CN105999239A - 一种盐酸溶菌酶滴眼液及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种治疗眼部感染的盐酸溶菌酶滴眼液，包括活性成分和辅料，所述的活性成分为盐酸溶菌酶，其在滴眼液中的重量百分比为0.04～0.20％。所述的辅料为制备滴眼液所需的可接受的任何辅料，包括稳定剂、渗透压调节剂和/或抑菌剂。本发明还提供所述盐酸溶菌酶滴眼液的制备方法。本发明的盐酸溶菌酶滴眼液对不同时期的病并发症引起的眼部感染的治疗，都显示了它具有杀菌作用。本发明还提供盐酸溶菌酶滴眼液制剂在制备治疗眼部感染的药物中的应用。

Description

一种盐酸溶菌酶滴眼液及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种滴眼剂及其制备方法，特别涉及一种盐酸溶菌酶滴眼液及其制备方法和应用，属于医药技术领域。
背景技术
滴眼剂同其他制剂一样，是在临床实践中，不断总结、完善、发展起来的。滴眼剂属于局部用药，对眼部具有杀菌、消炎、扩瞳、缩瞳、麻醉等作用。滴眼剂在临床上用于诊断、治疗和预防眼科疾病，其正确合理的使用有助于眼部疾病的早日康复。临床上滴眼剂的种类很多，有抗病毒的，有抗细菌的，还有激素类的，临床上以抗细菌的滴眼液的应用为多，并根据感染的菌种不同，而选择不同的滴眼液。
目前，国内外应用临床治疗结膜炎，角膜炎的药物常用的主要为化学药。如：氯霉素、新霉素、氧氟沙星、左氧氟沙星、庆大霉素、红霉素等制成的滴眼液和药膏。细菌性眼病治疗主要以抗生素眼药水最为常用，但容易产生耐药性。随着抗生素的大量应用，耐药菌株也不断增加。并且抗生素眼药水因其副作用不宜长期使用。因此，研制新的用于治疗细菌性眼病的眼用制剂成为了研究的热点。流行性角结膜炎是眼科的常见病和多发病，此病为自限性疾病，但其发病急、传染性强、刺激症状重，多合并角膜损害及耳前淋巴结肿大，可导致广泛流行。病程-一般可持续1～2周，发病期间严重影响患者的生活质量。常规以抗病毒药物全身或眼部滴眼为主进行治疗，但效果欠佳。
中国专利文件CN102961324A公开了一种溶菌酶眼用凝胶剂及其制备方法，中国药典规定，眼用制剂均为无菌制剂，该专利中所加入的苯扎氯铵是溶菌酶眼用凝胶剂在反复使用凝胶剂时，起到抑菌作用的。该专利存在以下的问题；1、该专利未表述在制备中的无菌制备的过程；2、众所周知，溶菌酶在液态条件下储存，稳定性较差，容易降解，该专利未表述保证溶菌酶眼用凝胶剂在液态条件下的稳定性。
中国专利文件CN103182075A公开了一种溶菌酶制剂、其制备方法及用途，所述溶菌酶制剂通过如下方法制得：1、将溶菌酶溶于注射用水，得到溶菌酶溶液；2、向步骤1中的溶菌酶溶液中加入稳定剂盐类；3调节pH至4.6～9.0。该专利存在以下的问题；1、该专利同样未表述在制备中的无菌制备的过程；2、该专利在精制人溶菌酶中采用的吸附剂为活性炭、硅藻土、膨润土等，公知是，活性炭、硅藻土、膨润土等含有大量的无机盐类，容易污染滴眼液的环境，影响滴眼液的临床效果。
总之，以上治疗方法都存在不同程度的缺陷，使临床应用受到很大限制。为满足广大患者的临床需求，因此，本领域技术人员多年来一直在寻求一种能够研制开发出安全高效，使用方便的治疗治疗由细菌、衣原体、病毒和耐药菌导致的各种红眼病、眼炎、角膜炎、角膜溃疡、结膜炎等常见眼部感染疾病滴眼液，以丰富临床用药。
溶菌酶是一种存在于人体正常体液及组织中的非特异性免疫因素，溶菌酶为一种粘多糖溶解酶，其通过水解破坏组成细菌细胞壁的肽糖分子的由N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖氨之间的β-(1，4)糖苷键，使细胞因渗透压不平衡引起破裂，从而导致菌体细胞壁溶解而杀死细菌。它具有多种药理作用，如抗菌、抗病毒和抗肿瘤等。
按照中国药典规定，用于滴眼液，应是无菌制剂。制剂所用的原料药、辅料以及生产条件不灭菌或灭菌方法不当的话，在临床上容易产生二次染菌，造成眼疾更难愈合，治疗效果很不理想或对人的眼睛产生更大的危害。此外，专用于治疗眼部感染疾病的盐酸溶菌酶外用药物，特别是溶菌酶滴眼液制剂尚未见报道。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种盐酸溶菌酶滴眼液及其制备方法和应用。
术语说明：
盐酸溶菌酶，英文名Lysozyme hydrochloride，系自新鲜鸡蛋清中提取的一种粘多糖的碱性蛋白酶，与氯离子结合成为溶菌酶氯化物，CAS登录号9066-59-5，市场可购。
本发明技术方案如下：
一种治疗眼部感染的盐酸溶菌酶滴眼液，包括活性成分和辅料，所述的活性成分为盐酸溶菌酶，其在滴眼液中的重量百分比为0.04～0.20％。
根据本发明，所述的辅料为制备滴眼液所需的可接受的任何辅料，根据本领域所熟知的，所述辅料包括稳定剂、渗透压调节剂和/或抑菌剂。
根据本发明，优选的，所述的稳定剂为甘氨酸；所述的渗透压调节剂为氯化钠；所述的抑菌剂为苯扎溴铵。
本发明所使用的盐酸溶菌酶为本领域常规原料，市购产品。
本发明提供以下优选的技术方案：
一种治疗眼部感染的盐酸溶菌酶滴眼液,由以下原料按质量份制成：
根据本发明优选的，一种治疗眼部感染的盐酸溶菌酶滴眼液,由以下原料按质量份制成：
根据本发明,进一步优选的；
一种治疗眼部感染的盐酸溶菌酶滴眼液，由以下原料按质量份制成：
或者，一种治疗眼部感染的盐酸溶菌酶滴眼液，由以下原料按质量份制成：
或者，一种治疗眼部感染的盐酸溶菌酶滴眼液，由以下原料按质量份制成：
根据本发明，所述盐酸溶菌酶滴眼液制剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)按配比称取盐酸溶菌酶、甘氨酸、苯扎溴铵、氯化钠、注射用水备用；
(2)按配比称取盐酸溶菌酶和甘氨酸，分别加注射用水溶解，用2～8％(W/W)盐酸调pH4.0～pH6.0；并分别用0.10～0.22μm滤膜，过滤操作压力是0.65～0.70MPa过滤除菌后，将所得盐酸溶菌酶、甘氨酸料液合并，输送至已灭菌的罐内，室温备用；
(3)按配比称取氯化钠、注射用水各组分混合，配成质量浓度为0.35％～0.55％的氯化钠水溶液继续升温至131～136℃，并保持温度15～30min进行灭菌，输送至已灭菌的罐内存放，在30～40℃保温备用；
(4)按配比称取苯扎溴铵，加入步骤(3)已灭菌的氯化钠水溶液，搅拌溶解，室温备用；
(5)在无菌条件下，将步骤(2)、(3)、(4)所得的物料混合，搅拌均匀，即得。
将上述产品进行无菌包装，检验，入库。
根据本发明优选的，步骤(2)的过滤滤膜为0.22μm；
根据本发明优选的，步骤(2)的过滤操作压力是0.65MPa；
根据本发明进一步优选的，一种盐酸溶菌酶滴眼液制剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)按配比称取盐酸溶菌酶、甘氨酸、苯扎溴铵、氯化钠、注射用水备用；
(2)按配比称取盐酸溶菌酶和甘氨酸，分别加注射用水溶解，用5％(W/W)盐酸调pH5.0；并分别用0.22μm滤膜；过滤操作压力是0.65MPa过滤除菌后，将所得盐酸溶菌酶、甘氨酸料液合并，输送至已灭菌的罐内，室温备用；
(3)按配比称取氯化钠、注射用水各组分混合，配成质量浓度为0.55％的氯化钠水溶液，继续升温至131～136℃，并保持温度15～30min进行灭菌，输送至已灭菌的罐内存放，在30～40℃保温备用；
(4)按配比称取苯扎溴铵，加入步骤(3)已灭菌的氯化钠水溶液，搅拌溶解，室温备用；
(5)在无菌条件下，将步骤(2)、(3)、(4)所得的物料混合，搅拌均匀，即得。
将上述产品进行无菌包装，检验，入库。
本发明所述的室温是指实验操作所处的环境温度，控制在15～30℃范围内。
需要说明的是，在以上制备方法中，所有用于物料输送的管道必须预先通过灭菌处理。就制备方法而言，以上是本发明的优选方法，但不限于此。本领域的技术人员根据其熟知的知识，可以适当加以调整。以上所述盐酸溶菌酶滴眼液制剂制备方法中为特别限定的，可参照现有技术。
经过实验表明，本发明的盐酸溶菌酶滴眼液对不同时期的病并发症引起的眼部感染的治疗，都显示了它具有杀菌作用，因此，本发明还提供盐酸溶菌酶滴眼液制剂在制备治疗眼部感染的药物中的应用。
本发明所述的制备方法中盐酸溶菌酶滴眼液制剂质量标准如下、但不限于此。
盐酸溶菌酶滴眼液质量标准
本品1mL盐酸溶菌酶滴眼液含盐酸溶菌酶的效价不得低于3.125万单位。
【形状】本品为无色的澄明液体。
【鉴别】盐酸溶菌酶(1)取本品，加入纯化水30mL溶解后，取出2mL加10％(W/W)氢氧化钠溶液5滴与10％(W/W)硫酸铜溶液1滴,混匀后显紫红色；
(2)取鉴别(1)项下溶解液5mL，加茚三酮试液1mL，加热，溶液应显蓝紫色；
(3)取鉴别(1)项下溶解液10mL加醋酸-醋酸钠缓冲液(取无水醋酸钠6.7g，加水约900mL，振摇使溶解，用醋酸调节pH值至5.4，加水稀释至1000mL，摇匀)制成每1mL中含盐酸溶菌酶0.4mg的溶液，照分光光度法(中国药典2010年版二部附录ⅣA)测定，在280nm的波长处有最大吸收，吸收度应为0.39～0.49；
(4)取盐酸溶菌酶标准品适量，用磷酸盐缓冲液制成每1mL含1mg的溶液。照有关物质项下方法试验。供试品色谱中，在与标准品色谱相应的位置上，显相同颜色的条带；
所述的磷酸盐缓冲液按照如下方法制得：取磷酸二氢钠10.4g与磷酸氢二钠7.86g及乙二胺四乙酸二钠0.37g，加水溶解使成1000mL，调节pH值至6.2。
【检查】pH应为4.0～6.0；
渗透压摩尔浓度 取本品，依法测定，本品的渗透压摩尔浓度应为280～380mOsmol/kg。
有关物质 取本品照效价测定项下供试品溶液制备方法用磷酸盐缓冲液(pH6.2)制成每1mL中含盐酸溶菌酶1mg的溶液，作为供试品溶液。取盐酸溶菌酶标准品适量，用磷酸盐缓冲液(pH6.2)制成每1mL含2mg的溶液，作为标准品溶液。分别精密吸取各溶液10μl照电泳法(《中国药典》2010年版二部附录ⅤF)测定，用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，考马斯亮蓝染色。供试品溶液如显杂质斑点，与标准品溶液杂质斑点比较，不得更深。
其他 本品应符合眼用制剂项下有关的各项规定。
【效价测定】供试品溶液的制备 称取软膏适量(相当于溶菌酶25mg)，置试管中，加水20mL搅拌后，过滤，取滤饼用80mL水反复冲洗三次，滤液合并至100毫升量瓶中，用PH6.2磷酸盐缓冲溶液定刻度。精密移取2mL置50mL容量瓶中，加pH6.2磷酸盐缓冲液至刻度，做为供试品溶液备用。
标准品溶液制备 精密称取盐酸溶菌酶标准品25毫克，置100mL容量瓶中，加磷酸盐缓冲溶液溶解，定容至刻度。分别精密移取1mL、2mL溶液置50mL容量瓶中，加PH6.2磷酸盐缓冲溶液至刻度，做为标准溶液(1)及标准溶液(2)。样品溶液，标准溶液(1)标准溶液(2)置冰浴中保存。
底物悬浮液的制备 称取溶酶小球菌15～20mg，加磷酸盐缓冲液(pH6.2)0.5～1mL,在研钵内研磨3分钟，再加磷酸盐缓冲液(pH6.2)适量，使总体积约为50mL，使悬浮液于25±0.1℃时，在450nm的波长处测得的吸收度为0.70±0.05(临用前配制)。
测定法 精密量取溶菌酶底物试液4mL，在35℃水浴中加热5分钟，精密移取在水浴提前加热3分钟的样品溶液100μL，加入底物试液中，并在35℃水浴中加热10分钟后，再精密量取1mol/L的盐酸溶液0.5mL加入底其中，摇匀。以水做为空白，在波长640nm处，紫外可见分光光度法测量样品溶液的吸收值Ast。标准溶液(1)、标准溶液(2)按以上方法测定吸光度As1、As2。
本品
Ws：盐酸溶菌酶标准品称取量；
Wt：样品称取量×规格；
As1：标准溶液(1)吸收度；
As2：标准溶液(2)吸收度。
本发明的治疗眼部感染的盐酸溶菌酶滴眼液，它采用溶菌酶为本发明药物的有效成分，与药用辅料制成药剂，经过眼部外用药物给药，对不同时期的病并发症引起的眼部感染的治疗，都显示了它具有杀菌作用，其中所具备的特点如下：
1、盐酸溶菌酶滴眼液中的盐酸溶菌酶具有促进纤维芽细胞的增殖作用、促进结缔组织纤维形成等药理作用。盐酸溶菌酶滴眼液中的活性成分溶菌酶为一种粘多糖溶解酶，其通过水解破坏组成细菌细胞壁的肽糖分子的由N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖氨之间的β-(1，4)糖苷键，使细胞因渗透压不平衡引起破裂，从而导致菌体细胞壁溶解而杀死细菌。
2、本发明制剂中通过苯扎溴铵的科学配比达到长期抑菌的要求。
3、本发明制剂中加入甘氨酸，一方面对盐酸溶菌酶起到稳定性作用，另一方面持续性缓慢释放盐酸溶菌酶以达到延长药效的目的。
4、本发明的盐酸溶菌酶滴眼液为局部外用无菌制剂，有效成分盐酸溶菌酶高温条件下易发生变性，不适于采用高温灭菌法。考虑到盐酸溶菌酶在水中溶解性较好，本发明先将盐酸溶菌酶溶解后再加入到水相中，选择过滤法除菌，以保证本制剂既符合国家药典要求，又能达到灭菌的目的。根据本发明制剂辅料各成分的理化性质，经综合考虑本制剂的特点，本发明特别采用高温湿热灭菌工艺对制剂辅料的水相进行灭菌。
综上，本发明的治疗眼部感染的外用药物的盐酸溶菌酶滴眼液制剂，采用盐酸溶菌酶为本发明药物的有效成分与药用辅料，通过溶解、滤膜过滤除菌、高温灭菌、搅拌、降温、无菌灌装等工艺制成药剂。经过眼部外用药物给药，对不同时期的眼部感染都显示了它具有较好的临床作用。更为详细的效果实验将在实施例中予以说明。
下面结合实验例对本发明做进一步的说明，但不限于此。
实验例1、盐酸溶菌酶、甘氨酸过滤除菌实验研究
1、材料与方法
1.1 试验材料
盐酸溶菌酶由山东鲁北药业有限公司、甘氨酸由宜昌人福药业有限责任公司提供；
1.2 主要设备
电子天平，压滤装置，恒温水浴锅，滤膜，分光光度计；
1.3 试验方法
1.3.1 膜孔径选择
根据细菌的特征，分别选用孔径为0.05、0.22、0.5μm的滤膜，对接种细菌的盐酸溶菌酶、甘氨酸进行过滤，进口压力0.65MPa。温度52℃，30min时对过滤后的滤液进行采样，检测细菌。
1.3.2 操作压力的确定
分别用孔径为0.22μm的滤膜过滤盐酸溶菌酶、甘氨酸溶解液，连续工作25min，期间每隔30min检测透过通量。操作温度为37～52℃，进口压力分别为0.35、0.55、0.65、0.70MPa，最后根据通量的大小及稳定性选定合适的进口工作压力。
1.3.3 滤膜过滤盐酸溶菌酶、甘氨酸溶解液效果试验
滤膜过滤盐酸溶菌酶、甘氨酸溶解液，操作温度37～52℃，进口压力为0.65MPa。每隔3Omin分别对过滤前及过滤后的提取液进行采样，检测细菌、菌落总数、浊度色值过滤前为对照组，过滤后为试验组。
2 结果与分析
2.1 不同膜孔径对细菌的去除效果
试验结果如表1所示。从表1中可以看出，随着滤膜孔径的减小，盐酸溶菌酶、甘氨酸溶解液中细菌的去除率越高，0.22μm孔径的滤膜能达到完全除菌的要求。
表1 滤膜孔径对细菌的影响
2.2 不同操作压力对通量的影响
在过滤温度52℃的条件下，采用不同的压力进行过滤试验，试验结果见图1，可以看出，随着时间的延长，过滤初期通量下降较快，随后下降速率变缓；在压力小于0.65MPa下，随着压力的增加，盐酸溶菌酶、甘氨酸溶解液通量增加较快；但当压力达到0.7MPa时，过滤后期通量反而小于0.65MPa时的通量。过滤初期，污染层较少，流道较为通畅，料液流动速度较快，过滤阻力主要为过滤膜的阻力。通量与压力成正比，增加压力即可增加通量。压力继续增大时，浓差极化作用增加，形成较厚的膜面凝胶层，凝胶层引起流道堵塞。浓差极化作用进一步加强，形成恶性循环，此时过滤阻力除膜阻力外，还有极化层阻力和凝胶层阻力。随着凝胶层厚度及浓差极化程度增加，阻力增加，使得通量反而降低，因此，操作压力取0.65～0.70MPa。
实验例2、盐酸溶菌酶pH稳定性研究
本实验主要研究盐酸溶菌酶溶液在不同条件下的物理稳定性和生物活性，为盐酸溶菌酶的剂型研发及相关的实验研究、工业生产提供依据。
1、试药和仪器
1.1 药品：盐酸溶菌酶；
1.2 仪器：紫外分光光度计；
2、实验方案：配制不同组成的盐酸溶菌酶溶液，并放于一定条件下定时取样，各溶液实验条件见表2。各样品在0、0.25、1、2、3、5、7d(天)取样，分别测定盐酸溶菌酶效价。各样品平行3份。以0d(天)盐酸溶菌酶的浓度为基准，计算各样品在不同时间的效价。分别以平均效价对时间作图，观察二者随时间的变化趋势。
表2 盐酸溶菌酶pH值的不同条件的稳定性
pH值的影响：溶液的pH值对盐酸溶菌酶的稳定性具有明显的影响，由图2所示，
结果:盐酸溶菌酶在pH4.0～pH6.0的条件下物理稳定性较好，在5d(天)内效价基本上没有变化，但在pH1.0的条件中效价下降迅速，5d时已经检测不到盐酸溶菌酶，在pH7.0条件下也不稳定，在进行实验的7d(天)时间内效价逐渐降低。如图2所示，盐酸溶菌酶在pH4.0～6.0之间的条件下始终保持较高的效价，在pH7.0的条件下次之，而pH1.0的条件对盐酸溶菌酶的效价影响显著，从实验开始就未能检测到效价，盐酸溶菌酶的活性部位在该条件下已经遭到了完全破坏。
实验例3、氯化钠溶液灭菌实验研究
不同的湿热灭菌和时间对氯化钠溶液湿热灭菌效果的比较，见表3：
表3 氯化钠溶液湿热灭菌效果比较
由表3中可分析出：
1、湿热灭菌温度在121～126℃，时间在15～30min条件下，但无菌检查，不符合规定。
2、湿热灭菌温度在131～136℃，时间在15～30min条件下，无菌检查，符合规定。
由上试验；在湿热灭菌温度在131～136℃，时间在15～30min，无菌检查，符合规定。
实验例4、盐酸溶菌酶滴眼液中氯化钠含量研究
滴眼药在临床使用时偶有溶血现象发生，经研究发现，滴眼液中氯化钠含量不足是引起溶血的重要原因，而氯化钠的含量测定往往并未列入滴眼液药的质量控制范围。为此，本研究通过体外溶血实验，考察制备盐酸溶菌酶滴眼液时控制氯化钠加入量以及含量，并建立准确、方便、快速检测该制剂中氯化钠含量的方法，以确保临床用药的安全。
1、材料
盐酸溶菌酶；氯化钠；所用试剂均为药用，水为注射用水。
2、方法结果
2.1 体外溶血实验精密称取盐酸溶菌酶、氯化钠，分别配制含氯化钠质量浓度0.20％、0.25％、0.30％、0.35％、0.40％、0.45％、0.5％、0.55％、0.60％、0.70％、0.80％、0.90％的1.0％盐酸溶菌酶系列溶液。取试管13支，各加入新鲜配制的2人血生理盐水混悬液2mL，第一管加生理盐水2mL为阴性对照管，其余各管分别加入上述系列溶液2mL，摇匀，置37℃，静置观察1h，若液体呈现红色澄清液，既药液引起红细胞破裂，溶血实验阳性。结果1％盐酸溶菌酶含氯化钠＜0.3％时均出现溶血现象。
3、结果评价
眼用溶液的渗透压应尽量和泪液等同，高渗溶液在眼内可使眼角膜失去水分，使组织干燥而产生不适；低渗溶液则能使角膜组织细胞胀大甚至破裂。因此，眼用溶液剂均应要求调节其渗透压范围。体外溶血实验可知，当1.0％盐酸溶菌酶溶液中加入氯化钠的浓度在0.3％(W/W)以下会产生溶血现象，证实控制氯化钠质量浓度应在0.35％(W/W)以上，本试验应优选的氯化钠在水中的质量浓度为0.35％～0.55％(W/W)之间。
实验例5、甘氨酸对盐酸溶菌酶溶出度影响作用试验
本发明制剂中加入甘氨酸，一方面对盐酸溶菌酶起到稳定性作用，另一方面持续性缓慢释放盐酸溶菌酶以达到延长药效的目的，并对其溶出度进行试验；
取实施例1～3的盐酸溶菌酶滴眼液，照《中国药典》溶出度测定法，以经脱气处理后的1000mL水为溶出介质，转速为75转±5转/分，依法操作，分别于5min、10min、20min、30min，取样20mL，滤过，取续滤液作为供试品溶液；测定盐酸溶菌酶的效价。
盐酸溶菌酶滴眼液溶出度试验表明：盐酸溶菌酶滴眼液中的盐酸溶菌酶成分在30min内持续性缓慢释放。见表4。
表4 盐酸溶菌酶滴眼液中的盐酸溶菌酶效价(万单位/mL)
结果表明：盐酸溶菌酶滴眼液实验例1～3的效价均在3.125万单位以上。
实验例6、盐酸溶菌酶滴眼液处方筛选实验
考察加入甘氨酸对盐酸溶菌酶活性起到保护作用；见表5。
表5 甘氨酸用量筛选单位(质量比)
用实施例1的方法制备；对其5个处方所制备的盐酸溶菌酶滴眼液进行6个月的考察，按照盐酸溶菌酶滴眼液质量标准，对盐酸溶菌酶效价分析；见表6。
表6 盐酸溶菌酶效价分析(万单位/mL)
处方评价及结果：
处方1：盐酸溶菌酶滴眼液为淡黄澄明液体，但盐酸溶菌酶效价低；
处方2：盐酸溶菌酶滴眼液为淡黄澄明液体，但盐酸溶菌酶效价较低；
处方3：盐酸溶菌酶滴眼液为淡黄澄明液体，盐酸溶菌酶效价稳定；
处方4：盐酸溶菌酶滴眼液为淡黄澄明液体，盐酸溶菌酶效价稳定；
处方5：盐酸溶菌酶滴眼液为淡黄澄明液体，盐酸溶菌酶效价稳定。
结果分析：以上处方盐酸溶菌酶滴眼液成型较好；处方1、2中甘氨酸用量低，造成盐酸溶菌酶效价较低，不适合本制剂的要求。处方3、4、5成型较好；盐酸溶菌酶效价稳定，适合要求，由此可见加入甘氨酸对盐酸溶菌酶活性起到保护作用。
实验例7：苯扎溴铵与盐酸溶菌酶滴眼液抗菌关系的实验研究
滴眼液作为一种眼用制剂，应是无菌制剂、滴眼液需要长期储存和多次使用。为了抑制微生物，在配方中常添加一些防腐抗菌剂是必要的。由于滴眼液中的水是微生物生长的温床，所以本发明主要从苯扎溴铵抑菌剂在配方中的比例入手，研究其抗菌的关系。
1、仪器与材料
1.1 仪器：超净工作台；可见分光光度计；数显恒温水浴锅；数显恒温培养箱；离心机；高压灭菌锅；数显鼓风干燥箱；微量移液器；一次性无菌刻度吸管；一次性无菌培养皿；无菌接种环；手动菌落计数器；自动菌落计数器；超低温冰箱。
1.2 材料：金黄色葡萄球菌；大肠埃希菌；铜绿假单胞杆菌；白色念珠菌；黑曲霉。大豆酪蛋白胨琼脂培养基；沙氏葡萄糖琼脂培养基；中和肉汤；磷酸盐缓冲液；0.9％(W/W)氯化钠溶液：含聚山梨酯80的0.9％氯化钠溶液；按实施例1方法制备不加溶菌酶的滴眼剂。
1.3 菌液的制备：取30～35℃条件下分别培养18～24h的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞杆菌及20～25℃条件下培养48～52h的白色念珠菌，用适量无菌生理盐水洗脱，转移至无菌离心管中，3000～5000r/min离心5min。弃上清，加适量无菌生理盐水，涡旋混合，测定吸光度，确定菌悬液浓度107～108cfu/mL。
取20～25℃条件下培养7d(天)的黑曲霉，用适量含聚山梨酯80的无菌生理盐水洗脱孢子，转移至无菌离心管中，5000～6500r/min离心8min。弃上清，加适量无菌生理盐水，涡旋混合，测吸光度，确定菌悬液浓度为l07～108cfu/mL。
2.2 测定方法
2.2.1 0d(天)实验取5支磷酸盐缓冲液、不加溶菌酶的滴眼剂20mL，分别依次接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞杆菌、白色念珠菌、黑曲霉。接种的菌悬液体积一般为供试样品体积的0.5％～1.0％。梯度稀释磷酸盐缓冲液，平行做2个平皿。5支不加溶菌酶的滴眼剂放入20～25℃培养箱培养，7d(天)后梯度稀释。
2.2.2 7d(天)实验取5支不加溶菌酶的滴眼剂各1mL，梯度稀释适宜的中和肉汤，取浓度适当的稀释液至平皿中，平行做2个平皿，分别加入培养基。细菌加入大豆酪蛋白胨琼脂培养基，真菌加入沙氏葡萄糖琼脂培养基。30～35℃条件下培养细3～5d，20～25℃条件下培养白色念珠菌3～5d，20～25℃条件下培养黑曲霉3～7d，并计数菌落。
2.2.3 14d(天)与28d(天)实验方法同7d(天)实验，见表7、8。
表7 0d(天)实验数据
表8 7d、14d、28d(天)实验数据及结果
3 实验结果
按照规定：眼用制剂产品，细菌7d(天)对数下降值不小于1.01，14d(天)对数下降值不小于3.01，28d(天)相对l4d应无增加；酵母菌及霉菌7、l4、28d(天)相对0d(天)应无增加。无增加即对前一个测定时间点，菌落增加数量不超过0.51。由表8可见，苯扎溴铵在滴眼剂中可作为防腐抗菌剂效果好，各测定时间点均符合有关规定标准。
实验例8、盐酸溶菌酶滴眼液抑菌活性研究实验
盐酸溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，是广泛存在于生物组织中的一种无毒蛋白质，能选择性地分解微生物的细胞壁形成溶菌现象，同时不破坏其他组织，因而在食品工业、医药、生物学等领域具有广泛的用途。
1、材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验菌：金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、大肠埃希菌、奇异变形杆菌；
1.1.2 盐酸溶菌酶滴眼液实施例1制备，不加苯扎溴铵的滴眼剂；
1.1.3 细菌培养基：用高压蒸汽灭菌培养基，主要成份：胰蛋白胨1.0g、氯化钠0.5g、琼脂粉1.5g、蒸馏水100mL、氢氧化钠调pH为6.2，高压灭菌。
1.1.4 缓冲液：1/15mol/L的pH为6.0磷酸盐缓冲液。
1.2 实验方法
1.2.1 盐酸溶菌酶的稀释：用高压蒸汽灭菌1/15mol/L的pH为6.0磷酸盐缓冲液，将盐酸溶菌酶滴眼液33000μ/mL，稀释成以下浓度：25000μ/mL、10000μ/mL。
1.2.2 营养琼脂平板盐酸溶菌酶纸片扩散抑菌法：用上述培养基，将其加热全融，倾注无菌培养皿中，用无菌棉签将上述细菌分别涂布于培养基上，分别吸取上述稀释度溶菌酶10μl于无菌纸片上，贴于接种细菌的平皿中，以10μl缓冲液为对照，于37℃恒温箱中培养l8～24h，测量抑菌圈的直径。
2、结果
2.1 营养琼脂平板盐酸溶菌酶纸片扩散抑菌法的抑菌作用；盐酸溶菌酶抑菌效果见表9。从抑菌圈的大小(表9)可以看出，盐酸溶菌酶对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、大肠埃希菌、奇异变形杆菌的抑菌效果较好。
表9 溶菌酶纸片扩散法的抑菌效果单位：(mm)
大多数抗菌、抑菌剂大部分是有机物质，它们广泛用于药品、食品防腐、洗涤剂及化妆品中。但它们存在着耐热性低、热稳性差、易挥发、易分解(产生有害的有关物质，并易产生耐药菌株)、安全性较差等缺点。为此本发明积极开发研究了一些生化抗菌剂，盐酸溶菌酶就是其中的一个。
盐酸溶菌酶为生化药品，无毒、无刺激性，因此，盐酸溶菌酶作为抗菌剂被用于制备的盐酸溶菌酶滴眼液是本发明的创新点之一。
实验例9、原辅料相容性试验
本发明盐酸溶菌酶滴眼液研究过程中选用的盐酸溶菌酶，尤其是辅料在处方中的应用，需进行原辅料的相容性试验，原辅料相容性试验如下；
将原料与所选辅料按一定比例物理混合，按照中国药典2010版二部(附录ⅪXC)原料药与药物制剂稳定性试验指导原则中影响因素的实验方法，由于盐酸溶菌酶在高温条件下不稳定，所以影响因素分别在高温50℃±2℃、湿度90％±5％、强光4500±500lx的条件下放置10天，检查放置前后变化。试验结果如下：
1、高温条件原辅料相容性试验
将原辅料按照一定比例混合，暴露置高温50℃±2℃条件下10天取样，检验结果见表10：
表10 原辅料相容性试验(50℃±2℃)10天
经高温50℃±2℃条件下10天相容性试验，结果显示盐酸溶菌酶与各辅料性状、效价均无变化。水分检查结果显示随时间延长而有所降低。
以上结果表明盐酸溶菌酶在高温50℃±2℃条件下与辅料相容性良好。
2、光照条件原辅料相容性试验
将原辅料按照一定比例混合，暴露置光照(4500±500lx)条件下10天取样，测定各项指标，结果见表11。
表11 原辅料相容性试验光照(4500±500lx)10天
以上结果表明盐酸溶菌酶在光照(4500±500lx)条件下与辅料相容性良好；经光照(4500±500lx)条件下10天相容性试验，结果显示盐酸溶菌酶与各辅料性状、效价均无变化。
3、高湿条件原辅料相容性试验
将原辅料按照一定比例混合，暴露置高湿(90％±5％)条件下10天取样，测定各项指标，结果见表12。
表12 原辅料相容性试验高湿(90％±5％)10天
经高湿90％±5％条件下10天相容性试验，结果显示盐酸溶菌酶与各辅料性状、效价均无变化。
以上结果表明盐酸溶菌酶在高湿90％±5％条件下与辅料相容性良好。综合试验结果表明制剂应密封保存。
实验例10、盐酸溶菌酶滴眼液的长期稳定性实验
将实施例1制备的盐酸溶菌酶滴眼液在上市规定的贮存条件下进行长期稳定性试验，考察盐酸溶菌酶滴眼液在运输、保存、使用过程中的稳定性特征，从而作为确定有效期和贮存条件的依据。将采用PVP-复合铝管瓶包装的盐酸溶菌酶滴眼液样品，放置于25℃±2℃、RH60％±10％的恒温、恒湿箱中放置24个月，分别于0、3、6、9、12、18、24个月取样，检测各项质量指标。结果见表13。
表13 盐酸溶菌酶滴眼液长期稳定性试验
结果：经长期稳定性24个月的考察，结果显示与0月比较各项指标无明显变化，表明盐酸溶菌酶滴眼液在25℃±2℃、RH60％±10％条件下稳定性良好，在规定的各项条件下生产、包装、贮存、运输均不会对本品的质量产生不利影响，可保障临床用药安全有效。
实验例11、盐酸溶菌酶滴眼液对家兔眼刺激性实验研究
本实验通过观察其对家兔眼部的刺激反应，为临床安全应用提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 药品及仪器
盐酸溶菌酶滴眼液，由实施例1制备；生理盐水滴眼液，由山东博士伦福瑞达制药有限公司生产；10％荧光素纳注射液，由美国爱尔康公司生产。裂隙灯显微镜(瑞士900型)。
1.2 实验动物
纯种新西兰白兔，由山东大学动物实验中心提供。选出无眼疾而健康的家兔20只用于本实验。雌雄各半，雌者无孕，兔龄4月，无眼部和全身疾病。
1.3 动物分组
将上述过程预选出的20只健康家兔按随机数字表法分为5组，每组4只。A组：0.07％盐酸溶菌酶滴眼液组；B组：0.08％盐酸溶菌酶滴眼液组；C组：0.09％盐酸溶菌酶滴眼液组；D组：0.1％盐酸溶菌酶滴眼液组；E组：赋形剂组。
1.4 实验方法
分别将不同浓度的盐酸溶菌酶滴眼液或赋形剂液0.1mL滴人家兔右眼结膜囊内，左眼滴等量生理盐水作对照。给药后兔眼被动闭合10s左右，观察并记录滴眼后30、60、90min的局部反应情况，每日给药4次，连续l周，停药后继续观察7d，眼刺激反应评分标准见表1。按表1将每个动物与相应的眼药水接触后眼角膜、虹膜和结膜的刺激反应分值相加，即为该动物刺激反应的总积分，将其除以动物数，即为该组动物眼刺激性的最后分值，按此方法分别求得各观察时段的眼刺激分值，并以最高分值为准。眼刺激性评价标准：无刺激性0～3分；轻刺激性4～8分；中刺激性9～l2分；强刺激性l3～16。
结果评价：在观察期间，仅0.1％盐酸溶菌酶滴眼液组4只兔中2只出现结膜充血，呈鲜红色、虹膜清晰可见(图3)，角膜散在点状混浊(图4)，0.1％盐酸溶菌酶滴眼液组按眼刺激性评价标准共得4分，平均值1分，停药2～3天后症状消失，其余所有动物未见异常反应，结膜无明显充血，虹膜清晰可见，(图5，6)，依照眼刺激性评价标准，四种盐酸溶菌酶滴眼液及赋形剂对眼睛无刺激性。
3、结论：实验已表明盐酸溶菌酶滴眼液在眼科疾病的防治已呈现出良好的前景。为便于盐酸溶菌酶滴眼液安全、广泛的应用于眼科临床，并观察了此种新剂型对眼部的刺激反应。通过观察我们发现盐酸溶菌酶滴眼液对眼角膜、结膜、虹膜等无明显刺激性。
实验例12、盐酸溶菌酶滴眼液的急性毒性
研究旨在观察盐酸溶菌酶滴眼液急性毒性，为其安全性评价和临床应用提供实验依据。1、盐酸溶菌酶滴眼液的急性毒性试验和最大耐受剂量测定
1.1 材料
1.1.1 实验动物选用鼠龄为4～6周小鼠20只(山东大学实验动物中心提供)，体重16～18g，清洁级，雌雄各半；
1.1.2 药物盐酸溶菌酶滴眼液，由实施例1的方法制备。
1.2 实验方法
小鼠禁食16h后，灌胃给予盐酸溶菌酶滴眼液每40mL/kg，每隔5h同样剂量灌胃给药1次，共3次，总剂量为120mL/kg。观察给药后小鼠的毒性反应，包括：一般症状、外观、毛色、大小便、摄食情况、自主活动等，以及7d内的死亡情况，并于给药第7天称重.
1.3 实验结果
小鼠给药后自主活动、毛色、外观、摄食均正常，首次给药5h左右可见大便颜色加深，24h后恢复正常，其他未见异常反应。在7d的观察期内末见有小鼠死亡，雌雄小鼠的体重均略有增长。见表14。
表14 盐酸溶菌酶滴眼液最大耐受量测定小鼠的体重变化(m/g)
1.4 结论
小鼠口服盐酸溶菌酶滴眼液40mL/kg，共3次，无明显的毒性反应，7d内无小鼠死亡。表明盐酸溶菌酶滴眼液的小鼠最大耐受剂量大120mL/kg。说明该药安全无毒。
实验例13、盐酸溶菌酶滴眼液主要药效学研究
1、实验材料
1.1 受试药物：盐酸溶菌酶滴眼液，由实施例1制备，盐酸溶菌酶效价分别为3.358和1.119万单位。溶剂为不含盐酸溶菌酶主药成分的溶液。
1.2 阳性对照药：地塞米松磷酸钠滴眼液(5mL:1.25mg)上海信谊金朱药业有限公司；生理盐水滴眼液，由山东博士伦福瑞达制药有限公司生产；
1.3 动物：家兔，日本大耳白种，体重2.0～2.6kg，雌雄兼用，由山东大学实验动物中心提供。
2 实验方法与结果
2.1 对家兔眼角膜化学烧伤的治疗作用：取健康无眼疾家兔40只，将每兔一侧眼进行人为化学烧伤(用直径0.5mm无菌滤纸片醮取1mol/L NaOH溶液，放置兔眼角膜上灼烧20s)，形成白色圆形斑痕，另侧眼作对照正常眼。测量动物各眼化学烧伤斑痕面积(用自制测量尺测白色圆形斑痕半径再计算其面积，无需局部麻醉及染色剂染色)，并均衡分成5组，每组8眼(8兔)，分别给予地塞米松磷酸钠滴眼液(5mL:1.25mg)，3.358、1.119万单位盐酸溶菌酶滴眼液，溶剂及生理盐水，每次3滴(0.15mL)，每日5次，连续给药11天，于给药后第6和第11天分别测量烧伤斑痕面积，并进行统计学处理，用t检验法进行比较，试验结果见表15。
表15 盐酸溶菌酶滴眼液对家兔眼角膜化学烧伤的治疗作用
注：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，与生理盐水滴眼液组比较。
由表15可见，溶剂对照组与生理盐水滴眼液组相比较无显著性差异，而盐酸溶菌酶滴眼液和地塞米松磷酸钠滴眼液均使家兔眼角膜烧伤斑痕面积显著地减小(p＜0.05～0.01)，表明两者对家兔眼角膜化学烧伤均具有明显治疗作用。另外，肉眼观察可见，初始时兔眼畏光、分泌物较多、眼局部轻微红肿，但随着治疗进程均不同程度逐渐改善，尤其盐酸溶菌酶滴眼液。
2.2 对巴豆油引起急性角膜虹膜炎症的影响：取健康无眼疾家兔40只，用注射器将0.05mL巴豆油乳液经角膜注入家兔一侧眼前房内，造成急性角膜虹膜炎症，然后按表16进行评分并均衡分成5组，每组8眼(8兔)，另侧眼作为正常对照眼。分别给予地塞米松磷酸钠滴眼液(5mL:1.25mg)，3.358、1.119万单位盐酸溶菌酶滴眼液，溶剂及生理盐水滴眼液，每次3滴，每日5次，连续给药10天，于给药后第5天及第10天分别按表16评分1次，并进行统计学处理，用t检验法进行组间比较，试验结果见表17。
表16 家兔眼角膜炎和虹膜炎评分标准
表17 盐酸溶菌酶滴眼液对巴豆油引起家兔眼角膜虹膜炎的影响
注：＊P＜0.05，与生理盐水滴眼液组比较。
由表17可见，溶剂组与生理盐水滴眼液组相比较无显著性差异，而盐酸溶菌酶滴眼液和地塞米松磷酸钠滴眼液均使家兔眼炎症评分显著地降低(P＜0.05)，表明两者对巴豆油引起的家兔眼虹膜炎和角膜炎具有明显治疗作用。
附图说明
图1是实验例1：操作压力对通量的影响(L/m2.h)，横坐标为时间(min)，纵坐标为通量；
图2是实验例2：盐酸溶菌酶pH值的不同条件的稳定性，横坐标为时间(天)，纵坐标为效价(万单位)；
图3是实验例11：0.1％盐酸溶菌酶滴眼液组，家兔出现结膜充血、呈鲜红色、虹膜清晰可见；
图4是实验例11：0.1％盐酸溶菌酶滴眼液组，家兔出现角膜散在点状混浊；
图5是实验例11：0.09％盐酸溶菌酶滴眼液组，家兔结膜无明显充血，虹膜清晰可见；
图6是实验例11：0.09％盐酸溶菌酶滴眼液组，家兔角膜透明。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明，但不限于此。
实施例1～3原辅料说明：
实施例中所涉及的装置和设备均为目前滴眼剂生产通用设备，市场可购。说明如下：
不锈钢溶解罐(型号100L)郑州永信搪瓷化工设备有限公司；有售。
实施例1、盐酸溶菌酶滴眼液及制备
1、原辅材料投料量配比(w/w)：
2、按照如下方法制备：
(1)按配比称取盐酸溶菌酶、甘氨酸、苯扎溴铵、氯化钠、注射用水备用；
(2)按配比称取盐酸溶菌酶和甘氨酸，分别加注射用水溶解，用2％(W/W)盐酸调pH5.0；并分别用0.22μm滤膜；过滤操作压力是0.65MPa过滤除菌后，将所得盐酸溶菌酶、甘氨酸料液合并，输送至已灭菌的罐内，室温备用；
(3)按配比称取氯化钠、注射用水各组分混合，配成质量浓度为0.55％的氯化钠水溶液，继续升温至131～136℃，并保持温度15～30min进行灭菌，输送至已灭菌的罐内存放，在30～40℃保温备用；
(4)按配比称取苯扎溴铵，加入步骤(3)已灭菌的氯化钠水溶液，搅拌溶解，室温备用；
(5)在无菌条件下，将步骤(2)、(3)、(4)所得的物料混合，搅拌均匀，即得。
将上述产品进行无菌包装，检验，入库。
实施例2、盐酸溶菌酶滴眼液及制备
1、原辅材料投料量配比(w/w)：
2、按照如下方法制备：
(1)按配比称取盐酸溶菌酶、甘氨酸、苯扎溴铵、氯化钠、注射用水备用；
(2)按配比称取盐酸溶菌酶和甘氨酸，分别加注射用水溶解，用5％(W/W)盐酸调pH5.0；并分别用0.22μm滤膜；过滤操作压力是0.65MPa过滤除菌后，将所得盐酸溶菌酶、甘氨酸料液合并，输送至已灭菌的罐内，室温备用；
(3)按配比称取氯化钠、注射用水各组分混合，配成质量浓度为0.45％的氯化钠水溶液，继续升温至131～136℃，并保持温度15～30min进行灭菌，输送至已灭菌的罐内存放，在30～40℃保温备用；
(4)按配比称取苯扎溴铵，加入步骤(3)已灭菌的氯化钠水溶液，搅拌溶解，室温备用；
(5)在无菌条件下，将步骤(2)、(3)、(4)所得的物料混合，搅拌均匀，即得。
将上述产品进行无菌包装，检验，入库。
实施例3、盐酸溶菌酶滴眼液及制备
1、原辅材料投料量配比(w/w)：
2、按照如下方法制备：
(1)按配比称取盐酸溶菌酶、甘氨酸、苯扎溴铵、氯化钠、注射用水备用；
(2)按配比称取盐酸溶菌酶和甘氨酸，分别加注射用水溶解，用8％(W/W)盐酸调pH6.0；并分别用0.15μm滤膜；过滤操作压力是0.68MPa过滤除菌后，将所得盐酸溶菌酶、甘氨酸料液合并，输送至已灭菌的罐内，室温备用；
(3)按配比称取氯化钠、注射用水各组分混合，配成质量浓度为0.35％的氯化钠水溶液，继续升温至131～136℃，并保持温度15～30min进行灭菌，输送至已灭菌的罐内存放，在30～40℃保温备用；
(4)按配比称取苯扎溴铵，加入步骤(3)已灭菌的氯化钠水溶液，搅拌溶解，室温备用；
(5)在无菌条件下，将步骤(2)、(3)、(4)所得的物料混合，搅拌均匀，即得。
将上述产品进行无菌包装，检验，入库。

Claims (10)

1.一种治疗眼部感染的盐酸溶菌酶滴眼液，包括活性成分和辅料，其特征在于所述的活性成分为盐酸溶菌酶，其在滴眼液中的重量百分比为0.04～0.20％。
2.如权利要求1所述的盐酸溶菌酶滴眼液，其特征在于，所述辅料包括稳定剂、渗透压调节剂和/或抑菌剂。
3.如权利要求2所述的盐酸溶菌酶滴眼液，其特征在于，所述的稳定剂为甘氨酸；所述的渗透压调节剂为氯化钠；所述的抑菌剂为苯扎溴铵。
4.如权利要求1～3任一所述的盐酸溶菌酶滴眼液，其特征在于，由以下原料按质量份制成：
5.如权利要求4所述的盐酸溶菌酶滴眼液，其特征在于，由以下原料按质量份制成：
6.如权利要求5所述的盐酸溶菌酶滴眼液，其特征在于，由以下原料按质量份制成：
或者，
或者，
7.如权利要求4～6任一所述的盐酸溶菌酶滴眼液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)按配比称取盐酸溶菌酶、甘氨酸、苯扎溴铵、氯化钠、注射用水备用；
(2)按配比称取盐酸溶菌酶和甘氨酸，分别加注射用水溶解，用2～8％(W/W)盐酸调pH4.0～pH6.0；并分别用0.10～0.22μm滤膜，过滤操作压力是0.65～0.70MPa过滤除菌后，将所得盐酸溶菌酶、甘氨酸料液合并，输送至已灭菌的罐内，室温备用；
(3)按配比称取氯化钠、注射用水各组分混合，配成质量浓度为0.35％～0.55％的氯化钠水溶液继续升温至131～136℃，并保持温度15～30min进行灭菌，输送至已灭菌的罐内存放，在30～40℃保温备用；
(4)按配比称取苯扎溴铵，加入步骤(3)已灭菌的氯化钠水溶液，搅拌溶解，室温备用；
(5)在无菌条件下，将步骤(2)、(3)、(4)所得的物料混合，搅拌均匀，即得。
8.如权利要求7所述的盐酸溶菌酶滴眼液的制备方法，其特征在于，步骤(2)的过滤滤膜为0.22μm；过滤操作压力是0.65Mpa。
9.如权利要求7所述的盐酸溶菌酶滴眼液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)按配比称取盐酸溶菌酶、甘氨酸、苯扎溴铵、氯化钠、注射用水备用；
(2)按配比称取盐酸溶菌酶和甘氨酸，分别加注射用水溶解，用5％(W/W)盐酸调pH5.0；并分别用0.22μm滤膜；过滤操作压力是0.65MPa过滤除菌后，将所得盐酸溶菌酶、甘氨酸料液合并，输送至已灭菌的罐内，室温备用；
(3)按配比称取氯化钠、注射用水各组分混合，配成质量浓度为0.55％的氯化钠水溶液，继续升温至131～136℃，并保持温度15～30min进行灭菌，输送至已灭菌的罐内存放，在30～40℃保温备用；
(4)按配比称取苯扎溴铵，加入步骤(3)已灭菌的氯化钠水溶液，搅拌溶解，室温备用；
(5)在无菌条件下，将步骤(2)、(3)、(4)所得的物料混合，搅拌均匀，即得。
10.如权利要求1～6任一所述的盐酸溶菌酶滴眼液在制备治疗眼部感染的药物中的应用。
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