CN1138557C - 人参及人参茎叶提取物防治骨质疏松症的新用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了人参和人参茎叶对防治骨质疏松的新用途,五加科植物人参(Panax ginseng C.A.Mey)干燥根,包括生晒参和红参的水提液,参须水提液,人参茎叶水提液对实验动物骨质疏松模型有显著的防治作用,人参根总皂甙、人参茎叶总皂甙对实验动物骨质疏松模型也有明显的防治作用,人参皂甙Rb1、人参皂甙Rb2、人参皂甙Rc和人参皂甙Rg,经研究证明也有较好的防治骨质疏松症的作用。本发明对人参及上述提取物用于防治人类骨质疏松症的新用途提出了新的思路。
Description
本发明涉及中药人参及人参茎叶提取物防治骨质疏松症的新用途。
骨质疏松症是老年医学的热门课题,随着世界人口的老化,患骨质疏松症的人群在逐年增多,据统计我国目前65岁以上的老年人已占1.2亿,而患有骨质疏松症的患者在这些人群中约占90%,因此,防治骨质疏松是抗衰老,延长寿命,保证人民的生活质量的一个十分迫切的研究课题。目前国内外对防治骨质疏松症尚未找到理想的新药,传统应用的雌激素、补钙和维生素D联合应用虽有一定的疗效,但仍存在较多的治疗学上的难题,为了解决这一难题,本课题组的成员一直在从天然药物中寻找抗骨质疏松的理想药物,希望能找到一种理想的抗骨质疏松的新药。
通过大量的动物实验研究和筛选,我们发现了中药五加科植物人参(Panax ginseng C.A.Mey)的干燥根以及其干燥根的提取物人参二醇组皂甙;人参茎叶的提取物人参茎叶总皂甙具有明显的防治骨质疏松的作用,为人类解决骨质疏松提供了一个新的途径。
本发明的任务是用科学的工艺把人参及其有效成份的提取物做成制剂,使该制剂用于人类防治骨质疏松症,该制剂既能阻止骨质的丢失,又能促进新骨的形成,为解决骨质疏松的难题提供新的用途。
解决这一任务的途径是这样实现的,选取五加科植物人参(Panax ginseng C.A.Mey)的干燥根,即中药称为人参的药用部份,取两个品种,一为生晒参,一为红参,另选人参的细支根及须根,即中药称为“参须”的药用部份;人参的地上部份人参茎叶按传统的工艺加10倍水,分别水提三次,过滤,浓缩至含药量50%,然后用本研究室建立的小白鼠骨质疏松模型和大白鼠骨质疏松模型进行给药研究,比较观察这四个受试品抗骨质疏松的药效学功能。
结果如下:生晒参、红参、参须和人参茎叶四个品种均有显著的预防实验动物骨质疏松的作用,效果最好的是生晒参和参须,该两药可使骨量显著增加,同时,又可使实验动物的胸腺萎缩受到抑制,提示了其抗骨质疏松具有显著的有利作用,红参和人参茎叶水提部份亦有显著的抗骨质疏松作用,但对胸腺萎缩的影响作用不显著,临床也可用于抗骨质疏松用途,在抗衰老方面可能不及前两个品种。
深入的研究是对人参有效成份的分离,提纯及抗骨质疏松作用的研究,具体如下:
1、从人参中提取人参皂甙
取人参根粗粉,用甲醇为溶剂提取可溶性成份,减压浓缩甲醇提取液,于残渣中加水,水溶液加乙醚提取,去掉脂类成份,水溶液再用正丁醇萃取,萃取后通过减压蒸干,得人参总皂甙(粗品),供实验用。
人参总皂甙按文献(李伯适,等,植物药有效成份的提取与分离,1993;26)的方法,用硅胶柱层析,分别得人参皂甙Ro;人参皂甙Rb1;人参皂甙Rb2;人参皂甙Rc;人参皂甙Rd;人参皂甙Re;人参皂甙Rg1;人参皂甙Rg2等8个成份,供实验应用。
2、从人参茎叶中提取人参茎叶总皂甙
取人参茎叶水煮,提取3次,水提液浓缩后,加醇至70%过滤,去沉淀,水醇液减压回收乙醇,水层再用正丁醇萃取。搅拌分取正丁醇层,使其通过酸性氧化铝柱,流速约10ml/min,流出液减压去正丁醇,即得人参茎叶总皂甙,供实验应用。把人参根总皂甙和人参茎叶总皂甙两种成份,以及人参皂甙Rb1和人参皂甙Rb2、人参皂甙Rg1、人参皂甙Rc四种成份分别采用小白鼠和大白鼠骨质疏松模型进行研究比较,结果如下:
人参根总皂甙(人参皂甙)和人参茎叶总皂甙(人参茎叶皂甙)均有明显的抗骨质疏松作用,人参茎叶皂甙在50mg/kg即有明显的疗效,且随剂量的增加疗效不断提高,在300mg/kg时效果较佳,毒性极小,人参皂甙的作用与人参茎叶皂甙效果相似。
人参皂甙Rb1、人参皂甙Rb2、人参皂甙Rg1和人参皂甙Rc四种成份对骨质疏松也有一定的防治作用,但其结果尚不及总皂甙,这可能与实验所用的剂量有一定的关系,对此四种成份的抗骨质疏松作用正在作深入的探讨,但初步的研究已肯定其抗骨质疏松的药理活性,这可能与这些成份均有增加大鼠骨髓细胞DNA和蛋白质的合成有关。
实施例:
为观察人参茎叶皂甙对骨质疏松的防治作用,进行了下述实验:
实验方法:
(一)动物分组:动物根据随机原则,先编号,然后随机分为5组,每组8只,各组的处理及用药如下:
1、假手术对照组:该组与其他各组一样,先麻醉并行假卵巢切除手术,即手术中找到双侧卵巢,轻轻取出观察,然后又放回腹腔,不切除,缝合好伤口即可。
2、去卵巢模型组:大鼠用戊巴比妥钠麻醉后,取侧卧位,剪去双侧腹部手术部位的毛,用碘酒,酒精局部消毒皮肤。分别自离肋下1.5cm与离腰椎1.0cm相交处做纵行切口约1cm,切开皮肤,分离皮下组织,切开肌层,即可见位于两侧肾脏外下方呈菜花样淡粉红色的卵巢,然后轻轻镊起卵巢,结扎后切除之,缝合皮肤,即可。另侧以同样方法做卵巢去除术。
3、去卵巢并服用雌激素组:与三组同法行去卵巢术后,每天灌胃给予雌激素——17-α炔雌醇(100μg/kg),共10周。因为雌激素可以防止骨组织因去卵巢而出现的迅速丢失,本研究以本药作为标准阳性药物,用以检验本研究的可靠性并与后面的人参茎叶皂甙防治组进行比较。
5、去卵巢加人参茎叶皂甙防治组:本组为本研究的主要目标,着重观察人参茎叶皂甙能否防治去卵巢大鼠的骨质疏松症。并与雌激素进行比较,观察两药效果是否一致,或何种更强?以探讨用人参茎叶皂甙来代替激素防治去卵巢所致的骨质疏松作用。人参茎叶皂甙按300mg/kg每天灌胃给药一次,共10周。
6、去卵巢加人参茎叶皂甙低剂量防治组:观察低剂量的人参茎叶皂甙能否防治去卵巢大鼠的骨质疏松症。并与实验组进行比较,观察药物的量效关系。人参茎叶皂甙按100mg/kg每天灌胃给药一次,共10周。
(二)给药方法及骨标本制备:
各组动物均在同等条件下饲养和给药,假手术组和去卵巢模型组每天灌胃给予生理盐水5ml/kg,雌激素阳性药物治疗组用17-α炔雌醇,按100μg/kg灌胃给药,每天灌胃给药一次,人参茎叶皂甙治疗组按300mg/kg每天灌胃给药一次,人参茎叶皂甙低剂量组按100mg/kg每天灌胃给药一次,共10周。所有动物均在室温26±2℃,通风良好,湿度60%-70%的条件下饲养,自由摄食和摄水。每周称体重一次,根据体重每周调整给药量,全部大鼠在处死前10天皮下注射盐酸四环素25mg/kg,在处死前2天于其背部皮下注射钙黄绿素5mg/kg。
实验结束时,用2%戊巴比妥钠(50mg/kg)麻醉,打开胸腔,暴露心脏,用注射器穿刺右心室取血,尽量吸尽血液(目的使骨髓腔与骨松质形态清晰),其吸出的血液可作生化检验,分离胫骨(或股骨,椎骨等,根据实验取材而定),去除肌肉,用低速锯在胫骨上段髁间隆起前方行额状面锯开,暴露骨髓腔,然后将其分为三段:上段为胫骨近端(proximal tibea metapha),主要观察骨松质;中段为胫骨中部,(tibial shaft)主要观察骨皮质,下段为胫骨远端(distaltibea),用于观察成年骨部位以及黄骨髓部位(adult bone site andyellow bone),将三段骨样本迅速取上置于10%磷酸盐缓冲液配制的福尔马林中固定48小时,再径70%乙醇脱水后,用特殊骨染料染色5天。以后从50%乙醇开始逐级脱水及丙酮脱脂,最后用甲基丙烯酸甲酯包埋不脱钙骨,包埋块干后用低速锯锯成300mm骨片,经磨成20mm的薄片再次梯度脱水,透明封片。(骨片也可采用硬组织切片机切成5μm薄片进行测量)。
结果
用骨组织计量学方法测量各组动物胫骨上段骨骨组织形态学参数比较见表1。表1 人参茎叶皂甙对大鼠胫骨上段骨组织形态学静态参数的影响
(X±SD)
骨小梁面积 骨小梁厚度 骨小梁密度 骨小梁间隙组别 %Tb.Ar Tb.Th(μm) Tb.N.(#/mm) Tb.Sp(μm)A.假手术组对照 22.71±6.51 55.10±4.32 4.18±1.41 215±115B.去卵巢对照组 5.47±1.49 52.5±5.21 1.04±0.26 959±238变化率A(%) -76*** -5 -75*** 346***C..雌激素组 14.35±5.23 51.93±5.27 2.75±0.98 342±118变化率A(%) -37* -6 -34* 156***变化率B(%) 162*** -1 164*** -64***D.人参茎叶皂甙实验组 8.52±1.53 54.68±5.93 1.57±0.28 604±135变化率B(%) 56*** 4 51*** -37***变化率C(%) -41* 5 -43*** 76***E.人参茎叶皂甙低量组 6.75±3.14 58.13±8.36 1.19±0.53 1082±915变化率B(%) 23 11 14 13
注:变化率A是与对照组比较;变化率A=待比较组/A组-1×100%;变化率B是与去卵巢对照组B组比较,变化率B=待比较组/B组-1%×100%,余同。
从表1可见:去卵巢对照组与假手术对照组相比,去卵巢对照组对大鼠胫骨近端骨组织形态结构影响具有下述特点:骨量显著减少,表现为骨小梁面积百分率(Percent Trabecular Area,Tb.Ar)减少76%,骨小梁数目(Trabecular Number,Tb.N)减少75%,骨小梁间隙(Trabecular Separation,Tb.Sp)增加346%。说明了去卵巢后大鼠出现了明显的骨质疏松症。人参茎叶皂甙实验组与去卵巢对照组相比,骨量明显增加:骨小梁面积百分率增加56%,骨小梁数目增加51%,骨小梁间隙减小37%;说明了人参茎叶皂甙有防治大鼠骨质疏松的形成。
根据以上实验结果,我们采用人参皂甙、人参茎叶皂甙按传统的制剂工艺,制成用于抗骨质疏松症的新制剂,如片剂、冲剂、胶囊剂、注射剂或口服液,用于临床骨质疏松的防治,取得较好的临床效果,人参皂甙和人参茎叶皂甙也可与其他成份组成复方,用于防治骨质疏松症。
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1、人参根总皂甙和人参茎叶皂甙在制备用于防治骨质疏松症的制剂中的应用。
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