CN105918130A - 一种猕猴桃茎尖脱毒快繁方法 - Google Patents

一种猕猴桃茎尖脱毒快繁方法 Download PDF

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    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants

Abstract

本发明公开了一种猕猴桃茎尖脱毒快繁方法，包括以下步骤：(1)材料选择；(2)材料消毒；(3)剥离茎尖；(4)株系建立与病毒检测；(5)快速繁殖。相对于现有技术，本发明猕猴桃茎尖脱毒快繁方法，能够有效脱去植株所带的病毒，从而培育出大量无病毒植株，能够显著增加猕猴桃节间距离，提高繁殖系数和移栽后成活，大大满足猕猴桃快速繁殖的需求。

Description

一种猕猴桃茎尖脱毒快繁方法
技术领域
本发明涉及一种猕猴桃茎尖脱毒快繁方法，属于苗木繁育领域。
背景技术
猕猴桃属猕猴桃科(Actinidiaceae)猕猴桃属(Actinidia)多年生藤本植物，是20世纪最早经人工驯化栽培的四大野生果树之一，其果实具有丰富的营养价值和良好的药用价值，尤含大量Vc,享有“Vc之王”美称。红阳猕猴桃属于中华系列猕猴桃，是猕猴桃家族中罕见的红心猕猴桃，是在四川称猴桃原产地苍溪发现的自然变异品种，营养价值极高，且果肉细嫩，口感香甜，早果性、丰产性和抗逆性强，深受市场欢迎，具有极高的推广前景。
随着猕猴桃产业的发展，猕猴桃病毒病所造成的严重损失已引起许多国家的高度关注。猕猴桃病毒病在我国保存的猕猴桃种质资源及栽培猕猴桃植株上发生较普遍。近些年，我国猕猴桃种植面积和产量均呈快速上升趋势，同时病毒病危害也正在加剧。目前世界上已报道关于猕猴桃病毒病有13种，常见的侵染我国猕猴桃的3种病毒，即猕猴桃病毒A(AcVA)，猕猴桃病毒B(AcVB)和柑橘叶斑驳病毒(CLBV)。此外，在中国田间调查发现猕猴桃植株上有病毒及类似病害的发生，日本也有猕猴桃嫁接传播病害的报道，但均未对其病原开展研究。解决猕猴桃病毒病危害的可行途径就是进行病毒脱除，生产脱毒猕猴桃种苗，以降低病毒病对猕猴桃大面积种植带来的危害。
目前，现有茎尖脱毒技术中，仍存在一些缺陷，如节间距离较短，繁殖系数较低，成活率低等，无法满足快速繁殖的需求，且没有涉及猕猴桃茎尖脱毒的相关技术。
发明内容
发明目的：为了克服现有育苗技术中存在的不足，本发明提供了一种猕猴桃茎尖脱毒快繁方法。
技术方案：为实现上述目的，本发明提供了一种猕猴桃茎尖脱毒快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)材料选择：筛选健壮的猕猴桃植株，做好标记，剪取1-2cm长的顶芽，备用；
(2)材料消毒：将所得顶芽先进行清洗，切去完全展开的叶片，然后在无菌操作台下用75％的乙醇浸泡20-30s，无菌水冲洗一遍，然后用0.1％的HgCl2浸泡5-6min，然后用无菌水冲洗多遍；
(3)剥离茎尖：取步骤(2)处理后的顶芽，在解剖镜下无菌剥离带1-2个叶原基的茎尖作为外植体，形态为突起态，将茎尖接入培养基进行接种培养，控制温度和光照，以获得再生植株；
(4)株系建立与病毒检测：将步骤(3)中获得的植株转入新的培养基用于株系的建立，等苗长至2-3cm高时，采用ELISA法进行病毒检测；
(5)快速繁殖：病毒检测合格后，将步骤(4)中检测合格的无病毒苗进行脱毒苗扩繁，采用繁殖培养基，控制温度和光照，即可获得脱毒苗。
作为优选，所述猕猴桃为红阳猕猴桃。
作为另一种优选，步骤(3)中所述茎尖大小为0.15-0.3mm。
作为另一种优选，步骤(3)中所述培养基的成分为：MS+6-BA1-3mg/L+GA30.1-0.3mg/L，琼脂6g/L，蔗糖25g/L，pH为5.8。
作为另一种优选，步骤(3)中所述控制温度和光照为：温度25-27℃，光照强度为1500-2000Lux，每天光照时数为12-14h。
作为另一种优选，步骤(4)中所述新的培养基为：MS+6-BA1-2mg/L+NAA0.1-0.3mg/L，琼脂6g/L，蔗糖30g/L，pH为5.8。
作为另一种优选，步骤(5)中所述繁殖培养基为：MS+6-BA1-3mg/L+NAA0.1-0.5mg/L，琼脂6g/L，蔗糖30g/L，pH为5.8。
作为另一种优选，步骤(5)中所述控制温度和光照为：温度25-27℃，光照强度为2000-3000Lux，每天光照时数为16h。
有益效果：相对于现有技术，本发明猕猴桃茎尖脱毒快繁方法，能够有效脱去植株所带的病毒，从而培育出大量无病毒植株，能够显著增加猕猴桃节间距离，提高繁殖系数和移栽后成活，大大满足猕猴桃快速繁殖的需求。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。而本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体试验结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所描述的本发明。
实施例1
(1)材料选择：于3月份从猕猴桃果园筛选健壮的红阳猕猴桃植株，做好标记，剪取1-2cm长的顶芽，备用；
(2)材料消毒：先在自来水下用流水冲洗2小时，切去完全展开的叶片，然后在无菌操作台下用75％的乙醇浸泡20s，无菌水冲洗一遍，然后用0.1％的HgCl2浸泡5min，然后用无菌水冲洗4遍；
(3)剥离茎尖：在解剖镜下从(2)中获取的顶芽中无菌剥离带1-2个叶原基的茎尖作为外植体，茎尖大小为0.15-0.3mm，形态为突起态，将茎尖接入培养基(MS+6-BA1mg/L+GA30.1mg/L，琼脂6g/L，蔗糖25g/L，pH5.8)进行接种培养，培养条件为温度25-27℃，光照强度为1500Lux，每天光照时数为12h，以获得再生植株；
(4)株系建立与病毒检测：将步骤(3)中获得的植株转入新的培养(MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L，琼脂6g/L，蔗糖30g/L，pH5.8)用于株系的建立，等苗长至2-3cm高时，采用ELISA法进行病毒检测；
(5)快速繁殖：病毒检测合格后，将步骤(4)中检测合格的无病毒苗进行脱毒苗扩繁，繁殖培养基：MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L，琼脂6g/L，蔗糖30g/L，pH5.8；培养条件为温度25-27℃，光照强度为2000Lux，每天光照时数为16h，即可获得脱毒苗。
实施例2
(1)材料选择：于3月份从猕猴桃果园筛选健壮的红阳猕猴桃植株，做好标记，剪取1-2cm长的顶芽，备用；
(2)材料消毒：先在自来水下用流水冲洗2小时，切去完全展开的叶片，然后在无菌操作台下用75％的乙醇浸泡30s，无菌水冲洗一遍，然后用0.1％的HgCl2浸泡6min，然后用无菌水冲洗6遍；
(3)剥离茎尖：在解剖镜下从(2)中获取的顶芽中无菌剥离带1-2个叶原基的茎尖作为外植体，茎尖大小为0.15-0.3mm，形态为突起态，将茎尖接入培养基(MS+6-BA3mg/L+GA30.3mg/L，琼脂6g/L，蔗糖25g/L，pH5.8)进行接种培养，培养条件为温度25-27℃，光照强度为2000Lux，每天光照时数为14h，以获得再生植株；
(4)株系建立与病毒检测：将步骤(3)中获得的植株转入新的培养(MS+6-BA2mg/L+NAA0.3mg/L，琼脂6g/L，蔗糖30g/L，pH5.8)用于株系的建立，等苗长至2-3cm高时，采用ELISA法进行病毒检测；
(5)快速繁殖：病毒检测合格后，将步骤(4)中检测合格的无病毒苗进行脱毒苗扩繁，繁殖培养基：MS+6-BA3mg/L+NAA0.5mg/L，琼脂6g/L，蔗糖30g/L，pH5.8；培养条件为温度25-27℃，光照强度为3000Lux，每天光照时数为16h，即可获得脱毒苗。
实施例3
(1)材料选择：于3月份从猕猴桃果园筛选健壮的红阳猕猴桃植株，做好标记，剪取1-2cm长的顶芽，备用；
(2)材料消毒：先在自来水下用流水冲洗2小时，切去完全展开的叶片，然后在无菌操作台下用75％的乙醇浸泡25s，无菌水冲洗一遍，然后用0.1％的HgCl2浸泡5.5min，然后用无菌水冲洗5遍；
(3)剥离茎尖：在解剖镜下从(2)中获取的顶芽中无菌剥离带1-2个叶原基的茎尖作为外植体，茎尖大小为0.15-0.3mm，形态为突起态，将茎尖接入培养基(MS+6-BA2mg/L+GA30.2mg/L，琼脂6g/L，蔗糖25g/L，pH5.8)进行接种培养，培养条件为温度25-27℃，光照强度为1800Lux，每天光照时数为13h，以获得再生植株；
(4)株系建立与病毒检测：将步骤(3)中获得的植株转入新的培养(MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L，琼脂6g/L，蔗糖30g/L，pH5.8)用于株系的建立，等苗长至2-3cm高时，采用ELISA法进行病毒检测；
(5)快速繁殖：病毒检测合格后，将步骤(4)中检测合格的无病毒苗进行脱毒苗扩繁，繁殖培养基：MS+6-BA2mg/L+NAA0.3mg/L，琼脂6g/L，蔗糖30g/L，pH5.8；培养条件为温度25-27℃，光照强度为2500Lux，每天光照时数为16h，即可获得脱毒苗。
实验例 本发明方法所得快繁苗考察
对照1组与本发明实施例3方法相同，不同之处仅在于去掉步骤(2)中乙醇浸泡的步骤，所得快繁苗；
对照2组与本发明实施例3方法相同，不同之处仅在于选用马铃薯植株，所得快繁苗；
实施例1、2和3组分别采用本发明实施例1、2和3方法，所得快繁苗；
将各组快繁苗移栽，在同样的条件下培养，考察结果见下表1。
表1各方法所得快繁苗考察结果
注：与对照组相比较，*P<0.05
由上表1结果可得，与对照组相比较，本发明茎尖脱毒方法，能够显著增加猕猴桃茎尖的成活率，提高脱毒率和移栽成活率，特别适用于红阳猕猴桃的茎尖脱毒快繁，能大大满足猕猴桃快速繁殖的需求。

Claims (8)

1.一种猕猴桃茎尖脱毒快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)材料选择：筛选健壮的猕猴桃植株，做好标记，剪取1-2cm长的顶芽，备用；
(2)材料消毒：将所得顶芽先进行清洗，切去完全展开的叶片，然后在无菌操作台下用75％的乙醇浸泡20-30s，无菌水冲洗一遍，然后用0.1％的HgCl2浸泡5-6min，然后用无菌水冲洗多遍；
(3)剥离茎尖：取步骤(2)处理后的顶芽，在解剖镜下无菌剥离带1-2个叶原基的茎尖作为外植体，形态为突起态，将茎尖接入培养基进行接种培养，控制温度和光照，以获得再生植株；
(4)株系建立与病毒检测：将步骤(3)中获得的植株转入新的培养基用于株系的建立，等苗长至2-3cm高时，采用ELISA法进行病毒检测；
(5)快速繁殖：病毒检测合格后，将步骤(4)中检测合格的无病毒苗进行脱毒苗扩繁，采用繁殖培养基，控制温度和光照，即可获得脱毒苗。
2.根据权利要求1所述的猕猴桃茎尖脱毒快繁方法，其特征在于，所述猕猴桃为红阳猕猴桃。
3.根据权利要求1所述的猕猴桃茎尖脱毒快繁方法，其特征在于，步骤(3)中所述茎尖大小为0.15-0.3mm。
4.根据权利要求1所述的猕猴桃茎尖脱毒快繁方法，其特征在于，步骤(3)中所述培养基的成分为：MS+6-BA1-3mg/L+GA30.1-0.3mg/L，琼脂6g/L，蔗糖25g/L，pH为5.8。
5.根据权利要求1所述的猕猴桃茎尖脱毒快繁方法，其特征在于，步骤(3)中所述控制温度和光照为：温度25-27℃，光照强度为1500-2000Lux，每天光照时数为12-14h。
6.根据权利要求1所述的猕猴桃茎尖脱毒快繁方法，其特征在于，步骤(4)中所述新的培养基为：MS+6-BA1-2mg/L+NAA0.1-0.3mg/L，琼脂6g/L，蔗糖30g/L，pH为5.8。
7.根据权利要求1所述的猕猴桃茎尖脱毒快繁方法，其特征在于，步骤(5)中所述繁殖培养基为：MS+6-BA1-3mg/L+NAA0.1-0.5mg/L，琼脂6g/L，蔗糖30g/L，pH为5.8。
8.根据权利要求1所述的猕猴桃茎尖脱毒快繁方法，其特征在于，步骤(5)中所述控制温度和光照为：温度25-27℃，光照强度为2000-3000Lux，每天光照时数为16h。
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Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107251698A (zh) * 2017-06-12 2017-10-17 昭通市宜佳农业开发有限公司 高抗红心猕猴桃的培育方法
CN109042136A (zh) * 2018-08-21 2018-12-21 沈阳千叶农业科技有限公司 一种软枣猕猴桃的培育方法
CN110651710A (zh) * 2019-09-17 2020-01-07 湖北大学 一种无溃疡病病原菌的猕猴桃种苗的生产方法
CN111713410A (zh) * 2020-07-03 2020-09-29 四川农业大学 一种猕猴桃外植体脱毒方法
CN113907006A (zh) * 2021-11-08 2022-01-11 西北农林科技大学 脱除猕猴桃褪绿环斑相关病毒的方法
CN114176006A (zh) * 2021-12-23 2022-03-15 廉江市茗皇红橙果业有限公司 一种红橙果苗的生物脱毒繁育办法
CN113826546B (zh) * 2020-06-08 2024-01-16 西北农林科技大学 一种小滴玻璃化法猕猴桃茎尖超低温脱毒的方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0356061A2 (en) * 1988-08-08 1990-02-28 Roussel-Uclaf Superoxide dismutase expression in plants
CN101248761A (zh) * 2008-03-27 2008-08-27 浙江省农业科学院 一种人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法
CN101584301A (zh) * 2009-06-05 2009-11-25 海南省农业科学院粮食作物研究所 番薯茎尖培养脱毒苗的方法
CN102870607A (zh) * 2012-10-25 2013-01-16 句容市旺华大棚蔬菜专业合作社 一种云南黑籽南瓜嫁接黄瓜的方法
CN104823849A (zh) * 2015-05-06 2015-08-12 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 一种木薯脱毒苗快速扩繁方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0356061A2 (en) * 1988-08-08 1990-02-28 Roussel-Uclaf Superoxide dismutase expression in plants
CN101248761A (zh) * 2008-03-27 2008-08-27 浙江省农业科学院 一种人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法
CN101584301A (zh) * 2009-06-05 2009-11-25 海南省农业科学院粮食作物研究所 番薯茎尖培养脱毒苗的方法
CN102870607A (zh) * 2012-10-25 2013-01-16 句容市旺华大棚蔬菜专业合作社 一种云南黑籽南瓜嫁接黄瓜的方法
CN104823849A (zh) * 2015-05-06 2015-08-12 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 一种木薯脱毒苗快速扩繁方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
丁士林等: "美味称猴桃的组织培养", 《中国果树》 *
严姜黎等: "红肉猕猴桃离体快速繁殖技术研究", 《华中农业大学学报》 *
徐小彪等: "玻璃化法超低温保存猕猴桃离体茎尖及其植株再生", 《园艺学报》 *
李鹤春等: "野生软枣猕猴桃茎尖培养研究", 《安徽农业科学》 *
许传俊等: "植物组织培养脱毒技术研究进展", 《安徽农业科学》 *
陈维伦等: "猕猴桃属(Actinidia)植物的离体种质保存", 《生物多样性》 *

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107251698A (zh) * 2017-06-12 2017-10-17 昭通市宜佳农业开发有限公司 高抗红心猕猴桃的培育方法
CN109042136A (zh) * 2018-08-21 2018-12-21 沈阳千叶农业科技有限公司 一种软枣猕猴桃的培育方法
CN110651710A (zh) * 2019-09-17 2020-01-07 湖北大学 一种无溃疡病病原菌的猕猴桃种苗的生产方法
CN110651710B (zh) * 2019-09-17 2021-06-04 湖北大学 一种无溃疡病病原菌的猕猴桃种苗的生产方法
CN113826546B (zh) * 2020-06-08 2024-01-16 西北农林科技大学 一种小滴玻璃化法猕猴桃茎尖超低温脱毒的方法
CN111713410A (zh) * 2020-07-03 2020-09-29 四川农业大学 一种猕猴桃外植体脱毒方法
CN113907006A (zh) * 2021-11-08 2022-01-11 西北农林科技大学 脱除猕猴桃褪绿环斑相关病毒的方法
CN113907006B (zh) * 2021-11-08 2022-11-15 西北农林科技大学 脱除猕猴桃褪绿环斑相关病毒的方法
CN114176006A (zh) * 2021-12-23 2022-03-15 廉江市茗皇红橙果业有限公司 一种红橙果苗的生物脱毒繁育办法

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