JP2016065019A - インテグリン発現促進剤 - Google Patents
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Abstract
【課題】インテグリン発現促進作用及びコラーゲンゲル収縮促進作用を有し、インテグリンの発現促進やコラーゲンゲルの収縮促進、更には皮膚弾力性改善、皮膚のタルミ予防又は改善、皮膚引き締め、或いは皮膚老化予防又は改善のために使用される新たな素材及び製剤の提供。
【解決手段】ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、ホウレンソウ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とするインテグリン発現促進剤、コラーゲンゲル収縮促進剤。
【選択図】なし
【解決手段】ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、ホウレンソウ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とするインテグリン発現促進剤、コラーゲンゲル収縮促進剤。
【選択図】なし
Description
本発明は、インテグリン発現促進やコラーゲンゲル収縮促進のために使用される新たな素材及び製剤に関する。
真皮に存在する線維芽細胞は、細胞接着因子であるインテグリン複合体を介してコラーゲン線維と結合している。線維芽細胞とコラーゲン線維の接着は、線維芽細胞の生存や増殖、生理機能の発現に重要であり、さらに線維芽細胞がコラーゲン線維を牽引し、組織の構造を維持するためにも必須であることが知られている。
例えば、老化してハリが失われたような皮膚では、線維芽細胞のインテグリン複合体の発現量が減少することが報告されている（非特許文献1）。これらのことから、線維芽細胞においてインテグリン複合体の発現を促進する素材は、皮膚の老化を改善するために有用であると考えられている。
例えば、老化してハリが失われたような皮膚では、線維芽細胞のインテグリン複合体の発現量が減少することが報告されている（非特許文献1）。これらのことから、線維芽細胞においてインテグリン複合体の発現を促進する素材は、皮膚の老化を改善するために有用であると考えられている。
インテグリン複合体は、α鎖とβ鎖の２つのサブユニットから成るヘテロダイマーである。現在までに、α鎖は１８種類、β鎖は８種類が同定され、αβ複合体としては２４種類が確認されている（非特許文献２）。中でも真皮線維芽細胞が発現しているコラーゲンの受容体としてはα１β１、α２β１が知られている（非特許文献３）。インテグリンβ１は、これら２つの重要な複合体に共通したサブユニットであり、インテグリンβ１単独の中和抗体によってたるみ改善の指標であるコラーゲンゲル収縮が著しく阻害されることから（非特許文献４）、インテグリンβ１の発現促進は、皮膚の老化改善に特に有用であると考えられる。
一方、ウリ科の野菜であるナガレイシは、古くから薬用植物としても知られ、血圧安定作用、健胃作用、利尿作用、整腸作用等の効果があるとされている。また、ミツガシワ科の植物であるミツガシワには、テストステロン−５−α−レダクターゼ阻害作用や育毛作用があること（特許文献１）、ウコギ科の植物であるヒメウコギは、薬理効果の詳細については不明だが、漢方で滋養強壮、鎮痛作用があるとして、腹痛、疲労回復、冷え症などに用いられている。アケビ科の植物であるミツバアケビには消炎作用や排膿および通経作用があり、腎炎に用いられること、緑色野菜であるホウレンソウには、ヒスタミン遊離抑制作用があること（特許文献２）が報告されている。また、キクラゲ科のキノコであるキクラゲには脂肪蓄積抑制作用があること（特許文献３）が報告されている。また、ミツバチが採取した花粉であるビーポーレン（Ｂｅｅ Ｐｏｌｌｅｎ）は、各種のたんぱく質、ビタミン類、アミノ酸類、ミネラル類等の栄養素を豊富に含み、従来から健康食品等に使用されている。
しかしながら、ナガレイシ、ミツガシワ、ヒメウコギ、ミツバアケビ、ホウレンソウ、キクラゲ及びビーポーレンに、インテグリンβ１の産生促進作用やコラーゲンゲル収縮促進作用があることはこれまでに知られていない。
しかしながら、ナガレイシ、ミツガシワ、ヒメウコギ、ミツバアケビ、ホウレンソウ、キクラゲ及びビーポーレンに、インテグリンβ１の産生促進作用やコラーゲンゲル収縮促進作用があることはこれまでに知られていない。
Biol Sci Med Sci. 2010, 65. 209-18
Cold Spring Harb Perspect Biol. 2011, 1. 1-14
J Cell Biol. 1991. 115. 1427-36
J Dermatol Sci. 2006. 45. 45-53
本発明は、インテグリン発現促進やコラーゲンゲル収縮促進、更には皮膚弾力性改善、皮膚のタルミ予防又は改善、皮膚引き締め、或いは皮膚老化予防又は改善のために使用される新たな素材及び製剤を提供することに関する。
本発明者らは、安全性の高い天然物の中から、ナガレイシ、ミツガシワ、ヒメウコギ、ミツバアケビ、ホウレンソウ、キクラゲ及びビーポーレンの各抽出物がインテグリンβ１の産生を促進すること、及びヒト皮膚線維芽細胞コラーゲン埋包培養系において優れたコラーゲンゲル収縮促進作用を有することを見出し、これが皮膚の弾力性改善、皮膚のタルミやハリの改善、皮膚引き締め、皮膚老化の予防又は改善のために有用であることを見出した。
すなわち、本発明は以下の１）〜７）に係るものである。
１）ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、ホウレンソウ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とするインテグリン発現促進剤。
２）ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、ホウレンソウ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とするコラーゲンゲル収縮促進剤。
３）ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とする皮膚弾力性改善剤。
４）ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とする皮膚のタルミ予防又は改善剤。
５）ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とする皮膚引き締め剤。
６）ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物及びキクラゲ抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とする皮膚老化予防又は改善剤。
１）ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、ホウレンソウ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とするインテグリン発現促進剤。
２）ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、ホウレンソウ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とするコラーゲンゲル収縮促進剤。
３）ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とする皮膚弾力性改善剤。
４）ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とする皮膚のタルミ予防又は改善剤。
５）ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とする皮膚引き締め剤。
６）ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物及びキクラゲ抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とする皮膚老化予防又は改善剤。
本発明のインテグリン産生促進剤、コラーゲンゲル収縮促進剤、皮膚弾力性改善剤、皮膚のタルミ予防又は改善剤、皮膚引き締め剤、皮膚老化予防又は改善剤は、例えば皮膚に適用することにより、皮膚弾力性を向上し、タルミの抑制又は回復、ハリの維持又は回復、皮膚引き締め等の効果を発揮する。
本発明の「ナガレイシ」は、ウリ科ツルレイシ属のＭｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａを意味し、Ｂａｌｓａｍ Ｐｅａｒとも称される。
本発明の「ミツガシワ」は、ミツガシワ科ミツガシワ属のＭａｎｙａｎｔｈｅｓ ｔｒｉｆｏｌｉａｔｅを意味し、「ミズガシワ」とも称される。
本発明の「ヒメウコギ」は、ウコギ科ウコギ属のＡｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ ｓｉｅｂｏｌｄｉａｎｕｓを意味し、Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ Ｈｅｒｂとも称される。
本発明の「ミツバアケビ」は、アケビ科アケビ属のＡｋｅｂｉａ ｔｒｉｆｏｌｉａｔａを意味し、Ａｋｅｂｉａ Ｓｔｅｍとも称される。
本発明の「ホウレンソウ」は、アカザ科ホウレンソウ属のＳｐｉｎａｃｅａ ｏｌｅｒａｃｅａを意味し、Ｓｐｉｎａｃｈ Ｌｅａｆとも称される。
本発明の「キクラゲ」は、キクラゲ科キクラゲ属のキノコであるＡｕｒｉｃｕｌａｒｉａ ａｕｒｉｃｕｌａ−ｊｕｄａｅを意味し、Ｗｏｏｄ Ｅａｒ Ｆｕｎｇｕｓとも称される。
本発明の「ビーポーレン」（Ｂｅｅ Ｐｏｌｌｅｎ）は、ミツバチが採取した花粉を意味するが、花粉が由来する植物の種類等は特に限定されない。
本発明の「ミツガシワ」は、ミツガシワ科ミツガシワ属のＭａｎｙａｎｔｈｅｓ ｔｒｉｆｏｌｉａｔｅを意味し、「ミズガシワ」とも称される。
本発明の「ヒメウコギ」は、ウコギ科ウコギ属のＡｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ ｓｉｅｂｏｌｄｉａｎｕｓを意味し、Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ Ｈｅｒｂとも称される。
本発明の「ミツバアケビ」は、アケビ科アケビ属のＡｋｅｂｉａ ｔｒｉｆｏｌｉａｔａを意味し、Ａｋｅｂｉａ Ｓｔｅｍとも称される。
本発明の「ホウレンソウ」は、アカザ科ホウレンソウ属のＳｐｉｎａｃｅａ ｏｌｅｒａｃｅａを意味し、Ｓｐｉｎａｃｈ Ｌｅａｆとも称される。
本発明の「キクラゲ」は、キクラゲ科キクラゲ属のキノコであるＡｕｒｉｃｕｌａｒｉａ ａｕｒｉｃｕｌａ−ｊｕｄａｅを意味し、Ｗｏｏｄ Ｅａｒ Ｆｕｎｇｕｓとも称される。
本発明の「ビーポーレン」（Ｂｅｅ Ｐｏｌｌｅｎ）は、ミツバチが採取した花粉を意味するが、花粉が由来する植物の種類等は特に限定されない。
本発明のナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、ホウレンソウ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物（以下、「本発明の抽出物」とも称する）において、ナガレイシ、ミツガシワ、ヒメウコギ、ミツバアケビ、ホウレンソウは、全草、葉、茎、芽、花、蕾、根、根茎、種子等、又はこれらを組み合わせて使用することが可能であるが、ナガレイシについては全草を、ミツガシワについては葉を、ヒメウコギについては全草を、ミツバアケビについては全草を、ホウレンソウについては全草を、夫々そのまま又は粉砕して用いるのが好ましい。
また、キクラゲは、その子実体をそのまま又は粉砕して用いるのが好ましい。
また、ビーポーレンは、採取した花粉をそのまま利用することもできるが、適宜乾燥処理、粉砕処理等を施したものを用いてもよい。
斯かるナガレイシ、ミツガシワ、ヒメウコギ、ミツバアケビ、ホウレンソウ、キクラゲ及びビーポーレンの各抽出物は、これらを常温又は加温下にて抽出するか又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて抽出すること等、公知の抽出方法により得られる各種溶媒抽出液、その希釈液、その濃縮液又はその乾燥末が挙げられる。
公知の抽出方法としては、例えば、浸漬、煎出、浸出、還流抽出、超臨界抽出、超音波抽出及びマイクロ波抽出等が挙げられる。
また、キクラゲは、その子実体をそのまま又は粉砕して用いるのが好ましい。
また、ビーポーレンは、採取した花粉をそのまま利用することもできるが、適宜乾燥処理、粉砕処理等を施したものを用いてもよい。
斯かるナガレイシ、ミツガシワ、ヒメウコギ、ミツバアケビ、ホウレンソウ、キクラゲ及びビーポーレンの各抽出物は、これらを常温又は加温下にて抽出するか又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて抽出すること等、公知の抽出方法により得られる各種溶媒抽出液、その希釈液、その濃縮液又はその乾燥末が挙げられる。
公知の抽出方法としては、例えば、浸漬、煎出、浸出、還流抽出、超臨界抽出、超音波抽出及びマイクロ波抽出等が挙げられる。
当該抽出物を得るために用いられる抽出溶剤としては、極性溶剤、非極性溶剤のいずれをも使用することができる。例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ピリジン類等が挙げられ、これらは単独又は混合物として用いることができる。このうち、水、アルコール系（アルコール類及び／又は多価アルコール類）溶剤、及び水−アルコール系混合溶剤を用いるのが好ましく、水−アルコール系混合溶剤が好ましい。さらに、アルコール類としてはメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールがより好ましく、エタノールがさらに好ましい。また、多価アルコール類としてはブチレングリコールがより好ましい。
より好適な水−アルコール系混合溶剤としては、２０％（ｖ／ｖ）以上、好ましくは５０％（ｖ／ｖ）以上、そして９５％（ｖ／ｖ）以下、９０％（ｖ／ｖ）以下のエタノール水溶液が挙げられる。例えば、２０〜９５％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、好ましくは５０〜９５％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液が挙げられる。
より好適な水−アルコール系混合溶剤としては、２０％（ｖ／ｖ）以上、好ましくは５０％（ｖ／ｖ）以上、そして９５％（ｖ／ｖ）以下、９０％（ｖ／ｖ）以下のエタノール水溶液が挙げられる。例えば、２０〜９５％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液、好ましくは５０〜９５％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液が挙げられる。
本発明の抽出物は、例えば、ナガレイシ、ミツガシワ、ヒメウコギ、ミツバアケビ、ホウレンソウ、キクラゲ又はビーポーレン（「植物体等」と云う）１質量部に対して１〜５０質量部の抽出溶剤を用い、４〜１００℃にて０．５時間〜３０日間抽出することにより行うことができる。より具体的には、抽出溶剤として水を用いる場合には、植物体等の１質量部に対して５〜３０質量部、４０〜１００℃にて１時間〜１日間が好ましい。また、抽出溶剤として水−エタノール混合溶剤を用いる場合には、植物体等の１質量部に対して５〜３０質量部、室温〜還流下で１時間〜２０日間が好ましい。また、これらの作業を繰り返し行っても良い。
上記の抽出物は、そのまま用いることもできるが、当該抽出物を希釈、濃縮若しくは凍結乾燥した後、粉末又はペースト状に調製して用いることもできる。また、前記抽出処理物の他、市販品を用いても良い。
また、上記抽出物は、さらに液々分配、固液分配、濾過膜、活性炭、吸着樹脂、イオン交換樹脂等の公知の技術によって不活性な夾雑物を除去して用いることが好ましい。このとき用いる溶剤は、上記の抽出溶剤の例示のものを用いてもよい。また、これらは、必要により公知の方法により脱臭、脱色等の処理を施してから用いてもよい。また、抽出物をさらに精製する際には、当該公知の技術及び方法を用いてもよい。
後記実施例で示すとおり、ナガレイシ、ミツガシワ、ヒメウコギ、ミツバアケビ、ホウレンソウ、キクラゲ及びビーポーレンの各抽出物は、インテグリンβ1の発現を促進し、及びヒト皮膚線維芽細胞を埋包したコラーゲンゲルの収縮を促進する作用を有する。
前述したとおり、老化してハリが失われたような皮膚では、線維芽細胞のインテグリン複合体の発現量が減少し（前記非特許文献１）、また、インテグリンβ１の中和抗体によってたるみ改善の指標であるコラーゲンゲル収縮が著しく阻害される（前記非特許文献４）ことから、インテグリンの発現促進は、皮膚のタルミの発生等の皮膚老化の改善に有効である。また、線維芽細胞を埋包したコラーゲンゲルの収縮能を高めることができれば、真皮結合組織を収縮させ、引き締め、強度を増加させることができる。
したがって、本発明の抽出物は、真皮結合組織をより収縮させ、引き締め、強度を増加させることができ、老化等により低下した皮膚の弾力性を向上させ、皮膚のタルミの抑制や回復、ハリの維持又は回復、皮膚引き締めに有効であり、皮膚の老化予防又は改善に有効であると云える。
前述したとおり、老化してハリが失われたような皮膚では、線維芽細胞のインテグリン複合体の発現量が減少し（前記非特許文献１）、また、インテグリンβ１の中和抗体によってたるみ改善の指標であるコラーゲンゲル収縮が著しく阻害される（前記非特許文献４）ことから、インテグリンの発現促進は、皮膚のタルミの発生等の皮膚老化の改善に有効である。また、線維芽細胞を埋包したコラーゲンゲルの収縮能を高めることができれば、真皮結合組織を収縮させ、引き締め、強度を増加させることができる。
したがって、本発明の抽出物は、真皮結合組織をより収縮させ、引き締め、強度を増加させることができ、老化等により低下した皮膚の弾力性を向上させ、皮膚のタルミの抑制や回復、ハリの維持又は回復、皮膚引き締めに有効であり、皮膚の老化予防又は改善に有効であると云える。
よって、本発明の抽出物は、インテグリン発現促進剤、コラーゲンゲル収縮促進剤、皮膚弾力性改善剤、皮膚のタルミの予防又は改善剤、皮膚引き締め剤、或いは皮膚老化予防又は改善剤（「インテグリン発現促進剤等」と称する）となり得、また、インテグリン発現促進剤等を製造するために使用することができる。すなわち、本発明のインテグリン発現促進剤等は、皮膚の弾力性やハリが低下し、タルミが気になるヒトに適用して、皮膚弾力性改善、皮膚のタルミの予防又は改善、皮膚引き締め、或いは皮膚老化の予防又は改善のために使用することができる。
ここで、ヒトに対する使用は、治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。「非治療的」とは、医療行為を含まない概念、すなわち人間を手術、治療又は診断する方法を含まない概念、より具体的には医師又は医師の指示を受けた者が人間に対して手術、治療又は診断を実施する方法を含まない概念である。
ここで、ヒトに対する使用は、治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。「非治療的」とは、医療行為を含まない概念、すなわち人間を手術、治療又は診断する方法を含まない概念、より具体的には医師又は医師の指示を受けた者が人間に対して手術、治療又は診断を実施する方法を含まない概念である。
当該インテグリン発現促進剤等は、それ自体、皮膚の弾力性改善、皮膚のタルミの予防又は改善、皮膚引き締め、或いは皮膚老化予防又は改善のための、化粧品、医薬品部外品、医薬品であってもよく、又は当該化粧品、医薬部外品、医薬品等に配合して使用される素材又は製剤であってもよい。
本明細書において、「インテグリン」とは、細胞表面に発現し、細胞接着に関与する受容体である。本発明においてインテグリンは、ヒト皮膚細胞に発現するものであればよいが、特にヒト皮膚線維芽細胞に発現するものであることが好ましい。インテグリンは、α鎖とβ鎖の２つのサブユニットから成るヘテロダイマーであり、現在までに、α鎖は１８種類、β鎖は８種類が同定され、αβ複合体としては２４種類が確認されている（前記非特許文献２）。本発明においては、これらのうちβ１サブユニットの発現が促進されるのが好ましく、さらにα２サブユニット、α１サブユニットの発現が促進されることがより望ましい。
本明細書において、「コラーゲンゲル」とは、コラーゲンと生体の真皮における線維芽細胞、或いは更にその周辺の細胞外マトリックスとを含むゲル状の構造物を意味し、「コラーゲンゲル収縮」とは、当該コラーゲンゲルの体積が小さくなることを意味する。
また、「皮膚弾力性改善」には、皮膚の弾性の向上や加齢等による皮膚の弾性低下の抑制が包含され、「皮膚のタルミ予防又は改善」には、皮膚の弾性低下に伴って生じる皮膚のタルミの抑制や回復、ハリの回復や維持が包含される。
「皮膚老化」とは、加齢に伴う生理的老化と日光暴露（紫外線）による光老化の何れか或いは両方を包含し、主として皮膚にハリが無くなり皮膚のシワやタルミが生じることを意味する。
また、「皮膚弾力性改善」には、皮膚の弾性の向上や加齢等による皮膚の弾性低下の抑制が包含され、「皮膚のタルミ予防又は改善」には、皮膚の弾性低下に伴って生じる皮膚のタルミの抑制や回復、ハリの回復や維持が包含される。
「皮膚老化」とは、加齢に伴う生理的老化と日光暴露（紫外線）による光老化の何れか或いは両方を包含し、主として皮膚にハリが無くなり皮膚のシワやタルミが生じることを意味する。
本発明の抽出物を含有する化粧品、医薬部外品又は医薬品は、好適には皮膚外用剤の形態で、具体的には、軟膏、乳化化粧料、クリーム、乳液、ローション、ジェル、エアゾール等の種々の形態で用いることができる。
斯かる製剤は、それぞれ一般的な製造法により、直接又は製剤上許容し得る担体、例えば、各種油剤、界面活性剤、ゲル化剤、防腐剤、酸化防止剤、溶剤、アルコール、水、キレート剤、増粘剤、紫外線吸収剤、乳化安定剤、ｐＨ調整剤、色素、香料等とともに混合、分散した後、所望の形態に加工することによって得ることができる。また、これらの化粧品、医薬部外品又は医薬品等には、それぞれの製剤に応じて、適宜、植物抽出物、殺菌剤、保湿剤、抗炎症剤、抗菌剤、清涼剤、抗脂漏剤等を本発明の効果を妨害しない範囲で適宜配合することができる。
斯かる製剤は、それぞれ一般的な製造法により、直接又は製剤上許容し得る担体、例えば、各種油剤、界面活性剤、ゲル化剤、防腐剤、酸化防止剤、溶剤、アルコール、水、キレート剤、増粘剤、紫外線吸収剤、乳化安定剤、ｐＨ調整剤、色素、香料等とともに混合、分散した後、所望の形態に加工することによって得ることができる。また、これらの化粧品、医薬部外品又は医薬品等には、それぞれの製剤に応じて、適宜、植物抽出物、殺菌剤、保湿剤、抗炎症剤、抗菌剤、清涼剤、抗脂漏剤等を本発明の効果を妨害しない範囲で適宜配合することができる。
当該化粧品、医薬部外品又は医薬品中の本発明の抽出物の含有量は、一般的に固形分濃度として０．００００１質量％、好ましくは０．００１質量％以上であり、そして１０質量％以下、好ましくは１質量％以下である。また、０．００００１〜１０質量％とするのが好ましく、０．００１〜１質量％とするのがより好ましい。
上記化粧品、医薬部外品又は医薬品の投与量は、効果が得られる量であれば特に限定されず、対象者の状態、体重、性別、年齢又はその他の要因に従って変動し得るが、成人（６０ｋｇ）１人当たり１日、各抽出物（乾燥物換算）として、例えば、好ましくは０．５ｍｇ以上であり、そして１０００ｍｇ以下、好ましくは５００ｍｇ以下である。また、０．５〜１０００ｍｇとするのが好ましく、更に０．５〜５００ｍｇとするのが好ましい。また、当該製剤は、任意の摂取・投与計画に従って摂取・投与され得るが、１日１回〜数回に分け、数週間〜数カ月間継続して投与することが好ましい。このうち、１日３回に分け、６週間以上継続して投与することがより好ましい。
また、上記化粧品、医薬品又は医薬部外品の適用対象者としては、それを必要としていれば特に限定されないが、皮膚の弾力性改善、皮膚のタルミやハリの予防又は改善、或いは皮膚引き締めを望むヒトが好ましい。
また、上記化粧品、医薬品又は医薬部外品の適用対象者としては、それを必要としていれば特に限定されないが、皮膚の弾力性改善、皮膚のタルミやハリの予防又は改善、或いは皮膚引き締めを望むヒトが好ましい。
上述した実施形態に関し、本発明においては以下の態様が開示される。
＜１＞ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、ホウレンソウ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とするインテグリン発現促進剤。
＜２＞ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、ホウレンソウ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とするコラーゲンゲル収縮促進剤。
＜３＞ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とする皮膚弾力性改善剤。
＜４＞ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とする皮膚のタルミ予防又は改善剤。
＜５＞ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とする皮膚引き締め剤。
＜６＞ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物及びキクラゲ抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とする皮膚老化予防又は改善剤。
＜７＞インテグリン発現促進剤を製造するための、ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、ホウレンソウ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上の使用。
＜８＞コラーゲンゲル収縮促進剤を製造するための、ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、ホウレンソウ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上の使用。
＜９＞皮膚弾力性改善剤を製造するための、ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上の使用。
＜１０＞皮膚のタルミ予防又は改善剤を製造するための、ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上の使用。
＜１１＞皮膚引き締め剤を製造するための、ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上の使用。
＜１２＞皮膚老化予防又は改善剤を製造するための、ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物及びキクラゲ抽出物から選ばれる１種以上の使用。
＜１３＞インテグリン発現促進に使用するためのナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、ホウレンソウ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上。
＜１４＞コラーゲンゲル収縮促進に使用するためのナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、ホウレンソウ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上。
＜１５＞皮膚弾力性改善に使用するためのナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上。
＜１６＞皮膚のタルミ予防又は改善に使用するためのナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上。
＜１７＞皮膚引き締めに使用するためのナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上。
＜１８＞皮膚老化予防又は改善に使用するためのナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物及びキクラゲ抽出物から選ばれる１種以上。
＜１９＞ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を、それらを必要とする対象に有効量で投与又は摂取する皮膚弾力性改善方法。
＜２０＞ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を、それらを必要とする対象に有効量で投与又は摂取する皮膚のタルミ予防又は改善方法。
＜２１＞ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を、それらを必要とする対象に有効量で投与又は摂取する皮膚引き締め方法。
＜２２＞ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物及びキクラゲ抽出物から選ばれる１種以上を、それらを必要とする対象に有効量で投与又は摂取する皮膚老化予防又は改善方法。
＜２３＞＜１３＞〜＜２２＞において、使用又は方法は非治療的な使用又は非治療的な方法である。
＜２４＞＜１＞、＜７＞、＜１３＞において、インテグリンはインテグリンβ１である。
＜２５＞前記＜１＞〜＜２２＞において、抽出物を得るための抽出溶剤が、水、アルコール系（アルコール類及び／又は多価アルコール類）溶剤、又は水−アルコール系混合溶剤である。ここで、アルコール類としてはメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールがより好ましく、エタノールがさらに好ましい。
＜２６＞前記＜１＞〜＜２２＞において、抽出物を得るための抽出溶剤が、水−アルコール系混合溶剤であり、更に好適には、２０％（ｖ／ｖ）以上９５％（ｖ／ｖ）以下のエタノール水溶液、５０％（ｖ／ｖ）以上９５％（ｖ／ｖ）以下のエタノール水溶液である。
＜１＞ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、ホウレンソウ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とするインテグリン発現促進剤。
＜２＞ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、ホウレンソウ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とするコラーゲンゲル収縮促進剤。
＜３＞ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とする皮膚弾力性改善剤。
＜４＞ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とする皮膚のタルミ予防又は改善剤。
＜５＞ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とする皮膚引き締め剤。
＜６＞ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物及びキクラゲ抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とする皮膚老化予防又は改善剤。
＜７＞インテグリン発現促進剤を製造するための、ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、ホウレンソウ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上の使用。
＜８＞コラーゲンゲル収縮促進剤を製造するための、ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、ホウレンソウ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上の使用。
＜９＞皮膚弾力性改善剤を製造するための、ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上の使用。
＜１０＞皮膚のタルミ予防又は改善剤を製造するための、ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上の使用。
＜１１＞皮膚引き締め剤を製造するための、ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上の使用。
＜１２＞皮膚老化予防又は改善剤を製造するための、ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物及びキクラゲ抽出物から選ばれる１種以上の使用。
＜１３＞インテグリン発現促進に使用するためのナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、ホウレンソウ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上。
＜１４＞コラーゲンゲル収縮促進に使用するためのナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、ホウレンソウ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上。
＜１５＞皮膚弾力性改善に使用するためのナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上。
＜１６＞皮膚のタルミ予防又は改善に使用するためのナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上。
＜１７＞皮膚引き締めに使用するためのナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上。
＜１８＞皮膚老化予防又は改善に使用するためのナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物及びキクラゲ抽出物から選ばれる１種以上。
＜１９＞ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を、それらを必要とする対象に有効量で投与又は摂取する皮膚弾力性改善方法。
＜２０＞ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を、それらを必要とする対象に有効量で投与又は摂取する皮膚のタルミ予防又は改善方法。
＜２１＞ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を、それらを必要とする対象に有効量で投与又は摂取する皮膚引き締め方法。
＜２２＞ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物及びキクラゲ抽出物から選ばれる１種以上を、それらを必要とする対象に有効量で投与又は摂取する皮膚老化予防又は改善方法。
＜２３＞＜１３＞〜＜２２＞において、使用又は方法は非治療的な使用又は非治療的な方法である。
＜２４＞＜１＞、＜７＞、＜１３＞において、インテグリンはインテグリンβ１である。
＜２５＞前記＜１＞〜＜２２＞において、抽出物を得るための抽出溶剤が、水、アルコール系（アルコール類及び／又は多価アルコール類）溶剤、又は水−アルコール系混合溶剤である。ここで、アルコール類としてはメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールがより好ましく、エタノールがさらに好ましい。
＜２６＞前記＜１＞〜＜２２＞において、抽出物を得るための抽出溶剤が、水−アルコール系混合溶剤であり、更に好適には、２０％（ｖ／ｖ）以上９５％（ｖ／ｖ）以下のエタノール水溶液、５０％（ｖ／ｖ）以上９５％（ｖ／ｖ）以下のエタノール水溶液である。
以下、実施例を示し、本発明をより具体的に説明する。
製造例１ ナガレイシ抽出物の製造
ナガレイシの全草（Ｍｏｎｔｅａｇｌｅ Ｈｅｒｂｓより入手）の粉砕物５０ｇを５０％エタノール水溶液５００ｍＬに浸漬し、室温にて１５日間抽出を行った。抽出後、ろ過を行い、抽出液を得た。抽出液を濃縮し、固形分５．９９ｇを得た。得られた固形分を蒸発残分１（ｗ／ｖ）％になるように５０％エタノールに溶解し、ナガレイシの５０％エタノール抽出物を調製した。
製造例１ ナガレイシ抽出物の製造
ナガレイシの全草（Ｍｏｎｔｅａｇｌｅ Ｈｅｒｂｓより入手）の粉砕物５０ｇを５０％エタノール水溶液５００ｍＬに浸漬し、室温にて１５日間抽出を行った。抽出後、ろ過を行い、抽出液を得た。抽出液を濃縮し、固形分５．９９ｇを得た。得られた固形分を蒸発残分１（ｗ／ｖ）％になるように５０％エタノールに溶解し、ナガレイシの５０％エタノール抽出物を調製した。
製造例２ ミツガシワ抽出物の製造
ミツガシワの葉（Ｍｏｎｔｅａｇｌｅ Ｈｅｒｂｓより入手）の粉砕物５０ｇを５０％エタノール水溶液５００ｍＬに浸漬し、室温にて１５日間抽出を行った。抽出後、ろ過を行い、抽出液を得た。抽出液を濃縮し、固形分８．２２ｇを得た。得られた固形分を蒸発残分１（ｗ／ｖ）％になるように５０％エタノールに溶解し、ミツガシワの５０％エタノール抽出物を調製した。
ミツガシワの葉（Ｍｏｎｔｅａｇｌｅ Ｈｅｒｂｓより入手）の粉砕物５０ｇを５０％エタノール水溶液５００ｍＬに浸漬し、室温にて１５日間抽出を行った。抽出後、ろ過を行い、抽出液を得た。抽出液を濃縮し、固形分８．２２ｇを得た。得られた固形分を蒸発残分１（ｗ／ｖ）％になるように５０％エタノールに溶解し、ミツガシワの５０％エタノール抽出物を調製した。
製造例３ ヒメウコギ抽出物の製造
ヒメウコギの全草（Ｍｏｎｔｅａｇｌｅ Ｈｅｒｂｓより入手）の粉砕物５０ｇを５０％エタノール水溶液５００ｍＬに浸漬し、室温にて１８日間抽出を行った。抽出後、ろ過を行い、抽出液を得た。抽出液を濃縮し、固形分１．８９ｇを得た。得られた固形分を蒸発残分１（ｗ／ｖ）％になるように５０％エタノールに溶解し、ヒメウコギの５０％エタノール抽出物を調製した。
ヒメウコギの全草（Ｍｏｎｔｅａｇｌｅ Ｈｅｒｂｓより入手）の粉砕物５０ｇを５０％エタノール水溶液５００ｍＬに浸漬し、室温にて１８日間抽出を行った。抽出後、ろ過を行い、抽出液を得た。抽出液を濃縮し、固形分１．８９ｇを得た。得られた固形分を蒸発残分１（ｗ／ｖ）％になるように５０％エタノールに溶解し、ヒメウコギの５０％エタノール抽出物を調製した。
製造例４ ミツバアケビ抽出物の製造
ミツバアケビの全草（Ｍｏｎｔｅａｇｌｅ Ｈｅｒｂｓより入手）の粉砕物５０ｇを５０％エタノール水溶液５００ｍＬに浸漬し、室温にて１８日間抽出を行った。抽出後、ろ過を行い、抽出液を得た。抽出液を濃縮し、固形分３．２５ｇを得た。得られた固形分を蒸発残分１（ｗ／ｖ）％になるように５０％エタノールに溶解し、ミツバアケビの５０％エタノール抽出物を調製した。
ミツバアケビの全草（Ｍｏｎｔｅａｇｌｅ Ｈｅｒｂｓより入手）の粉砕物５０ｇを５０％エタノール水溶液５００ｍＬに浸漬し、室温にて１８日間抽出を行った。抽出後、ろ過を行い、抽出液を得た。抽出液を濃縮し、固形分３．２５ｇを得た。得られた固形分を蒸発残分１（ｗ／ｖ）％になるように５０％エタノールに溶解し、ミツバアケビの５０％エタノール抽出物を調製した。
製造例５ ホウレンソウ抽出物の製造
ホウレンソウの全草（Ｍｏｎｔｅａｇｌｅ Ｈｅｒｂｓより入手）の粉砕物５０ｇを５０％エタノール水溶液５００ｍＬに浸漬し、室温にて１５日間抽出を行った。抽出後、ろ過を行い、抽出液を得た。抽出液を濃縮し、固形分７．６５ｇを得た。得られた固形分を蒸発残分１（ｗ／ｖ）％になるように５０％エタノールに溶解し、ホウレンソウの５０％エタノール抽出物を調製した。
ホウレンソウの全草（Ｍｏｎｔｅａｇｌｅ Ｈｅｒｂｓより入手）の粉砕物５０ｇを５０％エタノール水溶液５００ｍＬに浸漬し、室温にて１５日間抽出を行った。抽出後、ろ過を行い、抽出液を得た。抽出液を濃縮し、固形分７．６５ｇを得た。得られた固形分を蒸発残分１（ｗ／ｖ）％になるように５０％エタノールに溶解し、ホウレンソウの５０％エタノール抽出物を調製した。
製造例６ キクラゲ抽出物の製造
キクラゲの子実体（Ｍｏｎｔｅａｇｌｅ Ｈｅｒｂｓより入手）の粉砕物５０ｇを５０％エタノール水溶液５００ｍＬに浸漬し、室温にて１７日間抽出を行った。抽出後、ろ過を行い、抽出液を得た。抽出液を濃縮し、固形分３．０４ｇを得た。得られた固形分をｍＬ残分１（ｗ／ｖ）％になるように５０％エタノールに溶解し、キクラゲの５０％エタノール抽出物を調製した。
キクラゲの子実体（Ｍｏｎｔｅａｇｌｅ Ｈｅｒｂｓより入手）の粉砕物５０ｇを５０％エタノール水溶液５００ｍＬに浸漬し、室温にて１７日間抽出を行った。抽出後、ろ過を行い、抽出液を得た。抽出液を濃縮し、固形分３．０４ｇを得た。得られた固形分をｍＬ残分１（ｗ／ｖ）％になるように５０％エタノールに溶解し、キクラゲの５０％エタノール抽出物を調製した。
製造例７ ビーポーレン抽出物の製造
ビーポーレン（Ｍｏｎｔｅａｇｌｅ Ｈｅｒｂｓより入手）の粉砕物４０ｇを５０％エタノール水溶液４００ｍＬに浸漬し、室温にて２３日間抽出を行った。抽出後、ろ過を行い、抽出液を得た。抽出液を濃縮し、固形分１１．４３ｇを得た。得られた固形分を蒸発残分１（ｗ／ｖ）％になるように５０％エタノールに溶解し、ビーポーレンの５０％エタノール抽出物を調製した。
ビーポーレン（Ｍｏｎｔｅａｇｌｅ Ｈｅｒｂｓより入手）の粉砕物４０ｇを５０％エタノール水溶液４００ｍＬに浸漬し、室温にて２３日間抽出を行った。抽出後、ろ過を行い、抽出液を得た。抽出液を濃縮し、固形分１１．４３ｇを得た。得られた固形分を蒸発残分１（ｗ／ｖ）％になるように５０％エタノールに溶解し、ビーポーレンの５０％エタノール抽出物を調製した。
試験例１ ヒト皮膚線維芽細胞におけるインテグリンβ１発現促進作用の解析
ヒト皮膚線維芽細胞（ヒト包皮由来、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ社）を２４−ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに１×１０４ ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌの細胞密度で、ＦＢＳ（５％、Ｆａｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ）を含むＤＭＥ培地（ＧＩＢＣＯ ＤＭＥＭ、ｈｉｇｈ ｇｌｕｃｏｓｅ）を用いて播種した。翌日、培地をＦＢＳ無添加のＤＭＥ培地と置換し、さらに１日後と、３日後に各抽出物を終濃度が０．００１％（乾燥固形換算質量％）となるように添加した培地と置換した。５０％エタノールを等量加えた細胞をコントロールとした。最初の抽出物添加から５日後にリパバッファー（ＳＩＧＭＡ社）を用いて細胞を回収後、定法に従ってタンパク質を抽出し、抗インテグリンβ１抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社）を用いたウェスタンブロッティングによりインテグリンβ１タンパクを検出した。得られた目的のバンドはＬａｎｅ ＆ Ｓｐｏｔ ａｎａｌｙｚｅｒ（ＡＴＴＯ社）を用いた画像解析によって定量化した。
ヒト皮膚線維芽細胞（ヒト包皮由来、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ社）を２４−ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに１×１０４ ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌの細胞密度で、ＦＢＳ（５％、Ｆａｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ）を含むＤＭＥ培地（ＧＩＢＣＯ ＤＭＥＭ、ｈｉｇｈ ｇｌｕｃｏｓｅ）を用いて播種した。翌日、培地をＦＢＳ無添加のＤＭＥ培地と置換し、さらに１日後と、３日後に各抽出物を終濃度が０．００１％（乾燥固形換算質量％）となるように添加した培地と置換した。５０％エタノールを等量加えた細胞をコントロールとした。最初の抽出物添加から５日後にリパバッファー（ＳＩＧＭＡ社）を用いて細胞を回収後、定法に従ってタンパク質を抽出し、抗インテグリンβ１抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社）を用いたウェスタンブロッティングによりインテグリンβ１タンパクを検出した。得られた目的のバンドはＬａｎｅ ＆ Ｓｐｏｔ ａｎａｌｙｚｅｒ（ＡＴＴＯ社）を用いた画像解析によって定量化した。
結果を表１に併せて示す。各抽出物を加えたインテグリンβ１発現量をコントロールのそれで補正した値を発現量比として表した。表１より明らかなように、各抽出物の添加により、インテグリンβ１の発現が促進された。
試験例１ コラーゲンゲル収縮促進能の測定
コラーゲンゲルは文献「J. Cell Science,102，315-322（1992）」または「J. Invest. Dermatol,93，792-798（1989）」を参考にした方法で作製した。すなわち、氷冷下コラーゲンゲル溶液（新田ゼラチン社製、ｔａｐｅ Ｉ−Ａ（３．０ｍｇ／ｍＬ，ｐＨ＝３））にＨＥＰＥＳ（０．０１Ｍの水酸化ナトリウムを含む）、ＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ ＤＭＥＭ， ｌｏｗ ｇｌｕｃｏｓｅ）５倍濃縮溶液、ＦＢＳ（５％、Ｆａｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ）、精製水を加え、十分に攪拌中和した後、最終濃度０．００１、又は０．０００３質量％（乾燥固形換算質量％）の被験物質（製造例１〜７で調製した各抽出物、又はコントロールとして５０％エタノール）を添加して、予め５日間全培養したヒト皮膚線維芽細胞の懸濁液を加え十分に攪拌し、気泡を取り除いた後、２４穴プレートに各穴０．６ｍＬずつ注入し、直ちに３７℃でゲル化させた。この際のコラーゲン濃度は１．５ｍｇ／ｍＬに調製した。２４時間後にプレートの各穴に液体培地を加え、ゲルの周囲を剥離して、その後さらに３７℃で４８時間培養した。４８時間培養後、天秤秤にてゲルの重量を計測した。
コラーゲンゲルは文献「J. Cell Science,102，315-322（1992）」または「J. Invest. Dermatol,93，792-798（1989）」を参考にした方法で作製した。すなわち、氷冷下コラーゲンゲル溶液（新田ゼラチン社製、ｔａｐｅ Ｉ−Ａ（３．０ｍｇ／ｍＬ，ｐＨ＝３））にＨＥＰＥＳ（０．０１Ｍの水酸化ナトリウムを含む）、ＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ ＤＭＥＭ， ｌｏｗ ｇｌｕｃｏｓｅ）５倍濃縮溶液、ＦＢＳ（５％、Ｆａｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ）、精製水を加え、十分に攪拌中和した後、最終濃度０．００１、又は０．０００３質量％（乾燥固形換算質量％）の被験物質（製造例１〜７で調製した各抽出物、又はコントロールとして５０％エタノール）を添加して、予め５日間全培養したヒト皮膚線維芽細胞の懸濁液を加え十分に攪拌し、気泡を取り除いた後、２４穴プレートに各穴０．６ｍＬずつ注入し、直ちに３７℃でゲル化させた。この際のコラーゲン濃度は１．５ｍｇ／ｍＬに調製した。２４時間後にプレートの各穴に液体培地を加え、ゲルの周囲を剥離して、その後さらに３７℃で４８時間培養した。４８時間培養後、天秤秤にてゲルの重量を計測した。
結果を表２に示す。各抽出物を加えたゲルの重量をコントロールの重量で補正した値を収縮促進率として表した。表２より明らかなように、ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、ホウレンソウ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物の添加により、コラーゲンゲルの重量すなわち体積が小さくなり、コラーゲンゲルの収縮が促進された。
Claims (6)
- ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、ホウレンソウ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とするインテグリン発現促進剤。
- ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、ホウレンソウ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とするコラーゲンゲル収縮促進剤。
- ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とする皮膚弾力性改善剤。
- ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とする皮膚のタルミ予防又は改善剤。
- ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物、キクラゲ抽出物及びビーポーレン抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とする皮膚引き締め剤。
- ナガレイシ抽出物、ミツガシワ抽出物、ヒメウコギ抽出物、ミツバアケビ抽出物及びキクラゲ抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とする皮膚老化予防又は改善剤。
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