CN105998160A - 沙苑子总黄酮在制备治疗围绝经期抑郁症药物中的应用 - Google Patents

沙苑子总黄酮在制备治疗围绝经期抑郁症药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及沙苑子总黄酮在制备治疗围绝经期抑郁症药物中的应用，可有效解决围绝经期抑郁症的治疗用药问题，方法是，将沙苑子粉碎成粗粉，用石油醚回流提取，脱脂，弃去石油醚；沙苑子药渣挥干石油醚，用乙醇浸泡，回流提取，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，用蒸馏水分散，得样品液；样品液上AB‑8型大孔吸附树脂，依次用蒸馏水、质量浓度10%的乙醇、质量浓度80%的乙醇洗脱，收集80%乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，加等体积石油醚萃取，挥尽有机溶剂，水层冷冻干燥，冷冻干燥，粉碎，得沙苑子总黄酮。本发明原材料丰富，制备方法简单，有效解决了围绝经期抑郁症的治疗用药问题，是疗围绝经期抑郁症药物上的创新。

Description

沙苑子总黄酮在制备治疗围绝经期抑郁症药物中的应用
技术领域
本发明涉及医药，特别是一种沙苑子总黄酮在制备治疗围绝经期抑郁症药物中的应用。
背景技术
沙苑子又称扁茎黄耆(学名：Astragaluscomplanatus)是豆科黄芪属的植物，是中国的特有植物。分布于中国大陆的河南、东北、华北等地，生长于海拔1,000米至1,700米的地区，常生于路边、沟岸、草坡和干草场。
种子入药，有补肾固精、清肝明目之效，主治腰膝酸痛、遗精早泄、遗尿、尿频、白带、神经衰弱及视力减退、糖尿病等症。
围绝经期抑郁症是一种情绪障碍，不少妇女在绝经前数年就已经出现轻微的情绪障碍。多半周期性地出现在月经来潮前数天，而在月经来潮后自然缓解，即“经前综合征”。这些患者围绝经期抑郁症的发病危险可能增加，严重影响着患者的身体健康。
现虽有治疗围绝经期抑郁症的多种药物，但由于种种原因，其使用和疗效并不尽人意，因此，治疗围绝经期抑郁症药物上的改进和创新是本领域技术人员一直研究解决的技术问题，但至今未见有沙苑子提取物总黄酮在制备治疗围绝经期抑郁症药物中的公开报导。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种沙苑子总黄酮在制备治疗围绝经期抑郁症药物中的应用，可有效解决围绝经期抑郁症的治疗用药问题。
本发明解决的技术方案是，将沙苑子粉碎成粗粉，用石油醚回流提取，脱脂，弃去石油醚；沙苑子药渣挥干石油醚，用乙醇浸泡，回流提取，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，用蒸馏水分散，得样品液；样品液上AB-8型大孔吸附树脂，依次用蒸馏水、质量浓度10％的乙醇、质量浓度80％的乙醇洗脱，收集80％乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，加等体积石油醚萃取，挥尽有机溶剂，水层冷冻干燥，冷冻干燥，粉碎，得沙苑子总黄酮。
该沙苑子总黄酮有效用于制备治疗围绝经期抑郁症的药物，实现沙苑子总黄酮在制备治疗围绝经期抑郁症药物中的应用。
本发明原材料丰富，制备方法简单，有效解决了围绝经期抑郁症的治疗用药问题，是治疗围绝经期抑郁症药物上的创新，具有很强的实际应用价值。
具体实施方式
以下结合具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。
本发明在具体实施中，是由以下方法实现的。
一种沙苑子总黄酮在制备治疗围绝经期抑郁症药物中的应用，所述的沙苑子总黄酮是，将沙苑子粉碎成过20-30目筛的粗粉，先加粗粉10倍重量的石油醚(沸程60-90℃)回流提取1h，脱脂，弃去石油醚；再加粗粉10倍重量的石油醚回流提取1h，脱脂，弃去石油醚；沙苑子药渣挥干石油醚，加沙苑子粗粉10倍重量质量浓度80％的乙醇浸泡0.5h，回流提取2次，每次1h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水分散至相当于含生药量0.3g/ml，得样品液；样品液上AB-8型大孔吸附树脂，先用2倍柱体积蒸馏水洗脱，弃去水液；继用4倍柱体积、质量浓度10％的乙醇洗脱，弃去洗脱液；再用6倍柱体积、质量浓度80％的乙醇洗脱，收集质量浓度80％乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，加等体积的石油醚萃取1次，弃去石油醚；挥尽有机溶剂，水层冷冻干燥，粉碎，得沙苑子总黄酮。
本发明沙苑子总黄酮经实地试验，可有效用于制备治疗围绝经期抑郁症的药物，实现沙苑子总黄酮在制备治疗围绝经期抑郁症药物中的应用，有关试验资料如下：
1.材料与方法
1.1实验材料
1.1.1实验动物
SD大鼠；雌性；SPF级体重：250-270g；提供单位：山东鲁抗医药股份有限公司，动物合格证号：0021925；实验室合格证号：SYXK(豫)2010-001
1.1.2实验药物
沙苑子总黄酮
更年安胶囊，山西天星制药有限公司生产，批号140112；大豆异黄酮维E软胶囊，威海紫光生物科技开发有限公司生产，批号14040301。
1.3实验试剂：
大鼠E2、T、GnRH、LH、FSH、IL-2、BGP、β-EP、NE、5-HT、DA检测试剂盒，R&D公司，批号20150101A；抗ER多克隆抗体：北京博奥森生物工程有限公司，批号bs-0122R；抗AR多克隆抗体，武汉博士德生物工程有限公司。批号11D53；抗Bcl-2多克隆抗体：武汉博士德生物工程有限公司，批号196841；抗Bax多克隆抗体：武汉博士德生物工程有限公司，批号13CM400A；兔-IgG免疫组化试剂盒，武汉博士德生物工程有限公司，批号06K12A10；羧甲基纤维素钠，天津市恒星化学试剂制造有限公司，批号20140106；注射用青霉素钠，华北制药股份有限公司生产，批号F4013504；甲醛溶液(分析纯)，烟台市双双化工有限公司生产，批号20141003；0.9％氯化钠注射液，河南科伦药业有限公司生产，批号C114092201-2；水合氯醛，天津市光复精密化工研究所生产，批号20120807；酒精，新乡市三伟消毒制剂有限公司生产，批号20140905。
1.4实验仪器
TDZ4-WS台式低速离心机，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司；IORAD-680酶标仪，680Microplate Reader，Bio-Rad Laboratories；OFT-100开场活动试验箱，成都泰盟软件有限公司；BX61电动显微镜，日本OLYMPUS公司；888-2766A WELLWASH，赛默飞世尔(上海)仪器有限公司；JZ19600手动移液器，美国赛默飞世尔科技有限公司；HHS-21-8型电热恒温水浴锅，上海博迅实业有限公司医疗设备厂；
BCD-248T型冰箱，新飞电器有限公司；JM 1000电子秤，余姚记铭称重校验设备有限公司；AL204电子天平，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；FCD-3000电热鼓风干燥箱，北京科伟永兴仪器有限公司；Forma 900系列超低温冰箱，美国赛默飞世尔科技公司；X3R高速冷冻离心机，美国赛默飞世尔科技有限公司。
1.2实验方法
1.2.1造模与给药
取体重250-270g雌性wistar大鼠100只，随机取12只作为空白组，做假手术处理，其余大鼠造更年期模型。大鼠称重后腹腔注射10％水合氯醛(0.3ml/100g)麻醉后腹位固定，然后从大鼠背部最末肋骨下，距脊柱约2cm交叉处剪毛，消毒后切开皮肤和背肌，切开长约1cm，切口视野可见一乳白色的脂肪团；用小镊子轻轻夹住脂肪团拉出切口外，分离脂肪团，即可见到一团细线状不规则，呈黄红色的组织，即为卵巢。剪取时先将卵巢下输卵管(包括脂肪)用细线结扎，完全摘除左侧卵巢，右侧摘除80％。术后顺势将组织放回腹腔中，缝合肌肉及皮肤。造模过程分两批进行。术后精心饲养，肌肉注射青霉素20万u/kg(每只0.1ml)以防感染，连续3d，每天1次。手术5d后开始对手术大鼠逐只进行阴道涂片检查，每天1次，连续5d，涂片呈现动情反应的大鼠弃去不用，选择72只去势完全的大鼠随机均匀分为6组供实验用，分别为模型组，更年安胶囊组，大豆异黄酮维E软胶囊组，大、中、小剂量沙苑子总黄酮组。每日灌胃给药1次，连续给药35天。给药5天后，空白组大鼠6只/笼饲养，正常饮食饮水，不给任何刺激；造模型6组均为每笼饲养1只大鼠，每天随机给予6种不同刺激。6种应激因子按随机方法在18d内应用：①潮湿垫料(g垫料，ml水)，②冰水游泳(4℃，5min)，③热应激(45℃，5min)，④通宵照明(24h)，⑤禁水(24h)，⑥禁食(24h)。每天随机给予一种刺激，每种刺激不能连续出现，连续18d。
配药：0.5％CMC配制方法：称取羧甲基纤维素钠4g，用蒸馏水配成800ml。
(1)大、中、小剂量沙苑子总黄酮组给药剂量分别为0.20g/kg、0.10g/kg、0.05g/kg(给药体积1ml/100g)。配置方法：分别称取沙苑子总黄酮2.0g、1.0g、0.5g，先混悬于少量的0.5％CMC溶液，然后再定容到100ml，混匀，即为所需沙苑子总黄酮大、中、小剂量混悬液。
(2)更年安胶囊(0.45g/kg，用蒸馏水配成0.045g/ml，1ml/100g，相当于临床用量的10倍)；配置方法：取更年安胶囊15粒，先混悬于少量的0.5％CMC溶液，然后再定容到100ml，混匀，即为所需更年安胶囊混悬液。
(3)大豆异黄酮维E软胶囊(0.167g/kg，用蒸馏水配成0.0167g/ml，1ml/100g，相当于临床用量的10倍)；配置方法：取大豆异黄酮胶囊4粒，先混悬于少量的0.5％CMC溶解，然后再定容到120ml，混匀，即为所需大豆异黄酮胶囊混悬液。
给药：更年安胶囊组灌服更年安胶囊混悬液(0.45mg/kg，相当于临床剂量的10倍)，大豆异黄酮软胶囊组灌服大豆异黄酮软胶囊混悬液(0.167mg/kg，相当于临床剂量的10倍)，空白组和模型组分别灌服同体积0.5％CMC溶液(灌胃体积均为1ml/100g)，大、中、小剂量沙苑子总黄酮组，分别按组别灌服大、中、小剂量沙苑子总黄酮(给药剂量分别为0.2g/kg、0.1/kg、0.05g/kg，给药体积1ml/100g)。每日灌胃给药1次，连续给药35天。
1.2.2观察项目及检测方法
1.2.2.1观察项目
各组大鼠于刺激结束后第一天时测定开场活动(Open field)。第2天进行大鼠强迫游泳实验：测量大鼠4min内，2-4min的不动时间。于第3-4天进行糖水消耗实验，计算动物24h饮用1％糖水的量。
末次灌胃后2h(禁食15小时)，摘眼球取血，分离血清，测定血清中E2、T、GnRH、LH、FSH、IL-2、BGP的含量；血浆β-EP的含量。解剖大鼠，取脑匀浆，测脑组织匀浆中NE、5-HT、DA含量；摘除胸腺、脾脏、子宫和剩余20％卵巢组织，称量其湿重并计算胸腺、脾脏、子宫的脏器指数(脏器指数＝脏器湿重mg/大鼠体重g)，然后取脑中下丘脑和垂体，将左侧下丘脑、垂体、子宫以、卵巢及胸腺、脾脏固定于10％甲醛溶液中，石蜡包埋，切片，用免疫组化法测下丘脑、垂体、卵巢、子宫中ER表达，下丘脑、垂体中AR、Bcl-2、Bax表达。
1.2.2.2检测方法
(1)Openfield法测试
各组大鼠于刺激结束后第一天测定大鼠开场活动(Open field)，观察大鼠3min内站立次数和水平活动距离。
(2)强迫游泳实验
刺激结束后第2天进行大鼠强迫游泳实验：将大鼠单独放入圆柱形游泳筒，水温(23～25)℃，测量大鼠4min内，2-4min的不动时间。
(3)糖水摄入量测试
刺激结束后第3-4天测试各组大鼠1％蔗糖水消耗量，测试前禁水12小时，测定24小时内蔗糖水摄入量，同时禁食24h。
(4)试剂盒测定方法：
血清标本的获取：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心的分离。
血浆标本的获取：以肝素抗凝管存放血液样本，抗凝。后以3000转离心30分钟，取上清液。
组织匀浆标本的获取：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
大鼠雌二醇(E2)ELISA检测试剂盒测定方法同实验1中雌二醇测定法：其中，标准品(S0-S5)浓度依次为：0、4、8、16、32、64pmol/L。
大鼠黄体生成素(LH)ELISA检测试剂盒测定测定方法同雌二醇，其中，标准品(S0-S5)浓度依次为：0、3、6、12、24、48mIU/mL。
大鼠促卵泡素(FSH)ELISA检测试剂盒测定方法同雌二醇，其中，标准品(S0-S5)浓度依次为：0、0.75、1.5、3、6、12IU/mL。
大鼠促性腺激素释放激素(GnRH)ELISA检测试剂盒测定方法同雌二醇。其中，标准品(S0-S5)浓度依次为：0、5、10、20、40、80mIU/mL。
大鼠白细胞介素2(IL-2)ELISA检测试剂盒测定方法同雌二醇。其中，标准品(S0-S5)浓度依次为：0、100、200、400、800、1600pg/mL。
大鼠骨钙素(BGP)ELISA检测试剂盒测定方法同雌二醇。其中，标准品(S0-S5)浓度依次为：0、0.75、1.5、3、6、12ng/mL。
大鼠β-内啡肽(β-EP)ELISA检测试剂盒测定方法同雌二醇。其中，标准品(S0-S5)浓度依次为：0、3、6、12、24、48pg/mL。
大鼠睾酮(T)ELISA检测试剂盒测定方法同雌二醇。其中，标准品(S0-S5)浓度依次为：0、20、40、80、160、320pg/mL。
大鼠多巴胺(DA)ELISA检测试剂盒测定方法同雌二醇。其中，标准品(S0-S5)浓度依次为：0、100、200、400、800、1600pg/mL。
大鼠5羟色胺(5-HT)ELISA检测试剂盒测定方法同雌二醇。其中，标准品(S0-S5)浓度依次为：0、7.5、15、30、60、120ng/mL。
(5)免疫组化检测方法：同实验一。
1.2.3统计学处理方法
数据分析用SPSS17.0医用统计包进行数据资料的统计学处理，计量资料用平均数±标准差表示，各组间比较采用单因素方差分析，方差检验齐者用LSD法，方差不齐者用Games-Howell法检验，等级资料采用Ridit检验。
2.结果
2.1对围绝经期合并抑郁模型大鼠行为学的影响
对围绝经期合并抑郁模型大鼠旷场活动的影响(见表1)
表1沙苑子总黄酮对围绝经期抑郁大鼠旷场活动的影响
注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01
由上表可看出，与空白组相比，模型组大鼠的活动距离和站立次数都显著减少(P<0.01)；反映了大鼠对新鲜环境的好奇程度降低。与模型组比较，大剂量沙苑子总黄酮与更年安胶囊、大豆异黄酮软胶囊均能使围绝经期合并抑郁大鼠活动距离和站立次数显著增加(P<0.01)。中、小剂量对活动距离又增加趋势；中剂量能够显著增加站立次数(P<0.05)，小剂量对站立吃素有增加趋势。
对围绝经期合并抑郁模型大鼠强迫游泳和糖水摄入量的影响(见表2)
表2沙苑子总黄酮对围绝经期抑郁大鼠强迫游泳不动时间和糖水摄入量的影响
注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01
由上表可以看出，与空白组比，模型组大鼠的强迫游泳不动时间显著延长(P<0.01)，糖水摄入量显著下降(P<0.01)；说明围绝经期合并抑郁大鼠对不利环境的绝望程度升高，对奖赏的反应降低。与模型相比，更年安胶囊、大豆异黄酮软胶囊能使大鼠强迫游泳不动时间显著缩短(P<0.01)，糖水摄入量显著增加(P<0.01)；大剂量能够明显减少不动时间(P<0.05)，显著增加糖水摄入量(P<0.01)；中剂量对不懂时间有缩短趋势，能够明显增加糖水摄入量(P<0.05)；小剂量又缩短不动时间和增加糖水摄入量的趋势。
2.2对围绝经期合并抑郁模型大鼠脏器指数的影响
对围绝经期合并抑郁模型大鼠胸腺、脾脏、子宫指数的影响(见表3)
表3沙苑子总黄酮对围绝经期抑郁大鼠胸腺、脾脏、子宫指数的影响
注：与模型组比较，*P<0.05，**0.31P<0.01
由上表可看出，与空白组比，模型组大鼠的胸腺指数、脾脏指数、子宫指数显著下降(P<0.01)，说明不完全摘除卵巢所致围绝经期大鼠模型出现胸腺、脾脏和子宫萎缩。与模型组比，更年安胶囊、大豆异黄酮软胶囊可显著提高围绝经期模型合并抑郁大鼠胸腺和子宫指数(P<0.01)；大剂量沙苑子总黄酮、更年安胶囊、大豆异黄酮软胶囊可明显提高围绝经期合并抑郁大鼠的脾脏指数(P<0.05)；大剂量能够明显升高胸腺指数(P<0.05)，显著升高子宫指数(P<0.01)；中、小剂量对脾脏、胸腺、子宫指数有升高趋势。
2.3对围绝经期合并抑郁模型大鼠血清、血浆生化指标的影响
各组大鼠血清中E2、T、LH、FSH、GnRH、IL-2、BGP含量，血浆β-EP含量，见表4。
表4沙苑子总黄酮对围绝经期抑郁大鼠GnRH、LH、FSH的影响
注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01
由上表可以看出，与空白组比较，模型组大鼠血清的GnRH、LH、FSH含量均显著升高(P<0.01)；说明不完全摘除卵巢致围绝经期大鼠模型内分泌紊乱，下丘脑和垂体分泌的相关激素的水平发生紊乱。与模型组相比，大豆异黄酮能显著降低GnRH水平(P<0.01)，大剂量和更年安能够明显降低GnRH水平(P<0.05)；更年安能显著降低LH水评(P<0.01)，大剂量和大豆异黄酮能够明显降低LH水平(P<0.05)；大剂量、大豆异黄酮，更年安能够显著降低FSH水平(P<0.01)；中小剂量能够明显降低FSH水评(P<0.05)，对GnRH、LH水平有降低趋势。
表5沙苑子总黄酮对围绝经期抑郁大鼠血清E2、T的的影响
注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01
由上表可知，与空白组比较，模型组大鼠的血清E2、T水平显著下降(P<0.01)，说明不3.46完全摘除卵巢致围绝经期大鼠模型性激素紊乱，围绝经期大鼠模型复制成功。与模型组比较，更年安胶囊、大豆异黄酮软胶囊使围绝经期合并抑郁模型大鼠E2水平显著升高(P<0.01)，大剂量使E2水平明显升高(P<0.05)；中、小剂量沙苑子总黄酮使围绝经期合并抑郁模型大鼠E2水平有升高趋势；更年安使T水平显著升高(P<0.01)，大剂量和大豆异黄酮使使T水平明显升高(P<0.05)，中、小剂量沙苑子总黄酮使T水平有升高的趋势。
表5沙苑子总黄酮对围绝经期抑郁大鼠血浆β-EP、血清IL-2、BGP的的影响
注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01
由上表可以看出，与空白组比较，模型组大鼠的血浆β-EP、血清IL-2、BGP水平均显著下降(P<0.01)，说明不完全摘除卵巢所致围绝经期大鼠下丘脑分泌功能的紊乱，模型机体免疫力与骨钙质有所降低。与模型组比较，更年安胶囊、大豆异黄酮软胶囊可显著升高血浆β-EP和血清IL-2、BGP的水平(P<0.01)；大剂量可显著升高血浆β-EP谁平(P<0.05)，中小剂量对血浆β-EP谁平有升高趋势；大中小剂量可使血清IL-2水评明显升高(P<0.05)；大中剂量可使BGP水评明显升高(P<0.05)，小剂量对其有升高趋势。
4对对围绝经期合并抑郁模型大鼠脑组织匀浆液中生化指标的影响
对围绝经期合并抑郁模型大鼠脑组织匀浆液中5-HT、DA的影响，见表6.
表6沙苑子总黄酮对围绝经期抑郁大鼠脑匀浆中5-HT、DA的的影响
注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01
由上表可知，与空白组比，模型组大鼠脑匀浆中的5-HT、DA水平均显著降低(P<0.01)，说明造小鼠慢性应激抑郁模型成功。与模型组比，大剂量沙苑子总黄酮、更年安胶囊和大豆异黄酮软胶囊可显著提高脑匀浆中的5-HT水平(P<0.01)，中剂量沙苑子总黄酮可明显提高5-HT水平(P<0.05)；更年安胶囊、大豆异黄酮软胶囊、大剂量沙苑子总黄酮均可显著提高脑匀浆中的DA水平(P<0.01)，中、小剂量沙苑子总黄酮具有升高脑匀浆中的DA水平的趋势。小剂量具有升高脑匀浆中5-HT水平的趋势。
2.5对对围绝经期合并抑郁模型大鼠ER、AR、BAX、BCL-2在相应组织中表达的影响
对对围绝经期合并抑郁模型大鼠子宫、卵巢、垂体、下丘脑中ER的表达，垂体和下丘脑中AR、BAX、BCL-2表达的影响。见表7。
表7沙苑子总黄酮对围绝经期抑郁大鼠雌激素受体(ER)表达的影响(平均光密度)
注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01
表8沙苑子总黄酮对围绝经期抑郁大鼠雄激素受体(AR)表达的影响(平均光密度)
注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01
由上表可以看出，与空白组比较，模型大鼠各组织ER、AR的表达均显著降低(P<0.01)，说明不完全摘除卵巢合并慢性刺激所致围绝经期合并抑郁大鼠模型机体相关组织分布的性激素受体有所降低，从而降低了雌雄激素的生物效应。与模型组比较，大剂量沙苑子总黄酮、更年安胶囊和大豆异黄酮软胶囊能够显著升高ER在子宫、卵巢、垂体、下丘脑的表达(P<0.01)，中剂量显著升高ER在卵巢、垂体、下丘脑的表达(P<0.01)，小剂量ER在卵巢、垂体的表达(P<0.01)；
更年安和大豆异黄酮显著升高AR在垂体、下丘脑的表达(P<0.01)，大中剂量显著升高AR在垂体的表达(P<0.01)，大剂量明显升高AR在下丘脑的表达(P<0.05)。
表9沙苑子总黄酮对围绝经期抑郁大鼠BAX表达的影响(平均光密度)
注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01
表10沙苑子总黄酮对围绝经期抑郁大鼠BCL-2表达的影响(平均光密度)
注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01
由上表可以看出，与空白组相比，模型大鼠下丘脑和垂体中Bcl-2水平显著降低、Bax水平均显著升高(vvP<0.01)，说明不完全摘除卵巢合并慢性刺激所致围绝经期合并抑郁大鼠模型机体细胞凋亡增加。与模型组比较，大、中剂量沙苑子总黄酮、更年安胶囊、大豆异黄酮软胶囊均可显著降低垂体、下丘脑中Bax水平(P<0.01)；中剂量可显著降低下丘脑中Bax水平(P<0.01)，明显可降低垂体中Bax水平(P<0.05)；小剂量明显可降低垂体中Bax水平(P<0.05)；
更年安、大豆异黄酮可显著升高Bcl-2在垂体、下丘脑中的表达(P<0.01)；大剂量可明显升高Bcl-2在垂体的表达(P<0.05)，中小剂量可显著升高Bcl-2在垂体的表达(P<0.01)；大剂量可显著显著升高Bcl-2在下丘脑的表达。
3.结论
沙苑子总黄酮对大鼠围绝经期抑郁模型有好的改善作用，沙苑子总黄酮能使围绝经期合并抑郁大鼠活动距离和站立次数显著增加，对活动距离有增加的趋势；能够显著增加站立次数。沙苑子总黄酮能够明显减少不动时间，显著增加糖水摄入量。沙苑子总黄酮可明显提高围绝经期合并抑郁大鼠的脾脏指数，能够明显升高胸腺指数，显著升高子宫指数。沙苑子总黄酮能够明显降低GnRH水平、明显降低LH水平、显著降低FSH水平。沙苑子总黄酮使围绝经期合并抑郁模型大鼠E2水平有升高趋势，使T水平明显升高。沙苑子总黄酮可显著升高血浆β-EP水平，使血清IL-2水平明显升高。沙苑子总黄酮可明显提高5-HT水平，沙苑子总黄酮可显著提高脑匀浆中的DA水平。沙苑子总黄酮能够显著升高ER在子宫、卵巢、垂体、下丘脑的表达；显著升高AR在垂体的表达，明显升高AR在下丘脑的表达。沙苑子总黄酮可显著降低垂体、下丘脑中Bax水平，明显可降低垂体中Bax水平(P<0.05)；沙苑子总黄酮可明显升高Bcl-2在垂体的表达，可显著升高Bcl-2在垂体的表达，可显著显著升高Bcl-2在下丘脑的表达，有效用于制备治疗围绝经期抑郁症的药物，开拓了治疗围绝经期抑郁症药物上的新途径，是药物上的创新，具有实际的应用价值。

Claims (1)

1.一种沙苑子总黄酮在制备治疗围绝经期抑郁症药物中的应用，所述的沙苑子总黄酮是，将沙苑子粉碎成过20-30目筛的粗粉，先加粗粉10倍重量的石油醚回流提取1h，脱脂，弃去石油醚；再加粗粉10倍重量的石油醚回流提取1h，脱脂，弃去石油醚；沙苑子药渣挥干石油醚，加沙苑子粗粉10倍重量质量浓度80%的乙醇浸泡0.5h，回流提取2次，每次1h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水分散至相当于含生药量0.3g/ml，得样品液；样品液上AB-8型大孔吸附树脂，先用2倍柱体积蒸馏水洗脱，弃去水液；继用4倍柱体积、质量浓度10%的乙醇洗脱，弃去洗脱液；再用6倍柱体积、质量浓度80%的乙醇洗脱，收集质量浓度80%乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，加等体积的石油醚萃取1次，弃去石油醚；挥尽有机溶剂，水层冷冻干燥，粉碎，得沙苑子总黄酮。
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