CN106236799A - 蛇床子总黄酮在制备治疗围绝经期综合征药物中的应用 - Google Patents

蛇床子总黄酮在制备治疗围绝经期综合征药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及蛇床子总黄酮在制备治疗围绝经期综合征药物中的应用,可有效解决蛇床子总黄酮作为唯一活性成分在制备围绝经期综合征药物中的应用问题,该蛇床子总黄酮是将蛇床子粉碎成粗粉,先用石油醚回流提取,脱脂,蛇床子药渣挥干石油醚,加乙醇浸泡,回流提取,过滤,减压回收乙醇至无醇味,加蒸馏水分散,得药液;药液上AB‑8型大孔吸附树脂,先用蒸馏水洗脱,弃去水洗脱液;再用质量浓度10%乙醇洗脱,弃去洗脱液;再用质量浓度80%乙醇洗脱,收集80%乙醇洗脱液,减压回收乙醇至无醇味,冷冻干燥,粉碎,得蛇床子总黄酮,本发明原料丰富,制备方法简单,易操作,生产效率高,有效用于制备治疗围绝经期综合征的药物,开拓了蛇床子的新用途。

Description

蛇床子总黄酮在制备治疗围绝经期综合征药物中的应用
技术领域
本发明涉及医药,特别是一种蛇床子总黄酮在制备治疗围绝经期综合征药物中的应用。
背景技术
蛇床子Cnidium monnieri(L.)Cuss.,别名野胡萝卜子,性温,味苦,温肾壮阳,燥湿,祛风,杀虫,用于阳痿、宫冷、寒湿带下、湿痹腰痛;外治外阴湿疹、妇人阴痒、滴虫性阴道炎。
围绝经期综合征是指妇女绝经前后的一段时期(从45岁左右开始至停经后12个月内的时期),包括从接近绝经出现与绝经有关的内分泌、生物学和临床特征起至最后1次月经后1年,也就是卵巢功能衰退的征兆,一直持续到最后1次月经后1年,是正常的生理变化时期。但在围绝经期易发生不适,临床表现为月经改变,面部潮红、阵阵发热、出汗等血管舒张症状。情绪不稳定、激动易怒、抑郁多烦、记忆力减退、工作能力下降等,皮肤皱纹逐渐增多,有的出现瘙痒、毛发开始变白脱落。腹部和臀部脂肪增多,容易发胖,血压易波动,常出现高血压、心前区闷痛不适、心悸、气短,动脉硬化发生率增加,冠心病发病率也上升,骨质疏松,上述症状被称为围绝经期综合征。
现虽有治疗围绝经期的多种药物,但至今未见有从蛇床子中提取的蛇床子总黄酮在制备治疗围绝经期药物中的应用。
发明内容
针对上述情况,为克服现有技术之缺陷,本发明之目的就是提供一种蛇床子总黄酮在制备治疗围绝经期综合征药物中的应用,可有效解决蛇床子总黄酮作为唯一活性成分在制备围绝经期综合征药物中的应用问题。
本发明解决的技术方案是,蛇床子总黄酮作为唯一活性部位(成分)在制备治疗围绝经期综合征药物中的应用,该蛇床子总黄酮是将蛇床子粉碎成粗粉,先用石油醚回流提取,脱脂,蛇床子药渣挥干石油醚,加乙醇浸泡,回流提取,过滤,减压回收乙醇至无醇味,加蒸馏水分散,得药液;药液上AB-8型大孔吸附树脂,先用蒸馏水洗脱,弃去水洗脱液;再用质量浓度10%乙醇洗脱,弃去洗脱液;再用质量浓度80%乙醇洗脱,收集80%乙醇洗脱液,减压回收乙醇至无醇味,冷冻干燥,粉碎,得蛇床子总黄酮。
本发明制备的蛇床子总黄酮作为唯一活性成分在制备治疗围绝经期综合征药物中的应用,原料丰富,制备方法简单,易操作,生产效率高,有效用于制备治疗围绝经期综合征的药物,开拓了蛇床子的新用途,是中药上的创新,有显著的经济和社会效益。
具体实施方式
以下结合具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。
本发明在具体实施中,蛇床子总黄酮作为唯一活性部位(成分)在制备治疗围绝经期综合征药物中的应用,该蛇床子总黄酮是将蛇床子粉碎成过20-30目筛的粗粉,先加粗粉10倍重量的石油醚回流提取1h,脱脂,蛇床子药渣挥干石油醚,加粗粉10倍重量、质量浓度80%乙醇浸泡0.5h,回流提取1h,过滤,得第一次滤液;药渣再加粗粉10倍重量、质量浓度80%乙醇回流提取1h,过滤,得第二次滤液,合并两次滤液,减压回收乙醇至无醇味,加蒸馏水分散至相当于含生药量0.3g/ml,得药液;药液上AB-8型大孔吸附树脂,先用2倍柱体积蒸馏水洗脱,弃去水洗脱液;再用4倍柱体积的质量浓度10%乙醇洗脱,弃去洗脱液;再用6倍柱体积的质量浓度80%乙醇洗脱,收集80%乙醇洗脱液,减压回收乙醇至无醇味,冷冻干燥,粉碎,得蛇床子总黄酮。
本发明经试验,蛇床子总黄酮作为唯一活性成分,可有效用于制备治疗围绝经期综合征的药物,有关试验资料如下:
1实验材料
1.1药品试剂
本发明蛇床子总黄酮;更年安胶囊(地黄、熟地黄、泽泻、麦冬、玄参、牡丹皮、茯苓、珍珠母、仙茅、五味子、磁石、首乌藤、钩藤、浮小麦、制何首乌),滋阴潜阳,除烦安神;用于更年期潮热汗出,眩晕耳鸣,烦躁失眠。规格:每粒装0.3g;用法用量:口服,一次3粒,一日3次),山西黄河中药有限公司生产。大鼠E2检测试剂盒,R&D公司;注射用青霉素钠,华北制药股份有限公司;甲醛溶液(分析纯),烟台市双双化工有限公司;0.9%氯化钠注射液,河南科伦药业有限公司;水合氯醛:天津市光复精密化工研究所;酒精:新乡市三伟消毒制剂有限公司。
1.3实验仪器
TDZ4-WS台式低速离心机,湖南湘仪实验室仪器开发有限公司;BIORAD-680酶标仪,680Microplate Reader,Bio-Rad Laboratories;BX61电动显微镜,日本OLYMPUS公司;手动移液器,美国赛默飞世尔科技有限公司,型号:JZ19600;
HHS-21-8型电热恒温水浴锅,上海博迅实业有限公司医疗设备厂;BCD-248T型冰箱,新飞电器有限公司;JM 1000电子秤,余姚记铭称重校验设备有限公司;
AL204电子天平,梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司。
1.4实验动物
清洁级小鼠,昆明种,雌性,18-22g,山东鲁抗医药股份有限公司,动物合格证号37005400000020;实验室合格证号SYXK(豫)2010-001。
2实验方法
2.1造模与给药
造模方法:取昆明种小鼠80只,雌性,22~25g,随机取68只小鼠,腹腔注射戊巴比妥钠50mg/kg麻醉后腹位固定,然后从小鼠背部最末肋骨下,在腋中线和距脊柱外侧约1cm交叉处剪毛,消毒后切开皮肤和背肌约0.5~1cm,切口视野中可见一乳白色发亮的脂肪团,卵巢即包埋其中。用小镊子轻轻夹住脂肪团拉出切口外,分离脂肪团,即可见到一团细线状不规则呈黄红色的卵巢。剪取时先将卵巢下输卵管(包括脂肪)用细线结扎,再摘除卵巢,术后顺势将子宫角放回腹腔中,缝合肌肉及皮肤,同法摘除双侧卵巢。另12只小鼠为空白对照组,按上法做手术,但不切除卵巢。术后精心饲养,肌肉注射青霉素预防感染,连续3d。手术5d后开始做手术小鼠逐只进行大鼠阴道涂片检查,每天1次,连续5d,以确定卵巢是否完全切除。涂片呈现动情反应的动物弃去不用,选择60只去势完全的动物随机均匀分为5组。分别为模型组,更年安胶囊组,大、小剂量蛇床子总黄酮组,单做手术不切除卵巢的为空白对照组。
给药方法:将CMC-Na溶解于煮沸的蒸馏水中,制成0.5%的溶液做为溶媒,将以下各药物混悬其中。配成蛇床子总黄酮大、小剂量混悬液:20mg·mL-1、10mg·mL-1,按400mg·kg-1、200mg·kg-1灌胃;更年安胶囊:33.75mg·mL-1,按675mg·kg-1灌胃(相当于临床用量的15倍)灌胃;模型组和空白组给予同体积的CMC-Na溶液,给药体积为0.2mL/10g,每天1次,连续3周。
2.2观察项目及检测方法
各组小鼠末次灌胃后2h(禁食15小时),眶静脉取血,分离血清,采用放射免疫法测定血清中E2、LH、FSH的含量;解剖小鼠,摘除胸腺、脾脏、子宫组织,称量其湿重并计算脏器指数(脏器指数=脏器湿重mg/大鼠体重g);将子宫固定于10%福尔马林溶液中,石蜡包埋,切片,HE染色,光镜下观察各组的组织形态学变化。
雌二醇的测定方法
测定原理:本实验采用放射免疫分析方法。先将校准品或样品、标记物和抗体按程序规定依次加入试管中,使标记和非标记抗原与有限量抗体互相竞争结合,待反应平衡后,加入分离剂,离心沉淀,使游离抗原与抗原抗体复合物分离,测量沉淀物的放射性强度。随E2含量增加,其放射性强度则相应降低。
校准试剂:125I-E2,1瓶(红色液体);
抗体,1瓶(蓝色液体);
校准品,7瓶(液体),浓度为0、10、50、100、250、750、2000pg/mL;
分离剂,1瓶(悬浮液)用前摇匀;
质控血清,2瓶(液体),含低、高两个剂量。
操作程序:将圆底聚苯乙烯试管编号(按复管操作),按下表程序操作
加样测定程序表单位:μL
充分混匀,任取两管测定,作为总放射性强度T。3500rmp(离心力1500g)离心25分钟,立即吸去上清液,测各管的放射性计数(CMP)。
数据处理:以γ计数仪预先编制的程序直接给出有关参数、校准曲线及样品浓度。
3.实验结果
3.1蛇床子总黄酮对小鼠脏围绝经期模型器指数的影响
蛇床子总黄酮对围绝经期模型小鼠胸腺、脾脏、子宫指数的影响,结果见表1。
表1蛇床子总黄酮对围绝经期模型小鼠胸腺、脾脏、子宫指数的影响
与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01
从上表可以看出,与空白对照组比,模型组小鼠子宫指数显著降低(P<0.01)、胸腺指数和脾脏指数有降低的趋势(P>0.05),说明摘除卵巢造的围绝经期模型导致子宫萎缩。与模型组比,蛇床子总黄酮对型小鼠胸腺指数影响不明显(P>0.05);小剂量蛇床子总黄酮可显著提高模型小鼠胸腺指数(P<0.01);大、小剂量蛇床子总黄酮可显著提高型小鼠子宫指数(P<0.01)。
3.2蛇床子总黄酮对围绝经期模型小鼠血清性激素含量的影响
蛇床子总黄酮对小鼠围绝经期模型血清中E2水平的影响,结果见表2。
表2蛇床子总黄酮对小鼠围绝经期模型血清中E2水平的影响
与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01
从上表可以看出,与空白对照组比,模型组血清中E2水平显著下降(P<0.01),LH、FSH水平均显著升高(P<0.01),说明摘除小鼠卵巢所致围绝经期模型血清中性激素水平紊乱。与模型组相比,大、小剂量蛇床子总黄酮组可显著升高围绝经期模型血清E2水平(P<0.01)、更年安胶囊组可明显升高围绝经期模型血清E2水平(P<0.05);小剂量蛇床子总黄酮组和更年安胶囊组可明显降低模型小鼠LH水平(P<0.05);大、小剂量组蛇床子总黄酮组和更年安胶囊组可显著降低型小鼠FSH水平(P<0.01)。
3.3对子宫组织形态的影响
空白对照组小鼠子宫黏膜层、肌层、浆膜层基本正常,黏膜层中的上皮细胞、粘膜腺均正常。模型组小鼠子宫黏膜层、肌层、浆膜层明显萎缩,黏膜层中的上皮细胞、粘膜腺出现明显萎缩并减少。更年安胶囊组小鼠子宫黏膜层、肌层、浆膜层得到一定的恢复,黏膜层中的上皮细胞、粘膜腺也得到一程度的恢复。蛇床子总黄酮大剂量组小鼠子宫黏膜层、肌层、浆膜层基本正常,黏膜层中的上皮细胞、粘膜腺均正常。蛇床子总黄酮晓剂量组小鼠子宫黏膜层、肌层、浆膜层基本恢复正常,黏膜层中的上皮细胞、粘膜腺均正常。
采用测微尺测定子宫内膜和肌层厚度的最宽处及最窄处,求均数,用计数方法,计算内膜中腺体数量,求均数,测的结果见表4。
表4蛇床子总黄酮对小鼠围绝经期模型子宫内膜、肌层和内膜中腺体的影响
与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01
从上表可知,与空白对照组比,模型组小鼠子宫内膜厚度、肌层厚度显著减少(P<0.01),腺体个数显著降低(P<0.01),说明小鼠造围绝经期模型后子宫萎缩,腺体减少。与模型组相比,大、小剂量蛇床子总黄酮组和更年安胶囊组均能显著增加模型小鼠子宫内膜厚度(P<0.01);更年安胶囊组能显著和明显增加模型小鼠肌层厚度(P<0.05);大、小剂量蛇床子总黄酮组与更年安胶囊组均能显著提高模型小鼠内膜中腺体数量(P<0.01)。
应有本品用于制备治疗围绝经期综合征的药物(胶囊),并经临床确诊的88例轻度围绝经期综合征患者临床应用,取得了显著的治疗效果。患者每日服用2次,每次2-3粒,每粒含蛇床子总黄酮0.5g,每月1个疗程,连用2个疗程。除2人外,临床症状消失或临床症状有明显改善或改善者86人,有效率高达97.7%,效果之好是未曾料到的,是治疗围绝经期综合征药物上的创新,开拓了蛇床子的新用途,经济和社会效益显著。

Claims (1)

1.一种蛇床子总黄酮作为唯一活性部位在制备治疗围绝经期综合征药物中的应用,该蛇床子总黄酮是将蛇床子粉碎成过20-30目筛的粗粉,先加粗粉10倍重量的石油醚回流提取1h,脱脂,蛇床子药渣挥干石油醚,加粗粉10倍重量、质量浓度80%乙醇浸泡0.5h,回流提取1h,过滤,得第一次滤液;药渣再加粗粉10倍重量、质量浓度80%乙醇回流提取1h,过滤,得第二次滤液,合并两次滤液,减压回收乙醇至无醇味,加蒸馏水分散至相当于含生药量0.3g/ml,得药液;药液上AB-8型大孔吸附树脂,先用2倍柱体积蒸馏水洗脱,弃去水洗脱液;再用4倍柱体积的质量浓度10%乙醇洗脱,弃去洗脱液;再用6倍柱体积的质量浓度80%乙醇洗脱,收集80%乙醇洗脱液,减压回收乙醇至无醇味,冷冻干燥,粉碎,得蛇床子总黄酮。
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