CN104643058A - 20(R)-人参皂苷Rg3在制备改善或/和治疗肝硬化疾病的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种20(R)-人参皂苷Rg3在制备改善或/和治疗肝硬化药物中的新应用。试验证明，20(R)-人参皂苷Rg3治疗肝硬化的疗效显著，见效快、毒副作用小、是一种安全、高效、稳定、制备工艺简单的治疗肝硬化药物，适于工业化生产，易于推广。本发明为预防和治疗肝硬化及其并发症提供了一种新的药物来源。

Description

20(R)-人参皂苷Rg3在制备改善或/和治疗肝硬化疾病的药物中的应用

技术领域

本发明涉及一样领域，涉及一种治疗肝硬化的药物或保健食品，特别涉及一种中药人参提取成分在改善或/和治疗肝硬化药物或保健食品中的应用。

背景技术

肝硬化(cirrhosis of liver)是一种常见的由不同病因引起的肝脏慢性、进行性、弥漫性病变，其特点是在肝细胞坏死的基础上纤维化，并代之以纤维包绕的异常肝细胞结节(假小叶)，是严重的的肝脏疾病。临床上以肝功能损害和门脉高压症为主要表现，并有多器官多系统受累，晚期常出现上消化道出血、肝性脑病、继发感染等并发症。肝硬化为临床常见病，据1987年世界卫生组织(WHO)提供的数字，肝硬化人群平均发病率约17.1/10万。据55个国家向WHO提供的数字，每年全世界死于肝硬化的人数超过31万，近几年来已增至50万。在西欧和美国因肝硬化致死人数仅次于恶性肿瘤、心血管病、脑血管病和意外事故，居死亡原因第5位。在美国中年人中肝硬化则居死亡原因第4位。不同国家及同一国家不同地区肝硬化发病率也有较大差异。西方发达国家主要以酒精性肝硬化为主，占所有肝硬化的2/3以上。我国肝硬化发病率占同时期住院病人总数的1％左右，以肝炎病毒感染致肝炎后肝硬化多见。但近年来，酒精性肝硬化发病率明显增加，发病年龄以21～50岁多见，占85％左右，男女比例为4～8：1，中年男性患肝硬化最为突出。据统计，我国城市中50～60岁年龄组男性肝硬化死亡率为112/10万。

肝纤维化是肝脏细胞外基质的病理性蓄积，是其生成与降解失衡的结果，如同时伴有肝小叶结构的破坏(肝再生结节)者，则称为肝硬化。二者密不可分但又有区别：肝纤维化是肝硬化的病理改变基础，肝硬化是肝纤维化形成典型假小叶的结果，前者是病理诊断，后者是临床诊断，若能减少前者的沉积，就能促进后者的逆转。现代医学研究发现，肝组织发生炎症的同时往往伴有程度不等的胶原纤维组织的沉积，因此肝纤维化是许多慢性肝病的共同病理过程，从而抗肝纤维化成为慢性肝病的重要治疗手段。肝硬化是慢性肝炎的不良转归，病程较长，病变较重，目前临床上尚缺乏疗效可靠、毒副作用小的药物。在治疗中，若所用药物有抗肝纤维化的作用，就能不同程度的促进肝硬化的恢复。中医古籍中并无肝硬化之病名，根据其临床表现特点，属于中医学“胁痛”、“积聚”、“臌胀”等病证范畴。本病多由酒食不节，损伤脾胃，脾虚失运，壅阻气机，肝失条达，气血郁滞，或情志抑郁，肝失疏泄，气郁日久，血流不畅，瘀血停积，胁络痹阻所致。其病位在肝脾两脏，主要病机为肝郁脾虚、气滞血瘀。故当以疏肝健脾，行气活血，逐瘀消癥为主要治法。

人参是中药中名贵药材，现代医学研究表明人参的主要功效和作用有：对于神经中枢系统的作用，抗癌抗肿瘤作用，免疫功能调节作用，抗糖尿病的作用，增强肝功能作用，心脑血管障碍改善，抗动脉硬化作用，血压调节作用，以及更年期障碍和抗骨质疏松作用，抗疲劳，抗氧化，抑制衰老等。人参皂苷作为人参的主要有效成分，被广泛研究和使用，其中以20(R)-人参皂苷Rg3最为引人瞩目，其作为人参的主要有效成分，安全性良好，已经被制成抗肿瘤口服制剂应用于临床，作为注射剂被深入研究。

本发明人通过大量的现代科学研究，采用先进的分离纯化技术从人参药材中提取其治疗肝硬化的有效成分20(R)-人参皂苷Rg3，可以为肝硬化患者提供一种高效低毒的药物。

发明内容

本发明的首要目的是针对现有治疗肝硬化疾病治疗中存在的技术问题，提供20(R)-人参皂苷Rg3改善或/和治疗肝硬化疾病的性能和功效，并提供20(R)-人参皂苷Rg3新的药用用途，即在治疗、调理和改善肝硬化的药物或保健食品中的新应用。

为实现上述目的，本发明一方面提供一种20(R)-人参皂苷Rg3在制备改善或/和治疗肝硬化疾病药物或保健品中的应用。

在筛选具有治疗肝硬化作用的天然活性成分的过程中，发明人发现人参的化学成分中20(R)-人参皂苷Rg3具有较强的改善患者肝硬化的症状的作用。

其中，所述药物由20(R)-人参皂苷Rg3和药学上可接受的载体组成。

其中，所述的20(R)-人参皂苷Rg3含量为1％～98％；优选为30～80％，进一步优选为60％。

特别是，所述的20(R)-人参皂苷Rg3含量≥1％，优选为≥30％，进一步优选为≥60％，更进一步优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％。

特别是，药学上可接受的载体通常被保健专家认可用于这一目的且作为药剂的非活性成分。有关药学上可接受的载体的汇编可以在《药物赋形剂手册》(Handbook of Pharmaceutical excipients，第2版，由A.Wade和P.J.Weller编辑；American Pharmaceutical Association出版，Washington and ThePharmaceutical Press,London,1994)等工具书中找到。

尤其是，所述的载体包括赋形剂，如淀粉、水等；润滑剂，如硬脂酸镁等；崩解剂，如微晶纤维素等；填充剂，如乳糖等；粘结剂，如预胶化淀粉、糊精等；甜味剂；抗氧化剂；防腐剂、矫味剂、香料等；

其中，所述药物以片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、乳剂、注射剂、喷雾剂、气雾剂、凝胶型、霜剂、酊剂、巴布剂、橡胶贴膏剂或贴膏剂形式存在。

特别是，所述的20(R)-人参皂苷Rg3含量≥1％，优选为≥30％，进一步优选为≥60％，更进一步优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％。

本发明另一方面提供一种含有20(R)-人参皂苷Rg3的改善或/和治疗肝硬化疾病的药物或保健品。

其中，所述的20(R)-人参皂苷Rg3含量≥1％，优选为1％～98％；优选为30～80％，更进一步优选为60％。

特别是，所述的20(R)-人参皂苷Rg3含量≥1％，优选为≥30％，进一步优选为≥60％，更进一步优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％。

特别是，所述20(R)-人参皂苷Rg3的重量与所述制剂的总重量之比为0.01-10：100，优选为0.1～10：100，进一步优选为1～10：100。

特别是，所述药物或保健品中还包括香附提取物、青皮提取物、炙黄芪提取物、炒白术提取物、白芍提取物、三棱提取物、莪术提取物、地鳖虫提取物、郁金提取物、姜黄提取物、丹参提取物、黑芝麻提取物、生姜提取物、葡萄子提取物、石榴子提取物、植物精油、熊果苷、维生素C及其衍生物或维生素E及其衍生物。

所述药物可以采用本领域公知的方法制成各种剂型，如片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、乳剂、注射剂、喷雾剂、气雾剂、凝胶型、霜剂、酊剂、巴布剂、橡胶贴膏剂或贴膏剂等。

本发明还提供了一种治疗肝硬化疾病的方法，包括向受试者给予治疗有效量的20(R)-人参皂苷Rg3的药物组合物，其治疗有效量为0.06～12mg/kg.d，优选为1～6mg/kg.d，进一步优选为1.5～3mg/kg.d。

除非另外说明，本文所用的术语“治疗有效量”为需要产生有效作用的药物的用量；“治疗有效量”是可以调整和变化的，最终由医务人员确定，其所考虑的因素包括给药途径和制剂的性质、接受者的体重、年龄等一般情况以及所治疗疾病的性质和严重程度。

与现有技术相比，本发明具有如下的明显优点：

1、本发明对已知化合物20(R)-人参皂苷Rg3发掘了新的药用价值，将其用于改善、治疗肝硬化，并可制备成改善或/和治疗肝硬化的药物或保健食品，从而为人参药材的应用开拓了一个新的领域。

2、本发明的系列试验研究证明20(R)-人参皂苷Rg3具有显著的改善、治疗肝硬化的功效，能够显著改善肝硬化患者的生活质量，增强患者体力。

3、本发明的20(R)-人参皂苷Rg3药理作用强，用于改善、调理和治疗肝硬化的功效显著，见效快、毒副作用小、安全性好，能够长期服用，具有良好的药用前景。

4、本发明的产品原料来源丰富、价廉、临床使用安全，制备工艺简单，可制成各种剂型，且服量小，使用方便，因此易于推广。

6、本发明既可采用单一成分的20(R)-人参皂苷Rg3活性成分制备改善和治疗肝硬化的药物，又可采用20(R)-人参皂苷Rg3与其它活性成分(例如与香附、青皮、炙黄芪、炒白术、白芍、三棱、莪术、地鳖虫、郁金、姜黄、丹参、黑芝麻提取物、生姜提取物、葡萄子提取物、石榴子提取物、植物精油、熊果苷、维生素C及其衍生物或维生素E及其衍生物)共同组方，制备治疗失眠症的复方药物。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步描述本发明所述配方的有益效果，这些实施例包括了本发明的20(R)-人参皂苷Rg3的胶囊、片剂、软胶囊剂的药效学试验。这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的配方思路、用途范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

实施例1 Rg3片剂

1、按照如下配比准备原料

将人参皂苷Rg3和淀粉混合均匀后，制成颗粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混合均匀后压制成10000片。

实施例2 Rg3胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

人参皂苷Rg3(含量98％)     200g

淀粉                      1000g

将人参皂苷Rg3和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。。

实施例3 Rg3颗粒剂

1、按照如下配比准备原料

人参皂苷Rg3(含量63％)     10g

淀粉                      1000g

将人参皂苷Rg3和淀粉混合均匀后，制成颗粒，装袋、制成10000袋。

实施例4 Rg3片剂

1、按照如下配比准备原料

将人参皂苷Rg3、甘草提取物、维生素C和淀粉混合均匀后制粒，接着加入滑石粉和硬脂酸镁混匀后压制成10000片。

实施例5 Rg3胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

将人参皂苷Rg3、葡萄籽提取物、维生素C和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例6 Rg3颗粒剂

将人参皂苷Rg3、葡萄籽提取物、维生素C、蔗糖粉混合均匀后制成颗粒，然后装袋，制成10000袋。

实施例7 Rg3口服液

1、按照如下配比准备原料

全方最终加去离子水至100％。

2、取人参皂苷Rg3、何首乌提取物、黑芝麻提取物，用少量乙醇溶解后加入葡萄糖糖浆和去离子水至100％，即得。

试验例1 Rg3对肝硬化大鼠肝功能影响的试验

1实验材料

1.1药物与试剂:

20(R)-人参皂苷Rg3(纯度＞98％)，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20120316；以中国药品生物制品检定所提供的标准品对照并进行HPLC测定，含量符合标定值，含量测定值为98.2％。

实验时，用蒸馏水将之配制成所需浓度的混悬液；

阳性对照药：复方鳖甲软肝片：由内蒙古福瑞制药有限责任公司生产，国药准字(1999)Z-102号(批号:20110312)。实验时用蒸馏水配制成混悬液；

谷丙转氨酶测定试剂盒(批号20110316)；谷草转氨酶测定试剂盒(批号20110313)，均购自南京建成生物工程研究所；

总蛋白测定试剂盒(批号20110510)、白蛋白液体试剂盒(批号201104114)，均购自北京中生生物工程高技术公司。

1.2实验动物:

SD大鼠、60只，雌雄各半,体重180-200g，购自大连医科大学实验动物中心，质量合格证号：SCXK(13)2012-0003。

1.3仪器

FA2004型上皿电子天平上海精科天平仪器厂

LEICA RM2125型切片机德国LEICA公司

721型可见光分光光度计上海第三分析仪器厂

离心机：T-D-L-5A型上海安亭科学仪器厂

电热恒温水箱(HH-W21-600型)天津泰斯特仪器公司

OLYMPUS显微照相仪(VANOX PM-10AD型)日本

恒温振荡器SHA-C哈尔滨东联电子技术公司

2实验方法

2.1大鼠肝硬化模型的复制

实验动物随机抽取大鼠8只，雌雄各半，作为正常对照组，继续予以正常饲养。将其余大鼠用于复制肝硬化动物模型。造模方法为：实验动物正常喂养一周后，采用复合造模法复制肝硬化动物模型：皮下注射40％CCl4花生油溶液，首次注射量为0.5ml/100g，3d后注射量改为0.3ml/100g，每周2次，共注射9周，注射的前2周均以20％猪油、0.5％胆固醇、79.5％玉米面混合饲料喂养大鼠，注射的第3～9周以0.5％胆固醇和99.5％玉米面混合饲料喂养大鼠。整个造模期间以30％乙醇作为饮料让大鼠自由饮用。9周后，随机抽取造模大鼠6只处死，取肝组织标本做快速冷冻组织切片，显示为肝硬化状态时，结束造模，获得肝硬化大鼠。

2.2实验分组

全部造模大鼠随机分为4组：即肝硬化模型组、复方鳖甲软肝片阳性药物对照组、RG3低剂量组、RG3高剂量组，每组8只，雌雄各半，复方鳖甲软肝片对照组、RG3低剂量组、RG3高剂量组合称为治疗组。

2.3实验用药

造模成功后，治疗组灌服阳性对照药、人参皂苷Rg3，每日下午灌药一次，给药体积为1ml/100g体重。用药剂量：阳性药对照组0.13g/100g体重；人参皂苷Rg3低剂量组1.5mg/kg体重；人参皂苷Rg3高剂量组6mg/kg体重。正常对照组和肝硬化模型对照组给予等量0.5％的羧甲基纤维素钠液，每天下午灌药一次。共治疗四周。

2.4样本制备

治疗各组最后一次给药后，全部五组动物禁食不禁水12h后，麻醉状态下腹主动脉取血，立即以3500r/min离心5min，取血清，－20℃冷存待检。

2.5指标检测原理及计算方法

大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活力采用赖氏法测定。因ALT在37℃及PH7.4条件下，作用于丙氨酸及α－酮戊二酸组成的底物，生成丙酮酸及谷氨酸。反应30min后加入2，4－二硝基苯肼盐酸溶液，即中止反应，此时生成丙酮酸苯腙。苯腙在碱性条件下呈红棕色，于505nm比读吸光度则可计算ALT活力；AST作用于天门冬氨酸及α－酮戊二酸组成的底物，生成草酰乙酸及谷氨酸。草酰乙酸再经β－脱羧酶或枸橼酸苯胺作用脱羧后生成丙酮酸。丙酮酸再与2，4－二硝基苯肼作用，产生丙酮酸2，4－二硝基苯腙，在碱性条件下呈红棕色，与同样处理的标准丙酮酸比较，求得丙酮酸含量，然后可换算成AST活力单位。血清总蛋白(Tp)测定采用双缩脲法。在碱性条件下，蛋白质多肽链与铜离子络合形成紫红色化合物。在25℃下保温10分钟，测定样品、标准相对试剂空白管的吸光度A样品，A标准，计算样品中总蛋白浓度：C＝(A样品/A标准)×C标准(g/dl)；血清白蛋白(Alb)浓度测定采用溴甲酚绿法。在酸性环境中，溴甲酚绿在有非离子去垢剂存在时，可与蛋白形成蓝绿色复合物。在20－25℃保温5分钟，测定样品、标准相对试剂空白的吸光度A样品，A标准，计算样品中白蛋白浓度：C＝(A样品/A标准)×C标准(g/dl)。

2.6统计学处理

数据用均数±标准差(x±s)表示，采用SPSS11.0软件进行方差分析和q检验。显著性差异水平以0.05，0.01为标准。

3.实验结果

3.1各组大鼠症状学观察

正常对照组在整个实验期间，毛色光润，体重增加，无异常表现。造模各组大鼠较之正常组体重增长缓慢或体重减轻，皮毛杂乱无光泽，活动及饮水均减少。肝硬化模型制成后，即实验第9周，正常组8只体重全部增加；实验组存活的32只，85％体重减轻。治疗组开始治疗后，摄食增加，体重增加，毛色逐渐光润，活动趋于正常。

3.2各组大鼠肝功能(ALT、AST、Alb、Tp)的变化

大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血清总蛋白(Tp)、血清白蛋白(Alb)的测定结果如表1所示。

表1   Rg3对肝硬化大鼠ALT、AST、Alb、Tp的影响

注：与模型组比较＊P<O.O1；与模型组比较○P<O.01，△P<O.05

测定结果表明：

①各组大鼠血清ALT、AST活性比较：模型对照组均较正常对照组明显升高(P<0.01)；治疗各组血清ALT、AST均低于模型组(P<0.05或P<0.01)；RG3高剂量组和阳性药物对照组与低剂量组比较差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；说明RG3高剂量组和阳性药对照组在降低血清转氨酶方面效果相似。

②各组大鼠血清Tp、Alb含量比较：模型对照组较正常组明显降低(P<0.01)；治疗各组Tp、Alb均高于模型组(P<0.05或P<0.01)；RG3高、低剂量组和阳性药对照组血清Alb、TP含量均有明显上升，与模型对照组比较有显著性差异(P<0.01)。RG3高剂量和阳性药物复方鳖甲软肝片在升高Alb、Tp含量方面疗效相似。

模型组大鼠血清ALT、AST活性较正常组明显升高，TP、Alb含量较正常组明显降低。说明伴随着肝硬化的形成，大鼠出现肝脏损害，蛋白代谢紊乱。给药治疗后，各治疗组血清ALT、AST活性均低于模型组，TP、Alb含量均高于模型组。提示RG3可明显降低肝硬化大鼠血清转氨酶水平，升高蛋白含量，具有促使肝功能恢复正常，调节蛋白代谢的作用。

综上所述，RG3能明显降低肝硬化大鼠血清ALT、AST活性，提高TP、Alb含量，具有减轻肝细胞损伤、改善肝功能的作用。

Claims (10)

1.20(R)-人参皂苷Rg3在制备用于改善或/和治疗肝硬化疾病的药物或保健品中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征是所述药物由20(R)-人参皂苷Rg3和药学上可接受的载体组成。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征是所述药物以片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、乳剂、注射剂、喷雾剂、气雾剂、凝胶型、霜剂、酊剂、巴布剂、橡胶贴膏剂或贴膏剂形式存在。

4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征是所述的20(R)-人参皂苷Rg3的含量≥1％。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征是所述所述的20(R)-人参皂苷Rg3的含量为1％～98％。

6.一种用于改善或/和治疗肝硬化疾病的药物或保健品，其特征是含有20(R)-人参皂苷Rg3。

7.根据权利要求6所述的药物或保健品，其特征是所述20(R)-人参皂苷Rg3的重量与所述药物或保健品的总重量之比为0.01-10：100。

8.根据权利要求6所述的药物或保健品，其特征是所述的20(R)-人参皂苷Rg3的含量为≥1％。

9.根据权利要求8所述的药物或保健品，其特征是所述的20(R)-人参皂苷Rg3的含量为1％～98％。

10.根据权利要求6所述的药物，其特征是还包括香附提取物、青皮提取物、炙黄芪提取物、炒白术提取物、白芍提取物、三棱提取物、莪术提取物、地鳖虫提取物、郁金提取物、姜黄提取物、丹参提取物、黑芝麻提取物、生姜提取物、葡萄子提取物、石榴子提取物、植物精油、熊果苷、维生素C及其衍生物或维生素E及其衍生物。