CN105920077A - 血满草提取物的制备方法及其在类风湿性关节炎中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了血满草提取物的制备方法及其在类风湿性关节炎中的应用，涉及植物提取物及其制备方法和应用技术领域，本发明通过将血满草粉粹后、加入5～10倍量的溶剂，在35‑100℃下，反复萃取4次，再加热浓缩溶液、干燥冷冻，得到血满草提取物，将所制得的血满草提取物应用于治疗Ⅱ型胶原蛋白诱导的大鼠类风湿性关节炎，结果表明，本发明的血满草提取物能够显著改善弗氏佐剂诱发的类风湿性关节炎导致的大鼠的足肿胀水平，并能显著降低血清中炎症因子IL‑6水平，且对大鼠进食量没有产生影响。

Description

血满草提取物的制备方法及其在类风湿性关节炎中的应用

技术领域

本发明涉及植物提取物及其制备方法和应用技术领域，具体涉及血满草提取物的制备方法及其在类风湿性关节炎中的应用。

背景技术

类风湿性关节炎是一种慢性、炎性、系统性、累及多关节滑膜炎病变的自身免疫性疾病，以关节和关节组织非化脓性炎症为主要特征，主要表现为关节滑膜炎，终致关节的软骨、韧带、肌腱等各种组织以及多脏器损害。类风湿性关节炎多侵犯肢体小关节，如手、足及腕关节等，未经系统治疗的类风湿性关节炎可反复迁延多年，最终导致关节畸形、功能丧失，中医认为肝肾亏损，外邪深侵入肝肾，湿与风寒、风热、痰疲相夹，阻于经络，耗损肝肾，伤骨损筋是其突出的病因病机特点。类风湿性关节炎在我国发病率约0.4％，且女性高于男性。由于类风湿性关节炎致残率较高，严重影响病人及其家属的生活质量。目前该病没有特效药物，临床上主要以非甾体抗炎药、糖皮质激素类药物以及改善病情的抗风湿药(DMARD)进行维持治疗，但从长期来看并不能有效控制病程的发展。此外，化学药物具有很大的不良反应，许多患者无法承受，且存在由于不当的化学药物治疗所致药源性关节炎的风险，中医治疗风湿性关节炎的传统方法主要是通过将活血行气的药物外敷在患处，进行治疗，这种方哇虽然安全性高，但是它的作用效果缓慢，只能起到缓解病症的症状，而无法根治类风湿关节炎。

本发明将血满草应用于治疗和缓解类风湿关节炎，血满草性温、味甘、辛、归脾、肾经，具有活血行气，祛瘀通络，通痹止痛的功效，能标本兼顾，扶正祛邪，祛除外邪，岁治疗跌打损伤、骨折、风湿疼痛、扭伤瘀痛，急慢性肾炎等症状由显著的疗效。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种血满草提取物的制备方法，它具有简单，温度控制容易，等优点，特别适于工业化大生产，本发明还提供一种血满草提取物在类风湿性关节炎中的应用，它能够有效地治疗和缓解类风湿性关节炎，降低血清中炎症因子IL-6水平。

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：

一种血满草提取物的制备方法，包括以下步骤：

将血满草洗净去根，经粉碎后，加入5～10倍量的溶剂，提取0.5-24h，提取温度为35-100℃，然后过滤，得到滤液和滤渣，以相同的方法反复萃取滤渣4次，然后将4次得到的滤液合并，然后浓缩，浓缩过程中回收溶剂，将浓缩物冷冻干燥得血满草提取物。

所述萃取血满草的方法为溶剂温浸法、加热回流法、超声波提取法或微波提取法。

优选的，所述的溶剂为水、乙醇或水和乙醇的任意比混合物。

本发明还提供一种血满草提取物在类风湿性关节炎中的应用，所述血满草提取物用于制备治疗和缓解类风湿性关节炎的药物或食品。

优选的，所述用于治疗和缓解类风湿性关节炎的药物的剂型为颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、滴丸剂、口服液、泡腾片、浸膏剂、糖浆剂、注射剂、缓释剂、控释剂或靶向制剂。

优选的，所述治疗和缓解类风湿性关节炎的药物中还含有防腐剂、赋形剂、润滑剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂、有机溶剂等添加剂的一种或多种。

优选的，所述血满草提取物赋形剂，为乳糖、白糖、D-甘露醇、淀粉、结晶纤维素中一种或多种。

优选的，所述润滑剂为硬脂酸镁、硬脂酸钙、滑石粉中的一种或多种。

优选的，所述有机溶剂为水、乙醇、丙二醇中的一种或多种。

优选的，所述防腐剂为氯丁醇、二羟基乙酸中一种或两种。

优选的，所述抗氧化剂为亚硫酸盐、抗坏血酸中一种或两种。

本发明的有益效果，本发明通过简单的萃取法对血满草进行提取，它的温度控制容易，萃取效果好，材料的利用率高，且方法简单易行，没有繁琐复杂的操作，特别适于工业化大生产；本发明的血满草提取物的处理方法简单，可以制成多种中药剂型，能满足不同患者的需求，通过动物实验证明，本发明的血满草提取物能够显著改善弗氏佐剂诱发类风湿性关节炎大鼠的足肿胀水平，并能显著降低血清中炎症因子IL-6水平，且对大鼠进食量没有产生影响，因而能够有效地治疗和缓解类风湿性关节炎，且不会对机体产生副作用。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1：

一种血满草提取物的制备方法，其包括以下步骤：

将250g去根血满草粉末洗净，加水2500ml，在80℃下浸泡1h，过滤，收集滤液，将滤渣用上述方法反复提取四次，合并滤液，然后浓缩，浓缩过程中回收溶剂，经冷冻干燥得血满草提取物。

在血满草提取物中加入乳糖、结晶纤维、硬脂酸镁、二羟基乙酸、抗坏血酸，混合均匀后，制成用于治疗类风湿性关节炎的颗粒剂药物。

实施例2：

一种血满草提取物的制备方法，其包括以下步骤：

将250g去根血满草粉末洗净，加入1250ml乙醇，在80℃下加热回流30min，然后过滤，收集滤液，将滤渣用上述方法反复提取四次，合并滤液，然后浓缩，浓缩过程中回收溶剂乙醇，经冷冻干燥得血满草提取物。

在血满草提取物中加入乳糖、D-甘露醇、硬脂酸镁、二羟基乙酸、抗坏血酸、水，混合均匀后，制成治疗类风湿性关节炎的糖浆剂药物。

实施例3：

一种血满草提取物的制备方法，其包括以下步骤：

将250g去根血满草粉末洗净，1500mL水和乙醇的混合物(V_水：V_乙醇＝1:1)，在微波环境中萃取30-45min，微波频率为1000～2400MHz，萃取温度为60℃，过滤，收集滤液，将滤渣用上述方法反复提取四次，合并滤液，然后浓缩，浓缩过程中回收溶剂，经冷冻干燥得血满草提取物。

在血满草提取物中加入乙醇、丙二醇、水、二羟基乙酸、抗坏血酸混合，制成颗粒剂药物，制成治疗类风湿性关节炎的注射剂药物。

实施例4：

一种血满草提取物的制备方法，其包括以下步骤：

将250g去根血满草粉末洗净，加水2500ml，在100℃下浸泡24h，过滤，收集滤液，将滤渣用上述方法反复提取四次，合并滤液，然后浓缩，浓缩过程中回收溶剂，经冷冻干燥得血满草提取物。

在血满草提取物中加入乳糖、淀粉、结晶纤维、氯丁醇、抗坏血酸混合，制成治疗类风湿性关节炎的片剂药物。

实施例5：

一种血满草提取物的制备方法，其包括以下步骤：

将250g去根血满草粉末洗净，加入2000ml水和乙醇的混合物(V_水：V_乙醇＝2:1)，超声萃取2h，萃取温度为30-35℃，超声的频率为2800-3000W，过滤，收集滤液，将滤渣用上述方法反复提取四次，合并滤液，然后浓缩，浓缩过程中回收溶剂，经冷冻干燥得血满草提取物。

在血满草提取物中加入硬脂酸硬脂酸镁、滑石粉镁、二羟基乙酸、乙醇、氯丁醇混合，制成治疗类风湿性关节炎的浸膏。

本发明中血满草提取物药效学研究

1、动物模型：实验动物采用雄性大鼠，体重180-220g的Wistar大鼠，购自成都达硕生物科技有限公司；大鼠饲料购自成都达硕生物科技有限公司；实验大鼠在清洁级层流架中饲养，环境温度控制为23±2℃，相对湿度为75±10％，照明时间12h/d(7:00-19:00)。

2、分组及给药：将实验大鼠随机分为4组，每组10值，分别为正常组、模型组、阳性药物组、血满草提取物低剂量组。各组分分别给予下属治疗药物：正常组为正常饲养，不注射任何药物；模型组只注射Ⅱ型胶原蛋白；阳性药物组注射吲哚美辛，注射量为200mg/kg/day；血满草提取物低剂量组注射血满草提取物，注射量为100mg/kg/day。

3、测试方法：

(1)血满草提取物对Ⅱ型胶原蛋白诱导的大鼠类风湿性关节炎后足肿胀及模型进食量的影响

给予各组大鼠连续灌胃相应受试物54天，第25天测各组大鼠进食量，第26天测各组大鼠左右后足体积，然后向模型组和给药组大鼠右后足注射含牛Ⅱ型胶原的完全弗氏佐剂，注射计量为0.1mL/只。第32天测各组大鼠进食量，第33天测各组大鼠左右后足体积，再分别向模型组和给药组大鼠右后足注射含牛Ⅱ型胶原不完全弗氏佐剂，注射计量为0.1mL/只，进行二次免疫。然后每隔7天测一次进食量和左右后足体积。

表一血满草提取物对Ⅱ型胶原蛋白诱导的大鼠类风湿性关节炎后足肿胀的影响(与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01)

表二血满草提取物对Ⅱ型胶原蛋白诱导的大鼠类风湿性关节炎模型进食量(g)的影响

结果如表一和表二所示，二次免疫14天后实验动物后足发生明显肿胀，且右足肿胀程度超过左足，血满草提取物和阳性药均能显著缓解炎症造成的足肿胀，且血满草提取物对大鼠进食量没有明显影响。

(2)血满草提取物对Ⅱ型胶原蛋白诱导的大鼠类风湿性关节炎模型血清中炎症因子水平的影响

给药方案同(1)，实验第54天，末次给药1h后，向大鼠腹腔注射麻醉剂，取大鼠腹主动脉血液，然后离心取血清，采用ELISA试剂盒检测血清中IL-6水平。

表三血满草提取物对Ⅱ型胶原蛋白诱导的大鼠类风湿性关节炎模型血清中炎症因子含量的影响(与正常组比较，ΔP<0.05，与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01)

组别	剂量(mg/kg)	IL-6(mg/L)
			正常组	-	25.56±2.16
模型组	-	31.33±2.78Δ
			吲哚美辛组	200	26.59±3.12*
血满草组	100	22.24±5.35**

结果如表三所示，与正常组相比，模型组血清IL-6水平升高，血满草提取物与阳性药均可显著降低IL-6水平。

实验数据以Mean±SD表示，应用SPSS 19.0软件进行数据处理，符合正态分布且方差齐的数据进行单因素方差分析；方差不齐的数据则用非参数检验，p<0.05有统计学意义。

综上，本发明实施例具有如下有益效果：本发明所述的研究内容提示血满草提取物能够明显缓解类风湿性关节炎造成的足肿胀，并显著降低炎症因子水平，它能够改善类风湿性关节炎造成的诸多临床症状，且不会对机体产生副作用；此外，本发明的血满草提取物的制备方法简单，温度控制容易，性状好，特别适于工业化大生产。

需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (10)

1.一种血满草提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将血满草洗净去根，经粉碎后，加入5～10倍量的溶剂，提取0.5-24h，提取温度为35-100℃，然后过滤，得到滤液和滤渣，以相同的方法反复萃取滤渣4次，然后将4次得到的滤液合并，浓缩滤液，浓缩过程中回收溶剂，将浓缩产物冷冻干燥得血满草提取物。

所述提取血满草的方法为溶剂温浸法、加热回流法、超声波提取法或微波提取法。

2.如权利要求1所述的血满草提取物的制备方法，其特征在于，所述溶剂为水、乙醇或水和乙醇的任意比混合物。

3.一种如权利要求1或2所述的血满草提取物在类风湿性关节炎中的应用，其特征在于，所述血满草提取物用于制备治疗和缓解类风湿性关节炎的药物或食品。

4.如权利要求3所述的血满草提取物在类风湿性关节炎中的应用，其特征在于，所述用于治疗和缓解类风湿性关节炎的药物的剂型为颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、滴丸剂、口服液、泡腾片、浸膏剂、糖浆剂、注射剂、缓释剂、控释剂或靶向制剂。

5.如权利要求4所述的血满草提取物在类风湿性关节炎中的应用，其特征在于，所述治疗和缓解类风湿性关节炎的药物中还含有防腐剂、赋形剂、润滑剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂、有机溶剂等添加剂的一种或多种。

6.如权利要求5所述的血满草提取物在类风湿性关节炎中的应用，其特征在于，所述血满草提取物赋形剂，为乳糖、白糖、D-甘露醇、淀粉、结晶纤维素中一种或多种。

7.如权利要求6所述的血满草提取物在类风湿性关节炎中的应用，其特征在于，所述润滑剂为硬脂酸镁、硬脂酸钙、滑石粉中的一种或多种。

8.如权利要求7所述的血满草提取物在类风湿性关节炎中的应用，其特征在于，所述有机溶剂为水、乙醇、丙二醇中的一种或多种。

9.如权利要求8所述的血满草提取物在类风湿性关节炎中的应用，其特征在于，所述防腐剂为氯丁醇、二羟基乙酸中一种或两种。

10.如权利要求9所述的血满草提取物在类风湿性关节炎中的应用，其特征在于，所述抗氧化剂为亚硫酸盐、抗坏血酸中一种或两种。