CN105861388A - 一种油田嗜热降解长链烃芽孢杆菌hnmc 11117及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种油田嗜热降解长链烃芽孢杆菌HNMC11117及其应用，该菌株保藏编号为CGMCC No.12204。HNMC 11117菌株为以河南中原油田油藏底层温度大于60℃充气井的采出液为分菌样品，经分离纯化、筛选复检，得到对链长C₁₆～C₃₀的烷烃有选择性降解作用的高效菌株。本发明的菌株可用于提高高温条件下的原油采收率及修复石油污染的土壤等领域。

Description

一种油田嗜热降解长链烃芽孢杆菌HNMC 11117及其应用

技术领域

本发明涉及石油开采及石油污染的土壤生物处理技术领域，具体涉及在高温环境下降解长链烃的菌株，菌株分离、筛选的方法，及其在提高原油采收率及修复石油污染的土壤中的应用。

背景技术

我国是一个能源消耗大国，石油供需矛盾十分突出，已经成为制约我国国民经济发展的重要因素之一。目前，我国陆上大多数主力油田已进入中后期开发阶段，石油产量逐年递减，平均采收率不足30％，采用新的技术来提高石油产量和采收率是当务之急。油藏微生物一般是在特殊的温度、压力、盐度、pH地质环境下，自然选择出的一类种群结构和代谢方式相适应的微生物，主要通过其代谢过程和代谢产物作用于原油、岩油、水界面以提高原油采收率。利用油藏环境中的微生物资源提高采收率技术，通过调控油藏中微生物和微生物群落、充分发挥其有利于采油的功能，可以很好地提高原油采收率和产量，适合于我国多数油藏，在我国具有巨大的发展潜力。

随着各地油井开采深度的增加，大多数油井温度已达50℃以上，原油中胶质、沥青质含量也越来越高，之前筛选和投入使用的采油微生物菌剂大多数是常温菌，对油田长链烃(胶质、沥青质等)的降解不尽如人意，人们对井下油藏嗜热微生物种群研究较少，配伍效应研究不够，而且不同油田环境存在差异较大的嗜热菌群，用原来的采油微生物菌剂远不能满足深 井采油的需要。

同时，在石油开采的过程中，由于井喷事故、输油管和贮油罐的泄漏等原因，各种石油制品不可避免的进入环境而造成污染。石油污染物进入土壤后，会破坏土壤结构，影响土壤的通透性，影响植物生长，还可能污染地表水和地下水。

基于以上因素，亟需优化、筛选、培养出群体效应好、可有效降解长链烃的耐热或嗜热微生物用于降解原油中的胶质、沥青来提高原油采收率，或者用于修复被石油污染的土壤。

发明内容

本发明的目的是针对上述高温条件下降解石油存在的难题以及石油污染土壤的问题，提供能高效降解石油的菌株。

本发明的目的在于提供以下方面：

(1)一种油田嗜热降解长链烃芽孢杆菌HNMC 11117，该菌为苍白空气芽孢杆菌(Aeribacillus pallidus)，芽孢杆菌属，已于2016年3月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101，保藏编号：CGMCC No.12204。

(2)根据上述(1)所述的菌，可有效降解石油烃，优选长链烷烃，更优选链长C₁₆～C₃₀的烷烃。

(3)根据上述(1)或(2)所述的菌的分离、筛选方法，包括以下步骤：

1)分离纯化：直接取油田采出液，涂布于培养基平板上，恒温培养，待菌落生长稳定，接入培养基上，继续恒温培养，采用划线法，多次挑取单菌落纯化，直至获得菌落形态一致的 纯菌株；

2)筛选：活化菌体细胞，将菌体细胞接入液体摇瓶筛选基础培养基中，恒温培养，选取使原油分散明显、培养基浊度增加显著的菌株；

3)重复上述分离纯化、筛选实验，直至筛选到原油降解效果好的菌株。

(4)根据上述(3)所述的方法，其中，所述步骤1)中菌的培养温度为45-65℃，优选50-60℃；所述步骤2)中菌的培养温度为45-65℃，优选50-60℃。

(5)根据上述(3)所述的方法，其中，步骤1)中H培养基包括以下重量配比的组分：

调节其pH为7.0-7.5。

(6)根据上述(3)所述的方法，其中，步骤2)中的液体摇瓶筛选基础培养基包括以下重量配比的组分：

调节pH至7.5-8.5。

(7)根据上述(3)所述的方法，其中，步骤2)中的液体摇瓶筛选基础培养基中加入原油，其添加量为培养基总重量的0.5wt％-2.0wt％。

(8)根据上述(1)或(2)所述的菌用于降解长链烷烃的用途。

(9)根据上述(8)所述的菌的用途，其中，菌的降解条件如下：

温度45-65℃，优选50-60℃，更优选55℃；和/或

pH6.0-8.5，优选pH6.5-7.5，更优选pH7.0；和/或

NaCl浓度0.1％-2.0％，优选0.5％-1.5％，更优选1.0％。

根据本发明提供的一种油田嗜热降解长链烃芽孢杆菌HNMC 11117，具有以下有益效果：

1、耐热性：本发明成功地从油田高温采出液中分离、筛选出在高温条件下生长良好的苍白空气芽孢杆菌(Aeribacillus pallidus)，可有效提高高温条件下长链烃降解率；

2、群体效应：本发明中菌株在高温高压油藏环境中，和环境中自然存在的菌株产生配伍，协同作用原油，提高了原油中长链烃降解效率；

3、对长链烷烃的选择性降解：能够利用石油烃和多种烷烃为唯一碳源和能源生长，可选择性的降解长链烷烃；

4、高降解能力：在高温条件下，相比于已有的采油微生物菌，无论是常温菌还是耐热菌，本发明菌株具有更好的长链烷烃降解能力。

附图说明

图1为HNMC 11117菌株显微镜观察(40×100)下的菌体形态；

图2为AlkB基因的烃类降解途径；

图3为HNMC 11117菌株基于16SrDNA相似性构建的系统进化树；

图4为原油空白对照气相全烃色谱图；

图5为HNMC 11117菌株以原油为唯一碳源气相全烃色谱图；

图6为HNMC 11117菌株以原油和1％酵母粉为碳源气相全烃色谱图。

具体实施方式

下面通过对本发明进行详细说明，本发明的特点和优点将随着这些说明而变得更为清楚、明确。

在这里专用的词“示例性”意为“用作例子、实施例或说明性”。这里作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。尽管在附图中示出了实施例的各种方面，但是除非特别指出，不必按比例绘制附图。

本发明提供了一种油田嗜热降解长链烃芽孢杆菌HNMC 11117菌株。所述菌株为苍白空气芽孢杆菌(Aeribacillus pallidus)，芽孢杆菌属，保藏编号为CGMCC No.12204。HNMC 11117菌株的菌体形态如图1所示，芽孢椭圆到柱状，大小为(0.6μm～0.9μm)×(1.0μm～1.5μm)，菌落表面粗糙不透明，乳白色类圆状，直径为2mm～4mm。本发明中，HNMC 11117菌株可降解石油烃，优选长链烷烃，更优选链长C₁₆～C₃₀的烷烃。

HNMC 11117菌株来源于河南中原油田油藏底层温度大于60℃充气井的采出液，菌株经分离纯化，筛选复检，从多株优选菌株中筛选出一株能有效利用石油烃生长，对长链烷烃有选择性降解能力的高效菌株。

本发明中，所述油田嗜热降解长链烃芽孢杆菌HNMC 11117的分离、筛选方法，包括以下步骤：

1)分离纯化：取油田采出液，在培养基平板上培养，多次挑取单菌落纯化，直至获得纯菌株；

2)筛选：纯化菌体细胞，将菌体细胞接入液体摇瓶筛选基础培养基中培养，选取降解率高的菌株。

在一种优选的实施方式中，HNMC 11117菌株的分离、筛选方法为：

1)菌株的分离纯化：直接取油田高温采出液，均以200μL涂布于H培养基平板上，于45-65℃恒温培养，观察菌落生长情况。待菌落生长稳定，从每个样品的分离平板中，挑选单菌落生长较清晰的平板，尽可能挑去平板上所有单菌落，全部转接入H培养基上，45-65℃恒温培养。采用平板3区划线法，多次挑取单菌落纯化，直至获得菌落形态一致的纯菌株。

2)原油降解菌的多项筛选试验：应用H培养基活化纯培养细胞，45-65℃恒温培养1天，离心收集新鲜的菌体细胞，无菌水清洗3次以除去残留碳源。按1％接种量，将菌体细胞转接入以原油为唯一碳源的液体摇瓶筛选基础培养基中，以不接菌的液体摇瓶筛选基础培养基做空白对照，120r/min、45-65℃恒温培养21天，观察摇瓶中原油在水溶液中的分散状况、培养基浊度变化等表观现象，并记录试验结果。选取原油分散较明显、培养基浊度增加显著的菌株。

其中，所述H培养基，包括8-12重量份酵母膏、0.5-2重量份乳酸、8-12重量份NaCl和1000重量份H₂O，调节pH至7.0-7.5，121℃灭菌25min。

所述液体摇瓶筛选基础培养基，包括4-6重量份NaCl、0.8-1.2重量份K₃PO₄、0.8-1.2重量份NH₄H₂PO₄、0.8-1.2重量份(NH₄)₂SO₄、0.1-0.3重量份MgSO₄·7H₂O、2-4重量份KNO₃、以及1000重量份H₂O，调节pH至7.5-8.5；所述摇瓶筛选培养基中还加入原油，添加量为培养基总重量的0.5％-2.0％，加入原油后，121℃灭菌30min，灭菌3次。

在进一步优选的实施方式中，重复上述分离纯化、筛选试验，直至筛选到效果稳定的菌株。对该功能菌株做进一步烃降解特性分析，同时进行菌种多项分类鉴定。

本发明中主要通过基因筛选和摇瓶筛选两种方法对石油烃进行降解功能特性的研究，通过对其实验结果的判定筛选出高效的石油烃降解菌株，并确定其降解效率。

在基因筛选实验中，主要研究途径是通过对纯化得到的菌株基因组DNA中石油烃降解功能基因AlkB的筛选，判断其是否含有石油烃降解基因片段。首先利用AlkB功能基因的引物对样品基因组DNA进行扩增，阳性扩增序列的表达呈现，说明此菌株具有潜在的含有石油烃降解的基因片段，再通过分子克隆技术，测出该系列的全部系列长度，与GenBank数据库中信息进行比对，从而确定该菌株对石油烃降解的潜力。AlkB基因为烃类降解的单加氧酶基因，主要是合成烃类降解的单加氧酶，是目前所有研究发现的烃类降解途径中最主要的、必须经过的途径，具体降解途径如图2所示。

在摇瓶筛选实验中，主要研究途径是将纯化得到的菌种活 化后加到以原油为唯一碳源的无机盐培养基中，在55℃条件下培养21天后，摇瓶培养120r/min，通过观察原油分散于培养基水相、并使培养基逐渐浑浊的表观现象的初步判断其降解功能。收集微生物降解原油的反应液，采用三氯甲烷进行萃取，气相色谱—质谱(GC-MS)联用技术进行全烃组分的测定，确定原油组分中正构烷烃的浓度变化。具体方法如下：

在100mL培养液中加入1mL盐酸水(1:1)酸化，使pH降至2.0以下；将全部水样倒入分液漏斗中，部分原油黏附在三角瓶的瓶壁上，用三氯甲烷将该部分原油从瓶壁上洗脱后倒入分液漏斗中，每100mL水样加入20mL三氯甲烷，充分振荡，倒入250mL分液漏斗中，240r/min振荡5min，静置。待分层完全后，先将水样放出，然后放出下层油样至50mL离心管中；重复三氯甲烷萃取步骤两次；将萃取液于8000rpm离心10min，吸去上层水相，将油相转移至已知重量的100mL三角瓶中；放于通风橱内蒸干溶剂，残油称重，常温保存在三角瓶中；萃取回收后，用气相色谱分析其与对照样品组分的全烃成分变化情况，通过对其全烃组分含量的测定判断其降解效率。从而优选出最佳降解菌株。

筛选出的菌株基因测序结果与GenBank中的已有序列进行Blast比对，采用MEGA软件绘制系统进化树以确定菌株的种属关系，如图3所示，其中括号内的编号为菌株的GenBank登录号。HNMC 11117基因序列与苍白空气芽孢杆菌(Aeribacillus pallidus)DSM3670T(GenBank登录号为Z26930)的16SrDNA基因同源性最高，相似性为100％，结合菌种形态以及多项分类鉴定试验结果，确定HNMC 11117菌株为苍白空气芽孢杆菌(Aeribacillus pallidus)。

在更进一步优选的实施方式中，由于原油中可能存在耐高温菌，在摇瓶培养基制备的灭菌过程中，重复灭菌3次。尽管如此，为确认摇瓶筛选培养效果是转接的目标菌株作用的结果，重新分离纯化培养21天后的摇瓶筛选基础培养液中的菌株，即取培养21天后摇瓶培养液20μL，涂布于H培养基平板，45-65℃培养24h，挑取多个单菌落纯化，分别提取各纯培养物细胞的基因组DNA，PCR扩增、测序，比对16SrDNA。所述PCR反应体系(25μL)包括：0.5μL正向引物组(20μM)，0.5μL反向引物组(20μM)，2.5μL 10×PCR缓冲液，1.5μL MgCl₂(25mM)，0.5μL dNTP(10mM)，0.5μL TaqDNA聚合酶(2.5U/μL)，DNA模板1μL，H₂O补充至25μL。PCR扩增反应程序为：盖温：98℃，10min；预变性：95℃，10min；变性：94℃，1min；退火：55℃，40s；延伸：72℃，1min；72℃，5min；降温至4℃；其中2-4步运行30个循环。经凝胶电泳分析后，进行测序，16SrDNA(片段)测序结果一致，如SEQ ID NO.1所示。

试验例

实验中所用各培养基配制分别为：

H培养基由10g酵母膏、1g乳酸、10gNaCl和1000gH₂O配置而成，调节pH至7.0。

液体摇瓶筛选基础培养基由5gNaCl、1gK₃PO₄、1gNH₄H₂PO₄、1g(NH₄)₂SO₄、0.2gMgSO₄·7H₂O、3gKNO₃、以及1000gH₂O配置而成，调节pH至8.0。

无机盐培养基由5gNaCl、1gK₂HPO₄、1g NH₄H₂PO₄、1g(NH₄)₂SO₄、0.2g MgSO₄·7H₂O、3g KNO₃和1000gH₂O配 制而成，调节pH至7.0。

含1％酵母膏的无机盐培养基由无机盐培养基添加1wt％酵母膏配制而成，调节pH至7.0。

上述各培养基加入原油后，需121℃灭菌30min，灭菌3次。

实验中所用各培养基中组分来源分别为：

原油，来源于河南中原油田油藏底层温度大于60℃充气井的采出液；酵母膏，购自北京奥博星生物技术有限公司；乳酸，分析纯，购自北联精细化学品有限公司；NaCl，分析纯；K₃PO₄，分析纯；NH₄H₂PO₄，分析纯；(NH₄)₂SO₄，分析纯；MgSO₄·7H₂O，分析纯；KNO₃，分析纯；K₂HPO₄，分析纯；H₂O，一级水。

试验例1温度对HNMC 11117生长的影响

温度梯度实验采用无机盐培养基，菌株转接量为1％，每个梯度3个平行，恒温培养24h后测得其OD630值。结果如表1所示，可见菌株在55℃生长最佳。本菌株投入高温高压油藏环境，和环境中自然菌株产生配伍，可通过信号分子协同作用原油。

表1温度梯度菌液OD值

试验例2pH对HNMC 11117生长的影响

以无机盐培养基为基础，灭菌后，采用无菌的NaOH溶液和HCl溶液调整培养基pH为不同的梯度，并分装入无菌试管中(3mL/支)。转接量1％，每个梯度3个平行，恒温55℃培养，24h后测得其OD₆₃₀值。结果如表2所示，可见菌株在pH为7时生长最佳。

表2pH梯度菌液OD值

pH值	3	4	5	6	7	8	9	10	11
										OD值	0.124	0.295	0.438	0.537	0.695	0.574	0.467	0.168	0.058

试验例3NaCl浓度对HNMC 11117生长的影响

以不含NaCl的无机盐培养基为基础，添加不同浓度的NaCl，配制成NaCl％(w/v)梯度培养基，pH7.0，灭菌备用。转接活化好的菌液1％接种量于NaCl％梯度培养液中，每个梯度3个平行，恒温55℃培养，24h后测得其OD₆₃₀值。结果如表3所示，可见菌株在1％的NaCl含量时生长最佳。

表3盐度梯度菌液OD值

盐度	0.5	1.0	1.5	2.0	3.0	4.0	5.0	6.0
									OD值	0.438	0.689	0.539	0.485	0.452	0.391	0.204	0.147

实施例

实施例1HNMC 11117菌株的分离、筛选

本发明中油田嗜热降解长链烃芽孢杆菌HNMC 11117的分离、筛选方法，包括以下步骤：

1)分离纯化：直接取油田高温采出液，均以200μL涂布平板，涂布与于H培养基平板上，置于55℃恒温培养，观察菌落生长情况。待菌落生长稳定，从每个样品的分离平板中，挑选单菌落生长较清晰的平板，尽可能挑去平板上所有单菌落，全部转接入H培养基上，55℃恒温培养。采用平板3区划线法，多次挑取单菌落纯化，直至获得菌落形态一致的纯菌株。

2)多项筛选试验：应用H培养基活化纯培养细胞，55℃恒温培养1天，离心收集新鲜的菌体细胞，无菌水清洗3次以除去残留碳源。按1％接种量，将菌体细胞转接入液体摇瓶筛选基础培养基中，以不接菌的液体摇瓶筛选基础培养基做空白对照， 120r/min、55℃恒温培养21天，观察摇瓶中原油在水溶液中的分散状况、培养基浊度变化等表观现象，并记录试验结果。选取原油分散较明显、培养基浊度增加显著的菌株，重复上述筛选试验，直至筛选到效果稳定的菌株，即为苍白空气芽孢杆菌(Aeribacillus pallidus)HNMC 11117。

实施例2HNMC 11117菌株的原油降解性能

分别采用H培养基、无机盐培养基和含1％酵母膏的无机盐培养基，均添加1wt％原油，以不同的温度、盐度和pH值的条件，120r/min，恒温培养21天，从菌株对原油分散的表观现象和培养液的浑浊程度，分析菌株对原油降解的最佳作用条件。即部分摇瓶中的培养液呈现浑浊状态，原油无挂壁现象，能够完全分散于液体培养基中。

综合其培养条件和理化因素可以看出，菌株HNMC 11117在pH7.0、55℃、1.0％NaCl含量条件下，以无机盐培养基和含1％酵母膏的无机盐培养基为降解培养基，对原油降解的表观现象最为显著。结果如表4所示，其中，“-”表示无明显分散，“+”表示明显分散，“++”表示显著分散。

表4在不同的温度、盐度和pH值下的原油降解性能

石油烃降解率和选择性的测定方法采用气相色谱法。气相色谱法由于原油组分测定条件的限制，将在摇瓶实验中选择样品进行原油组分的测定，主要为原油中全烃含量的变化。以不 接入菌种的样品做对照，采用GC-MS联用技术进行全烃组分的测定，确定原油组分中正构烷烃的浓度变化。

全烃色谱测定采用执行标准：SY/T 5779-2008《原油全烃气相色谱分析方法》。气相色谱仪为Varian3700(American)，色谱柱为弹性石英毛细柱，长30m，内径0.22mm。设置气相色谱仪和色谱数据处理机的分析条件：载气：99.999％氮气；进样口：300℃；检测器FID：300℃；色谱柱:HP-1弹性石英毛细柱(60m×0.25mm×0.25μm)；柱温：初温40℃保持10min，4℃/min升温至70℃，8℃/min升温至300℃，保持30min；载气流速：恒流1mL/min；分流60：1。

通过摇瓶筛选后，对石油烃的降解作用采用GC-MS测得石油全烃组分的变化图谱。如图4、图5和图6所示，通过测定全烃相关成分、相对含量和数据分析发现，原油处理前后C₁₆和C₁₇显著增加，C₃₀有所减少，尽管C₃₀在处理前后的比值并不明显低于其他的烃类，但由于长链烃分子量大的原因，因而认为该比值表明C₃₀较显著地减少；又由于C₃₀减少的同时C₁₆和C₁₇增加，认为C₁₆和C₁₇应是C₃₀降解的部分产物。HNMC 11117菌对石油烃，特别是链长C₁₆～C₃₀的长链烃有较好的降解能力。

实施例3与常温菌株原油降解性能比较

本发明中，以小于C₁₆的液态烃类为唯一碳源，采用液体摇瓶筛选基础培养基，通过接入相同的菌体量，经过一段时间的培养后，通过OD值测定其菌体最终的生长量，以比对常温菌株SHY-33和菌株HNMC 11117的生长差异，进而确定原油降解性能的差异。液态烷烃为正己烷，正辛烷，正癸烷，十二烷，十四烷，十六烷。

将菌株在最适温度下，活化培养12h。实验前先将液态烷烃用0.22μm滤膜过滤之后，以2％的量加入到经过高温灭菌后的50mL液体摇瓶筛选基础培养基中，然后将目标菌株活化后的菌体细胞收集后用无菌水清洗三次，以除去菌体细胞中残留的碳源，以10％的接种量接入液体摇瓶基础培养基中培养。装有烷烃培养基的三角瓶用橡皮塞封口，以防止高温和光照的条件下，液态烷烃的挥发。接种完毕的摇瓶，常温菌株SHY-33在30℃，菌株HNMC 11117在55℃，150r/min条件下，摇床培养7d后，以相应不加任何烷烃的接菌液体摇瓶筛选基础培养基做空白对照，取样测定各样品的OD₆₃₀值，结果如表5所示。菌株HNMC 11117能高效利用C₆-C₁₆直链烷烃进行生长，而代表菌株SHY-33利用率较低。OD₆₃₀值测定是以空白样品为“0”进行计算的。

表5HNMC 11117与常温菌株原油降解性能比较

序号	代表菌株	空白对照	正己烷	正辛烷	正癸烷	十二烷	十四烷	十六烷
									1	HNMC11117	0	0.005	0.009	0.026	0.002	0.013	0.015
2	SHY-33	0	0.001	0.003	0.004	0	0	0.001

实施例4与耐热菌株原油降解性能比较

本发明中，以小于C₁₆的液态烃类为唯一碳源，采用液体摇瓶筛选基础培养基，通过接入相同的菌体量，经过一段时间的培养后，通过OD值测定其菌体最终的生长量，以比对耐热菌株P388-53和菌株HNMC 11117的生长差异，进而确定原油降解性能的差异。液态烷烃为正己烷，正辛烷，正癸烷，十二烷，十四烷，十六烷。

将代表菌株在最适温度下，活化培养12h。实验前先将液 态烷烃用0.22μm滤膜过滤之后，以2％的量加入到经过高温灭菌后的50mL液体摇瓶筛选基础培养基中，然后将目标菌株活化后的菌体细胞收集后用无菌水清洗三次，以除去菌体细胞中残留的碳源，以10％的接种量接入液体摇瓶基础培养基中培养。装有烷烃培养基的三角瓶用橡皮塞封口，以防止高温和光照的条件下，液态烷烃的挥发。接种完毕的摇瓶在55℃，150r/min条件下，摇床培养7d后，以相应不加任何烷烃的接菌液体摇瓶筛选基础培养基做空白对照，取样测定各样品的OD₆₃₀值，结果如表6所示。菌株HNMC 11117能高效利用C₆-C₁₆直链烷烃进行生长，而代表菌株P388-53利用率较低。OD₆₃₀值测定是以空白样品为“0”进行计算的。

表6HNMC 11117与耐热菌株原油降解性能比较

序号	代表菌株	空白对照	正己烷	正辛烷	正癸烷	十二烷	十四烷	十六烷
									1	HNMC11117	0	0.005	0.009	0.026	0.002	0.013	0.015
2	P388-53	0	0	0	0.014	0.002	0.007	0.010

由上述实施例可知，分离出的具有烷烃降解功能的嗜热苍白空气芽孢杆菌HNMC 11117，在最适降解原油条件为55℃，pH7.0，NaCl浓度1.0％下，比已有的采油微生物菌，无论是常温菌还是耐热菌，对原油和石油污染中的长链烃类具有更好的选择性降解能力。

以上结合具体实施方式和范例性实例对本发明进行了详细说明，不过这些说明并不能理解为对本发明的限制。本领域技术人员理解，在不偏离本发明精神和范围的情况下，可以对本发明技术方案及其实施方式进行多种等价替换、修饰或改进，这些均落入本发明的范围内。本发明的保护范围以所附权利要 求为准。

Claims (10)

1.HNMC 11117菌，保藏编号为CGMCC No.12204。

2.根据权利要求1所述的菌，其特征在于，所述菌为苍白空气芽孢杆菌，芽孢杆菌属。

3.根据权利要求1或2所述的菌，其特征在于，所述菌可降解石油烃，优选长链烷烃，更优选链长C₁₆～C₃₀的烷烃。

4.根据权利要求1至3之一所述菌的分离、筛选方法，包括以下步骤：

(1)分离纯化：取油田采出液，在培养基平板上培养，多次挑取单菌落纯化，直至获得纯菌株；

(2)筛选：纯化菌体细胞，将菌体细胞接入液体摇瓶筛选基础培养基中培养，选取原油降解率高的菌株。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(1)中菌的培养温度为45-65℃，优选50-60℃；步骤(2)中菌的培养温度为45-65℃，优选50-60℃。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述培养基包括以下重量配比的组分：

其pH为7.0-7.5。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述液体摇瓶筛选基础培养基包括以下重量配比的组分：

其pH为7.5-8.5。

8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述液体摇瓶筛选基础培养基中加入原油，基于培养基的总重量，原油为0.5wt％-2.0wt％。

9.根据权利要求1至3之一所述的菌用于降解长链烷烃的用途。

10.根据权利要求9所述的菌的用途，其特征在于，菌的降解条件如下：

温度45-65℃，优选50-60℃，更优选55℃；和/或

pH6.0-8.5，优选pH6.5-7.5，更优选pH7.0；和/或

NaCl浓度0.1％-2.0％，优选0.5％-1.5％，更优选1.0％。