CN105816469A - 20(R)-人参皂苷Rg3在制备用于治疗骨质疏松症的药物或保健品中的应用及药物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种20(R)-人参皂苷Rg3在制备用于治疗骨质疏松症的药物中的新应用。试验证明，20(R)-人参皂苷Rg3治疗骨质疏松症的疗效显著，见效快、毒副作用小、是一种安全、高效、稳定、制备工艺简单的治疗骨质疏松症药物，适于工业化生产，易于推广。本发明为治疗骨质疏松症提供了一种新的药物来源。

Description

20(R)-人参皂苷Rg3在制备用于治疗骨质疏松症的药物或保健品中的应用及药物

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种治疗骨质疏松症的药物或保健食品，特别涉及一种中药人参提取成分在治疗骨质疏松症药物或保健食品中的应用。

背景技术

骨质疏松症主要分为原发性和继发性，原发性除特发性外，分为I型和II型，I型又称为绝经后骨质疏松，为高转换型，主要原因为雌性激素缺乏；II型又称为老年性骨质疏松，为低转换型，由于年龄的老化。骨质疏松症由多种因素所致，它的基本病理机理是骨代谢过程中骨吸收和骨形成的偶联出现缺陷，导致人体内的钙磷代谢不平衡，使骨密度逐渐减少而引起的临床症状。

原发性骨质疏松症最常见的症症，以腰背痛多见，占疼痛患者中的70％～80％。疼痛沿脊柱向两侧扩散，仰卧或坐位时疼痛减轻，直立时后伸或久立、久坐时疼痛加剧，日间疼痛轻，夜间和清晨醒来时加重，弯腰、肌肉运动、咳嗽、大便用力时加重。一般骨量丢失12％以上时即可出现骨痛。老年骨质疏松症时，椎体骨小梁萎缩，数量减少，椎体压缩变形，脊柱前屈，腰疹肌为了纠正脊柱前屈，加倍收缩，肌肉疲劳甚至痉挛，产生疼痛。新近胸腰椎压缩性骨折，亦可产生急性疼痛，相应部位的脊柱棘突可有强烈压痛及叩击痛，一般2～3周后可逐渐减轻，部分患者可呈慢性腰痛。若压迫相应的脊神经可产生四肢放射痛、双下肢感觉运动障碍、肋间神经痛、胸骨后疼痛类似心绞痛，也可出现上腹痛类似急腹症。若压迫脊髓、马尾还中影响膀胱、直肠功能。多在疼痛后出现。脊椎椎体前部几乎多为松质骨组成，而且此部位是身体的支柱，负重量大，尤其第11、12胸椎及第3腰椎，负荷量更大，容易压缩变形，使脊椎前倾，背曲加剧，形成驼背，随着年龄增长，骨质疏松加重，驼背曲度加大，致使膝关节挛拘显著。每人有24节椎体，正常人每一椎体高度约2cm左右，老年人骨质疏松时椎体压缩，每椎体缩短2mm左右，身长平均缩短3～6cm。胸、腰椎压缩性骨折，脊椎后弯，胸廓畸形，可使肺活量和最大换气量显著减少，患者往往可出现胸闷、气短、呼吸困难等症状。

绝经后和老年性骨质疏松症的诊断，首先需排除其他各种原因所致的继发性骨质疏松症，如甲状旁腺功能亢进和多发性骨髓瘤、骨质软化症、肾性骨营养不良、儿童的成骨不全、转移瘤、白血病以及淋巴瘤等。

骨质疏松症进行分级诊断：正常为BMD或BMC在正常成人骨密度平均值的1个标准差(SD)之内；骨质减少为BMD或BMC较正常成人骨密度平均值降低1～2.5个标准差；骨质疏松症为BMD或BMC较正常成人骨密度平均值降低2.5个标准差以上；严重骨质疏松症为BMD或BMC较正常成人骨密度平均值降低2.5个标准差以上并伴有1个或1个以上的脆性骨折。该诊断标准中BMD或BMC可在中轴骨或外周骨骼测定。

临床上用来防治骨质疏松的药物有：钙制剂，包括有逸得乐、凯思立，钙尔奇D、乐力、葡萄糖酸钙口服液、龙昌钙+D口服液、劲得钙、巨能钙和超微钙；抑制骨吸收药物，如去氢孕嗣、倍美力片和利维爱等；双膦酸盐类，如福善美、骨麟、邦得林和吉力舒宁；成骨治疗药物，如特乐定；促进矿化的维生素类药物，如法能(lα-羟基维生素D3)、罗钙全(钙三醇)、萌格旺(阿法骨化醇)、立庆(阿法骨化醇片)。

只有在因骨质疏松症发生骨折以后，才需外科治疗，其目的在于治疗骨折，尽早恢复正常功能。

人参中药中名贵药材，现代医学研究表明人参的主要功效和作用有：对于神经中枢系统的作用，抗癌抗肿瘤作用，免疫功能调节作用，抗糖尿病的作用，增强肝功能作用，心脑血管障碍改善，抗动脉硬化作用，血压调节作用，以及更年期障碍和抗骨质疏松作用，抗疲劳，抗氧化，抑制衰老等。人参皂苷作为人参的主要有效成分，被广泛研究和使用，其中以20(R)-人参皂苷Rg3最为引人瞩目，其作为人参的主要有效成分，安全性良好，已经被制成抗肿瘤口服制剂应用于临床，作为注射剂被深入研究。

本发明人通过大量的现代科学研究，采用先进的分离纯化技术从人参药材中提取其治疗骨质疏松症的有效成分20(R)-人参皂苷Rg3，并对20(R)-人参皂苷Rg3及其相应的药物制剂进行了治疗骨质疏松症的药效学、药理学研究，结果表明20(R)-人参皂苷Rg3单体药理作用清楚，治疗骨质疏松症功效强，毒副作用低，安全性高，可以为治疗骨质疏松症提供一种高效低毒的药物。

发明内容

本发明的首要目的是针对上述现有治疗骨质疏松症的药物或保健品中存在的技术问题，提供20(R)-人参皂苷Rg3治疗骨质疏松症的性能和功效，并针对上述现有技术存在的问题，提供20(R)-人参皂苷Rg3新的药用用途，即在治疗骨质疏松症的药物或保健食品中的新应用。

为实现本发明的目的，本发明一方面提供一种20(R)-人参皂苷Rg3在制备用于治疗骨质疏松症的药物或保健品中的应用。

在筛选具有治疗骨质疏松症作用的天然活性成分的过程中，发明人发现人参的化学成分中20(R)-人参皂苷Rg3具有强烈的治疗骨质疏松症的作用。

其中，所述药物或保健品由20(R)-人参皂苷Rg3和药学上可接受的载体组成。

其中，所述的20(R)-人参皂苷Rg3含量≥1％，优选为≥30％，进一步优选为≥60％，更进一步优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％。

特别是，所述的20(R)-人参皂苷Rg3含量为1％～98％；优选为30～80％，进一步优选为60％。

特别是，药学上可接受的载体通常被保健专家认可用于这一目的且作为药剂的非活性成分。有关药学上可接受的载体的汇编可以在《药物赋形剂手册》(HandbookofPharmaceuticalexcipients，第2版，由A.Wade和P.J.Weller编辑；AmericanPharmaceuticalAssociation出版，WashingtonandThePharmaceuticalPress,London,1994)等工具书中找到。

尤其是，所述的载体包括赋形剂，如淀粉、水等；润滑剂，如硬脂酸镁等；崩解剂，如微晶纤维素等；填充剂，如乳糖等；粘结剂，如预胶化淀粉、糊精等；甜味剂；抗氧化剂；防腐剂、矫味剂、香料等。

其中，所述药物以片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、乳剂、注射剂、喷雾剂、气雾剂、凝胶型、霜剂、酊剂、巴布剂、橡胶贴膏剂或贴膏剂形式存在。

特别是，所述的20(R)-人参皂苷Rg3含量≥1％，优选为≥30％，进一步优选为≥60％，更进一步优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％。

本发明另一方面提供一种含有20(R)-人参皂苷Rg3的治疗骨质疏松症的药物或保健品。

其中，所述的20(R)-人参皂苷Rg3含量≥1％，优选为≥30％，进一步优选为≥60％，更进一步优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％。

特别是，所述的20(R)-人参皂苷Rg3含量优选为1％～98％；进一步优选为30～80％，更进一步优选为60％。

特别是，所述20(R)-人参皂苷Rg3的重量与所述药物或保健品的总重量之比为0.01-10：100，优选为0.1～10：100，进一步优选为1～10：100。

特别是，所述药物或保健品中还黄芪提取物、丹参提取物、淫羊藿提取物、山茱萸提取物、甘草提取物、黑芝麻提取物、生姜提取物、葡萄子提取物、石榴子提取物、植物精油、熊果苷、维生素C及其衍生物或维生素E及其衍生物中的一种或多种。

所述药物可以采用本领域公知的方法制成各种剂型，如片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、注射剂、喷雾剂、气雾剂、凝胶型、霜剂、酊剂、巴布剂、橡胶贴膏剂或贴膏剂等。

本发明还提供了一种治疗骨质疏松症的方法，包括向受试者给予治疗有效量的20(R)-人参皂苷Rg3的药物组合物，其治疗有效量为0.6～12mg/kg·d，优选为1～6mg/kg·d，进一步优选为1.5～3mg/kg·d。

除非另外说明，本文所用的术语“治疗有效量”为需要产生有效作用的药物的用量；“治疗有效量”是可以调整和变化的，最终由医务人员确定，其所考虑的因素包括给药途径和制剂的性质、接受者的体重、年龄等一般情况以及所治疗疾病的性质和严重程度。

与现有技术相比，本发明具有如下的明显优点：

1、本发明对已知化合物20(R)-人参皂苷Rg3发掘了新的药用价值，将其用于预防、治疗骨质疏松症，并可制备成治疗骨质疏松症的药物或保健食品，从而为人参药材的应用开拓了一个新的领域。

2、本发明的系列试验研究证明20(R)-人参皂苷Rg3具有显著的治疗骨质疏松症的功效。

3、本发明的20(R)-人参皂苷Rg3药理作用强，治疗骨质疏松症的功效显著，见效快、毒副作用小、安全性好，能够长期服用，具有良好的药用前景。

4、本发明的产品原料来源丰富、价廉、临床使用安全，制备工艺简单，可制成各种剂型，且服量小，使用方便，因此易于推广。

5、本发明既可采用单一成分的20(R)-人参皂苷Rg3活性成分制备治疗骨质疏松症的药物，又可采用20(R)-人参皂苷Rg3与其它活性成分(例如与黄芪、丹参、淫羊藿、山茱萸、甘草、黑芝麻提取物、生姜提取物、葡萄子提取物、石榴子提取物、植物精油、熊果苷、维生素C及其衍生物或维生素E及其衍生物)共同组方，制备治疗骨质疏松症的复方药物。

具体实施例方式

下面通过具体实施方式来进一步描述本发明所述配方的有益效果。这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的配方思路、用途范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内

下列实施例中未注明具体实验条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照厂商所建议的条件。以下通过试验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果，这些试验例包括了本发明药物的药效学试验。

实施例1Rg3片剂

1、按照如下配比准备原料

将人参皂苷Rg3和淀粉混合均匀后，制成颗粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混合均匀后压制成10000片。

实施例2Rg3胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

人参皂苷Rg3(含量63％)200g

淀粉1000g

将人参皂苷Rg3和淀粉混合均匀后，装入胶囊，制成10000粒。

实施例3Rg3颗粒剂

1、按照如下配比准备原料

人参皂苷Rg3(含量98％)10g

微晶纤维素1000g

将人参皂苷Rg3和微晶纤维素混合均匀后制成颗粒，装袋，制成10000袋。

实施例4Rg3片剂

1、按照如下配比准备原料

将人参皂苷rg3、甘草提取物、维生素C和淀粉混合均匀后，制粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混匀后压制成10000片。

实施例5Rg3胶囊剂

将人参皂苷Rg3、黄芪提取物、维生素C和淀粉混合均匀后装入胶囊，制成10000粒。

实施例6Rg3颗粒剂

将人参皂苷Rg3、山茱萸提取物、维生素C和蔗糖粉混合均匀制成颗粒后装袋，制成10000袋。

实施例7Rg3口服液

1、按照如下配比准备原料

取人参皂苷Rg3用少量乙醇溶解后，加入丹参提取物、黑芝麻提取物和葡萄糖糖浆，最后补加去离子水至100ml，即得。

试验例120(R)-人参皂苷Rg3抗骨质疏松症药效学实验

1实验材料

1.1药物与试剂

20(R)-人参皂苷Rg3，大连富生天然药物开发有限公司药物制剂研究室提供，批号：2012303；以中国药品生物制品检定所提供的人参皂苷Rg3标准品对照并进行HPLC标定，含量为98.2％；

阳性对照药物：尼尔雌醇片由北京四环制药有限公司生产，国药准字Hl1020123号，lmg/片，10片/盒。使用前在碾钵中碾细后并以0.5％CMC-Na助悬配成0.05mg/m1混悬液；

阴性对照药物：生理盐水，宁夏启元国药有限公司提供，批号员100221-1；

麻醉药：10％水合氯醛；

其余试剂均为分析纯。

1.2实验动物

8月龄Wistar雌性大鼠、体重220-310g，购自大连医科大学实验动物中心，质量合格证号：SCXK(13)2012-0003。

1.3实验仪器

BIO-RAD型洗板机、Model-680型酶标仪、DHP-9082型电热恒温培养箱、OlympusAU2700全自动生化分析仪、TD5A-WS台式低速离心机等由宁夏医科大学提供。

2实验方法

2.1造模方法

去卵巢模型鼠：10％水合氯醛30mg/kg腹腔注射麻醉，严格无菌操作，取腹部正中切口，进入腹腔，完整摘除双侧卵巢，彻底止血后，分两层依次缝合肌肉和皮肤，切除的卵巢均经病理学证实：假手术组切口同前，进入腹腔后切除左、右肠系膜各一段，取出双侧卵巢于体外放置lmin后还纳，其重量基本与两侧卵巢一致，不去卵巢，止血缝合。伤口撒青霉素粉末，术后伤口无感染，按期愈合。卵巢切除后5天连续阴道涂片无周期性的变化，尸检时子宫萎缩。

2.2动物分组及给药方法

造模后将48只Wistar大鼠按体重分层随机分为RG3高剂量组(简称高剂量组)、RG3中剂量组(简称中剂量组)，RG3低剂量组(简称低剂量组)、阳性对照组、模型空白组、假手术组共6组，每组均8只大鼠，均于术后半月给药。模型组给予生理盐水灌胃，2ml/kg体重，每日一次连续12周，假手术组处理同模型组。RG3高、中、低剂量组分别给予6mg/kg、3mg/kg、1.5mg/kg。每日一次，连续12周。阳性对照组，以尼尔雌醇0.15mg/kg每周灌胃一次，另每周灌蒸馏水6次，2ml/kg，连续12周。在同样环境中自由饮水、摄食12周，控制食量。

药物干预12周月后，各组动物于末次给药后，腹腔注射10％水合氯醛(30ml/kg)麻醉后，俯卧位置于双能X线骨密度诊断仪，用小动物测量软件在高分辨率模式下对大鼠第1-5腰椎和股骨进行扫描，扫描参数为：l.0xl.0mm，60mm/s，12.00cmREV3.9.3/2.1.0，精密度1.5％，准确度90％。

3实验结果

采用SPSS11.0处理，所有数据先行正态性和方差齐性检验。各组大鼠骨密度测定结果的比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验，检验水准α＝0.05，测定结果如表1所示。

表1RG3对去势雌鼠骨密度的影响(x±sn＝8)

注：与模型组比较*：P<0.01，**：P<0.001。

由表1的实验结果可知：模型组与假手术组比较，股骨、腰椎骨及全身的骨密度明显下降(p<0.01)，表明去卵巢雌鼠的骨矿含量明显下降；RG3高、中剂量组与模型组比较，显著提高了去卵巢雌鼠雌鼠相应部位的骨密度(p<0.01，p<0.001)，表明RG3与尼尔雌醇都能明显增加去卵巢大鼠的骨矿含量。

试验例220(R)-人参皂苷Rg3对骨质疏松作用的实验研究

1实验材料

1.1药物与试剂

20(R)-人参皂苷Rg3(含量＞98％)，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：2012303；以中国药品生物制品检定所提供的人参皂苷Rg3标准品对照并进行HPLC标定，含量为98.2％；

阳性对照药：尼尔雌醇片由北京四环制药有限公司生产，国药准字Hl1020123号，lmg/片，10片/盒。

维甲酸片，山东良福制药有限公司生产，国药准字H20083494，10mg/片，20片/盒。

雌二醇(E2)定量测定试剂盒(化学发光法)厦门波生生物技术有限公司。

骨钙素(BGP)检测试剂盒上海谷研实业有限公司。

人降钙素(CT)酶联免疫检测试剂盒上海朗顿生物科技有限公司。

胰岛素样生长因子-受体I/Ⅱ(IGF-I/ⅡR)ELISA试剂盒上海江莱生物科技有限公司。

1.2实验动物

Wistar大鼠，50只，雌雄各半，体重180g～220，3月龄，购自大连医科大学实验动物中心，质量合格证号：SCXK(13)2012-0003。

2实验方法

2.1动物模型制作

大鼠适应性喂养3天，随机挑选10只作为正常对照组，其余40只造模，每只按

75mg/kg.d维甲酸灌喂15d，对照组用同等量的蒸馏水灌胃。

2.2动物分组

选择30只成模鼠随机分为模型组、RG3组、尼尔雌醇治疗对照组，另加正常组，共4组，每组10只。

2.3治疗方法

造模成功并分组后，各组大鼠即开始按lml/100g剂量灌胃治疗，正常组：灌服0.9％生理盐水；模型组：灌服0.9％生理盐水；rg3组：灌服6mg/1kg体重的rg3；上述四组大鼠每日灌胃一次，对照组：灌服尼尔雌醇，使用前用生理盐水配成浓度为0.2mg/m1的混悬液，lml/100g每周一次灌胃，均不限制进食及饮水，周期为8周。

2.4观察指标与指标检测方法

大鼠血清学检查：实验结束后，各组大鼠分别采用摘眼球取血，离心分离血清，放于－20℃冰箱中保存，应用放免测定法，分别测定大鼠血清如下指标：雌二醇(E2)、骨钙素(BGP)、降钙素(CT)、胰岛素样生长因子－I(IGI-I)，以上均严格按试剂盒说明书进行。

3实验结果

3.1RG3对大鼠血清E2的影响

大鼠血清中雌二醇(E2)的测定结果见表2。

表2RG3对大鼠血清E2的影响(x±s)

组别	例数	E2(ng/L)
			正常对照组	10	49.13±3.42
模型对照组	10	4.28±0.89*
			RG3组	10	31.07±3.16*△□
阳性药物对照组	10	23.25±2.84*△

注：与正常组比较*：P<0.01，与模型组比较△：P<0.01，与尼尔雌醇组比较□：P<0.01。

表1的实验结果表明：给药8周后，正常对照组大鼠血清雌二醇含量最高，RG3组给药后可明显升高动物雌二醇含量，与模型组比较，有显著性差异(P<0.01)并明显优于对照组(P<0.01)说明RG3能明显升高实验动物雌二醇含量。

3.2RG3对大鼠血清骨钙素(BGP)的影响的影响

大鼠血清中骨钙素(BGP)的测定结果见表3。

表3RG3对大鼠血清骨钙素(BGP)的影响(x±s)

注：与正常组比较*：P<0.01，与模型组比较△：P<0.01，与尼尔雌醇组比较□：P<0.01。

由表3可见：药物治疗后，大鼠血清骨钙素水平比较，模型对照组与正常对照组比较，有非常显著性差异(P<0.01)，RG3治疗组与模型组及阳性药物(尼尔雌醇)组相比较有显著性差异(P<0.01)。

3.3RG3对大鼠血清降钙素(CT)的影响的影响

大鼠血清中降钙素(CT)的测定结果见表4。

表4RG3对大鼠CT的影响(x±s)

注：与正常组比较*：P<0.01，与模型组比较△：P<0.01，与尼尔雌醇组比较□：P<0.01。

由表4的测定结果可知：两个治疗组及正常对照组血清降钙素高于模型组(P<0.01)，RG3组与阳性药物(尼尔雌醇)组比较效果明显(P<0.01)，本实验表明，RG3能够显著提高骨质疏松大鼠血清降钙素水平。

3.4RG3对大鼠血清IGI-I(胰岛素样生长因子－I)的影响的影响

大鼠血清中IGI-I(胰岛素样生长因子－I)的测定结果见表5。

表5RG3对大鼠IGI-I的影响(x±s)

注：与正常组比较*：P<0.01，与模型组△：P<0.01，□与尼尔雌醇组：P<0.01。

由表5可见：给药8周后，正常对照组大鼠血清IGI-I含量最高，RG3组给药后可明显升高动物IGI-I含量，与模型组比较，有显著性差异(P<0.01)组间比较，RG3组给药第8周后明显优于对照组(P<0.01)，说明RG3能明显升高实验动物IGI-I含量。

Claims (10)

1.20(R)-人参皂苷Rg3在制备用于治疗骨质疏松症的药物或保健品中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征是所述药物由20(R)-人参皂苷Rg3和药学上可接受的载体组成。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征是所述药物以片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、乳剂、注射剂、喷雾剂、气雾剂、凝胶型、霜剂、酊剂、巴布剂、橡胶贴膏剂或贴膏剂形式存在。

4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征是所述的20(R)-人参皂苷Rg3的含量≥1％。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征是所述的20(R)-人参皂苷Rg3的含量为1％～98％。

6.一种治疗骨质疏松症的药物或保健品，其特征是含有20(R)-人参皂苷Rg3。

7.根据权利要求6所述的药物或保健品，其特征是所述20(R)-人参皂苷Rg3的重量与所述药物或保健品的总重量之比为0.01-10：100。

8.根据权利要求6所述的药物或保健品，其特征是所述的20(R)-人参皂苷Rg3的含量为≥1％。

9.根据权利要求8所述的药物或保健品，其特征是所述的20(R)-人参皂苷Rg3的含量为1％～98％。

10.根据权利要求6所述的药物或保健品，其特征是还包括黄芪提取物、丹参提取物、淫羊藿提取物、山茱萸提取物、甘草提取物、黑芝麻提取物、生姜提取物、葡萄子提取物、石榴子提取物、植物精油、熊果苷、维生素C及其衍生物或维生素E及其衍生物中的一种或多种。