CN101248761A - 一种人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法 - Google Patents

一种人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，属植物病毒检测技术领域，包括如下步骤：培养基的配制、茎尖脱毒培养、指示植物番茄的无菌苗培养、微嫁接培养和脱病毒组培苗的增殖培养。本发明的优点是：所用的培养基、组培条件和微嫁接器适于人参果脱毒苗的微嫁接培养，利于嫁接口的愈合，平均嫁接成功率超过90％，可完全满足病毒检测的要求。与传统的田间指示植物检测相比，大大缩短了检测所需的时间。该种方法不受时间限制、环境因素的影响，可常年在实验室条件下进行，非常实用，可用于人参果脱毒苗的病毒快速检测和脱毒苗的规模化生产。

Description

一种人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法
技术领域
本发明涉及植物脱毒组培快繁技术领域，尤其涉及一种人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法。
背景技术
人参果(Solamun muricatum Ait)又名香艳果，为茄科直立多年生草本或亚灌木，原产南美洲的秘鲁、厄瓜多尔地区。其性喜温暖、凉爽、干燥气候，生长适温18～20℃。人参果以浆果供食，低糖、低脂，可炒、烧、炸、做汤、鲜食等。据分析，其果实富含人体所需的维生素及各种微量元素：铜、钾、镁、硒等。食用人参果，对各种癌症、高血压、糖尿病、冠心病等有较好的防治效果，被誉为抗癌之王、绿色保健珍品。近年来国内引进推广种植，且适应性广、抗逆性强，生产效益高，市场前景好。人参果常规栽培以茎段扦插繁殖为主，但幼苗和成株极易感染烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒和马铃薯M病毒等多种病毒，体内病毒感染严重，并逐代积累，严重影响其生长发育，表现为叶片皱缩、变小，死亡率较高，坐果率低，产量大幅度下降。通过植物茎尖脱毒培养进行种苗脱毒和快速繁殖是生产无病毒种苗的有效途径。
无毒苗生产需要快速、灵敏、特异的检测方法。指示植物检测是一种准确、可靠的检测方法，至今人参果病毒病的检测仍主要依靠于指示植物检测，按照常规做法，首先必须将试管苗进行生根培养，移栽成活后才能用指示植物进行检测，并以指示植物检测的结果作为判断待检植物是否带毒的最终依据。但这种方法费时较长，需要1年的时间才能完成，并且病毒病的症状表现易受环境因素的影响。因此需要寻找更好的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法。
发明内容
本发明要解决上述现有技术的缺陷，提供一种人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法。
本发明目的通过以下技术方案来实现：这种人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，按如下步骤进行：
1)、培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
(1)基本培养基：选用MS培养基或1/2MS培养基，蔗糖或白糖20～30g/L，琼脂7～9g/L，pH5.6～5.8；
(2)诱导培养基：MS+BA 0.5～2.0mg/L+IAA 0.05～0.5mg/L；
(3)微扦插培养基：MS+BA0.1～1.0mg/L+NAA0.05～0.5mg/L；
(4)壮苗培养基：MS+BA 0.05～0.5mg/L+NAA 0.01～0.1mg/L+PP333 0.1～0.5mg/L；
(5)微嫁接培养基：MS+BA 0.05～0.5mg/L+IBA 0.05～0.5mg/L；
(6)生根培养基：1/2MS+NAA 0.05～0.5mg/L；
(7)无菌播种培养基：1/2MS。
2)、人参果茎尖脱毒培养：
(1)外植体的选取与灭菌：从盆栽植株或大田植株上剪取顶芽或带腋芽茎段为外植体，经灭菌处理，作为脱毒组培用的外植体；
(2)茎尖培养：将灭菌处理后的顶芽或带腋芽茎段在无菌条件下，在40倍的双筒解剖镜下，摘出0.2～0.3mm大小的带1～2个叶原基的茎尖，接种在诱导培养基上，在培养条件下培养20～30天后，从茎尖诱导形成幼芽，再培养20～30天，茎不断抽长，培养成约3～5节、高5～7cm的幼苗；
(3)微扦插培养：将诱导形成的幼苗切成一节一芽、约3～5节转接到微扦插培养基上，在培养条件下培养30～45天每节又培养成约3～5节、高5～7cm的幼苗；根据对幼苗数量的需求，每隔30～45天按同样方法进行幼苗再微扦插培养；
(4)壮苗培养：将微扦插培养成约3～5节、高5～7cm的幼苗切成一节一芽、约3～5节接种到壮苗培养基上，在培养条件下培养30～45天，幼苗约2～3节、高3～5cm、茎变粗；
3)、指示植物番茄的无菌苗培养：
(1)外植体的选取与灭菌：取番茄的种子，经灭菌处理，作为无菌播种的外植体；
(2)无菌播种培养：将灭菌处理后的种子接种在无菌播种培养基上，在培养条件下培养20～30天后，从种子培育成高约5～7cm的幼苗；
(3)微扦插培养：将诱导形成的幼苗切成一节一芽、约3～5节转接到微扦插培养基上，在培养条件下培养30～45天每节又培养成约3～5节、高5～7cm的幼苗；根据对幼苗数量的需求，每隔30～45天按同样方法进行幼苗再微扦插培养。
4)、微嫁接培养：
(1)微嫁接砧木准备：将步骤2)人参果茎尖脱毒培养的幼苗在无菌操作条件下切成一个个带腋芽的茎段，用解剖刀将腋芽小心的去掉，并在茎段的上部纵切一个长约0.5cm的切口，作为微嫁接砧木；
(2)微嫁接接穗准备：将步骤3)无菌苗培养的指示植物番茄的幼苗切成带单芽的茎段，芽上面的部分留0.3～0.5cm，芽下面的部分留0.5～1.0cm，并将其下部削成楔形，削面约长0.3cm，作为微嫁接接穗；
(3)微嫁接器准备：将步骤2)人参果茎尖脱毒培养的幼苗在无菌操作条件下切成一个个长约1.5cm的不带腋芽的茎段，用解剖刀在茎段中间纵切一个长约0.5cm的开口；
(4)微嫁接：将微嫁接器套入微嫁接砧木的切口下方，然后将微嫁接接穗插入微嫁接砧木上端的纵切口中，最后将微嫁接砧木的切口下方的微嫁接器往上移至微嫁接砧木的切口处，将微嫁接砧木的切口和微嫁接接穗固定牢；
(5)微嫁接苗培养：将嫁接苗接种到微嫁接培养基中进行培养，在培养条件下经45～60天的培养，指示植物苗生长正常、无病毒病的症状(叶片相对平展、翠绿、单叶面积较大)的为脱病毒苗；指示植物表现出病毒病的症状(叶片稍皱缩、叶缘上卷、暗绿、单叶面积较小)的为未脱除病毒苗。
5)、脱病毒组培苗的增殖培养：
(1)微扦插培养：将步骤4)检测出脱病毒的同一编号的组培苗切成一节一芽、约3～5节转接到微扦插培养基上，在培养条件下培养30～45天每节又培养成约3～5节、高5～7cm的幼苗；根据对幼苗数量的需求，每隔30～45天按同样方法进行幼苗再微扦插培养；
(2)壮苗培养：将微扦插培养成约3～5节、高5～7cm的幼苗切成一节一芽、约3～5节接种到壮苗培养基上，在培养条件下培养30～45天，幼苗约2～3节、高3～5cm、茎变粗；
(3)生根培养：将培养的壮苗接种在生根培养基中进行生根培养，在培养条件下培养20～30天后，幼苗长高成约5～7cm、苗基部长出5～10根细根；
(4)移栽：将生根组培苗移栽于基质中，培育1～2个月至成苗。
(5)定植：将移栽苗定植在大田中，培育6～10个月至植株。
所述的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，其特征在于：所述的培养基，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
(1)基本培养基：选用MS培养基或1/2MS培养基，琼脂8g/L，pH5.8；
(2)诱导培养基：MS+BA 1mg/L+IAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L；
(3)微扦插培养基：MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L+白糖30g/L；
(4)壮苗培养基：MS+BA 0.1mg/L+NAA 0.05mg/L+PP3330.2mg/L+白糖30g/L；
(5)微嫁接培养基：MS+BA 0.1mg/L+IBA 0.1mg/L+蔗糖40g/L；
(6)生根培养基：1/2MS+NAA 0.1mg/L+白糖20g/L；
(7)无菌播种培养基：1/2MS+白糖20g/L。
所述的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，所述的人参果茎尖脱毒培养时外植体的灭菌处理是经75％酒精浸泡0.5～1.0min，再用0.1％升汞溶液灭菌10～15min，最后用无菌水冲洗3～5次。
所述的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，所述的指示植物番茄的无菌苗培养时种子的灭菌处理是经75％酒精浸泡0.5～1.0min，再用0.1％升汞溶液灭菌20～30min，最后用无菌水冲洗3～5次。
所述的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，所述的人参果茎尖脱毒培养和脱病毒组培培养时各组培阶段的培养条件是，培养温度为25±2℃，光照光强为2500～3000Lx，光照时间为12h/d。
所述的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，所述的指示植物番茄的无菌苗培养时各阶段的培养条件是，培养温度为25±2℃，光照光强为2000～2500Lx，光照时间为10h/d。
所述的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，所述的嫁接苗培养时的培养条件是，培养温度为25±2℃，光照光强为3000～3500Lx，光照时间为16h/d。
所述的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，所述的移栽基质由泥炭∶珍珠岩∶蛭石按体积比2∶1∶1配制而成。
本发明的有益效果是：
(1)微嫁接材料(脱毒苗)易于在较小的空间和较短的时间内大量繁殖，且不受季节和外界气候的影响。
(2)所用的培养基、组培条件和微嫁接器适于人参果脱毒苗的微嫁接培养，利于嫁接口的愈合，平均嫁接成功率超过90％，可完全满足病毒检测的要求。
(3)与传统的田间指示植物检测相比，大大缩短了检测所需的时间，传统的方法需要1年的时间才能完成，本方法只需2个月就可检测出结果。
(4)该种方法不受时间限制、环境因素的影响，可常年在实验室条件下进行，非常实用，可用于人参果脱毒苗的病毒快速检测和脱毒苗的规模化生产。
具体实施方式
通过以下实施例对本发明作进一步的详细说明，但本发明的内容并不局限于此。
实施例1：
1)、培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
(1)基本培养基：选用MS培养基或1/2MS培养基，琼脂8g/L，pH5.8；
(2)诱导培养基：MS+BA 1mg/L+IAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L；
(3)微扦插培养基：MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+白糖30g/L；
(4)壮苗培养基：MS+BA 0.1mg/L+NAA 0.05mg/L+PP333 0.2mg/L+白糖30g/L；
(5)微嫁接培养基：MS+BA 0.1mg/L+IBA 0.1mg/L+蔗糖40g/L；
(6)生根培养基：1/2MS+NAA0.1mg/L+白糖20g/L；
(7)无菌播种培养基：1/2MS+白糖20g/L。
2)、人参果茎尖脱毒培养：
(1)外植体的选取与灭菌：从盆栽植株或大田植株上剪取顶芽为外植体，经灭菌处理，作为脱毒组培用的外植体；
(2)茎尖培养：将灭菌处理后的顶芽或带腋芽茎段在无菌条件下，在40倍的双筒解剖镜下，摘出0.2～0.3mm大小的带1～2个叶原基的茎尖，接种在诱导培养基上，在培养条件下培养20～30天后，从茎尖诱导形成幼芽，再培养20～30天，茎不断抽长，培养成约3～5节、高5～7cm的幼苗；
(3)微扦插培养：将诱导形成的幼苗切成一节一芽、约3～5节转接到微扦插培养基上，在培养条件下培养30～45天每节又培养成约3～5节、高5～7cm的幼苗；根据对幼苗数量的需求，每隔30～45天按同样方法进行幼苗再微扦插培养；
(4)壮苗培养：将微扦插培养成约3～5节、高5～7cm的幼苗切成一节一芽、约3～5节接种到壮苗培养基上，在培养条件下培养30～45天，幼苗约2～3节、高3～5cm、茎变粗；
3)、指示植物番茄的无菌苗培养：
(1)外植体的选取与灭菌：取番茄的种子，经灭菌处理，作为无菌播种的外植体；
(2)无菌播种培养：将灭菌处理后的种子接种在无菌播种培养基上，在培养条件下培养20～30天后，从种子培育成高约5～7cm的幼苗；
(3)微扦插培养：将诱导形成的幼苗切成一节一芽、约3～5节转接到微扦插培养基上，在培养条件下培养30～45天每节又培养成约3～5节、高5～7cm的幼苗；根据对幼苗数量的需求，每隔30～45天按同样方法进行幼苗再微扦插培养。
4)、微嫁接培养：
(1)微嫁接砧木准备：将步骤2)人参果茎尖脱毒培养的幼苗在无菌操作条件下切成一个个带腋芽的茎段，用解剖刀将腋芽小心的去掉，并在茎段的上部纵切一个长约0.5cm的切口，作为微嫁接砧木；
(2)微嫁接接穗准备：将步骤3)无菌苗培养的指示植物番茄的幼苗切成带单芽的茎段，芽上面的部分留0.3～0.5cm，芽下面的部分留0.5～1.0cm，并将其下部削成楔形，削面约长0.3cm，作为微嫁接接穗；
(3)微嫁接器准备：将步骤2)人参果茎尖脱毒培养的幼苗在无菌操作条件下切成一个个长约1.5cm的不带腋芽的茎段，用解剖刀在茎段中间纵切一个长约0.5cm的开口；
(4)微嫁接：将微嫁接器套入微嫁接砧木的切口下方，然后将微嫁接接穗插入微嫁接砧木上端的纵切口中，最后将微嫁接砧木的切口下方的微嫁接器往上移至微嫁接砧木的切口处，将微嫁接砧木的切口和微嫁接接穗固定牢；
(5)微嫁接苗培养：将嫁接苗接种到微嫁接培养基中进行培养，在培养条件下经45～60天的培养，指示植物苗生长正常、无病毒病的症状(叶片相对平展、翠绿、单叶面积较大)的为脱病毒苗；指示植物表现出病毒病的症状(叶片稍皱缩、叶缘上卷、暗绿、单叶面积较小)的为未脱除病毒苗。
5)、脱病毒组培苗的增殖培养：
(1)微扦插培养：将步骤4)检测出脱病毒的同一编号的组培苗切成一节一芽、约3～5节转接到微扦插培养基上，在培养条件下培养30～45天每节又培养成约3～5节、高5～7cm的幼苗；根据对幼苗数量的需求，每隔30～45天按同样方法进行幼苗再增殖；
(2)壮苗培养：将微扦插培养成约3～5节、高5～7cm的幼苗切成一节一芽、约3～5节接种到壮苗培养基上，在培养条件下培养30～45天，幼苗约2～3节、高3～5cm、茎变粗；
(3)生根培养：将培养的壮苗接种在生根培养基中进行生根培养，在培养条件下培养20～30天后，幼苗长高成约5～7cm、苗基部长出5～10根细根；
(4)移栽：将生根组培苗移栽于基质中，培育1～2个月至成苗。
(5)定植：将移栽苗定植在大田中，培育6～10个月至植株。
所述的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，所述的人参果茎尖脱毒培养时外植体的灭菌处理是经75％酒精浸泡0.5～1.0min，再用0.1％升汞溶液灭菌12min，最后用无菌水冲洗3～5次。
所述的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，所述的指示植物番茄的无菌苗培养时种子的灭菌处理是经75％酒精浸泡0.5～1.0min，再用0.1％升汞溶液灭菌25min，最后用无菌水冲洗3～5次。
所述的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，所述的人参果茎尖脱毒培养和脱病毒组培培养时各组培阶段的培养条件是，培养温度为25±2℃，光照光强为2500～3000Lx，光照时间为12h/d。
所述的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，所述的指示植物番茄的无菌苗培养时各阶段的培养条件是，培养温度为25±2℃，光照光强为2000～2500Lx，光照时间为10h/d。
所述的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，所述的嫁接苗培养时的培养条件是，培养温度为25±2℃，光照光强为3000～3500Lx，光照时间为16h/d。
所述的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，所述的移栽基质由泥炭∶珍珠岩∶蛭石按体积比2∶1∶1配制而成。
实施例2：
本例中，其基本培养基：选用MS培养基或1/2MS培养基，琼脂7g/L，pH5.6；诱导培养基：MS+BA 0.5mg/L+IAA 0.05mg/L+蔗糖30g/L；微扦插培养基：MS+BA 0.1mg/L+NAA0.05mg/L+白糖30g/L；壮苗培养基：MS+BA 0.05mg/L+NAA 0.01mg/L+PP333 0.1mg/L+白糖30g/L；微嫁接培养基：MS+BA 0.05mg/L+IBA 0.05mg/L+蔗糖40g/L；生根培养基：1/2MS+NAA 0.05mg/L+白糖20g/L；无菌播种培养基：1/2MS+蔗糖20g/L。人参果茎尖脱毒培养时取顶芽为外植体，经75％酒精浸泡0.5～1.0min，再用0.1％升汞溶液灭菌10min，最后用无菌水冲洗3～5次。指示植物番茄的无菌苗培养时种子的灭菌处理是经75％酒精浸泡0.5～1.0min，再用0.1％升汞溶液灭菌30min，最后用无菌水冲洗3～5次。其余步骤，条件均同于实施例1。
实施例3：
本例中，其基本培养基：选用MS培养基或1/2MS培养基，琼脂9g/L，pH5.7；诱导培养基：MS+BA 2.0mg/L+IAA 0.5mg/L+蔗糖；微扦插培养基：MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L+白糖30g/L；壮苗培养基：MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L+PP333 0.5mg/L+白糖30g/L；微嫁接培养基：MS+BA 0.5mg/L+IBA 0.5mg/L+蔗糖40g/L；生根培养基：1/2MS+NAA0.5mg/L+白糖20g/L；无菌播种培养基：1/2MS+白糖20g/L。人参果茎尖脱毒培养时取带腋芽茎段为外植体，经75％酒精浸泡0.5～1.0min，再用0.1％升汞溶液灭菌15min，最后用无菌水冲洗3～5次。指示植物番茄的无菌苗培养时种子的灭菌处理是经75％酒精浸泡0.5～1.0min，再用0.1％升汞溶液灭菌20min，最后用无菌水冲洗3～5次。其余步骤，条件均同于实施例1。
实施例4：
本例中，其基本培养基：选用MS培养基或1/2MS培养基，蔗糖或白糖20～40g/L，琼脂7～9g/L，pH5.6～5.8；诱导培养基：MS+BA 0.5～2.0mg/L+IAA 0.05～0.5mg/L；微扦插培养基：MS+BA 0.1～1.0mg/L+NAA 0.05～0.5mg/L；壮苗培养基：MS+BA 0.05～0.5mg/L+NAA 0.01～0.1mg/L+PP333 0.1～0.5mg/L；微嫁接培养基：MS+BA 0.05～0.5mg/L+IBA0.05～0.5mg/L；生根培养基：1/2MS+NAA 0.05～0.5mg/L；无菌播种培养基：1/2MS。人参果茎尖脱毒培养时取顶芽或带腋芽茎段为外植体，经75％酒精浸泡0.5～1.0min，再用0.1％升汞溶液灭菌10～15min，最后用无菌水冲洗3～5次。指示植物番茄的无菌苗培养时种子的灭菌处理是经75％酒精浸泡0.5～1.0min，再用0.1％升汞溶液灭菌20～30min，最后用无菌水冲洗3～5次。其余步骤，条件均同于实施例1。
除上述实施例外，本发明还可以有其他实施方式。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围。

Claims (8)

1、一种人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，其特征在于：该方法按以下步骤进行：
1)、培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
(1)基本培养基：选用MS培养基或1/2MS培养基，蔗糖或白糖20～40g/L，琼脂7～9g/L，pH5.6～5.8；
(2)诱导培养基：MS+BA 0.5～2.0mg/L+IAA 0.05～0.5mg/L；
(3)微扦插培养基：MS+BA 0.1～1.0mg/L+NAA 0.05～0.5mg/L；
(4)壮苗培养基：MS+BA0.05～0.5mg/L+NAA0.01～0.1mg/L+PP3330.1～0.5mg/L；
(5)微嫁接培养基：MS+BA 0.05～0.5mg/L+IBA 0.05～0.5mg/L；
(6)生根培养基：1/2MS+NAA 0.05～0.5mg/L；
(7)无菌播种培养基：1/2MS；
2)、人参果茎尖脱毒培养：
(1)外植体的选取与灭菌：剪取顶芽或带腋芽茎段为外植体，经灭菌处理，作为脱毒组培用的外植体；
(2)茎尖培养：将灭菌处理后的顶芽或带腋芽茎段在无菌条件下，在双筒解剖镜下，摘出0.2～0.3mm大小的带1～2个叶原基的茎尖，接种在诱导培养基上，在培养条件下培养20～30天后，从茎尖诱导形成幼芽，再培养20～30天，培养成3～5节、高5～7cm的幼苗；
(3)微扦插培养：将诱导形成的幼苗切成一节一芽、3～5节转接到微扦插培养基上，在培养条件下培养30～45天每节又培养成3～5节、高5～7cm的幼苗；根据对幼苗数量的需求，每隔30～45天按同样方法进行幼苗再微扦插培养；
(4)壮苗培养：将微扦插培养成3～5节、高5～7cm的幼苗切成一节一芽、3～5节接种到壮苗培养基上，在培养条件下培养30～45天，幼苗2～3节、高3～5cm、茎变粗；
3)、指示植物番茄的无菌苗培养：
(1)外植体的选取与灭菌：取番茄的种子，经灭菌处理，作为无菌播种的外植体；
(2)无菌播种培养：将灭菌处理后的种子接种在无菌播种培养基上，在培养条件下培养20～30天后，从种子培育成高5～7cm的幼苗；
(3)微扦插培养：将诱导形成的幼苗切成一节一芽、3～5节转接到微扦插培养基上，在培养条件下培养30～45天每节又培养成3～5节、高5～7cm的幼苗；根据对幼苗数量的需求，每隔30～45天按同样方法进行幼苗再微扦插培养；
4)、微嫁接培养：
(1)微嫁接砧木准备：将步骤2)人参果茎尖脱毒培养的幼苗在无菌操作条件下切成一个个带腋芽的茎段，将腋芽去掉并在茎段的上部纵切一个长0.5cm的切口，作为微嫁接砧木；
(2)微嫁接接穗准备：将步骤3)无菌苗培养的指示植物番茄的幼苗切成带单芽的茎段，芽上面的部分留0.3～0.5cm，芽下面的部分留0.5～1.0cm，并将其下部削成楔形，削面长0.3cm，作为微嫁接接穗；
(3)微嫁接器准备：将步骤2)人参果茎尖脱毒培养的幼苗在无菌操作条件下切成一个个长1.5cm的不带腋芽的茎段，用解剖刀在茎段中间纵切一个长0.5cm的开口；
(4)微嫁接：将微嫁接器套入微嫁接砧木的切口下方，然后将微嫁接接穗插入微嫁接砧木上端的纵切口中，最后将微嫁接砧木的切口下方的微嫁接器往上移至微嫁接砧木的切口处，将微嫁接砧木的切口和微嫁接接穗固定牢；
(5)微嫁接苗培养：将嫁接苗接种到微嫁接培养基中进行培养，在培养条件下经45～60天的培养，指示植物苗生长正常、无病毒病的症状的为脱病毒苗；指示植物表现出病毒病的症状的为未脱除病毒苗；
5)、脱病毒组培苗的增殖培养：
(1)微扦插培养：将步骤4)检测出脱病毒的同一编号的组培苗切成一节一芽、3～5节转接到微扦插培养基上，在培养条件下培养30～45天每节又培养成3～5节、高5～7cm的幼苗；根据对幼苗数量的需求，每隔30～45天按同样方法进行幼苗再微扦插培养；
(2)壮苗培养：将微扦插培养成约3～5节、高5～7cm的幼苗切成一节一芽、约3～5节接种到壮苗培养基上，在培养条件下培养30～45天，幼苗约2～3节、高3～5cm、茎变粗；
(3)生根培养：将培养的壮苗接种在生根培养基中进行生根培养，在培养条件下培养20～30天后，幼苗长高成5～7cm、苗基部长出5～10根细根；
(4)移栽：将生根组培苗移栽于基质中，培育1～2个月至成苗；
(5)定植：将移栽苗定植在大田中，培育6～10个月至植株。
2、根据权利要求1所述的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，其特征在于：所述的培养基，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
(1)基本培养基：选用MS培养基或1/2MS培养基，琼脂8g/L，pH5.8；
(2)诱导培养基：MS+BA 1.0mg/L+IAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L；
(3)微扦插培养基：MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L+白糖30g/L；
(4)壮苗培养基：MS+BA 0.1mg/L+NAA 0.05mg/L+PP3330.2mg/L+白糖30g/L；
(5)微嫁接培养基：MS+BA 0.1mg/L+IBA 0.1mg/L+蔗糖40g/L；
(6)生根培养基：1/2MS+NAA 0.1mg/L+白糖20g/L；
(7)无菌播种培养基：1/2MS+白糖20g/L。
3、根据权利要求1所述的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，其特征在于：所述的人参果茎尖脱毒培养时外植体的灭菌处理是经75％酒精浸泡0.5～1.0min，再用0.1％升汞溶液灭菌10～15min，最后用无菌水冲洗3～5次。
4、根据权利要求1所述的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，其特征在于：所述的指示植物番茄的无菌苗培养时种子的灭菌处理是经75％酒精浸泡0.5～1.0min，再用0.1％升汞溶液灭菌20～30min，最后用无菌水冲洗3～5次。
5、根据权利要求1所述的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，其特征在于，所述的人参果茎尖脱毒培养和脱病毒组培培养时各组培阶段的培养条件是，培养温度为25±2℃，光照光强为2500～3000Lx，光照时间为12h/d。
6、根据权利要求1所述的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，其特征在于，所述的指示植物番茄的无菌苗培养时各阶段的培养条件是，培养温度为25±2℃，光照光强为2000～2500Lx，光照时间为10h/d。
7、根据权利要求1所述的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，其特征在于，所述的嫁接苗培养时的培养条件是，培养温度为25±2℃，光照光强为3000～3500Lx，光照时间为16h/d。
8、根据权利要求1所述的人参果脱毒组培苗的病毒快速检测方法，其特征在于：所述的移栽基质由泥炭∶珍珠岩∶蛭石按体积比2∶1∶1配制而成。
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