CN106083943B - 一种吡喃葡萄糖基衍生物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种作为钠依赖性葡萄糖转运蛋白(SGLT)抑制剂的吡喃葡萄糖基衍生物类化合物、其制备方法及其在医药上的应用，或含有该化合物的药物组合物和它们作为治疗糖尿病和糖尿病相关疾病的药物的用途。本发明所提供的化合物的制备方法操作简单，所得产物光学纯度高，收率高，后处理简便，纯化容易，适于工业化生产。

Description

一种吡喃葡萄糖基衍生物及其制备方法和用途

发明领域

本发明属于药物化学领域，具体涉及一种作为钠依赖性葡萄糖转运蛋白(SGLT)抑制剂的吡喃葡萄糖基衍生物类化合物及其制备方法。

发明背景

糖尿病是一种常见的以高血糖为特征的慢性疾病，糖尿病的发生伴随着外周组织的胰岛素抵抗、体内胰岛素分泌减少以及肝脏糖异生作用的增加。当通过饮食和运动无法有效地控制病症时，需要另外使用胰岛素或者口服降血糖药来治疗。目前降血糖药包括双胍类、磺酰脲类、胰岛素增敏剂、格列奈类、α-葡萄糖苷酶抑制剂以及DPP-IV(二肽基肽酶IV)抑制剂等。然而，目前这些降血糖药都存在欠缺，双胍类会引起乳酸中毒，磺酰脲类会引起严重的低血糖，格列奈类使用不当也会引起低血糖，胰岛素增敏剂会造成水肿、心脏衰竭和体重增加，α-葡萄糖苷酶抑制剂会造成腹部胀气和下痢，DPP-IV抑制剂需要和二甲双胍联合用药才能达到理想的降糖效果。因此，迫切需要开发更安全有效的新型降血糖药。

研究发现，葡萄糖转运蛋白是一类镶嵌在细胞膜上转运葡萄糖的载体蛋白质，葡萄糖必须借助葡萄糖转运蛋白才能通过细胞膜的脂质双层结构。葡萄糖转运蛋白分两大类，一类是钠依赖性葡萄糖转运蛋白(sodium-dependent glucose transporters,SGLTs)；另一类是葡萄糖转运蛋白(glucose transporters,GLUTs)。SGLTs的两个主要家族成员为SGLT-1和SGLT-2。SGLT-1主要分布在小肠、肾脏、心脏和气管中，主要表达于小肠刷状缘和肾近曲小管较远的S3阶段中，少量表达于心脏和气管，以钠-葡萄糖2:1的比率转运葡萄糖和半乳糖。而SGLT-2主要分布在肾脏中，主要表达于肾近曲小管较远的S1节段中，以钠-葡萄糖1:1的比率转运葡萄糖。在生物体里，SGLTs以主动方式逆浓度梯度转运葡萄糖，同时消耗能量，而GLUTs以易化扩散的方式顺浓度梯度转运葡萄糖，其转运过程不消耗能量。研究表明，血浆葡萄糖通常在肾脏的肾小球中过滤并有90％的葡萄糖在肾小管近端S1段被SGLT-2主动转运至上皮细胞中，10％的葡萄糖在肾小管远端S3段被SGLT-1主动转运至上皮细胞中，又被上皮细胞基底膜侧的GLUT转运至周围毛细管网中，完成了肾小管对葡萄糖的重吸收。因此，SGLTs是调控细胞糖代谢的第一道关卡，也是能有效治疗糖尿病的理想靶点。研究发现，SGLT-2缺陷的病人有大量的尿糖排出，这为通过抑制SGLT-2活性减少葡萄糖的吸收进而治疗糖尿病提供事实依据。所以抑制SGLTs转运蛋白活性，可以阻断肾小管对葡萄糖的重吸收，增加葡萄糖在尿中排泄，从而使血浆中葡萄糖浓度正常化，进而控制糖尿病及糖尿病并发症的病情。抑制SGLTs不会影响正常葡萄糖反调节机制，造成低血糖风险；同时通过增加肾脏葡萄糖的排泄来降低血糖，能促使肥胖症患者的体重下降。研究还发现，SGLTs抑制剂作用机制不依赖于胰岛β-细胞功能异常或者胰岛素抵抗的程度，因此，其效果不会随着β-细胞的功能衰竭或者严重胰岛素抵抗而下降。它可以单独使用，也可以和其他的降血糖药联合治疗。因此，SGLTs抑制剂是理想的新型降血糖药。

此外，研究还发现SGLTs抑制剂可以用于糖尿病相关并发症的治疗。如视网膜病变、神经病、肾病，葡萄糖代谢紊乱造成的胰岛素耐受、高胰岛素血症、高血脂、肥胖等。同时SGLTs抑制剂亦可与现有的治疗药物联合使用，如磺酰胺、噻唑烷二酮、二甲双胍和胰岛素等，在不影响药效的情况下，降低用药剂量，从而避免或减轻了不良反应的发生，提高了患者对治疗的顺应性。

本申请人于2014年09月26日提交的申请PCT/CN2014/087587(WO2015043511)描述了一类吡喃葡萄糖基衍生物，以及其作为SGLTs抑制剂的应用，经试验证明，其中公开的实施例1化合物(1R,2S,3S,4R,5S)-5-[4-氯-3-[(4-乙氧基苯基)甲基]苯基]-1-(1-羟乙基)-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-2,3,4-三醇对SGLTs的抑制作用明显，因此将其整个内容作为本发明的参考文献。

本发明合成了PCT/CN2014/087587中化合物(1R,2S,3S,4R,5S)-5-[4-氯-3-[(4-乙氧基苯基)甲基]苯基]-1-(1-羟乙基)-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-2,3,4-三醇的(R)-型异构体(1R,2S,3S,4R,5S)-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-1-[(1R)-1-羟乙基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-2,3,4-三醇，并通过对(R,S)-非对映体混合物的拆分得到了(S)-型异构体(1R,2S,3S,4R,5S)-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-1-[(1S)-1-羟乙基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-2,3,4-三醇。通过生物活性测试，证明了两种不同的非对映异构体生物活性有明显差异，其中，上述的(R)-型异构体的体内药效活性显著优于其(S)-型异构体和(R,S)-非对映体混合物。此外，(R)-型异构体还具有更加优良的药代动力学性质，口服给药吸收良好，半衰期理想，生物利用度较高，具有更好的开发前景。

本发明还提供了两种如式(I)所示化合物的立体选择性合成方法，一是通过烷基锌试剂对醛基的不对称加成反应，得到高ee值的产物；二是，通过对羰基的立体选择性还原，得到产物。本发明所提供的制备方法操作简单，所得产物光学纯度高，收率高，后处理简便，纯化容易，适于工业化生产。

发明内容

一方面，本发明提供了一种化合物，其具有如式(I)所示的结构:

或其立体异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂合物、氘代物、代谢产物以及药学上可接受的盐或前药。

另一方面，本发明涉及具有如式(I)所示的结构的化合物的制备方法。

首先，参考专利PCT/CN2014/087587(WO2015043511)的方法，制备得到如式(III)所示的中间体化合物。

具体方案如下：

制备如式(III)所示的中间体包含以下步骤：首先，将化合物(I-a)在碱性环境(如N-甲基吗啉)作用下，与三甲基氯硅烷反应得到化合物(I-b)；接着，化合物(I-b)在正丁基锂的作用下，与溴化物片段(I-c)发生耦联反应得到化合物(I-d)；然后，化合物(I-d)在酸性条件下与甲醇发生醚化反应，并脱去三甲基硅基保护基，得到化合物(I-e)。在咪唑的作用下,化合物(I-e)中的伯羟基与二甲基叔丁基氯硅烷反应得到化合物(I-f)；然后，化合物(I-f)中的仲羟基在强碱性条件下，如氢化钠的作用下，与合适的试剂反应(比如溴苄)，生成羟基保护的化合物(I-g)；接着，化合物(I-g)在极性溶剂中与四丁基氟化铵反应，脱除伯羟基上的硅保护基得到化合物(I-h)；然后，化合物(I-h)中裸露的伯羟基在氧化剂的作用下转化为醛基，从而得到化合物(I-i)。在极性溶剂中，化合物(I-i)在碱的作用下，与甲醛反应，得到化合物(I-j)；然后，化合物(I-j)在酸性条件下，发生分子内的缩合反应，得到化合物(I-k)；最后，化合物(I-k)中的伯羟基在氧化剂的作用下，氧化为醛基，就得到中间体(I-l)，也就是式(III)所示的化合物中的一种。

其他合成方法，只要可以制备得到如式(III)所示的化合物，均可以引入到本发明所述的制备方法中。

在一些实施方案中，得到式(III)所示的化合物之后，本发明的式(I)化合物的制备通过如下反应方案一实现：

步骤(A)：中间体化合物(III)，与二甲基锌发生加成反应，得到式(II)所示的化合物；

步骤(B)：脱除式(II)所示的化合物羟基上的保护基团，就得到式(I)所示的化合物；

具体反应方案一如下所示：

其中，PG、PG¹和PG²各自独立地为保护基团。

根据本发明的实施方案，在本发明所述的制备方法中，步骤(A)通过二甲基锌试剂对醛基的不对称加成反应，引入新的手性中心，此反应通过对手性配体的选择优化可以得到高ee值的产物，经简单的后处理，就可得到光学纯的化合物(II)，并且收率较高。化合物(II)再经过简单的反应，脱除羟基上的保护基团就得到光学纯的化合物(I)。

根据本发明的实施方案，在本发明所述的制备方法中，步骤(A)所述的加成反应还使用双羟基手性配体、Salen配体、金属-Salen配体或(1R,2R)-(+)-N,N’-二对甲苯磺酰-1,2-环己二胺作为手性配体。

根据本发明的实施方案，在本发明所述的制备方法中，步骤(A)所述的加成反应二甲基锌的用量为1.0～5.0当量；在一些实施方案中，优选为1.1～2.0当量；在一些实施方案中，更优选为1.2～1.6当量。所使用的二甲基锌试剂的规格可以为1mol/L的二甲基锌的甲苯溶液。

根据本发明的实施方案，在本发明所述的方法中，步骤(A)所述的加成反应使用Salen配体或金属-Salen配体作为手性配体。其中，所述的金属-Salen配体可以是Zn-Salen配体、Mn-Salen配体或Cr-Salen配体，优选为Cr-Salen配体。其中，在一些实施方案中，Salen配体的用量为0.10～1.0当量；在另一些实施方案中，金属-Salen配体的用量为0.01～0.50当量；还在一些实施方案中，Cr-Salen配体的用量为0.01～0.20当量；优选为0.03～0.15当量。该反应的反应溶剂为甲苯、邻二甲苯、对二甲苯、间二甲苯或它们的任意组合。在一些实施方案中，该反应的反应温度为–20℃～30℃；优选为20℃～30℃。

所述的Salen配体、Zn-Salen配体、Mn-Salen配体和Cr-Salen配体分别优选为以下结构：

根据本发明的实施方案，在本发明所述的制备方法中，步骤(A)所述的加成反应使用双羟基手性配体；在一些实施方案中，所述的双羟基手性配体是：TADDOL、(R)-BINOL或(S)-H₈-BINOL，优选为(R)-BINOL。在一些实施方案中，(R)-BINOL的用量为0.1～0.9当量。在一些实施方案中，该反应的反应溶剂为甲苯、邻二甲苯、对二甲苯、间二甲苯或它们的任意组合。在一些实施方案中，该反应的反应温度为–20℃～30℃；优选为20℃～30℃。

根据本发明的实施方案，在本发明所述的方法中，步骤(A)所述的加成反应还可以使用(1R,2R)-(+)-N,N’-二对甲苯磺酰-1,2-环己二胺作为手性配体；在一些实施方案中，该手性配体的用量为0.1～1.0当量。在一些实施方案中，该反应的反应溶剂为甲苯、邻二甲苯、对二甲苯、间二甲苯或它们的任意组合。在一些实施方案中，该反应的反应温度为–20℃～30℃；优选为20℃～30℃。

根据本发明的实施方案，在本发明所述的方法中，步骤(A)所得到的反应粗产物(II)是经打浆的方法纯化的，打浆所使用的溶剂为石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂；在一些实施方案中，所述混合溶剂为体积比4/1～30/1的石油醚/乙酸乙酯。

根据本发明的实施方案，在本发明所述的方法中，当保护基团PG、PG¹和PG²为苄基时，步骤(B)脱除式(III)所示化合物中的羟基保护基团所使用的试剂：催化剂为钯碳、氢氧化钯/碳或氯化钯；氢源为氢气；酸为盐酸或乙酸。

另一方面，得到化合物(III)之后，本发明的式(I)化合物的制备还可以通过如下反应方案二实现：

步骤(1)：中间体化合物(III)，与甲基格氏试剂加成反应，得到式(IV)所示的化合物；

步骤(2)：式(IV)所示的化合物经氧化反应得到式(V)所示的化合物；

步骤(3)：式(V)所示的化合物经还原反应得到式(II)所示的化合物；

步骤(4)：脱除式(II)所示的化合物中的保护基团，得到式(I)所示的化合物。

具体反应方案二如下：

其中，PG、PG¹和PG²各自独立地为保护基团。

根据本发明的实施方案，在本发明所述的方法中，首先，通过甲基格氏试剂对羰基的加成反应引入甲基；然后，将羟基氧化，利用对羰基的不对称还原引入手性中心；此反应通过对还原反应条件的选择优化也可以得到较高ee值的化合物(II)，化合物(II)再经过简单的反应，脱除羟基上的保护基团，就得到光学纯的化合物(I)。

根据本发明的实施方案，在本发明所述的方法中，步骤(2)的氧化反应，使用的氧化剂为戴斯马丁氧化剂、2-碘酰基苯甲酸或四甲基哌啶氮氧化物/次氯酸钠；反应溶剂为二氯甲烷或二氯甲烷/水的混合溶剂；在一些实施方案中，该反应的反应温度为–20℃～20℃。

根据本发明的实施方案，在本发明所述的方法中，其中，步骤(3)的还原反应，使用的还原剂为硼氢化钠、硼氢化钠/三氯化铈、三乙酰氧基硼氢化钠、三叔丁氧基氢化铝锂、DIBAL-H或(S)-3-甲基-1,1,1-三苯基丁-2-胺/硼烷；在一些实施方案中，还原剂优选为三乙酰氧基硼氢化钠或DIBAL-H；在一些实施方案中，还原剂的用量为1.0～2.0当量。在一些实施方案中，该反应的反应溶剂为甲醇、乙醇、四氢呋喃、甲苯或乙酸乙酯；在一些实施方案中，该反应的反应温度为–78℃～30℃。

根据本发明的实施方案，在本发明所述的方法中，保护基团为苄基时，步骤(4)脱除式(II)所示化合物中的保护基团所使用的试剂：催化剂为钯碳、氢氧化钯/碳或氯化钯，氢源为氢气，酸为盐酸或醋酸。

还在另一方面，本发明还提供了一种化合物，其具有如式(II)所示的结构:

其中，PG、PG¹和PG²各自独立地为保护基团；所述的保护基团各自独立地为苄基、三苯基甲基、对甲氧基苄基、叔丁基二甲基硅基、三甲基硅基、叔丁基二苯基硅基、三乙基硅基、三异丙基硅基、甲酸苄酯基、2-(三甲基硅烷基)乙氧甲基、二氢吡喃基、溴丙烯基、乙酯甲酰基、乙酰基或苯甲酰基。

另一方面，本发明涉及一种药物组合物，包含本发明所述的化合物及药学上可以接受的辅料。

在一些实施方案中，本发明所述的药物组合物更进一步地包含附加治疗剂，其中所述附加治疗剂选自非SGLT-2抑制剂的抗糖尿病药物、抗高血糖药物、抗肥胖症药物、抗高血压药物、抗血小板药物、抗动脉粥样硬化药物、降脂药物、消炎药物或其组合。

在一些实施方案中，本发明所述的非SGLT-2抑制剂的抗糖尿病药物选自双胍类药物、磺酰脲类药物、葡萄糖苷酶抑制剂、PPAR激动剂(过氧化物酶体增殖物激活受体激动剂)、αP2抑制剂(脂肪细胞脂肪酸结合蛋白抑制剂)、PPARα/γ双激活剂(过氧化物酶体增殖物激活受体α/γ双激活剂)、二肽基肽酶IV(DPP-IV)抑制剂、格列奈类药物、胰岛素、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)抑制剂、PTP1B抑制剂(蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制剂)、糖原磷酸化酶抑制剂、葡萄糖-6-磷酸酶抑制剂或其组合。

在一些实施方案中，本发明所述的降脂药物选自MTP抑制剂(微粒体甘油三酯转移蛋白抑制剂)、HMGCoA还原酶抑制剂(羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂)、角鲨烯合成酶抑制剂、贝特类降血脂药物、ACAT抑制剂(乙酰胆固醇乙酰转移酶抑制剂)、脂加氧酶抑制剂、胆固醇吸收抑制剂、回肠钠离子/胆汁酸协同转运蛋白抑制剂、LDL受体活性的向上调节物、烟酸类降血脂药物、胆汁酸螯合物或其组合。

在另一些实施方案中，本发明所述的降脂药物选自普伐他汀、辛伐他汀、阿伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀、埃塔伐他汀、罗素他汀或其组合。

另一方面，本发明涉及如本发明所述的化合物或药物组合物在制备药物中的用途，其中所述药物用于抑制SGLT-2。

另一方面，本发明涉及如本发明所述的化合物或药物组合物在制备药物中的用途，其中所述药物用于升高高密度脂蛋白的水平。

另一方面，本发明还涉及如本发明所述的化合物或药物组合物在制备药物中的用途，其中所述药物用于预防或治疗下列疾病，减轻下列疾病症状或者延缓下列疾病的发展或发作，其中所述的疾病是糖尿病、糖尿病性视网膜病、糖尿病性神经病、糖尿病性肾病、胰岛素抗性、高血糖、高胰岛素血症、血液中脂肪酸或甘油水平的升高、高脂血症、肥胖症、高甘油三酯血症、X综合症、糖尿病并发症、动脉粥样硬化或者高血压。

前面所述内容只概述了本发明的某些方面，但并不限于这些方面及其他方面的内容将在下面作更加具体完整的描述。

本发明的详细说明

本发明提供了一种作为钠依赖性葡萄糖转运蛋白(SGLT)抑制剂的化合物(1R,2S,3S,4R,5S)-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-1-[(1R)-1-羟乙基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-2,3,4-三醇、其制备方法及其组合物和此化合物及其组合物在医药上的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明中。

定义和一般术语

除非另有说明，本发明所用在说明书和权利要求书中的术语具有下述定义。

现在详细描述本发明的某些实施方案，其实例由随附的结构式和化学式说明。本发明意图涵盖所有的替代、修改和等同技术方案，它们均包括在如权利要求定义的本发明范围内。本领域技术人员应认识到，许多与本文所述类似或等同的方法和材料能够用于实践本发明。本发明绝不限于本文所述的方法和材料。在所结合的文献、专利和类似材料的一篇或多篇与本申请不同或相矛盾的情况下(包括但不限于所定义的术语、术语应用、所描述的技术，等等)，以本申请为准。

应进一步认识到，本发明的某些特征，为清楚可见，在多个独立的实施方案中进行了描述，但也可以在单个实施例中以组合形式提供。反之，本发明的各种特征，为简洁起见，在单个实施方案中进行了描述，但也可以单独或以任意适合的子组合提供。

除非另外说明，本发明所使用的所有科技术语具有与本发明所属领域技术人员的通常理解相同的含义。本发明涉及的所有专利和公开出版物通过引用方式整体并入本发明。

除非另外说明，应当应用本文所使用的下列定义。出于本发明的目的，化学元素与元素周期表CAS版，和《化学和物理手册》，第75版，1994一致。此外，有机化学一般原理可参考"Organic Chemistry",Thomas Sorrell,University Science Books,Sausalito:1999,和"March's Advanced Organic Chemistry”by Michael B.Smith and Jerry March,JohnWiley&Sons,New York:2007中的描述，其全部内容通过引用并入本文。

除非另有说明或者上下文中有明显的冲突，本文所使用的冠词“一”、“一个(种)”和“所述”旨在包括“至少一个”或“一个或多个”。因此，本文所使用的这些冠词是指一个或多于一个(即至少一个)宾语的冠词。例如，“一组分”指一个或多个组分，即可能有多于一个的组分被考虑在所述实施方案的实施方式中采用或使用。

本发明所使用的术语“受试对象”是指动物。典型地所述动物是哺乳动物。受试对象，例如也指灵长类动物(例如人类，男性或女性)、牛、绵羊、山羊、马、犬、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在某些实施方案中，所述受试对象是灵长类动物。在其他实施方案中，所述受试对象是人。

本发明所使用的术语“患者”是指人(包括成人和儿童)或者其他动物。在一些实施方案中，“患者”是指人。

本发明所使用的术语“当量”数，是按照化学反应的当量关系，以每步中所用基本原料为基准(1当量)，所需要的其他原材料的当量用量。

术语“包含”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。

“立体异构体”是指具有相同化学构造，但原子或基团在空间上排列方式不同的化合物。立体异构体包括对映异构体、非对映异构体、构象异构体(旋转异构体)、几何异构体(顺/反异构体)、阻转异构体，等等。

“手性”是具有与其镜像不能重叠性质的分子；而“非手性”是指与其镜像可以重叠的分子。

“对映异构体”是指一个化合物的两个不能重叠但互成镜像关系的异构体。

“非对映异构体”或“非对映体”是指有两个或多个手性中心并且其分子不互为镜像的立体异构体。非对映异构体具有不同的物理性质，如熔点、沸点、光谱性质和反应性。非对映异构体可通过高分辨分析操作如电泳和色谱，例如HPLC来分离。

“构型”是指因分子中存在手性中心而产生的异构体中的原子或取代基团的空间排列关系。

“差向异构体”是指有两个或多个手性中心，其中只有一个手性碳原子的构型不同，其余的构型都相同的非对映体叫差向异构体。

术语“药物组合物”表示一种或多种本文所述化合物或者其生理学上/药学上可以接受的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，其他组分例如生理学上/药学上可以接受的载体、赋形剂、稀释剂、辅剂、媒介物，以及抗糖尿病试剂、抗高血糖试剂、抗肥胖症试剂、抗高血压试剂、抗血小板试剂、抗动脉粥样硬化试剂或者降脂试剂等附加治疗剂。药物组合物的目的是促进化合物对生物体的给药。

术语“任选”或者“任选地”意味着随后所描述的事件或者环境可以但不必发生，该说明包括该事情或者环境发生或者不发生的场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情景和杂环基团不被烷基取代的情景。

术语“X综合症”，也称作代谢综合症的病症、疾病，其疾患详述于Johannsson etal.,J.Clin.Endocrinol.Metab.,1997,82,727-734中。

本发明所使用的术语“前药”，代表一个化合物在体内转化为式(I)所示的化合物。这样的转化受前体药物在血液中水解或在血液或组织中经酶转化为母体结构的影响。本发明前体药物类化合物可以是酯，在现有的发明中酯可以作为前体药物的有苯酯类，脂肪族(C_1-24)酯类，酰氧基甲基酯类，碳酸酯，氨基甲酸酯类和氨基酸酯类。例如本发明里的一个化合物包含羟基，即可以将其酰化得到前体药物形式的化合物。其他的前体药物形式包括磷酸酯，如这些磷酸酯类化合物是经母体上的羟基磷酸化得到的。关于前体药物完整的讨论可以参考以下文献：Higuchi et al.,Pro-drugs as Novel Delivery Systems,Vol.14,A.C.S.Symposium Series；Roche et al.,Bioreversible Carriers in Drug Design,American Pharmaceutical Association and Pergamon Press,1987；Rautio et al.,Prodrugs:Design and Clinical Applications,Nature Reviews Drug Discovery,2008,7,255-270,and Hecker et al.,Prodrugs of Phosphates and Phosphonates,J.Med.lChem.,2008,51,2328-2345。

术语“代谢产物”是指具体的化合物或其盐在体内通过代谢作用所得到的产物。一个化合物的代谢产物可以通过所属领域公知的技术来进行鉴定，其活性可以通过如本发明所描述的那样采用试验的方法进行表征。这样的产物是可以通过给药化合物经过氧化，还原，水解，酰氨化，脱酰氨作用，酯化，脱脂作用，酶裂解等等方法得到。相应地，本发明包括化合物的代谢产物，包括将本发明的化合物与哺乳动物充分接触一段时间所产生的代谢产物。

本发明所使用的立体化学定义和规则一般遵循S.P.Parker，Ed.，McGraw-HillDictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company，New York；andEliel，E.and Wilen，S.，“Stereochemistry of Organic Compounds”，John Wiley&Sons，Inc.，New York，1994。

许多有机化合物以光学活性形式存在，即它们具有使平面偏振光的平面发生旋转的能力。在描述光学活性化合物时，使用前缀D和L或R和S来表示分子关于其一个或多个手性中心的绝对构型。前缀d和l或(+)和(–)是用于指定化合物所致平面偏振光旋转的符号，其中(–)或l表示化合物是左旋的。前缀为(+)或d的化合物是右旋的。

一种具体的立体异构体是对映异构体，这种异构体的混合物称作对映异构体混合物。对映异构体的50:50混合物称为外消旋混合物或外消旋体，当在化学反应或过程中没有立体选择性或立体特异性时，可出现这种情况。一种具体的立体异构体是非对应异构体，这种异构体的混合物称作非对映体混合物。

本发明公开化合物的任何不对称原子(例如，碳等)都可以以外消旋或对映体富集的形式存在，例如(R)-、(S)-或(R,S)-构型形式存在。在某些实施方案中，各不对称原子在(R)-或(S)-构型方面具有至少50％对映体过量，至少60％对映体过量，至少70％对映体过量，至少80％对映体过量，至少90％对映体过量，至少95％对映体过量，或至少99％对映体过量。

所得的任何立体异构体的混合物可以依据组分物理化学性质上的差异被分离成纯的或基本纯的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，差向异构体，例如，通过色谱法、打浆、结晶、蒸馏或升华等方法被分离为个别非对映异构体。

可以用已知的方法将任何所得终产物或中间体的外消旋体通过本领域技术人员熟悉的方法拆分成光学对映体，如，通过对获得的其非对映异构的盐进行分离。外消旋产物也可以通过手性色谱来分离，如，使用手性吸附剂的高效液相色谱(HPLC)。特别地，对映异构体可以通过不对称合成制备，例如，可参考Jacques,et al.,Enantiomers,Racematesand Resolutions(Wiley Interscience,New York,1981)；Principles of AsymmetricSynthesis(2^nd Ed.Robert E.Gawley,Jeffrey Aubé,Elsevier,Oxford,UK,2012)；Eliel,E.L.Stereochemistry of Carbon Compounds(McGraw-Hill,NY,1962)；Wilen,S.H.Tablesof Resolving Agents and Optical Resolutions p.268(E.L.Eliel,Ed.,Univ.of NotreDame Press,Notre Dame,IN 1972)；Chiral Separation Techniques:A PracticalApproach(Subramanian,G.Ed.,Wiley-VCH Verlag GmbH&Co.KGaA,Weinheim,Germany,2007)。

术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指具有不同能量的可通过低能垒(lowenergy barrier)互相转化的结构异构体。若互变异构是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体(protontautomer)(也称为质子转移互变异构体(prototropic tautomer))包括通过质子迁移来进行的互相转化，如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键互变异构体(valence tautomer)包括通过一些成键电子的重组来进行的互相转化。酮-烯醇互变异构的具体实例是戊烷-2,4-二酮和4-羟基戊-3-烯-2-酮互变异构体的互变。互变异构的另一个实例是酚-酮互变异构。酚-酮互变异构的一个具体实例是吡啶-4-醇和吡啶-4(1H)-酮互变异构体的互变。除非另外指出，本发明化合物的所有互变异构体形式都在本发明的范围之内。

术语“保护基团”是指一个取代基与其他官能团起反应的时候，通常用来阻断或保护的特殊的功能性基团。例如，“氨基的保护基团”是指一个取代基与氨基基团相连来阻断或保护化合物中氨基的功能性，合适的氨基保护基团包括乙酰基，三氟乙酰基，叔丁氧羰基(BOC,Boc)，苄氧羰基(CBZ,Cbz)和9-芴亚甲氧羰基(Fmoc)。相似地，“羟基保护基团”是指羟基的取代基用来阻断或保护羟基的功能性，合适的保护基团包括苄基(Bn)、苄氧羰基(Cbz)、三苯基甲基、对甲氧基苄基(PMB)、叔丁基二甲基硅基(TBDMS)、三甲基硅基(TMS)、叔丁基二苯基硅基(TBDPS)、三乙基硅基(TES)、三异丙基硅基(DIPS)、2-(三甲硅烷基)乙氧甲基、二氢吡喃基、溴丙烯基、乙酯甲酰基、乙酰基或苯甲酰基等。“羧基保护基团”是指羧基的取代基用来阻断或保护羧基的功能性，一般的羧基保护基包括-CH₂CH₂SO₂Ph，氰基乙基，2-(三甲基硅烷基)乙基，2-(三甲基硅烷基)乙氧基甲基，2-(对甲苯磺酰基)乙基，2-(对硝基苯磺酰基)乙基，2-(二苯基膦基)乙基，硝基乙基，等等。对于保护基团一般的描述可参考文献：T W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,NewYork,1991；and P.J.Kocienski,Protecting Groups,Thieme,Stuttgart,2005.

本发明所使用的“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的有机盐和无机盐。药学上可接受的盐在所属领域是为我们所熟知的，如文献：S.M.Berge et al.,describepharmaceutically acceptable salts in detail in J.Pharmaceutical Sciences,1977,66:1-19.所记载的。药学上可接受的无毒的酸形成的盐包括，但并不限于，与氨基基团反应形成的无机酸盐有盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐、高氯酸盐，和有机酸盐如乙酸盐、草酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、丙二酸盐，或通过书籍文献上所记载的其他方法如离子交换法来得到这些盐。其他药学上可接受的盐，包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、重硫酸盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊基丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、反丁烯二酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡萄糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐，等等。通过适当的碱得到的盐，包括碱金属，碱土金属，铵和N⁺(C₁-C₄烷基)₄的盐。本发明也拟构思了任何所包含N的基团的化合物所形成的季铵盐。水溶性或油溶性或分散产物可以通过季铵化作用得到。碱金属或碱土金属盐，包括钠、锂、钾、钙、镁，等等。药学上可接受的盐进一步包括适当的、无毒的铵，季铵盐和抗平衡离子形成的胺阳离子，如卤化物，氢氧化物，羧化物，硫酸化物，磷酸化物，硝酸化物，C_1-8磺酸化物和芳香磺酸化物。

如本发明所使用的术语“治疗”任何疾病或病症，在其中一些实施方案中指改善疾病或病症(即减缓或阻止或减轻疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一些实施方案中，“治疗”指缓和或改善至少一种身体参数，包括可能不为患者所察觉的身体参数。在另一些实施方案中，“治疗”指从身体上(例如稳定可察觉的症状)或生理学上(例如稳定身体的参数)或上述两方面调节疾病或病症。在另一些实施方案中，“治疗”指预防或延迟疾病或病症的发作、发生或恶化。

本发明公开化合物可含有不对称或手性中心，因此可以不同的立体异构体形式存在。本发明旨在使式(I)所示化合物的所有立体异构体形式，包括但不限于非对映异构体、对映异构体、阻转异构体和几何(或构象)异构体，以及它们的混合物如外消旋混合物，成为本发明的组成部分。

在本发明公开的结构中，当任意特定的手性原子的立体化学未指明时，则该结构的所有立体异构体都考虑在本发明之内，并且作为本发明公开化合物包括在本发明中。当立体化学被表示特定构型的实楔形线(solid wedge)或虚线指明时，则该结构的立体异构体就此明确和定义。

式(I)所示化合物可以以不同的互变异构体形式存在，并且所有这些互变异构体，如权利要求书所述的，都包括在本发明范围内。

式(I)所示化合物可以以盐的形式存在。在一些实施方案中，所述盐是指药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的”是指物质或组合物必须与包含制剂的其它成分和/或用其治疗的哺乳动物化学上和/或毒理学上相容。在另一些实施方案中，所述盐不一定是药学上可接受的盐，可以是用于制备和/或提纯式(I)所示化合物和/或用于分离本式(I)所示化合物的对映体的中间体。

可药用的酸加成盐可与无机酸和有机酸形成，例如乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、氯化物/盐酸盐、氯茶碱盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。

可以由其衍生得到盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。

可以由其衍生得到盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、羟基乙酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、磺基水杨酸等。

可药用碱加成盐可与无机碱和有机碱形成。

可以由其衍生得到盐的无机碱包括，例如铵盐和周期表的I族至XII族的金属。在某些实施方案中，该盐衍生自钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌和铜；特别适合的盐包括铵、钾、钠、钙和镁盐。

可以由其衍生得到盐的有机碱包括伯胺、仲胺和叔胺，取代的胺包括天然存在的取代的胺、环状胺、碱性离子交换树脂等。某些有机胺包括，例如，异丙胺、苄星青霉素(benzathine)、胆碱盐(cholinate)、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺(meglumine)、哌嗪和氨丁三醇。

本发明的可药用盐可以用常规化学方法由母体化合物、碱性或酸性部分来合成。一般而言，该类盐可以通过使这些化合物的游离酸形式与化学计量量的适宜碱(如Na、Ca、Mg或K的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应，或者通过使这些化合物的游离碱形式与化学计量量的适宜酸反应来进行制备。该类反应通常在水或有机溶剂或二者的混合物中进行。一般地，在适当的情况中，需要使用非水性介质如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。在例如“Remington′s Pharmaceutical Sciences”，第20版，Mack Publishing Company，Easton，Pa.，(1985)；和“药用盐手册：性质、选择和应用(Handbook of PharmaceuticalSalts：Properties，Selection，and Use)”，Stahl and Wermuth(Wiley-VCH，Weinheim，Germany，2002)中可找到另外一些适宜盐的列表。

另外，本发明公开的化合物、包括它们的盐，也可以以它们的水合物形式或包含其溶剂(例如乙醇、DMSO，等等)的形式得到，用于它们的结晶。本发明公开化合物可以与药学上可接受的溶剂(包括水)固有地或通过设计形成溶剂合物；因此，本发明旨在包括溶剂化的和未溶剂化的形式。

本发明给出的任何结构式也意欲表示这些化合物未被同位素富集的形式以及同位素富集的形式。同位素富集的化合物具有本发明给出的通式描绘的结构，除了一个或多个原子被具有所选择原子量或质量数的原子替换。可引入本发明化合物中的示例性同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，如²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁷O、¹⁸O、¹⁸F、³¹P、³²P、³⁵S、³⁶Cl和¹²⁵I。

另一方面，本发明所述化合物包括同位素富集的本发明所定义的化合物，例如，其中存在放射性同位素，如³H、¹⁴C和¹⁸F的那些化合物，或者其中存在非放射性同位素，如²H和¹³C。该类同位素富集的化合物可用于代谢研究(使用¹⁴C)、反应动力学研究(使用例如²H或³H)、检测或成像技术，如正电子发射断层扫描术(PET)或包括药物或底物组织分布测定的单光子发射计算机断层成像术(SPECT)，或可用于患者的放疗中。¹⁸F富集的化合物对PET或SPECT研究而言是特别理想的。同位素富集的式(I)所示化合物可以通过本领域技术人员熟悉的常规技术或本发明中的实施例和制备过程所描述使用合适的同位素标记试剂替代原来使用过的未标记试剂来制备。

此外，较重同位素特别是氘(即，²H或D)的取代可提供某些治疗优点，这些优点是由代谢稳定性更高带来的。例如，体内半衰期增加或剂量需求降低或治疗指数得到改善带来的。

术语“氘代物”指化合物中的任一位置的氢被氘(即，²H或D)替代后所得到的化合物。本发明中的氘被看作式(I)所示化合物的取代基。可以用同位素富集因子来定义该类较重同位素特别是氘的浓度。本发明所使用的术语“同位素富集因子”是指所指定同位素的同位素丰度和天然丰度之间的比例。如果本发明化合物的取代基被指定为氘，该化合物对各指定的氘原子而言具有至少3500(各指定氘原子处52.5％的氘掺入)、至少4000(60％的氘掺入)、至少4500(67.5％的氘掺入)，至少5000(75％的氘掺入)，至少5500(82.5％的氘掺入)、至少6000(90％的氘掺入)、至少6333.3(95％的氘掺入)、至少6466.7(97％的氘掺入)、至少6600(99％的氘掺入)或至少6633.3(99.5％的氘掺入)的同位素富集因子。本发明可药用的溶剂化物包括其中结晶溶剂可以是同位素取代的例如D₂O、丙酮-d₆、DMSO-d₆的那些溶剂化物。

包含本发明化合物的药物组合物

本发明的药物组合物包括(I)所示结构化合物，本发明所列出的化合物，或实施例中的化合物，或其立体异构体、互变异构体、氮氧化物、溶剂合物、氘代物、代谢产物以及药学上可接受的盐或前药，以及药学上可以接受的辅料。本发明的药物组合物中化合物的量能有效地可探测地抑制生物标本或患者体内的钠依赖性葡萄糖转运蛋白(sodium-dependent glucose transporters,SGLTs)的活性。

本发明的化合物存在自由形态，或合适的、作为药学上可接受的衍生物。本发明中所述的药学上可接受的衍生物包括，但并不限于，药学上可接受的前药、盐、酯、酯类的盐，或能直接或间接地根据患者的需要给药的其他任何加合物或衍生物，本发明其他方面所描述的化合物，其代谢产物或其残留物。

像本发明所描述的，本发明药学上可接受的药物组合物进一步包含药学上可接受的辅料，这些像本发明所应用的辅料，包括任何溶剂、稀释剂或其他液体赋形剂、分散剂或悬浮剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂、乳化剂、防腐剂、固体粘合剂或润滑剂等，适合于特定的目标剂型。如以下文献所描述的：In Remington:The Science and Practice ofPharmacy,21st edition,2005,ed.D.B.Troy,Lippincott Williams&Wilkins,Philadelphia,and Encyclopedia of Pharmaceutical Technology,eds.J.Swarbrickand J.C.Boylan,1988-1999,Marcel Dekker,New York,综合此处文献的内容，表明不同的辅料可应用于药学上可接受的药物组合物的制剂和它们公知的制备方法。除了任何常规的辅料与本发明的化合物不相容的范围，例如所产生的任何不良的生物效应或与药学上可接受的药物组合物的任何其他组分以有害的方式产生的相互作用，它们的用途也是本发明所考虑的范围。

可作为药学上可接受辅料的物质包括，但并不限于，离子交换剂，铝、硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白，如人血清蛋白，缓冲物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐，胶体硅，三硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，聚丙烯酸脂，蜡，聚乙烯-聚氧丙烯-阻断聚合体，羊毛脂，糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；填充剂，淀粉如玉米淀粉和土豆淀粉；纤维素和它的衍生物如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；树胶粉；麦芽；明胶；滑石粉；油如花生油、棉子油、红花油、麻油、橄榄油、玉米油和豆油；二醇类化合物，如丙二醇和聚乙二醇；酯类如乙基油酸酯和乙基月桂酸酯；琼脂；缓冲剂如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原的水；等渗盐；林格(氏)溶液；乙醇，磷酸缓冲溶液，和其他无毒的合适的润滑剂如月桂硫酸钠和硬脂酸镁，着色剂，释放剂，包衣衣料，甜味剂，调味剂和香料，粘合剂，稀释剂，赋形剂，防腐剂和抗氧化剂。

本发明的化合物可以以仅有的药学试剂或结合一个或多个其他附加治疗(药学的)剂来给药，其中联合用药引起可接受的不良反应，这对于糖尿病、糖尿病并发症以及其它相关疾病的治疗具有特殊的意义，所述的这些疾病包括，但并不限于，I型糖尿病、II型糖尿病、糖尿病性视网膜病、糖尿病性神经病、糖尿病性肾病、胰岛素抗性、高血糖、高胰岛素血症、血液中脂肪酸或甘油水平的升高、高脂血症、肥胖症、高甘油三酯血症、X综合症、糖尿病并发症、动脉粥样硬化、高血压等。本发明所使用的“附加治疗剂”包括已知的非SGLT-2抑制剂的抗糖尿病药物、抗高血糖药物、抗肥胖症药物、抗高血压药物、抗血小板药物、抗动脉粥样硬化药物、降脂药物或者消炎剂，或其组合。

其中，本发明所述的非SGLT-2抑制剂的抗糖尿病试剂包括，但并不限于双胍类药物(例如苯乙双胍、二甲双胍(metformin))、磺酰脲类药物(例如醋磺环已脲、氯磺丙脲(diabinese)、格列本脲(glibenclamide,优降糖)、格列吡嗪(glipizide,吡磺环已脲)、格列齐特(gliclazide,达美康)、格列美脲(glimepiride)、格列戊脲(glipentide)、格列喹酮(gliquidone)、妥拉磺脲及甲苯磺丁脲、氯茴苯酸(meglitinide))、格列奈类药物(例如瑞格列奈及那格列奈)、α-葡萄糖苷水解酶抑制剂(例如阿卡波糖(acarbose))、α-葡萄糖苷酶抑制剂(例如酯解素、卡格列波糖(camiglibose)、乙格列酯(emiglitate)、米格列醇(miglitol)、伏格列波糖(voglibose)、普那米星(pradimicin)及沙玻制菌素(salbostatin))、PPAR激动剂(例如巴格列酮(balaglitazone)、环格列酮(ciglitazone)、达格列酮(darglitazone)、恩格列酮(englitazone)、伊沙列酮(isaglitazone)、吡格列酮(pioglitazone)、罗格列酮(rosiglitazone)及曲格列酮(troglitazone))、PPARα/γ双激活剂(例如CLX-0940、GW-1536、GW-1929、GW-2433、KRP-297、L-796449、LR-90、MK-0767及SB-219994)、DPP-IV抑制剂(西格列汀(sitagliptin)、维格列汀(vidagliptin)、阿格列汀(alogliptin)、利格列汀(linagliptin)及沙格列汀(saxagliptin))、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)激动剂(乙先素-3(exendin-3)与乙先素-4(exendin-4))、蛋白质酪氨酸磷酸酶-1B(PTP1B)抑制剂(曲度奎明、海提索萃取物及由Zhang,S.等人，现代药物发现，12(9/10)，373-381(2007)所公开的化合物)、胰岛素、胰岛素拟似物、肝糖磷酸化酶抑制剂、VPAC2受体激动剂、葡萄糖激酶活化剂、糖原磷酸化酶抑制剂或者葡萄糖-6-磷酸酶抑制剂；αP2抑制剂、乙酰基-CoA羧化酶-2(ACC-2)抑制剂、磷酸二酯酶(PDE)-10抑制剂、二酰基甘油酰基转移酶(DGAT)1或2抑制剂、葡萄糖转运载体4(GLUT4)调节剂及谷氨酰胺-果糖-6-磷酸酰胺转移酶(GFAT)抑制剂。

其中，本发明所述的抗高血糖试剂包括，但并不限于双胍类药物(例如苯乙双胍、二甲双胍(metformin))、磺酰脲类药物(例如醋磺环已脲、氯磺丙脲(diabinese)、格列本脲(glibenclamide,优降糖)、格列吡嗪(glipizide,吡磺环已脲)、格列齐特(gliclazide,达美康)、格列美脲(glimepiride)、格列戊脲(glipentide)、格列喹酮(gliquidone)、妥拉磺脲及甲苯磺丁脲、氯茴苯酸(meglitinide))、格列奈类药物(例如瑞格列奈及那格列奈)、α-葡萄糖苷水解酶抑制剂(例如阿卡波糖(acarbose))、α-葡萄糖苷酶抑制剂(例如酯解素、卡格列波糖(camiglibose)、乙格列酯(emiglitate)、米格列醇(miglitol)、伏格列波糖(voglibose)、普那米星(pradimicin)及沙玻制菌素(salbostatin))、PPAR激动剂(例如巴格列酮(balaglitazone)、环格列酮(ciglitazone)、达格列酮(darglitazone)、恩格列酮(englitazone)、伊沙列酮(isaglitazone)、吡格列酮(pioglitazone)、罗格列酮(rosiglitazone)及曲格列酮(troglitazone))、PPARα/γ双激活剂(例如CLX-0940、GW-1536、GW-1929、GW-2433、KRP-297、L-796449、LR-90、MK-0767及SB-219994)、二肽基肽酶IV(DPP-IV)(例如西格列汀(sitagliptin)、维格列汀(vidagliptin)、阿格列汀(alogliptin)及沙格列汀(saxagliptin))、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)激动剂(乙先素-3(exendin-3)与乙先素-4(exendin-4))、蛋白质酪氨酸磷酸酶-1B(PTP1B)抑制剂(曲度奎明、海提索萃取物及由Zhang,S.等人，现代药物发现，12(9/10)，373-381(2007)所公开的化合物)、胰岛素、胰岛素拟似物、肝糖磷酸化酶抑制剂、VPAC2受体激动剂、葡萄糖激酶活化剂、糖原磷酸化酶抑制剂或者葡萄糖-6-磷酸酶抑制剂；αP2抑制剂、乙酰基-CoA羧化酶-2(ACC-2抑制剂)、磷酸二酯酶(PDE)-10抑制剂、二酰基甘油酰基转移酶(DGAT)1或2抑制剂、葡萄糖转运载体4(GLUT4)调节剂及谷氨酰胺-果糖-6-磷酸酰胺转移酶(GFAT)抑制剂。

其中，本发明所述的降脂试剂包括，但并不限于MTP抑制剂、HMG CoA还原酶抑制剂、角鲨烯合成酶抑制剂、贝特类降血脂药物、ACAT抑制剂、脂加氧酶抑制剂、胆固醇吸收抑制剂、回肠钠离子/胆汁酸协同转运蛋白抑制剂、LDL受体活性的向上调节物、胆汁酸螯合物或者烟酸以及其衍生物。其中一些实施例是，所述的降脂试剂选自普伐他汀、辛伐他汀、阿伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀、埃塔伐他汀或者罗素他汀。其中，所述的抗肥胖症试剂选自CB-1拮抗剂(例如利莫那班(rimonabant)、泰伦那班(taranabant)、溴乙那班(surinabant)、奥特那班(otenabant)、SLV319与AVE1625)、肠-选择性MTP抑制剂(例如地洛他派(dirlotapide)、米曲他匹德(mitratapide)及英普他派(implitapide))、CCKa激动剂、5HT2c激动剂(例如氯卡色林(lorcaserin))、MCR4激动剂、脂肪酶抑制剂(例如替丽斯特(Cetilistat))、PYY_3-36、类阿片拮抗剂(例如纳曲酮(naltrexone))、油酰基-雌酮、奥尼匹肽(obinepitide)、普拉林肽(pramlintide)、特索芬辛(tesofensine)、勒帕茄碱、利拉鲁肽(liraglutide)、溴麦角环肽、奥利司他(orlistat)、艾塞那肽(exenatide)、AOD-9604及西布曲明(sibutramide)。

其中，本发明所述的适当消炎剂包括生殖道/尿道感染预防与治疗药品，例如酸果蔓(Vaccinium macrocarpon)与酸果蔓衍生物，譬如酸果蔓汁液、酸果蔓萃液或酸果蔓的黄酮醇类。此外，其他的适当消炎剂还包括，但并不限于阿司匹林、非类固醇消炎药、糖皮质类固醇、柳氮磺吡啶和环氧酶II选择抑制剂等。

本发明的药物组合物可以是口服给药，注射给药，喷雾吸入法，局部给药，经直肠给药，经鼻给药，含服给药，阴道给药或通过植入性药盒给药。此处所使用的术语“注射给药”包括皮下的，静脉的，肌内的，关节内的，滑膜(腔)内的，胸骨内的，膜内的，眼内的，肝内的，病灶内的，和颅内的注射或输注技术。优选的药物组合物为口服给药，向腹膜内给药或静脉注射。本发明的药物组合物无菌的注射方式可以是水的或油脂性的悬浮液。这些悬浮液可以根据公知技术采用合适的分散剂、湿润剂和悬浮剂按配方制造。无菌注射剂可以是无菌注射液或悬浮液，是注射无毒的可接受的稀释剂或溶剂，如1,3-丁二醇溶液。这些可接受的赋形剂和溶剂可以是水，林格溶液和等渗氯化钠溶液。更进一步地，无菌的非挥发性的油按照惯例可以作为溶剂或悬浮介质。

以此为目的，任何温和的非挥发性的油可以是合成的单或二葡萄糖基甘油二酯。脂肪酸，如油酸和它的甘油酯衍生物可用于血管注射剂的制备，作为天然的药学上可接受的油脂，如橄榄油或蓖麻油，特别是它们的聚氧乙烯衍生物。这些油溶液或悬浮液可以包含长链醇稀释剂或分散剂，如羧甲基纤维素或相似分散剂，一般用于药学上可接受剂型的药物制剂包括乳化液和悬浮液。其他常用的表面活性剂，如吐温类，司盘类和其他乳化剂或生物药效率的强化剂，一般用于药学上可接受的固体、液体，或其他剂型，并可以应用于目标药物制剂的制备。

本发明化合物和药物组合物的用途

本发明的化合物或药物组合物中化合物的量可以有效地可探测地抑制钠依赖性葡萄糖转运蛋白(sodium-dependent glucose transporters,SGLTs)的活性，尤其是SGLT-2的活性。SGLT-2负责重吸收来自肾脏的肾小球滤液中的D-葡萄糖，抑制葡萄糖在血管中的重吸收有利于降低血糖浓度。因此，本发明的化合物将应用于糖尿病和相关疾病的预防、治疗或者改善这些疾病的症状。

本发明的化合物将应用于，但绝不限于，使用本发明的化合物或药物组合物的有效量对患者给药来预防或治疗患者糖尿病和相关疾病，或者减轻糖尿病和相关疾病症状，或者延缓糖尿病和相关疾病的发展或发作或用于增加高密度脂蛋白的水平。这样的疾病包括，但并不限于糖尿病，尤其是II型糖尿病，以及糖尿病性视网膜病、糖尿病性神经病、糖尿病性肾病、胰岛素抗性、高血糖、高胰岛素血症、血液中脂肪酸或甘油水平的升高、高脂血症、肥胖症、高甘油三酯血症、X综合症、糖尿病并发症、动脉粥样硬化、高血压。

此外，本发明化合物或药物组合物还适于预防和治疗糖尿病性后期损伤，例如肾病、视网膜病、神经病、以及心肌梗塞、外周动脉闭合疾病、血栓形成、动脉硬化、炎症、免疫疾病、自身免疫性疾病如AIDS、哮喘、骨质疏松症、癌症、牛皮癣、阿尔茨海默氏症、精神分裂症和感染性疾病。

本发明的化合物除了对人类治疗有益以外，还可应用于兽医治疗宠物、引进品种的动物和农场的动物，包括哺乳动物，啮齿类动物等等。另外一些动物的实例包括马、狗和猫。在此，本发明的化合物包括其药学上可接受的衍生物。

本发明的化合物或药学上可接受的药物组合物的“有效量”、“有效治疗量”或“有效剂量”是指处理或减轻一个或多个本发明所提到病症的严重度的有效量。本发明的化合物或药学上可接受的药物组合物在相当宽的剂量范围内是有效的。例如，每天服用的剂量约在0.1mg～1000mg/人范围内，分为一次或数次给药。根据本发明的方法、化合物和药物组合物可以是任何给药量和任何给药途径来有效地用于处理或减轻疾病的严重程度。必需的准确的量将根据患者的情况而改变，这取决于种族，年龄，患者的一般条件，感染的严重程度，特殊的因素，给药方式等。本发明的化合物或药物组合物可以和一个或多个其他治疗剂联合给药，如本发明所讨论的。

附图说明

图1：为苯甲醛二甲缩醛保护的化合物(I)，即化合物(I-n)的H-H NOESY谱图

一般合成和检测方法

在本说明书中，如果在化学名称和化学结构间存在任何差异，以结构为准。

所属领域的技术人员将认识到：本发明所描述的化学反应可以用来合适地制备许多与本发明所述的化合物相似的化合物。所属领域的技术人员通过修饰方法，如适当的保护基团，通过利用其他已知的试剂除了本发明所描述的，或将反应条件做一些常规的修改也可以实现本发明，这些常规的制备方法修改也应当认为是属于本发明的范围。另外，本发明所公开的反应或已知的反应条件也公认地适用于其他与本发明所述的化合物相似的化合物的制备。

一般地，本发明所描述的方法能制备得到本发明如式(I)所示的化合物。下面的实施例用于进一步举例说明本发明的内容。

(R,S)-非对映体混合物(1R,2S,3S,4R,5S)-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-1-(1-羟乙基)-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-2,3,4-三醇参照PCT/CN2014/087587(WO2015043511)所述方法制备，因此将该公开内容作为参考文献。

化合物的结构是通过核磁共振(¹H-NMR、¹³C-NMR)来确定的。¹H-NMR、¹³C-NMR化学位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。¹H-NMR、¹³C-NMR的测定是用Bruker Ultrashield-400核磁共振谱仪和Bruker Avance III HD 600核磁共振谱仪，测定溶剂为氘代氯仿(CDCl₃)、氘代甲醇(CD₃OD)或者氘代DMSO(DMSO-d₆)，用TMS(0ppm)或氘代氯仿(7.26ppm)作为参照标准。当出现多重峰的时候，将使用下面的缩写：s(singlet，单峰),d(doublet，双峰),t(triplet，三重峰),m(multiplet，多重峰),br(broadened，宽峰),dd(doublet ofdoublets，四重峰),dt(doublet of triplets，双三重峰),ddd(doublet of doubletofdoublets，双双二重峰),ddt(doublet of doublet of triplets，双双三重峰),td(triplet of doublets，三双重峰),brs(broadened singlet，宽单峰)。偶合常数，用赫兹(Hz)表示。

其中，中间体化合物(I-m)中与桥头碳连接的手性碳的的绝对构型是通过Mosher法进行确认的：

将化合物(I-m)分别与(R)-2-甲氧基-2-三氟甲基苯乙酸，即(R)-MTPA和(S)-2-甲氧基-2-三氟甲基苯乙酸，即(S)-MTPA反应制备得到Mosher酯，即(R)-MTPA酯和(S)-MTPA酯，用Bruker Ultrashield-400核磁共振谱仪分别测定两种Mosher酯的¹H-NMR，溶剂为DMSO-d₆，并计算得到该手性碳上的羟基的β-H的位移差值(△δ＝△δ_S–△δ_R)，根据β-H位移差值的正负就可以得出化合物(I-m)中与桥头碳连接的手性碳的绝对构型。

化合物(I)中与桥头碳连接的手性碳的绝对构型可以通过H-H NOESY法确定，将化合物(I)与苯甲醛二甲缩醛反应，得到化合物(I-n)，使用Bruker Avance III HD 600核磁共振谱仪测定该化合物的H-H NOESY谱图，溶剂为DMSO-d₆，根据H-H NOESY谱图中的NOE信号情况可以得出该化合物分子立体结构中各个氢原子的空间位置关联，进而可以判断出与桥头碳连接的手性碳的绝对构型。

MS的测定用Agilen-6120 Quadrupole LC/MS质谱仪；

薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254硅胶板。

柱层析一般使用青岛海洋化工200目～300目或300目～400目硅胶为载体。

本发明的起始原料是已知的，并且可以在市场上购买到得，购买自上海韶远公司(Shanghai Accela Company)、安耐吉公司(Energy Company)、百灵威公司(J&K)、成都艾尔泰公司(Chengdu Aiertai Company)、天津阿法埃莎公司(Alfa Company)等公司，或者按照本领域已知的方法来合成。

实施例中无特殊说明的，反应均在氮气氛下进行；

氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氮气气球或钢釜；

氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球或者是一个约1L容积的不锈钢高压反应釜；

实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。

实施例中无特殊说明，反应温度为室温；

室温是指20℃～30℃。

实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂体系有：二氯甲烷和甲醇体系，二氯甲烷和乙酸乙酯体系，石油醚(或正己烷、环己烷或正庚烷等)和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节。

柱层析的洗脱剂的体系包括：A：石油醚(或正己烷、环己烷或正庚烷等)和乙酸乙酯体系，B：二氯甲烷和乙酸乙酯体系，C：二氯甲烷和甲醇体系。溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的氨水或醋酸等进行调节。

HPLC是指高效液相色谱；

HPLC的测定使用安捷伦1200高压液相色谱仪(Zorbax Eclipse Plus C18 150×4.6mm色谱柱)；

HPLC测试条件：运行时间：30min 柱温：35℃ PDA：210nm,254nm

流动相：A相：H₂O B相：乙腈 流速：1.0mL/min

下面简写词的使用贯穿本发明：

生物测试试验中的分析用的LC/MS/MS系统包括Agilent 1200系列真空脱气炉，二元注射泵，孔板自动采样器，柱恒温箱，带电喷雾电离(ESI)源的Agilent G6430三级四级杆质谱仪。定量分析在MRM模式下进行，MRM转换的参数如表A所示：

表A

多反应检测扫描	490.2→383.1
		碎裂电压	230V
毛细管电压	55V
		干燥气温度	350℃
雾化器	0.28MPa
		干燥气流速	10L/min

分析使用Agilent XDB-C18，2.1×30mm，3.5μM柱，注入5μL样品。分析条件：流动相为0.1％的甲酸水溶液(A)和0.1％的甲酸甲醇溶液(B)。流速为0.4mL/min。流动相梯度如表B所示：

表B

时间	流动相B的梯度
		0.5min	5％
1.0min	95％
		2.2min	95％
2.3min	5％
		5.0min	终止

此外，用于分析的还有Agilent 6330系列LC/MS/MS光谱仪，配备有G1312A二元注射泵，G1367A自动采样器和G1314C UV检测器；LC/MS/MS光谱仪采用ESI放射源。使用标准液对每一个分析物进行合适的阳离子模型处理和MRM转换进行最佳的分析。在分析期间使用Capcell MP-C18柱，规格为：100×4.6mm I.D.，5μM(Phenomenex,Torrance,California,USA)。流动相是：5mM醋酸铵/0.1％甲醇水溶液(A)和5mM醋酸铵/0.1％甲醇乙腈溶液(B)；(70:30，v/v)；流速为0.6mL/min；柱温保持在室温；注入20μL样品。

具体实施方式

本发明实施例公开了制备光学纯的(1R,2S,3S,4R,5S)-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-1-[(1R)-1-羟乙基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-2,3,4-三醇的方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容，或者适当改进工艺参数来实现本发明的内容。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明的范围中。本发明的方法已经通过实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容和范围内对本文所述的方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明的技术。

为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明进行详细说明。

实施例

实施例1[(1S,2S,3S,4R,5S)-2,3,4-三苄氧基-5-[4-氯-3-[(4-乙氧基苯基)甲基]苯基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-1-甲醛(I-l)

步骤1(3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三(三甲基硅氧基)-6-[(三甲基硅氧基)甲基]-四氢 吡喃-2-酮(I-b)

在0℃下，将三甲基氯硅烷(213mL,1.68mol)在2小时内，缓慢滴入到N-甲基吗啉(246.8mL,2.24mol)与(3R,4S,5S,6R)-3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢吡喃-2-酮I-a(50g,0.28mol,购自阿拉丁)的无水四氢呋喃(500mL)溶液中，室温搅拌8小时。向混合物中加入1L水淬灭反应，分液，有机相用饱和磷酸氢二钾(100mL×3)和饱和食盐水洗涤(100mL×3)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，残余物经硅胶柱层析纯化[石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝40/1]，得到标题化合物I-b(125.2g,无色油状物)，产率：100％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm):4.17(m,1H),3.99(d,1H),3.89(t,1H),3.81(m,3H),0.18(s,9H),0.17(s,9H),0.15(s,9H),0.11(s,9H).

步骤2(2S,3R,4S,5R,6R)-2-[4-氯-3-[(4-乙氧基苯基)甲基]苯基]-3,4,5-三(三 甲基硅氧基)-6-(三甲基硅氧基甲基)四氢吡喃-2-醇(I-d)

在–78℃下，氮气氛中，将正丁基锂的正己烷溶液(40.3mL,96.7mmol,2.4M)滴加到2-[(4-乙氧基苯基)甲基]苯基-4-溴-1-氯苯I-c(30g,92.1mmol,购买于上海金赛医药公司)的无水四氢呋喃(250mL)溶液中，在–78℃下继续搅拌40分钟后，将(3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三(三甲基硅氧基)-6-[(三甲基硅氧基)甲基]-四氢吡喃-2-酮I-b(47.3g,101.3mmol)的无水四氢呋喃(50mL)溶液滴加到反应体系中。滴加完毕，在–78℃下继续搅拌5小时，然后保持–78℃，并缓慢加入100mL饱和氯化铵水溶液淬灭反应，升温至室温，减压浓缩除去大部分溶剂。残余物加入150mL水，乙酸乙酯萃取(150mL×3)，有机相用饱和食盐水洗涤(200mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，得到标题化合物I-d(69.7g,淡黄色油状物)，产率：100％。粗产物直接用于下一步。

步骤3(2S,3R,4S,5S,6R)-2-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-6-(羟甲基)-2- 甲氧基-四氢吡喃-3,4,5-三醇(I-e)

在室温下，将一水合对甲苯磺酸(8.76g,46.06mmol)加入到(2S,3R,4S,5R,6R)-2-[4-氯-3-[(4-乙氧基苯基)甲基]苯基]-3,4,5-三(三甲基硅氧基)-6-(三甲基硅氧基甲基)四氢吡喃-2-醇I-d(65.7g,92.13mmol)的甲醇(300mL)溶液中，室温搅拌12小时。用饱和碳酸氢钠水溶液调节至溶液pH＝7，减压浓缩除去大部分溶剂。残余物加入100mL水，用乙酸乙酯萃取(200mL×3)，合并有机相。有机相用饱和食盐水(200mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，所得残余物经重结晶[甲苯/正己烷(v/v)＝1/1]，得到标题化合物I-e(29.0g,白色网状固体)，产率：71.6％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.52(s,1H),7.39(m,2H),7.08(m,2H),6.83(m,2H),4.96(d,1H),4.73(m,2H),4.52(t,1H),4.09-3.94(m,4H),3.76-3.72(m,1H),3.61-3.51(m,2H),3.38(m,1H),3.23(m,1H),2.92(s,3H),2.89(m,1H),1.29(t,3H).

步骤4(2S,3R,4S,5S,6R)-6-[(叔丁基(二甲基)硅基)氧基甲基]-2-[4-氯-3-[(4- 乙氧基苯基)甲基]苯基]-2-甲氧基-四氢吡喃-3,4,5-三醇(I-f)

在室温下，将咪唑(25.5g,374.7mmol)加入到(2S,3R,4S,5S,6R)-2-[4-氯-3-[(4-乙氧基苯基)甲基]苯基]-6-(羟甲基)-2-甲氧基-四氢吡喃-3,4,5-三醇I-e(82.2g,187.4mmol)的二氯甲烷(800mL)溶液中，将得到的混合物降温至0℃后，加入叔丁基二甲基氯硅烷(56.7g,374.7mmol)，在0℃下继续搅拌2小时。保持0℃下，加入饱和碳酸氢钠水溶液调节至反应液pH＝7，分液，有机相用水洗(100mL×2)，饱和食盐水洗涤(100mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，得到标题化合物I-f(119g,黄色油状物)，产率：100％。粗产物直接用于下一步。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.37(m,2H),7.30(m,1H),6.08(m,2H),6.80(m,2H),4.02-3.88(m,7H),3.67(m,2H),3.22(m,1H),3.08(s,3H),1.40(t,3H),0.90(s,9H),0.12(s,3H),0.09(s,3H).

步骤5叔丁基-二甲基-[[(2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5-三苄氧基-6-[4-氯-3-[(4-乙 氧基苯基)甲基]苯基]-6-甲氧基-四氢吡喃-2-基]甲氧基]硅烷(I-g)

在0℃下，将(2S,3R,4S,5S,6R)-6-[[叔丁基(二甲基)硅基]氧基甲基]-2-[4-氯-3-[(4-乙氧基苯基)甲基]苯基]-2-甲氧基-四氢吡喃-3,4,5-三醇I-f(150g,0.271mol)的无水四氢呋喃(800mL)溶液滴加到60％氢化钠(65.4g,1.627mol)的无水四氢呋喃(100mL)溶液中，保持0℃下搅拌1小时。升至室温，依次加入苄溴(113mL,951.84mmol)，四丁基碘化铵(3.91g,10.6mmol)后，升温至40℃搅拌12小时。在0℃下滴加50mL水淬灭反应，减压浓缩除去大部分溶剂，向残余物中加入200mL水，乙酸乙酯萃取(150mL×3)，分液，有机相用饱和食盐水洗涤(200mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，所得残余物经硅胶柱层析纯化[石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝20/1]，得到标题化合物I-g(97g，黄色油状物)，产率：43.5％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.46(m,1H),7.35(m,12H),7.20(m,3H),7.04(m,4H),6.74(m,2H),4.90(m,3H),4.72(d,1H),4.50(d,1H),4.15(t,1H),4.05(d,1H),3.97(m,3H),3.80(m,3H),3.75(m,1H),3.65(m,1H),3.29(d,1H),3.05(s,3H),1.38(t,3H),0.90(s,9H),0.11(s,3H),0.08(s,3H).

步骤6[(2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5-苄氧基-6-[4-氯-3-[(4-乙氧基苯基)甲基]苯 基]-6-甲氧基-四氢吡喃-2-基]甲醇(I-h)

在室温下，将四丁基氟化铵(53.4g,204.2mmol)加入到叔丁基-二甲基-[[(2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5-三苄氧基-6-[4-氯-3-[(4-乙氧基苯基)甲基]苯基]-6-甲氧基-四氢吡喃-2-基]甲氧基]硅烷I-g(84.1g,102.1mmol)的四氢呋喃(400mL)溶液中，室温搅拌2小时。用100mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，分液，保留有机相，水相用乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合并的有机相用饱和食盐水洗涤(200mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，所得残余物经硅胶柱层析纯化[石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝10/1]，得到标题化合物I-h(56.3g,黄色油状物)，产率：77.8％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.34(m,13H),7.25(m,3H),7.04(m,2H),6.99(m,2H),6.77(m,2H),4.90(m,3H),4.69(d,1H),4.49(d,1H),4.16(t,1H),4.10(d,1H),4.00(m,2H),3.98(m,2H),3.81(m,1H),3.70(m,1H),3.68(m,1H),3.66(m,1H),3.29(d,1H),3.06(s,3H),1.75(brs,1H),1.38(t,3H).

步骤7(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-苄氧基-6-[4-氯-3-[(4-乙氧基苯基)甲基]苯 基]-6-甲氧基-四氢吡喃-2-甲醛(I-i)

在室温下，将2-碘酰基苯甲酸(6.83g,24.39mmol)加入到[(2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5-苄氧基-6-[4-氯-3-[(4-乙氧基苯基)甲基]苯基]-6-甲氧基-四氢吡喃-2-基]甲醇I-h(8.65g,12.19mmol)的二氯甲烷(300mL)溶液中，加热至45℃回流搅拌36小时。加150mL水淬灭反应，分液，有机相用饱和食盐水洗涤(150mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，得到标题化合物I-i(7.57g,黄色油状物)，产率：87.8％。粗产物直接用于下一步。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.74(d,1H),7.39-7.19(m,16H),7.03-7.00(m,4H),6.76(m,2H),4.90(m,3H),4.70(d,1H),4.48(d,1H),4.23(t,1H),4.15-4.07(m,2H),3.99-3.75(m,5H),3.31(d,1H),3.07(s,3H),1.38(t,3H).

步骤8[(3S,4S,5R,6S)-3,4,5-三苄氧基-6-[4-氯-3-[(4-乙氧基苯基)甲基]苯 基]-2-(羟甲基)-6-甲氧基-四氢吡喃-2-基]甲醇(I-j)

在室温下，将氢氧化钠(1.22g,30.56mmol)分批加入到(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-苄氧基-6-[4-氯-3-[(4-乙氧基苯基)甲基]苯基]-6-甲氧基-四氢吡喃-2-甲醛I-i(13.5g,19.1mmol)的异丙醇/二氧六环(95mL,v/v＝18/1)的混合溶液中，再加入37％甲醛溶液(38.7mL,477.5mmol)，室温搅拌48小时。用饱和氯化铵水溶液调节至溶液pH＝7，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，有机相用水洗(25mL×2)，饱和食盐水洗涤(25mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，所得残余物经硅胶柱层析纯化[石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝5/1]，得到标题化合物I-j(4.63g,黄色油状物)，产率：32.8％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.37(m,6H),7.22(m,10H),7.05(m,2H),7.02(m,2H),6.79(m,2H),4.95(m,3H),4.69(d,2H),4.38(m,1H),4.09(m,2H),4.04-3.96(m,4H),3.83(m,3H),3.66(m,1H),3.25(m,1H),3.06(s,3H),1.72(t,1H),1.39(t,3H).

步骤9[(1S,2S,3S,4R,5S)-2,3,4-三苄氧基-5-[4-氯-3-[(4-乙氧基苯基)甲基] 苯基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-1-基]甲醇(I-k)

在室温下，将一水合对甲苯磺酸(0.32g,1.69mmol)加入到[(3S,4S,5R,6S)-3,4,5-三苄氧基-6-[4-氯-3-[(4-乙氧基苯基)甲基]苯基]-2-(羟甲基)-6-甲氧基-四氢吡喃-2-基]甲醇I-j(2.49g,3.37mmol)的二氯甲烷(300mL)溶液中，室温搅拌1小时。用30mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，二氯甲烷萃取(20mL×2)，有机相用饱和食盐水洗涤(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，残余物经硅胶柱层析纯化[石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝7/1]，得到标题化合物I-k(1.06g,浅黄色油状物)，产率：44.5％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.45(d,1H),7.40(m,12H),7.30(m,3H),7.09(m,2H),6.91(m,2H),6.78(m,2H),4.88(m,3H),4.78(d,1H),4.29(m,2H),4.11-3.96(m,6H),3.88(d,1H),3.80(m,2H),3.71(m,2H),1.85(t,1H),1.41(t,3H).

步骤10[(1S,2S,3S,4R,5S)-2,3,4-三苄氧基-5-[4-氯-3-[(4-乙氧基苯基)甲基] 苯基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-1-甲醛I-l

在室温下，将[(1S,2S,3S,4R,5S)-2,3,4-三苄氧基-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-1-基]甲醇I-k(100.0g,141.4mmol)溶于二氯甲烷(800mL)溶液中降温至3℃后，依次加入溴化钾(10.1g,84.9mmol)、2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物(2.23g,14.1mmol)和饱和碳酸氢钠水溶液(2500mL,2000mmol)，加完搅拌1分钟后，加入次氯酸钠溶液(210mL,368mmol,d＝1.25g/m³)，继续搅拌15分钟。静置分液，将有机层用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩，得到标题化合物I-l(99.7g，红色油状物)，产率：100％。

¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):9.63(s,1H),7.36(m,12H),7.20(m,4H),7.08(d,2H),6.89(d,2H),6.77(d,2H),4.95(m,1H),4.87(m,2H),4.76(d,1H),4.51(d,1H),4.26(m,1H),4.03(m,7H),3.86(d,1H),3.72(d,1H),1.41(t,3H).

实施例2(1R)-1-[(1R,2S,3S,4R,5S)-2,3,4-三苄氧基-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-1-基]乙醇I-m

在室温下，将手性配体Cr-Salen(11.0g,17.4mmol,0.15当量)加入到[(1S,2S,3S,4R,5S)-2,3,4-三苄氧基-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-1-甲醛I-l(82.0g,116mmol,1.0当量)的甲苯(600mL)溶液中。反应液在氮气保护下，室温搅拌30分钟后，降温至–10℃，在1小时内缓慢加入二甲基锌的正己烷溶液(150.8mL,150.8mmol,1.3当量,1.0M)，室温反应20小时。在–10℃下，用50mL水淬灭反应，水相用乙酸乙酯萃取(100mL×2)，合并有机相，水洗(500mL×2)，饱和食盐水洗涤(500mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，得到标题化合物的粗产物I-m(115g,红棕色油状物)。

纯化：将115g红棕色油状物用石油醚/乙酸乙酯(v/v＝4/1,100mL)打浆，室温搅拌10小时，过滤，用石油醚/乙酸乙酯(v/v＝30/1,40mL)洗涤滤饼，收集滤饼，真空干燥，得到纯化后的目标产物I-m(46.0g,黄色固体,HPLC:90.8％,ee:96.7％)，产率：53.0％。

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.48(dd,2H),7.41(dd,1H),7.37-7.32(m,2H),7.32-7.24(m,8H),7.24-7.16(m,3H),7.05(d,2H),6.85(d,2H),6.75(d,2H),5.04(s,1H),4.79(m,4H),4.26(d,1H),4.12(d,1H),4.00(dd,2H),3.96-3.84(m,5H),3.79(d,1H),3.73(dd,2H),1.29(t,3H),1.15(d,3H).

绝对构型的确认：

根据前述Mosher法，计算得到与桥头碳连接的手性碳上的羟基的β-H位移差值(△δ＝△δ_S–△δ_R)为正值，即△δ>0，根据Mosher法确定构型的方法，最终确定化合物(I-m)中与桥头碳连接的手性碳的绝对构型为(R)-型。

化合物(I-m)的合成还可以按照表1的条件进行；表1所示的化合物(I-m)的合成条件均参照实施例2中所述的方法实施。

表1：合成化合物(I-m)的试验条件及结果

注：反应溶剂均为甲苯

Salen配体、Zn-Salen配体、Mn-Salen配体和Cr-Salen配体分别为以下结构：

实施例3(1R,2S,3S,4R,5S)-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-1-[(1R)-1-羟乙基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-2,3,4-三醇(I)

在室温下，依次将10％钯/碳(0.55g,5.2mmol)和浓盐酸(17mL,395mmol,12M)加入(1R)-1-[(1R,2S,3S,4R,5S)-2,3,4-三苄氧基-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-1-基]乙醇I-m(46.0g,63.7mmol)的甲醇/四氢呋喃(v/v＝10/1,440mL)溶液中，室温下，氢气氛下搅拌反应2小时。过滤除去钯/碳，滤液减压浓缩，得到的残留物溶于100mL乙酸乙酯，用饱和碳酸氢钠水溶液调节至pH＝7，饱和食盐水洗涤(100mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，所得残余物经硅胶柱层析纯化[100％乙酸乙酯]，得到目标产物I(22.0g，白色固体,HPLC:92.4％,ee:97.1％)，产率：90.0％。

MS(ESI,pos.ion)m/z:451.2[M+H]⁺；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.41(dd,2H),7.35-7.29(m,1H),7.11(d,2H),6.84(d,2H),5.30(d,1H),5.01(d,1H),4.92(d,1H),4.64(d,1H),4.03-3.95(m,5H),3.85(m,1H),3.78(d,1H),3.59-3.53(m,1H),3.44(dd,1H),3.38(m,1H),1.30(t,3H),1.18(d,3H).

绝对构型的确认：

将化合物(I)与苯甲醛二甲缩醛反应，得到其衍生物化合物(I-n)。测定化合物(I-n)的H-H NOESY谱(如图1所示)，将化合物的各个位置的氢原子如式(I-n)中所示进行编号，根据H-H NOESY谱图中的NOE信号情况，谱图解析结果如下表2所示：

表2化合物(I-n)H-H NOESY谱图中主要氢的相关NOE数据表

8→9(弱)	7→9(无)	6→8(很弱)	3→7(强)
				8→7(中强)	7→8(中强)	6→7(强)	3→6(强)
8→6(很弱)	7→6(强)	6→3(强)	3→2(中强)
				--	7→3(中强)	--	3→1(强)

根据上表可以判断出化合物(I)中与桥头碳连接的手性碳的绝对构型为(R)-型。

化合物(I)即(R)-型异构体，还可以通过如下实施例4的制备方法得到，具体的方法如下所示：

实施例4(1R,2S,3S,4R,5S)-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-1-[(1R)-1-羟乙基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-2,3,4-三醇(I)

步骤1 1-[(1R,2S,3S,4R,5S)-2,3,4-三苄氧基-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基] 苯基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-1]-乙醇I-r

在–10℃下，氮气氛中，将甲基溴化镁乙醚溶液(2.13mL,6.39mmol,3M)在5分钟内加入到[(1S,2S,3S,4R,5S)-2,3,4-三苄氧基-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-1-甲醛I-l(3.02g,4.26mmol)的四氢呋喃(40mL)溶液中，升至室温搅拌16小时。用5mL水淬灭反应，分液，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×2)，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，所得残余物经硅胶柱层析纯化[EA/PE(v/v)＝1/10],分离纯化，得到标题化合物I-r(2.0g,浅黄色油状物)，产率：65.0％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.48(m,2H),7.45(m,1H),7.30(m,10H),7.19(m,3H),7.05(m,2H),6.85(m,2H),6.75(m,2H),5.04(m,1H),4.80(m,3H),4.30(d,1H),4.11(m,1H),4.01(m,3H),3.98(m,5H),3.79(m,2H),1.28(t,3H),1.13(d,3H)。

步骤2 1-[(1R,2S,3S,4R,5S)-2,3,4-三苄氧基-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基] 苯基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-1-基]乙酮I-s

在0℃下，依次将饱和碳酸氢钠溶液(7.4mL,6.9mmol)、溴化钾(50mg,0.42mmol)、2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物(10mg,64mmol)加入到1-[(1R,2S,3S,4R,5S)-2,3,4-三苄氧基-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-1-基]乙醇I-r(0.5g,0.69mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中，将次氯酸钠溶液(1.5mL,1.8mmol,活性氯的含量为3.28％)滴加到该体系中，在0℃下搅拌反应0.5小时。分液，保留有机相，水相用二氯甲烷萃取(10mL×2)，合并的有机相用饱和食盐水洗涤(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，所得残余物经硅胶柱层析纯化[石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝4/1]，得到标题化合物I-s(0.25g,白色固体)，产率：50.0％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.37(m,12H),7.20(m,4H),7.08(d,2H),6.90(d,2H),6.77(d,2H),4.86(dd,2H),4.73(d,1H),4.62(d,1H),4.51(d,1H),4.27(d,1H),4.00(m,7H),3.88(d,1H),3.73(d,1H),2.14(s,3H),1.41(t,3H)。

步骤3(1R)-1-[(1R,2S,3S,4R,5S)-2,3,4-三苄氧基-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基) 甲基]苯基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-1-基]乙醇I-m

在室温下，将三乙酰氧基硼氢化钠(0.18g,0.84mmol)加入1-[(1R,2S,3S,4R,5S)-2,3,4-三苄氧基-5-[4-氯-3-[(4-乙氧基苯基)甲基]苯基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-1-基]乙酮I-s(0.3g,0.42mmol)的乙酸乙酯(10mL)溶液中，反应5小时。用1mL水淬灭反应，分液，有机相水洗(3mL×2)，饱和食盐水洗涤(3mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，残余物经硅胶柱层析纯化[石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1/2]，得到得到标题化合物I-m(0.17g,黄色固体，粗产物)。

进一步纯化：将白色固体粗产物用石油醚/乙酸乙酯(v/v＝4/1,10mL)打浆，室温搅拌10小时，抽滤，用石油醚/乙酸乙酯(v/v＝30/1,4mL)洗涤滤饼，收集滤饼，重复前述打浆方法3～5次，然后抽滤，收集滤饼，真空干燥，得到纯化后的目标产物I-m(白色固体,HPLC:90.8％,ee:96.7％)。

化合物(I-m)的合成还可以按照表3的条件进行；表3所示的化合物(I-m)的合成参照实施例4步骤3中所述的方法实施。

表3：合成化合物(I-m)的方法二的试验条件及结果

注：化合物(I-s)用量为1.0当量

步骤4(1R,2S,3S,4R,5S)-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-1-[(1R)-1-羟 乙基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-2,3,4-三醇I

在室温下，氮气氛中，依次将10％钯/碳(0.55g,5.2mmol)和浓盐酸(17mL,395mmol,12M)加入(1R)-1-[(1R,2S,3S,4R,5S)-2,3,4-三苄氧基-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-1-基]乙醇I-m(46.0g,63.7mmol)的甲醇/四氢呋喃(v/v＝10/1,440mL)溶液中，室温下氢化反应2小时。过滤除去钯/碳，滤液减压浓缩，残留物溶于100mL乙酸乙酯，用饱和碳酸氢钠水溶液调节至溶液pH＝7，饱和食盐水洗涤(100mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，残留物经硅胶柱层析纯化[100％乙酸乙酯]，得到目标产物I(22.0g，白色固体,HPLC:92.4％,ee:97.1％)，产率：90.0％。

MS(ESI,pos.ion)m/z:451.2[M+H]⁺；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.41(dd,2H),7.35-7.29(m,1H),7.11(d,2H),6.84(d,2H),5.30(d,1H),5.01(d,1H),4.92(d,1H),4.64(d,1H),4.03-3.95(m,5H),3.85(m,1H),3.78(d,1H),3.59-3.53(m,1H),3.44(dd,1H),3.38(m,1H),1.30(t,3H),1.18(d,3H).

实施例5(1R,2S,3S,4R,5S)-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-1-[(1S)-1-羟乙基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-2,3,4-三醇即：(S)-型异构体

参照PCT/CN2014/087587(WO2015043511)所述方法制备得到(R,S)-非对映体混合物(1R,2S,3S,4R,5S)-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-1-(1-羟乙基)-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-2,3,4-三醇，然后使用上海申越试验器材有限公司的Calesep PUMP 250型制备色谱仪和Novasep公司的Novasep LC-50型制备柱，对(R)-型异构体和(S)-型异构体进行拆分。将样品(R,S)-非对映体混合物以甲醇溶解，经0.45μm孔径的有机滤膜过滤后进样。分析条件：流动相为64％甲醇(B)和36％的水(A)，流速为85mL/min，

检测波长为224nm和276nm。按照此方法分离得到光学纯的(S)-型异构体。

MS(ESI,pos.ion)m/z:451.2[M+H]⁺；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.44-7.36(m,2H),7.31(d,1H),7.10(d,2H),6.83(d,2H),5.15(d,1H),4.99(d,1H),4.94(d,1H),4.57(d,1H),4.06(d,1H),3.97(m,4H),3.87-3.79(m,1H),3.77(dd,1H),3.50(d,1H),3.44(dd,1H),3.38(d,1H),1.29(t,3H),1.11(d,3H).

测试例

一.SGLT-2和SGLT-1抑制活性测定

试验目的：

下面的方法是用来测定本发明化合物(I)及其(S)-型异构体、(R,S)-非对映体混合物对SGLT-1和SGLT-2的抑制活性。

受试化合物：

化合物(I)即(R)-型异构体：(1R,2S,3S,4R,5S)-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-1-[(1R)-1-羟乙基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-2,3,4-三醇

(S)-型异构体：(1R,2S,3S,4R,5S)-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-1-[(1S)-1-羟乙基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-2,3,4-三醇

(R,S)-非对映体混合物：(1R,2S,3S,4R,5S)-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-1-[1-羟乙基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-2,3,4-三醇(即专利WO2015043511中的实施例1化合物)

试验材料：

¹⁴C-AMG溶液购于PerkinElmer，Cat.No.NEZ080001MC；

α-甲基葡萄糖甙购于Sigma，Cat.No.M9376-100G；

N-甲基-D-葡萄糖胺购于Sigma，Cat.No.M2004-100G；

根皮甙购于Sigma，Cat.No.P3449-1G；

96孔细胞培养板购于Corning，Cat.No.3903。

试验方法：

将3×10⁴个Mock-转染的FIP-in CHO细胞(转染阴性对照)和表达人SGLT1/SGLT2基因的CHO细胞分别接种至96孔细胞培养板；培养12小时后，每孔加入150μL无钠缓冲液洗涤细胞1次；洗涤后，每孔加入50μL含有不同浓度受试化合物的含钠缓冲液和0.5μM[¹⁴C]-AMG，并在37℃的CO₂培养箱中进行孵育，1小时后每孔加入150μL的预冷的无钠缓冲液以终止反应；然后用无钠缓冲液洗涤细胞3次并清除孔内残留液体；继而，每孔加入20μL预冷的100mM NaOH，并在900rpm下震荡5分钟；最后每孔加入80μL闪烁液，并在600rpm下震荡5分钟后，用液闪仪读板，结果如表4所示：

表4：化合物(I)及其(S)-型异构体和(R,S)-非对映体混合物的SGLT-2和SGLT1抑制试验结果

试验结果显示：本发明化合物(I)对SGLT-2有非常好的抑制作用；相对于其(S)-型异构体和(R,S)-非对映体混合物，化合物(I)对SGLT-2具有更好的抑制活性。

二.口服葡萄糖耐量试验和促尿糖排泄试验

试验目的：

下面的方法是用来测定在不同动物体内，本发明化合物(I)及其立体异构体对改善口服葡萄糖耐量及促进尿糖排泄的作用。

受试化合物：

达格列净

化合物(I)即(R)-型异构体：(1R,2S,3S,4R,5S)-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-1-[(1R)-1-羟乙基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-2,3,4-三醇

(S)-型异构体：(1R,2S,3S,4R,5S)-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-1-[(1S)-1-羟乙基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-2,3,4-三醇

试验材料：

葡萄糖：成都市科龙化工试剂厂

尿糖检测用的是罗氏生化仪

血糖检测用的是罗氏卓越型血糖检测仪

试验方法：

将试验动物食蟹猴和C57BL/6小鼠隔夜禁食15小时后称重、检测空腹血糖含量，根据体重及空腹血糖进行随机分组，然后各给药组分别单次灌胃给予相应受试化合物(剂量：5mg/kg)，空白对照组给予溶媒。在给药15min后检测血糖值(即0时血糖)，检测0时血糖后各组动物立即单次灌胃给予葡萄糖(2.5g/kg)，然后在给糖后15min、30min、60min、120min利用静脉取血，血糖仪连续检测动物血糖含量；计算糖负荷后120min内血糖曲线下面积(AUC_{Glu 0-120min})的下降率。检测完120min血糖后将每组动物分别放入一个代谢笼中，以代谢笼为单位收集给药后0～24小时、24～48小时的尿液，并记录每个时间点尿量，并利用全自动生化仪检测试验动物的尿糖含量，尿液收集过程中自由饮食、饮水。其结果如表5和表6所示：

表5：化合物(I)及其(S)-型异构体对小鼠的促尿糖排泄试验结果

试验结果显示：本发明化合物(I)在改善小鼠口服葡萄糖耐量及促进尿糖排泄方面作用明显；并且在促进尿糖排泄方面的效果明显优于其(S)-型异构体。

表6：化合物(I)及其(S)-型异构体对食蟹猴的促尿糖排泄试验结果

试验结果显示：本发明化合物(I)在改善食蟹猴口服葡萄糖耐量及促进尿糖排泄方面作用明显；并且在促进尿糖排泄方面的效果明显优于其(S)-型异构体。

三.静脉注射和口服定量本发明化合物后的的药代动力学评价

测定目的：

下面的方法是用来测定本发明化合物(I)及其立体异构体在动物体内的药代动力学进行评价。

受试化合物：

化合物(I)即(R)-型异构体：(1R,2S,3S,4R,5S)-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-1-[(1R)-1-羟乙基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-2,3,4-三醇

(S)-型异构体：(1R,2S,3S,4R,5S)-5-[4-氯-3-[(4-乙氧苯基)甲基]苯基]-1-[(1S)-1-羟乙基]-6,8-二氧双环[3.2.1]辛烷-2,3,4-三醇

试验方法：

将雄性SD大鼠，隔夜禁食15小时后称重、检测空腹血糖含量，根据体重及空腹血糖进行随机分组，受试化合物以5％DMSO+5％Solutol+90％Saline溶液形式进行给药。对于静脉注射给药的试验组，对试验动物给予2mg/kg的剂量；对于口服给药的试验组，对试验动物给予5mg/kg的剂量。然后，在时间点为0、0.083(仅静脉注射组)、0.25、0.5、1.0、2.0、5.0、7.0和24小时取静脉血(约0.2mL)，置于EDTAK₂抗凝管中，在11000rpm离心2分钟，收集血浆，并于-20℃或-70℃下保存直到进行LC/MS/MS分析。

测定各时间点血浆中药物浓度，根据药物浓度-时间曲线计算药动学参数。其结果如表7和表8所示：

表7：口服给药化合物(I)在大鼠体内的药代特征试验结果

表8：静脉注射给药化合物(I)在大鼠体内的药代特征试验结果

试验结果显示，将本发明提供的化合物(I)静脉注射给药或口服给药时，其表现出优良的药代动力学性质，包括较好的吸收，理想的半衰期(T_1/2)和非常好的口服生物利用度(F)；并且相对于其(S)-型异构体，化合物(I)吸收更好，半衰期更理想，暴露量(AUC_last)更高，药代动力学性质更佳。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。本发明所引用的所有出版物或专利都将作为本发明的参考文献。

Claims (12)

1.一种式(I)所示化合物的制备方法，其包含以下步骤：

步骤(A)：将式(III)所示化合物，与二甲基锌进行加成反应，得到式(II)所示的化合物，

步骤(B)：脱除式(II)所示化合物中羟基上的保护基团，得到式(I)所示的化合物，

其中，PG、PG¹和PG²各自独立地为保护基团；

步骤(A)所述的加成反应还使用双羟基手性配体、Salen配体、金属-Salen配体或(1R,2R)-(+)-N,N’-二对甲苯磺酰-1,2-环己二胺作为手性配体。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(A)所得到的反应粗产物(II)是经打浆的方法纯化的，打浆所使用的溶剂为石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂，所述混合溶剂为体积比4/1～30/1的石油醚/乙酸乙酯。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(A)中的二甲基锌的用量为1.0～5.0当量。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其中，步骤(A)中的二甲基锌的用量为1.1～2.0当量。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(A)的反应溶剂为甲苯、邻二甲苯、对二甲苯、间二甲苯或它们的任意组合；反应温度为–20℃～30℃。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其中，当保护基团PG、PG¹和PG²为苄基时，步骤(B)脱除式(II)所示化合物中的保护基团所使用的试剂：催化剂为钯碳、氢氧化钯/碳或氯化钯；氢源为氢气；酸为盐酸或乙酸。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述的金属-Salen配体为Zn-Salen配体，Mn-Salen配体或Cr-Salen配体；所述的金属-Salen配体用量为0.01～0.50当量；其中，所述的双羟基手性配体为：TADDOL、(R)-BINOL或(S)-H₈-BINOL；其中，(R)-BINOL的用量为0.1～0.9当量。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其中，所述的Cr-Salen配体用量为0.01～0.20当量。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其中，所述的Cr-Salen配体用量为0.03～0.15当量。

10.一种式(I)所示化合物的制备方法，其包含以下步骤：

步骤(1)：将式(III)所示化合物，与甲基格氏试剂进行加成反应，得到式(IV)所示的化合物，

步骤(2)：将式(IV)所示的化合物经氧化反应得到式(V)所示的化合物，

步骤(3)：将式(V)所示的化合物经还原反应得到式(II)所示的化合物，

步骤(4)：脱除式(II)所示的化合物中的保护基团，得到式(I)所示的化合物，

其中，PG、PG¹和PG²各自独立地为保护基团；

步骤(3)的还原反应，使用的还原剂为硼氢化钠、硼氢化钠/三氯化铈、三乙酰氧基硼氢化钠、DIBAL-H或(S)-3-甲基-1,1,1-三苯基丁-2-胺/硼烷。

11.根据权利要求10所述的制备方法，其中，步骤(2)的氧化反应，使用的氧化剂为戴斯马丁氧化剂、2-碘酰基苯甲酸或四甲基哌啶氮氧化物/次氯酸钠；反应溶剂为二氯甲烷或二氯甲烷和水的混合溶剂。

12.根据权利要求10所述的制备方法，其中，步骤(3)的还原反应，所选溶剂为甲醇、乙醇、四氢呋喃、甲苯或乙酸乙酯；该反应的反应温度为–78℃～30℃。

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