙醇中具有1.5％的总固体，而PK012由PK10571∶DSPC∶氯化钙组成。以下表10显示了含有DSPC赋形剂的喷雾干燥的PK10571的API含量，其通过HPLC MS/MS进行测量并一式三份进行(PK011S7＝PK011；PK012S8＝PK012)。表11概括了与作为赋形剂的DSPC一起喷雾干燥的PK10571的MMAD。通过在NGI级联冲击器的每个阶段中经UV光谱法测量API的浓度来确定MMAD，其中空气流速为60L/min持续4秒。突出显示的部分仅用于强调。

表10

表11

ID	T	PS	1	2	3	4	5	6	7	8	MMAD	GSD
													PK011	24.859	30.548	10.617	57.727	134.412	197.596	76.294	11.727	0	0	2.55	1.6
PK012	48.511	503.247	32.087	16.325	22.949	41.634	30.119	8.999	0	0	2.66	2.06

在PK10571动物中我们还比较了给药前和给药后(给药后大约1小时)的PA收缩压(图29)。如图29所示，在MCT+PN模型中的PK10571：给药前和给药后(大约1小时)。显示了第1-6天处理的数据。在处理早期给药后(即，到第4天)观察到肺动脉收缩压的短暂降低，尽管这一短暂的剂量效应似乎在处理中随后减小，同时总PA收缩压下降。这些数据表明了PK10571的血管舒张和抗增殖作用，后者可能更重要。

实施例D-PK10571在PAH的SU5416/低氧/常氧模型中的功效。

PAH的SU5416/低氧/常氧模型在本领域中已很好地描述，被认为准确地反映了人类PAH疾病，并预测了在人类中的药物反应²⁵。向研究动物SQ施用SU541620mg/kg，并将其置于FiO2＝10％的COY低氧室中。在1周低氧；2周低氧/12天常氧；3周低氧/12天常氧；和3周低氧/5周常氧之后对动物进行研究。研究程序的结束包括采用Scisense Admittance系统获得右心室压力容积环。对异氟烷麻醉和100％FiO2下的通气开胸动物获得RV PV环。此外，动物的亚组在PA中植入DSI PAC40遥测导管。在该亚组中，在能走动的动物中持续监测PA压，并在给药的7天内，进行给药之前和之后的PA压分析。参见图30-31。

处理方案。在SUGEN5416/2周低氧/常氧2周亚组中，经由CH TechnologiesExposure System每天两次施用PK10571/海藻糖/亮氨酸干粉或载体。结果表明，在PK10571处理组中处理之后RV收缩末期压力显著降低(图30)。PK10571对PA压还有脉动的作用，因为在某些天，与给药前相比，给药后PA收缩压显著降低。然而，随着PA压随时间降低，这一急性效应减小(图31)。这些结果表明，PK10571具有急性血管舒张作用，但更重要的是持续的抗增殖/逆向重塑作用。

如图30所示，吸入的PK10571在PAH的SU5416/低氧/常氧模型中的功效。NL＝正常对照；H1＝SU5416+1周低氧；H2/N2＝SU5416+2周低氧和12天常氧，其中在11天常氧期间每日两次吸入载体(载体在常氧的第2天开始)；H3/N2＝SU5416+3周低氧和2周常氧；H2/N2+D＝SU5416+2周低氧和12天常氧，并在11天常氧期间每日两次采用吸入的PK10571处理。(在常氧的第2天开始药物处理)。与载体处理的动物(H2/N2)相比，吸入的PK10571导致RV收缩末期压力显著降低。H2/N2与H3/N2组之间没有显著性差异。统计分析：用于多重比较的具有Bonferroni校正的ANOVA。

如图31所示，SU5416/低氧(2周)/常氧(12天)；在每日两次用PK10571处理的n＝3只动物中持续监测PA压。在从低氧室中取出后的当天(第2天)开始处理。根据我们的经验，在从低氧室中取出并置于标准大气压后的前24小时内存在PA压的初始下降。因此，我们在从低氧室中取出后的第2天开始药物处理，并继续处理10天。在第12天，对动物施以安乐死并收获组织。显示了每日给药前的PA收缩压(蓝色)和给药后约1小时的PA收缩压(橙色)。采用用于多重比较的重复测量ANOVA和Bonferroni校正来进行统计分析。*p<0.0001，第6、7、9-12天相对于第2天和第4天。其他的显著性比较：第1天相对于第2、4、5-12天，p<0.0001；第5天相对于第11天，p＝0.002。

在SU5416模型中，我们还采用显微CT和3D重建检查了肺动脉循环的microfil不透射线铸型(radiopaque cast)。在采用肝素化盐水接着采用硝普钠冲洗大鼠的肺循环以使肺动脉血管最大化舒张之后制造铸型。随后采用注射泵以0.2ml/min注射Microfil，直到邻近的PA充血且microfil的晶格在肺周围可见。使胸部充满冰盐水直到microfil固化。初步结果示于图32中，图32显示了在PAH的SU5416/低氧/常氧模型中采用硝普钠处理之后的肺动脉血管系统的3D显微CT。载体处理的动物在左侧。PK10571处理的动物在右侧。分辨率：20微米。在PK10571处理的动物中似乎有更多的第三和第四代分支。

实施例E SEM和MDSC数据的分析：以下表12中显示了采用Buchi Bench顶端喷雾干燥器进行的喷雾干燥条件。

表12

通过在超光滑导电碳粘着标签(EMS目录号77827-12)覆盖的试样残段(stub)的表面上分布干粉来制备试样。涂覆的残段随后用金/钯溅涂。使用20kV束进行成像。参见图33和35。

使用装备有冷藏的冷却系统(RCS)的TA Instruments Q100差示扫描量热器，并根据Impact Analytical标准操作程序SOP-THR-011进行调制DSC(MDSC)。吹扫气体为50mL/min的氮气。向铝密封盘中称入大约2mg材料，并将盖子气密密封。将样品冷却至-90℃，随后加热至300℃。使用常规MDSC在±1.5℃的幅度以及2℃/min的加热速率下将样品运行60秒的一段时间。使用TA Instruments Universal Analysis软件分析数据。参见以下表13和图34。

简而言之，图33是与亮氨酸赋形剂一起喷雾干燥的PK10571的扫描电子显微照片，而图34示出了采用NGI级联冲击器确定的质量中值空气动力学直径：T＝“喉”；PS＝预分离器。1-8＝NGI级联冲击器的阶段。MMAD＝质量中值空气动力学直径；GSD＝几何标准差。这里，PK10571与DSPC一起喷雾干燥，其中观察到的PK013 PK10571-DPSC(S142533)的玻璃化转变温度为67℃。

此外，图35示出了具有DSPC赋形剂的PK10571的扫描电子显微照片，而图36是显示PK10571/DSPC喷雾干燥粉末的颗粒大小分布的图。在60L/min下使用NGI级联冲击器4sec。HPMC胶囊装入单剂量吸入器中。MMAD＝2.5微米GSD 1.6。

图37是表示化合物命名、结构和分子量(MW)的图表“图表A”，而图38是显示化合物针对PDGFRα的IC50数据的图。最后，图39是显示化合物针对PDGFRβ的IC50数据的图，其中：PK105R＝PK10571外消旋混合物；PK105＝PK10571；PK19＝PK1019；PK23＝PK1023；PK24＝PK1024。

表13观察到的玻璃化转变温度

样品	T<sub>g</sub>(℃)
		PK003 Leu/API 1.2(S141397)	103
PK004 Leu/API 0.8(S141398)	101
		PK005 Leu/API 1.7(S141399)	105

实施例F PK10571减少了人肺成纤维细胞中PDGF受体β的磷酸化：如图40所示，PK10571减少了人肺成纤维细胞中PDGF受体β的磷酸化。在此，经由在不同的PK10571浓度下处理的成年肺成纤维细胞(HLFa)的蛋白质印迹示出了磷酸化的PDGF受体β(pPDGFrβ)和总PDGF受体β(PDGFrβ)数据。

图40(A)示出了与总PDGFrβ一起剥离并重新探测的pPDGFrβ(Y751)、β-肌动蛋白，注意到每个泳道加载了25ug，在温育过程中使用1∶500稀释的pPDGFrβ(Y751)抗体。泳道的图例如下：Std＝蛋白质标准分子量标记；+Ctrl＝用10ng/mL PDGF BB处理7.5分钟的HLFa的裂解物；-Ctrl＝无血清培养基中的HLFa的裂解物；SF＝无血清培养基中的HLFa的裂解物；BB＝在GM或SF中用10ng/mL PDGF BB刺激7.5分钟的HLFa的裂解物；10＝用10uMPK10571预处理30分钟，随后用20ng/mL PDGF BB+10uM PK10571(最终浓度为10ng/mL PDGFBB)刺激7.5分钟的HLFa的裂解物；1＝用1uM PK10571预处理30分钟，随后用20ng/mL PDGFBB+1uM PK10571(最终浓度为10ng/mL PDGF BB)刺激7.5分钟的HLFa的裂解物；0.1＝用0.1uM PK10571预处理30分钟，随后用20ng/mL PDGF BB+0.1uM PK10571(最终浓度为10ng/mL PDGF BB)刺激7.5分钟的HLFa的裂解物；0.01＝用0.01uM PK10571预处理30分钟，随后用20ng/mL PDGF BB+0.01uM PK10571(最终浓度为10ng/mL PDGF BB)刺激7.5分钟的HLFa的裂解物。

图40(B)示出了与总PDGFrβ一起剥离并重新探测的pPDGFrβ(Y1021)、β-肌动蛋白，注意到每个泳道加载25ug，在温育过程中使用1:500稀释的pPDGFrβ(Y1021)抗体。泳道的图例如下：Std＝蛋白质标准分子量标记；+Ctrl＝用10ng/mL PDGF BB处理7.5分钟的HLFa的裂解物；-Ctrl＝无血清培养基中的HLFa的裂解物；SF＝无血清培养基中的HLFa的裂解物；BB＝在GM或SF中用10ng/mL PDGF BB刺激7.5分钟的HLFa的裂解物；10＝用10uM PK10571预处理30分钟，随后用20ng/mL PDGF BB+10uM PK10571(最终浓度为10ng/mL PDGF BB)刺激7.5分钟的HLFa的裂解物；1＝用1uM PK10571预处理30分钟，随后用20ng/mL PDGF BB+1uMPK10571(最终浓度为10ng/mL PDGF BB)刺激7.5分钟的HLFa的裂解物；0.1＝用0.1uMPK10571预处理30分钟，随后用20ng/mL PDGF BB+0.1uM PK10571(最终浓度为10ng/mLPDGF BB)刺激7.5分钟的HLFa的裂解物；0.01＝用0.01uM PK10571预处理30分钟，随后用20ng/mL PDGF BB+0.01uM PK10571(最终浓度为10ng/mL PDGF BB)刺激7.5分钟的HLFa的裂解物。

实施例G在大鼠野百合碱加肺切除术模型中，作为干粉通过吸入递送的PK10571改善了肺功能：大鼠野百合碱肺切除术模型是一种与肺纤维化相关的肺高压模型。研究方案：对雄性Sprague Dawley大鼠进行左侧肺切除术，并在随后的10天腹膜内给予野百合碱50mg/kg。二十一天后，使用由Vilnius干粉发生器生成的干粉气雾剂，经由CHtechnologies吸入暴露塔，每天两次施用吸入的PK10571，持续十天。

如图41所示，与载体相比，PK10571显著改善了潮气量。在载体处理的动物中呼吸速率较高，这补偿了降低的潮气量，因此使每分钟通气量在各组之间没有显著性差异。气道阻力在PK10571与载体处理的动物之间没有显著性差异(图)。采用EMKA 2室身体体积描记器进行体积描记术并采用IOX软件获得数据。采用XLSTAT进行统计分析。图41显示了通过吸入向患有用野百合碱肺切除术诱发的、与肺纤维化相关的肺高压的Sprague Dawley大鼠递送PK10571干粉。相对于载体处理的动物(n＝12)，PK10571显著改善了潮气量(n＝12)；*p＝0.006。呼吸速率在PK10571处理的动物中也较低(*p＝0.005)。

如图42所示，在大鼠野百合碱加肺切除术模型中，与PK10453处理的动物相比，来自载体处理的动物的肺切片的三色染色。蓝色表示胶原。在PK10453处理的动物中胶原沉积较不明显，并且肺泡结构显示正常。图42示出了来自患有野百合碱+肺切除术诱发的肺纤维化和肺高压的载体处理的大鼠(左)与吸入的PK10453处理的大鼠野百合碱+肺切除大鼠(右)的肺切片的三色染色。三色将胶原染为蓝色(胶原在纤维化的情况下增加)。使用10X显微镜物镜，PK10453处理的动物具有较少的胶原沉积，并且肺泡结构显示正常。

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Claims

1.一种制剂，其包含

a)下式的化合物：

或其药学上可接受的盐；以及

b)至少一种赋形剂，其中所述赋形剂包括疏水性氨基酸，

其中所述制剂为粉末。

2.根据权利要求1所述的制剂，其中所述制剂是干粉。

3.根据权利要求2所述的制剂，其中所述干粉具有按水重量计低于5％的水分含量。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的制剂，其中所述疏水性氨基酸为亮氨酸。

5.根据权利要求4所述的制剂，其中所述疏水性氨基酸为L-亮氨酸。

6.根据权利要求1-3中任一项所述的制剂，其中所述赋形剂还包括碳水化合物填充剂。

7.根据权利要求6所述的制剂，其中所述碳水化合物填充剂为海藻糖。

8.根据权利要求6所述的制剂，其中所述疏水性氨基酸为亮氨酸且所述碳水化合物填充剂为海藻糖。

9.根据权利要求1-3中任一项所述的制剂，其中所述粉末的平均颗粒大小为0.5微米至10微米。

10.下式的化合物或其药学可接受的盐在制备用于治疗疾病的药物中的应用：

其中所述药物包括至少一种赋形剂，其中所述赋形剂包括疏水性氨基酸，并且

其中所述药物为粉末。

11.根据权利要求10所述的应用，其中所述药物配制为用于吸入施用。

12.根据权利要求10所述的应用，其中所述药物配制为用于鼻内递送施用。

13.根据权利要求10所述的应用，其中所述药物配制为用于通过吸入器施用。

14.根据权利要求10所述的应用，其中所述药物配制为用于通过喷雾器施用。

15.根据权利要求10所述的应用，其中所述药物配制为用于通过雾化器施用。

16.根据权利要求10-15中任一项所述的应用，其中所述药物包含治疗有效量的所述化合物，所述治疗有效量为每天0.01mg/kg至100mg/kg。

17.根据权利要求10-15中任一项所述的应用，其中当向受试者施用时，所述药物在所述受试者血浆中提供为1至5000ng/mL的所述化合物的C_max。

18.根据权利要求10-15中任一项所述的应用，其中当向受试者施用24小时后，所述药物在所述受试者的血浆中提供为1至5000ng/mL的所述化合物的C_max。