CN105985871A - 一种清洗剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物领域,特别涉及一种清洗剂。本发明的清洗剂是针对酶促化学发光系统全自动化学发光免疫仪废液针的清洗剂,主要针对废液针上的干涸物质和残留的酶,将碱性氢氧化物和表面活性剂组合使用,增加了蛋白及其它物质的溶解度,能将废液针上的干涸物质溶解;而无机酸的存在既可以起到中和pH的作用,还可以将废液针上残留的酶进行灭活处理,防止交叉污染的产生。
Description
技术领域
本发明涉及生物领域,特别涉及一种清洗剂。
背景技术
全自动化学发光免疫分析仪是医院临床应用最为频繁的仪器之一,临床医生常常依据化学发光免疫分析仪对临床病人体液相应生理指标的检测结果,来对患者疾病做出诊断。化学发光免疫分析为非均相反应,有洗涤步骤。目前全自动化学发光免疫分析仪均采用废液针吸走废液的方式完成洗涤过程。废液针被重复利用,容易导致交叉污染造成测定结果出现差异。因此配套清洗液对于全自动化学发光免疫分析仪的废液针的维护、保证样本测试准确性具有重要意义。
化学发光免疫分析技术按照发光方式不同可分为酶促化学发光(HRP-Luminol系统、ALP-AMPPD系统)、直接化学发光(异鲁米诺、吖啶酯系统)和电致化学发光系统。针对不同的系统所采用的清洗液成分也不尽相同。本发明主要针对酶促化学发光系统(如HRP系统、ALP系统)废液针的维护。废液针吸取的废液的主要成分为人体体液(如血清、血浆等)和试剂缓冲液。人体体液成分复杂,含有大量蛋白类物质、脂类物质等;而试剂缓冲要中也含有蛋白类物质、糖类物质等。这些物质残留在废液针上容易干涸结块从而造成交叉污染。
CN200710305058.7公开了采用碱金属氢氧化物作为自动生化分析仪用清洗液;主要是针对全自动生化分析仪的清洗液,从反应原理、仪器结构、包括清洗液的使用方法与全自动化学发光免疫分析仪完全不同,且该专利的清洗液稳定性不好,不利于生产应用。
CN201010584650.7公开采用碱金属氢氧化物能够降低金属氢氧化物的残留量;
CN200810103646.7公开采用碱性清洗液和酸性清洗液清洗烟气-烟气换热器换热组件的石膏浆或烟尘。但该专利与本技术领域完全不同。
CN201280024172.1公开采用碱性清洁剂和酸性清洁剂清晰器皿,减少膜的沉积。
目前针对全自动化学发光免疫分析仪的市售洗涤液大部分为单组分碱性洗涤液,对废液针上的残留物质只有促溶作用,无法对残留的酶进行灭活。如果碱性清洗液无法将废液针上的残留物质清洗干净,残留的酶将对后续实验造成一定的影响。
因此,提供一种清洗效果好、稳定性好的清洗剂具有重要的现实意义。
发明内容
有鉴于此,本发明提供一种用于全自动化学发光免疫分析仪的清洗剂,该清洗剂具有清洗效果好,,成本低,稳定性好等优势。
为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:
本发明提供了一种清洗剂,包括组分A和组分B,其中,
组分A包括:碱金属氢氧化物和表面活性剂;
组分B包括:酸。
其中,组分A的主要作用是溶解残留在废液针上的干涸蛋白,组分B的主要作用是灭活废液针上残留的酶。
本发明涉及的清洗液有A、B两种组分,组分A为碱性清洗液,负责溶解废液针上的残留物质,当组分A无法将残留物质清洗干净时,组分B为酸,会将干扰后续实验的主要物质酶进行灭活处理,以保证后续反应结果的准确性。
本发明中的一些实施方案中,灭活的酶不仅仅限于HRP系统,还包括ALP系统。
本发明中的一些实施方案中,所述的酶是辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。
在本发明的一些实施方案中,所述碱金属氢氧化物为氢氧化钠或氢氧化钾。
在本发明的一些实施方案中,所述表面活性剂为非离子表面活性剂。
在本发明的一些实施方案中,所述非离子表面活性剂选自脂肪醇与环氧乙烷的缩合物、聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯三嵌段共聚物或者聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯中的一种或两者以上的混合物。
在本发明的一些实施方案中,所述酸为无机酸。
在本发明的一些实施方案中,所述无机酸为盐酸或硝酸。
在本发明的一些实施方案中,所述组分A与所述组分B的质量比为(0.11~3):(0.3~1)。
在本发明的一些实施方案中,所述组分A中,所述碱金属氢氧化物与所述表面活性剂的质量比为(0.1~2):(0.1~1)。
在本发明的一些实施方案中,清洗剂的剂型为清洗液,所述清洗液包括组分A、组分B和水,所述组分A和组分B的质量之和在所述清洗液中的质量百分含量为0.41%~4%。
在本发明的一些实施方案中,清洗剂的剂型为清洗液,所述碱金属氢氧化物在所述清洗液中的质量百分含量为0.1%~2%;所述表面活性剂在所述清洗液中的质量百分含量为0.01%~1%;所述无机酸在所述清洗液中的质量百分含量为0.3%~1%。
具体的,本发明提供的清洗剂用于全自动化学发光免疫分析仪的清洗。
组分A的主要作用是溶解残留在废液针上的干涸蛋白,组分B的主要作用是灭活废液针上残留的酶和中和pH的作用。因此,通过干涸蛋白溶解效果试验和酶灭活实验来模拟验证清洗效果。
干涸蛋白溶解实验方法:模拟废液针上干涸蛋白的主要成分,将酪蛋白、BSA用PBST溶液配制成糊状溶液,将上述糊状溶液放置在60℃烘箱,烤干。将烤干后的固体用剪刀剪成大小一致的小方块,将小方块放置在5mL溶液中,每隔一段时间测定上清液的OD值(蛋白溶解会导致OD值的升高,与溶解蛋白量成正比。),确定蛋白的溶解情况。
酶灭活实验方法:将酶直接连接在羧基磁珠上,取50μl磁珠加入到试管中,用磁力架吸附磁珠后,弃上清。再加入500μl不同的灭活剂混匀,置于磁力架上,吸附1min后弃上清。洗涤3遍后测定其发光信号。
本发明的针对酶促化学发光系统全自动化学发光免疫仪废液针的清洗剂,主要针对废液针上的干涸物质和残留的酶,将碱性氢氧化物和表面活性剂组合使用,增加了蛋白及其它物质的溶解度,能将废液针上的干涸物质溶解;而无机酸的存在既可以起到中和pH的作用,还可以将废液针上残留的酶进行灭活处理,防止交叉污染的产生。
利用本发明的清洗液在线测试过程中,按照设置的清洗程序进行在线清洗,能够去除包括蛋白质、脂类物质等有机物,避免这些物质在废液针表面干涸残留,影响后续实验;清洗后具有良好的临床项目的批内重复性、低交叉污染等特点,同时不影响免疫分析仪的测试结果;清洗过程对分析仪的液路系统及反应均没有腐蚀作用;同时本发明清洗液所有组分都可以生物降解,对环境没有潜在的污染,符合环保要求。
具体实施方式
本发明公开了一种清洗剂,本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。
本发明提供的清洗剂中所用组分均可由市场购得。
下面结合实施例,进一步阐述本发明:
实施例1:
以水为溶剂,按如下重量百分比浓度比例配制清洗液:
清洗液A:NaOH 0.4%
TritonX-100 0.1%
清洗液B:HCL 0.365%
用迈克公司IS1200全自动化学发光免疫分析仪测定上述清洗液清洗性能,主要测定干涸物质溶解情况及酶的灭活情况。
模拟废液针上干涸蛋白的主要成分,将酪蛋白、BSA用PBST溶液配制成糊状溶液,将上述糊状溶液放置在60℃烘箱,烤干。将烤干后的固体用剪刀剪成大小一致的小方块,将小方块放置在5mL溶液中,每隔一段时间测定上清液的OD值(蛋白溶解会使溶液变浑,OD值升高),确定蛋白的溶解情况。结果见表1。
表1蛋白溶解情况
结果表明,实施例1制备的清洗液溶解蛋白效果明显优于对照(TBST洗液)及市售的多酶清洗液。
模拟废液针上残留的HRP和ALP,用实施例1制备的清洗液进行灭活实验,结果见表2。
表2实施例1制备的清洗液对酶的灭活效果
结果表明,市售清洗液对酶没有灭活作用,而实施例1制备的清洗液能显著降低发光信号,达到灭活酶的目的。避免残留的酶对后续实验的影响。
将实施例1配制的清洗剂放置到迈克IS1200全自动化学发光免疫分析仪上按设定程序进行清洗效果验证实验。具体验证方法如下:先测定一组HCG高值样本,分别用普通请洗液(TBST)和本发明实施例1制备的清洗剂清洗,然后再测定校准品零点信号和已知低值样本浓度。结果见表3。
表3特殊清洗液清洗效果验证
结果表明,本发明实施例1制备的清洗剂能显著(P<0.05)降低高值样本对后续样本测定的影响,并且不影响免疫分析仪的测定结果。同时对批内重复性进行测定,结果表明批内精密度CV<5%。
将特殊清洗液A、B室温放置1年后,对比新配置的特殊清洗液A、B的洗涤效果。干涸蛋白溶解效果测定结果见表2,酶灭活效果测定结果见表4。
表4干涸蛋白溶解效果测定结果
表5酶灭活效果测定结果
结果表明,实施例1制备的清洗液室温放置1年后,蛋白溶解效果和酶灭活效果与新配制的溶液相比没有明显差异(P>0.05),稳定性好。
实施例2:
组分A:
用天平称取氢氧化钠1g置于1000ml烧杯中,加入水500-700mL使完全溶解,再慢慢加入Triton-X1000.1mL,搅拌使其充分溶解,最后用量筒加水定容至1L,即得到体积为1L的特殊清洗液A。
组分B:
用量筒量取700-900mL水,在缓慢加入6.9mL浓度为37%的浓盐酸,然后定容至1L,即得到体积为1L的特殊清洗液B。
实施例3:
组分A:
用天平称取氢氧化钠4g置于1000ml烧杯中,加入水500-700mL使完全溶解,再慢慢加入Triton-X1001mL,搅拌使其充分溶解,最后用量筒加水定容至1L,即得到体积为1L的特殊清洗液A。
组分B:
用量筒量取700-900mL水,在缓慢加入9mL浓度为37%的浓盐酸,然后定容至1L,即得到体积为1L的特殊清洗液B。
实施例4:
组分A:
用天平称取氢氧化钠20g置于1000ml烧杯中,加入水500-700mL使完全溶解,再慢慢加入Triton-X10010mL,搅拌使其充分溶解,最后用量筒加水定容至1L,即得到体积为1L的特殊清洗液A。
组分B:
用量筒量取700-900mL水,在缓慢加入22.8mL浓度为37%的浓盐酸,然后定容至1L,即得到体积为1L的特殊清洗液B。
实施例5:
将实施例2至4制备的清洗剂进行模拟清洗效果实验。即干涸蛋白溶解实验、酶灭活实验和上机实验,实验数据如表6、表7、表8:
表6干涸蛋白溶解效果测定结果
结果表明,实施例2、3、4提供的清洗液均能溶解蛋白,溶解效果差异不明显。
表7酶灭活效果测定结果
结果表明,实施例2、3、4配方中的清洗液均能灭活辣根过氧化物酶,灭活效果差异不明显。
表8特殊清洗液清洗效果验证
结果表明,实施例2、3、4的清洗液均能达到显著(P<0.05)清洗效果,且不影响免疫分析仪的测定结果。同时对批内重复性进行测定,结果表明三种配方的批内精密度CV<5%。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种清洗剂,其特征在于,包括组分A和组分B,其中,
组分A包括:碱金属氢氧化物和表面活性剂;
组分B包括:酸。
2.根据权利要求1所述的清洗剂,其特征在于,所述碱金属氢氧化物为氢氧化钠或氢氧化钾。
3.根据权利要求1或2所述的清洗剂,其特征在于,所述表面活性剂为非离子表面活性剂。
4.根据权利要求1至3任一项所述的清洗剂,其特征在于,所述非离子表面活性剂选自脂肪醇与环氧乙烷的缩合物、聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯三嵌段共聚物或者聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯中的一种或两者以上的混合物。
5.根据权利要求1至4任一项所述的清洗剂,其特征在于,所述酸为无机酸。
6.根据权利要求1至5任一项所述的清洗剂,其特征在于,所述无机酸为盐酸或硝酸。
7.根据权利要求1至6任一项所述的清洗剂,其特征在于,所述组分A与所述组分B的质量比为(0.11~3):(0.3~1)。
8.根据权利要求1至7任一项所述的清洗剂,其特征在于,所述组分A中,所述碱金属氢氧化物与所述表面活性剂的质量比为(0.1~2):(0.01~1)。
9.根据权利要求1至8任一项所述的清洗剂,其特征在于,其剂型为清洗液,所述清洗液包括组分A、组分B和水,所述组分A和组分B的质量之和在所述清洗液中的质量百分含量为0.41%~4%。
10.根据权利要求9所述的清洗剂,其特征在于,所述碱金属氢氧化物在所述清洗液中的质量百分含量为0.1%~2%;所述表面活性剂在所述清洗液中的质量百分含量为0.01%~1%;所述无机酸在所述清洗液中的质量百分含量为0.3%~1%。
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