CN105806983A - 一种成方制剂中虾青素含量的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于化学分析领域，尤其涉及一种成方制剂中虾青素含量的检测方法。本发明提供的方法包括以下步骤：a)、成方制剂待测样品、丁基羟基茴香醚和乙酸乙酯混合，进行过滤后，得到滤液；b)、采用色谱法检测所述滤液中的虾青素含量，得到滤液中虾青素的含量；c)、根据所述滤液中虾青素的含量，得到成方制剂待测样品中虾青素的含量。本发明以丁基羟基茴香醚和乙酸乙酯作为提取液，提高了提取液对成方制剂中虾青素的提取效果，从而提高了虾青素含量检测的准确度。实验结果表明，采用本发明提供的方法对成方制剂中虾青素的含量进行检测时的专属性良好，重复性、稳定性和回收率的RSD值均在2％以内。
Description
技术领域
本发明属于化学分析领域，尤其涉及一种成方制剂中虾青素含量的检测方法。
背景技术
成方制剂是指在医药理论指导下，将药物组方按照现代药学技术选择合适的给药途径、剂型、辅料和制备工艺制成质量稳定可控的并经批准生产应用的一类制剂，如片剂、注射剂、气雾剂、丸剂、散剂、胶囊剂、膏剂等。
虾青素(astaxanthin)，又名虾黄质、龙虾壳色素，是一种萜烯类不饱和化合物，化学分子式为C40H52O4，分子结构中有两个β-紫罗兰酮环，11个共轭双键。天然虾青素世界上最强的天然抗氧化剂之一，有效清除细胞内的氧自由基，增强细胞再生能力，维持机体平衡和减少衰老细胞的堆积，由内而外保护细胞和DNA健康，从而保护皮肤健康，促进毛发生长，抗衰老、缓解运动疲劳、增强活力。自2008年以来，国内外大量研究证实虾青素具有较强的抗氧化活性，在提高免疫力，预防肿瘤、心血管疾病、糖尿病等慢性疾病的发生发展，延缓衰老等方面具有积极的促进作用。由于虾青素具有上述优异的药用功效，目前已经广泛添加于各种成方制剂中。
为了更好的控制成方制剂的质量，保证成方制剂中虾青素的临床疗效，必须对成方制剂中虾青素的含量进行准确检测。但现有的检测方法准确度较差，检测得到的虾青素检测值远远低于其真实值。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种成方制剂中虾青素含量的检测方法，采用本发明提供的方法对成方制剂中虾青素的含量进行检测时的准确度高。
本发明提供了一种成方制剂中虾青素含量的检测方法，包括以下步骤：
a)、成方制剂待测样品、丁基羟基茴香醚和乙酸乙酯混合，进行过滤后，得到滤液；
b)、采用色谱法检测所述滤液中的虾青素含量，得到滤液中虾青素的含量；
c)、根据所述滤液中虾青素的含量，得到成方制剂待测样品中虾青素的含量。
优选的，所述丁基羟基茴香醚和乙酸乙酯的用量比为0.005～0.05(g)：100(mL)。
优选的，所述成方制剂待测样品与乙酸乙酯的用量比为0.5(g)：30～200(mL)。
优选的，步骤a)中，所述待测样品、丁基羟基茴香醚和乙酸乙酯在超声波存在下和/或在回流条件下进行混合。
优选的，步骤a)中，所述混合的时间为40～240min。
优选的，所述步骤b)为：
b1)、所述滤液与碱混合反应，反应得到的反应液进行离心，得到上清液；
b2)、采用色谱法检测所述上清液中的虾青素含量，得到上清液中虾青素的含量；
b3)、根据所述上清液中虾青素的含量，得到滤液中虾青素的含量。
优选的，步骤b1)中，所述滤液与碱的用量比为10(mL)：0.08～0.2(g)。
优选的，步骤b1)中，所述反应的温度为2～6℃；所述反应的时间为0.8～3h。
优选的，所述步骤b2)具体为：
b2.1)、对所述上清液进行液相色谱检测，得到上清液中虾青素的峰面积；
b2.2)、根据所述上清液中虾青素的峰面积与预定的虾青素的浓度-峰面积标准曲线，得到上清液中虾青素的含量。
优选的，所述成方制剂待测样品中含有虾青素、红景天苷提取物、葡萄籽提取物和姜黄提取物中的一种或多种。
与现有技术相比，本发明提供了一种成方制剂中虾青素含量的检测方法。本发明提供的方法包括以下步骤：a)、成方制剂待测样品、丁基羟基茴香醚和乙酸乙酯混合，进行过滤后，得到滤液；b)、采用色谱法检测所述滤液中的虾青素含量，得到滤液中虾青素的含量；c)、根据所述滤液中虾青素的含量，得到成方制剂待测样品中虾青素的含量。本发明以丁基羟基茴香醚和乙酸乙酯作为提取液，提高了提取液对成方制剂中虾青素的提取效果，从而提高了虾青素含量检测的准确度。实验结果表明，采用本发明提供的方法对成方制剂中虾青素的含量进行检测时的专属性良好，重复性、稳定性和回收率的RSD值均在2％以内。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例1提供的虾青素的浓度-峰面积标准曲线图；
图2是本发明实施例8提供的对照品色谱图；
图3是本发明实施例8提供的测试样品色谱图；
图4是本发明实施例8提供的阴性供试品色谱图。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供了一种成方制剂中虾青素含量的检测方法，包括以下步骤：
a)、成方制剂待测样品、丁基羟基茴香醚和乙酸乙酯混合，进行过滤后，得到滤液；
b)、采用色谱法检测所述滤液中的虾青素含量，得到滤液中虾青素的含量；
c)、根据所述滤液中虾青素的含量，得到成方制剂待测样品中虾青素的含量。
在本发明提供的方法中，首先将成方制剂待测样品、丁基羟基茴香醚和乙酸乙酯溶液混合。其中，所述成方制剂待测样品是由活性成分和辅料组成的制剂。所述成方制剂的剂型可以是片剂、注射剂、气雾剂、丸剂、胶囊剂、散剂或膏剂。在本发明提供的一个实施例中，所述成方制剂待测样品中含有虾青素、红景天苷提取物、葡萄籽提取物和姜黄提取物中的一种或多种。在本发明提供的一个实施例中，所述虾青素在成方制剂待测样品中的含量为0.2～6％；在本发明提供的另一个实施例中，所述虾青素在成方制剂待测样品中的含量为0.3～3wt％；本发明提供的其他实施例中，所述虾青素在成方制剂待测样品中的含量为0.5～0.6wt％。在本发明提供的一个实施例中，所述红景天苷提取物中的红景天苷在成方制剂待测样品中的含量为0.25～5wt％；在本发明提供的另一个实施例中，所述红景天苷提取物中的红景天苷在成方制剂待测样品中的含量为0.3～3wt％；在本发明提供的其他实施例中，所述红景天苷提取物中的红景天苷在成方制剂待测样品中的含量为1.7～2wt％。在本发明提供的一个实施例中，所述葡萄籽提取物中的原花青素在成方制剂待测样品中的含量为2～8wt％；在本发明提供的另一个实施例中，所述葡萄籽提取物中的原花青素在成方制剂待测样品中的含量为3～6wt％；在本发明提供的其他实施例中，所述葡萄籽提取物中的原花青素在成方制剂待测样品中的含量为4～5wt％。在本发明提供的一个实施例中，所述姜黄提取物中的总姜黄素在成方制剂待测样品中的含量为0.5～7wt％；在本发明提供的另一个实施例中，所述姜黄提取物中的总姜黄素在成方制剂待测样品中的含量为0.2～5wt％；在本发明提供的其他实施例中，所述姜黄提取物中的总姜黄素在成方制剂待测样品中的含量为2～3wt％。在本发明提供的一个实施例中，所述成方制剂待测样品还含有微晶纤维素，所述微晶纤维素在成方制剂待测样品中的含量为0.5～2.5wt％；在本发明提供的另一个实施例中，所述微晶纤维素在成方制剂待测样品中的含量为1～2wt％。
在本发明中，所述成方制剂待测样品、丁基羟基茴香醚换热乙酸乙酯混合过程中，所述丁基羟基茴香醚和乙酸乙酯的用量比优选为0.005～0.05(g)：100(mL)，更优选为0.01～0.03(g)：100(mL)，最优选为0.02～0.025(g)：100(mL)。所述成方制剂待测样品与乙酸乙酯的用量比优选为0.5(g)：30～200(mL)，更优选为0.5(g)：50～200(mL)，最优选为0.5(g)：50～100(mL)。在本发明中，优选先将所述丁基羟基茴香醚和乙酸乙酯混合，得到丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯溶液；再将所述成方制剂待测样品与丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯溶液混合。
在本发明中，所述成方制剂待测样品、丁基羟基茴香醚和乙酸乙酯混合过程中，所述待测样品、丁基羟基茴香醚和乙酸乙酯优选在超声波存在下和/或在回流条件下进行混合。所述混合的时间优选为40～240min，更优选为60～120min，最优选为60～90min。混合过程中，丁基羟基茴香醚和乙酸乙酯组成的混合体系对所述成方制剂待测样品中的虾青素进行提取，混合结束后，进行过滤，得到滤液。所述滤液中含有从所述成方制剂待测样品中提取出来的提取物。在本发明中，为方便过滤，所述成方制剂待测样品、丁基羟基茴香醚和乙酸乙酯完成混合后，优选先进行离心，再进行过滤。
得到所述滤液后，采用色谱法检测所述滤液中的虾青素含量，得到滤液中虾青素的含量。在本发明提供的一个实施例中，按照以下方式检测所述滤液中的虾青素含量：
b1)、所述滤液与碱混合反应，反应得到的反应液进行离心，得到上清液；
b2)、采用色谱法检测所述上清液中的虾青素含量，得到上清液中虾青素的含量；
b3)、根据所述上清液中虾青素的含量，得到滤液中虾青素的含量。
在本发明提供的上述检测所述滤液中的虾青素含量的过程中，首先将所述滤液与碱混合反应。其中，所述碱优选为NaOH和/或KOH，更优选为KOH。所述滤液与碱的的用量比优选为10(mL)：0.08～0.2(g)，更优选为10(mL)：0.1～0.2(g)。在本发明中，优选先将碱和水混合配制成碱液，再将所述滤液与碱液混合反应。所述碱液中碱的含量优选为1～5wt％，更优选为2～3wt％。在本发明中，所述滤液与碱优选在量瓶中混合反应，所述滤液与碱混合后优选向所述量瓶中加入所述丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯溶液定容。在本发明中，所述滤液与定容后得到的混合体系的体积比优选为10：(20～50)，更优选为10：(20～30)，最优选为10：25。在本发明中，所述滤液与碱混合反应过程中，碱对滤液中的虾青素酯进行皂化，使滤液中的虾青素酯皂化为游离的虾青素。所述反应的温度优选为2～6℃，更优选为4～5℃；所述反应的时间优选为0.8～3h，更优选为1～2h。反应结束后，得到反应液。对所述反应液进行离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
得到所述上清液后，采用色谱法检测所述上清液中的虾青素含量，得到上清液中虾青素的含量，该过程具体包括：
b2.1)、对所述上清液进行液相色谱检测，得到上清液中虾青素的峰面积；
b2.2)、根据所述上清液中虾青素的峰面积与预定的虾青素的浓度-峰面积标准曲线，得到上清液中虾青素的含量。
在本发明提供的上述采用色谱法对所述上清液进行虾青素含量检测的过程中，首先对所述上清液进行液相色谱检测。其中，本发明对所述液相色谱检测采用的仪器没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的液相色谱仪即可，如可以采用岛津LC-20AT高效液相色谱仪或安捷伦高效液相色谱仪Agilent1100。在本发明中，所述液相色谱检测的流动相优选为甲醇水溶液；所述甲醇水溶液中，水和甲醇的体积比优选为(8～12)：(92～88)；所述液相色谱检测的固定相优选为十八烷基硅烷键合硅胶；所述液相色谱检测的色谱柱优选为lunaC18(250×4.6mm，0.5μm)柱；所述液相色谱检测的洗脱方式优选为等度洗脱；所述液相色谱检测的波长优选为450～500nm，更优选为483～487nm；所述液相色谱检测的流动相的流速优选为0.5～2mL/min，更优选为0.8～1.2mL/min，最优选为1.0mL/min；所述液相色谱检测的柱温优选为25～35℃，更优选为30℃；所述液相谱检测的池温优选为1～10℃，更优选为4℃；所述液相谱检测的进样量优选为1～10μL，更优选为5μL。液相色谱检测结束后，得到上清液中虾青素的峰面积。
得到所述上清液中虾青素的峰面积后，本发明根据所述上清液中虾青素的峰面积与预定的虾青素的浓度-峰面积标准曲线，得到上清液中虾青素的含量。在本发明中，所述预定的虾青素的浓度-峰面积标准曲线优选按照以下方法获得：
首先，提供虾青素系列浓度的标准溶液；然后，对所述虾青素系列浓度的标准溶液进行液相色谱检测，得到每个浓度的虾青素标准溶液的色谱图；最后，根据所述色谱图与其对应的虾青素标准溶液的浓度，得到虾青素的浓度-峰面积标准曲线。
在本发明提供的上述获得虾青素的浓度-峰面积标准曲线的方法中，首先提供虾青素系列浓度的标准溶液，本发明对所述标准溶液的来源没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的虾青素标准溶液即可，如可以购买虾青素的标准品溶液，也可以自行进行配制，本发明对所述标准溶液的配制方法没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的标准溶液的配制方法即可。对于虾青素的标准品溶液的市售商品，本发明可以根据需要将其稀释成所需的浓度，进行检测。在本发明中，所述虾青素的标准溶液的质量浓度优选为1～100μg/mL，更优选为5.42～43.33μg/mL，最优选为5.42μg/mL、10.80μg/mL、21.66μg/mL、32.50μg/mL、37.91μg/mL和43.33μg/mL。
得到虾青素系列浓度的标准溶液后，本发明对所述虾青素系列浓度的标准溶液进行液相色谱检测，得到每个浓度的虾青素标准溶液的色谱图。本发明优选采用上述对上清液中虾青素检测的技术方案对所述虾青素系列浓度的标准溶液进行液相色谱检测，在此不再赘述。
得到每个浓度的虾青素标准溶液的色谱图后，本发明计算得到每个浓度的虾青素标准溶液的峰面积，根据得到的峰面积与其对应的虾青素标准溶液的浓度，得到虾青素浓度-峰面积标准曲线。
在本发明中，得到所述上清液中虾青素的含量后，根据所述上清液中虾青素的含量，得到滤液中虾青素的含量。最后根据所述滤液中虾青素的含量，得到成方制剂待测样品中虾青素的含量。
在本发明提供的一个实施例中，对液相色谱检测样品中虾青素含量时的定量限和检测限进行测定，测定方法为：对一系列已知浓度的虾青素的乙酸乙酯溶液进行液相色谱检测，已S/N＝10为定量限，S/N＝3为检测限，计算得到定量限和检测限测定结果。在本发明提供的一个实施例中，定量限为1.5ng，检测限为0.5ng。
本发明以丁基羟基茴香醚和乙酸乙酯作为提取液，提高了提取液对成方制剂中虾青素的提取效果，从而提高了成方制剂中虾青素的含量检测的准确度。实验结果表明，本发明提供的方法对成方制剂中虾青素的含量进行检测时的专属性良好，重复性、稳定性和回收率的RSD值均在2％以内。
为更清楚起见，下面通过以下实施例进行详细说明。
实施例1
建立虾青素的浓度-峰面积标准曲线：
1)虾青素储备液的制备：称取虾青素对照品(SIGMA公司，纯度>97％)适量，精密称定，置于棕色容量瓶中，用乙酸乙酯制成每1mL含虾青素为108.30μg的溶液，作为储备液。
2)标准系列溶液的配置：分别精密量取不同体积的上述制得的储备液，置于10mL的棕色容量瓶中，用乙酸乙酯配置成一系列浓度的标准溶液：5.42、10.80、21.66、32.50、37.91、43.33μg/ml。
3)液相色谱仪和色谱条件：液相色谱仪型号为岛津LC-20AT高效液相色谱仪；色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水为流动相A，以甲醇为流动相B，按照A：B＝10:90的比例进行等度洗脱，检测波长为485nm；柱温为30℃，进样池温度为4℃，流速为1.0mL/min；进样量：5μL。
4)测定：精密吸取上述标准系列溶液各5μL，注入液相色谱仪，按步骤3)提供中的色谱条件测定峰面积，以进样浓度(μg/mL)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，计算回归方程。
标准曲线图如图1所示，图1是本发明实施例1提供的虾青素的浓度-峰面积标准曲线图。通过图1可知，虾青素在5.42μg/ml～43.33μg/ml范围内有良好的线性关系，回归方程为y＝34.84x+15.92，R2＝0.999。
实施例2
成方制剂中虾青素含量的检测：
1)成方制剂待测样品成分：
2)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯50mL，称定重量，超声提取1小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
3)液相色谱检测和结果计算：采用与实施例1建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，结果为：虾青素含量0.50wt％。
实施例3
成方制剂中虾青素含量的检测：
1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯50mL，称定重量，回流提取1小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
2)液相色谱检测和结果计算：采用与实施例1建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，结果为：虾青素含量0.49wt％。
实施例4
成方制剂中虾青素含量的检测：
1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯100mL，称定重量，超声提取1小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
2)液相色谱检测和结果计算：采用与实施例1建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，结果为：虾青素含量0.50wt％。
实施例5
成方制剂中虾青素含量的检测：
1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯100mL，称定重量，超声提取2小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
2)液相色谱检测和结果计算：采用与实施例1建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，结果为：虾青素含量0.50wt％。
实施例6
成方制剂中虾青素含量的检测：
1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯100mL，称定重量，超声提取2小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯稀释并定容，4℃反应2小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
2)液相色谱检测和结果计算：采用与实施例1建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，结果为：虾青素含量0.50wt％。
实施例7
成方制剂中虾青素含量的检测：
1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯100mL，称定重量，超声提取2小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入6mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯稀释并定容，4℃反应2小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
2)液相色谱检测和结果计算：采用与实施例1建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，结果为：虾青素含量0.50wt％。
实施例8
检测方法的专属性考察：
1)对照品制备：取虾青素对照品(SIGMA公司，纯度>97％)适量，精密称定，置棕色容量瓶中，加乙酸乙酯溶液，制成一定浓度的虾青素对照品溶液。
2)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯50mL，称定重量，超声提取1小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
3)阴性供试品制备：按照成方制剂待测样品的制备工艺，制备缺少虾青素的阴性样品，按照供试品溶液制备方法制得阴性供试品溶液。
4)液相色谱检测：分别精密吸取对照品、测试样品、阴性供试品各5μL，注入高效液相色谱仪，采用与实施例1建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测。检测结果如图2～如4所示，图2是本发明实施例8提供的对照品色谱图，图3是本发明实施例8提供的测试样品色谱图，图4是本发明实施例8提供的阴性供试品色谱图。
通过图2～图4可以看出，测试样品色谱中呈现与对照品色谱主峰保留时间一致的色谱峰，且阴性供试品色谱图中在待测成分保留时间处无杂质峰干扰，表明本方法有良好的专属性。
实施例9
检测方法的系统适应性考察：
1)对照品制备：取虾青素对照品(SIGMA公司，纯度>97％)适量，精密称定，置棕色量瓶中，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯，配置成虾青素含量4.11μg/ml的对照品溶液。
2)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯50mL，称定重量，超声提取1小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
3)液相色谱检测：采用与实施例1建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测，精密吸取对照品5μL,连续重复进样5次，测定，计算峰面积测量值的相对标准偏差；精密吸取测试样品5μL，注入高效液相色谱仪，测定，计算待测组方的分离度、拖尾因子、理论塔板数。
4)结果比较：在上述条件下，测试样品色谱中虾青素与邻近色谱峰分离度大于2，已达到极限分离，拖尾因子为0.95～1.05，色谱系统的重复性相对标准偏差为0.18％，以虾青素计算理论塔板数大于10000。可见本发明提供的方法可以保证虾青素定量分析的准确性。
实施例9
仪器的精密度考察：
1)对照品制备：取虾青素对照品(SIGMA公司，纯度>97％)适量，精密称定，置棕色量瓶中，加乙酸乙酯，配置成虾青素含量25.69μg/ml的对照品溶液。
2)液相色谱检测和结果计算：采用与实施例1建立标准曲线时相同的色谱条件对所述对照品溶液进行液相色谱检测，连续重复进样6次，测得虾青素峰面积积分值，并计算相对标准偏差(RSD)，结果如表1所示:
表1精密度测试结果
通过表1可以看出RSD为0.87％，说明本发明提供的方法所采用的仪器精密度良好。
实施例10
检测方法的重复性考察：
1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯50mL，称定重量，超声提取1小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。平行制备6份测试样品。
2)液相色谱检测和结果计算：采用与实施例1建立标准曲线时相同的色谱条件对所述6份测试样品进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，同时计算相对标准偏差(RSD)，结果如表2所示:
表2重复性测定结果
通过表2可以看出RSD为1.29％，说明本发明提供的方法重复性良好。
实施例11
测试样品的稳定性考察：
1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯50mL，称定重量，超声提取1小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
2)液相色谱检测和结果计算：采用与实施例1建立标准曲线时相同的色谱条件分别在制得所述上清液后的2h、4h、6h、8h、10h和12h取样，进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，同时计算相对标准偏差(RSD)，结果如表3所示：
表3稳定性试验结果
通过表3可以看出RSD为0.46％，说明本发明提供的测试样品12h内稳定性良好。
实施例12
检测方法的加样回收率计算：
1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.26～0.28g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，分别加入虾青素含量为0.13g/100g对照品1mL，再补加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯至50mL，称定重量，超声提取1小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。同法制备6份测试样品。
2)液相色谱检测和结果计算：采用与实施例1建立标准曲线时相同的色谱条件对所述6份测试样品进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，同时计算回收率、平局回收率和相对标准偏差(RSD)，结果如表4所示:
表4加样回收率测试结果
通过表4可以看出平均回收率为98.50％，RSD为1.39％，说明本发明提供的方法具有较高的准确性。
实施例13
定量限和检测限测定：
取实施例1制得的虾青素储备液若干份，以不同比例稀释后测定，已S/N＝10为定量限，S/N＝3为检测限，测得的定量限为1.5ng，检测限为0.5ng。
对比例1
成方制剂中虾青素含量的检测：
1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的丙酮50mL，称定重量，超声提取1小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的丙酮稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
2)液相色谱检测和结果计算：采用与实施例1建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，结果为：虾青素含量0.42wt％。
对比例2
成方制剂中虾青素含量的检测：
1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的二氯甲烷50mL，称定重量，超声提取1小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的二氯甲烷稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
2)液相色谱检测和结果计算：采用与实施例1建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，结果为：虾青素含量0.23wt％。
对比例3
成方制剂中虾青素含量的检测：
1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的丙酮50mL，称定重量，回流提取1小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的丙酮稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
2)液相色谱检测和结果计算：采用与实施例1建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，结果为：虾青素含量0.41wt％。
对比例4
成方制剂中虾青素含量的检测：
1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的二氯甲烷50mL，称定重量，回流提取1小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的二氯甲烷稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
2)液相色谱检测和结果计算：采用与实施例1建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，结果为：虾青素含量0.22wt％。
对比例5
成方制剂中虾青素含量的检测：
1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯25mL，称定重量，超声提取1小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
2)液相色谱检测和结果计算：采用与实施例1建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，结果为：虾青素含量0.25wt％。
对比例6
成方制剂中虾青素含量的检测：
1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯50mL，称定重量，超声提取0.5小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
2)液相色谱检测和结果计算：采用与实施例1建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，结果为：虾青素含量0.25wt％。
对比例7
成方制剂中虾青素含量的检测：
1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯50mL，称定重量，超声提取1小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯稀释并定容，4℃反应0.5小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
2)液相色谱检测和结果计算：采用与实施例1建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，结果为：虾青素含量0.44wt％。
对比例8
成方制剂中虾青素含量的检测：
1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯50mL，称定重量，超声提取1小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入3mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
2)液相色谱检测和结果计算：采用与实施例1建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，结果为：虾青素含量0.36wt％。
实施例14
1)建立虾青素的浓度-峰面积标准曲线：
1-1)虾青素储备液的制备：称取虾青素对照品(SIGMA公司，纯度>97％)适量，精密称定，置于棕色容量瓶中，用乙酸乙酯制成每1mL含虾青素为108.30μg的溶液，作为储备液。
1-2)标准系列溶液的配置：分别精密量取不同体积的上述制得的储备液，置于10mL的棕色容量瓶中，用乙酸乙酯配置成一系列浓度的标准溶液：5.42、10.80、21.66、32.50、37.91、43.33μg/ml。
1-3)液相色谱仪和色谱条件：液相色谱仪型号为岛津LC-20AT高效液相色谱仪；色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水为流动相A，以甲醇为流动相B，按照A：B＝10:90的比例进行等度洗脱，检测波长为485nm；柱温为30℃，进样池温度为4℃，流速为0.8mL/min；进样量：5μL。
1-4)测定：精密吸取上述对照品溶液各5μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以进样浓度(μg/mL)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，计算回归方程。
2)成方制剂中虾青素含量的检测：
2-1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯50mL，称定重量，超声提取1小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
2-2)液相色谱检测和结果计算：采用与步骤1)建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，结果为：虾青素含量0.49wt％。
实施例15
1)建立虾青素的浓度-峰面积标准曲线：
1-1)虾青素储备液的制备：称取虾青素对照品(SIGMA公司，纯度>97％)适量，精密称定，置于棕色容量瓶中，用乙酸乙酯制成每1mL含虾青素为108.30μg的溶液，作为储备液。
1-2)标准系列溶液的配置：分别精密量取不同体积的上述制得的储备液，置于10mL的棕色容量瓶中，用乙酸乙酯配置成一系列浓度的标准溶液：5.42、10.80、21.66、32.50、37.91、43.33μg/ml。
1-3)液相色谱仪和色谱条件：液相色谱仪型号为岛津LC-20AT高效液相色谱仪；色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水为流动相A，以甲醇为流动相B，按照A：B＝10:90的比例进行等度洗脱，检测波长为485nm；柱温为30℃，进样池温度为4℃，流速为1.2mL/min；进样量：5μL。
1-4)测定：精密吸取上述对照品溶液各5μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以进样浓度(μg/mL)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，计算回归方程。
2)成方制剂中虾青素含量的检测：
2-1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯50mL，称定重量，超声提取1小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
2-2)液相色谱检测和结果计算：采用与步骤1)建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，结果为：虾青素含量0.51wt％。
实施例16
1)建立虾青素的浓度-峰面积标准曲线：
1-1)虾青素储备液的制备：称取虾青素对照品(SIGMA公司，纯度>97％)适量，精密称定，置于棕色容量瓶中，用乙酸乙酯制成每1mL含虾青素为108.30μg的溶液，作为储备液。
1-2)标准系列溶液的配置：分别精密量取不同体积的上述制得的储备液，置于10mL的棕色容量瓶中，用乙酸乙酯配置成一系列浓度的标准溶液：5.42、10.80、21.66、32.50、37.91、43.33μg/ml。
1-3)液相色谱仪和色谱条件：液相色谱仪型号为岛津LC-20AT高效液相色谱仪；色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水为流动相A，以甲醇为流动相B，按照A：B＝10:90的比例进行等度洗脱，检测波长为485nm；柱温为25℃，进样池温度为4℃，流速为1.0mL/min；进样量：5μL。
1-4)测定：精密吸取上述对照品溶液各5μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以进样浓度(μg/mL)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，计算回归方程。
2)成方制剂中虾青素含量的检测：
2-1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯50mL，称定重量，超声提取1小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
2-2)液相色谱检测和结果计算：采用与步骤1)建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，结果为：虾青素含量0.50wt％。
实施例17
1)建立虾青素的浓度-峰面积标准曲线：
1-1)虾青素储备液的制备：称取虾青素对照品(SIGMA公司，纯度>97％)适量，精密称定，置于棕色容量瓶中，用乙酸乙酯制成每1mL含虾青素为108.30μg的溶液，作为储备液。
1-2)标准系列溶液的配置：分别精密量取不同体积的上述制得的储备液，置于10mL的棕色容量瓶中，用乙酸乙酯配置成一系列浓度的标准溶液：5.42、10.80、21.66、32.50、37.91、43.33μg/ml。
1-3)液相色谱仪和色谱条件：液相色谱仪型号为岛津LC-20AT高效液相色谱仪；色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水为流动相A，以甲醇为流动相B，按照A：B＝10:90的比例进行等度洗脱，检测波长为485nm；柱温为35℃，进样池温度为4℃，流速为1.0mL/min；进样量：5μL。
1-4)测定：精密吸取上述对照品溶液各5μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以进样浓度(μg/mL)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，计算回归方程。
2)成方制剂中虾青素含量的检测：
2-1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯50mL，称定重量，超声提取1小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
2-2)液相色谱检测和结果计算：采用与步骤1)建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，结果为：虾青素含量0.50wt％。
实施例18
1)建立虾青素的浓度-峰面积标准曲线：
1-1)虾青素储备液的制备：称取虾青素对照品(SIGMA公司，纯度>97％)适量，精密称定，置于棕色容量瓶中，用乙酸乙酯制成每1mL含虾青素为108.30μg的溶液，作为储备液。
1-2)标准系列溶液的配置：分别精密量取不同体积的上述制得的储备液，置于10mL的棕色容量瓶中，用乙酸乙酯配置成一系列浓度的标准溶液：5.42、10.80、21.66、32.50、37.91、43.33μg/ml。
1-3)液相色谱仪和色谱条件：液相色谱仪型号为岛津LC-20AT高效液相色谱仪；色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水为流动相A，以甲醇为流动相B，按照A：B＝10:90的比例进行等度洗脱，检测波长为483nm；柱温为30℃，进样池温度为4℃，流速为1.0mL/min；进样量：5μL。
1-4)测定：精密吸取上述对照品溶液各5μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以进样浓度(μg/mL)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，计算回归方程。
2)成方制剂中虾青素含量的检测：
2-1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯50mL，称定重量，超声提取1小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
2-2)液相色谱检测和结果计算：采用与步骤1)建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，结果为：虾青素含量0.50wt％。
实施例19
1)建立虾青素的浓度-峰面积标准曲线：
1-1)虾青素储备液的制备：称取虾青素对照品(SIGMA公司，纯度>97％)适量，精密称定，置于棕色容量瓶中，用乙酸乙酯制成每1mL含虾青素为108.30μg的溶液，作为储备液。
1-2)标准系列溶液的配置：分别精密量取不同体积的上述制得的储备液，置于10mL的棕色容量瓶中，用乙酸乙酯配置成一系列浓度的标准溶液：5.42、10.80、21.66、32.50、37.91、43.33μg/ml。
1-3)液相色谱仪和色谱条件：液相色谱仪型号为岛津LC-20AT高效液相色谱仪；色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水为流动相A，以甲醇为流动相B，按照A：B＝10:90的比例进行等度洗脱，检测波长为487nm；柱温为30℃，进样池温度为4℃，流速为1.0mL/min；进样量：5μL。
1-4)测定：精密吸取上述对照品溶液各5μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以进样浓度(μg/mL)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，计算回归方程。
2)成方制剂中虾青素含量的检测：
2-1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯50mL，称定重量，超声提取1小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
2-2)液相色谱检测和结果计算：采用与步骤1)建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，结果为：虾青素含量0.50wt％。
实施例20
1)建立虾青素的浓度-峰面积标准曲线：
1-1)虾青素储备液的制备：称取虾青素对照品(SIGMA公司，纯度>97％)适量，精密称定，置于棕色容量瓶中，用乙酸乙酯制成每1mL含虾青素为108.30μg的溶液，作为储备液。
1-2)标准系列溶液的配置：分别精密量取不同体积的上述制得的储备液，置于10mL的棕色容量瓶中，用乙酸乙酯配置成一系列浓度的标准溶液：5.42、10.80、21.66、32.50、37.91、43.33μg/ml。
1-3)液相色谱仪和色谱条件：液相色谱仪型号为岛津LC-20AT高效液相色谱仪；色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水为流动相A，以甲醇为流动相B，按照A：B＝8:92的比例进行等度洗脱，检测波长为485nm；柱温为30℃，进样池温度为4℃，流速为1.0mL/min；进样量：5μL。
1-4)测定：精密吸取上述对照品溶液各5μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以进样浓度(μg/mL)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，计算回归方程。
2)成方制剂中虾青素含量的检测：
2-1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯50mL，称定重量，超声提取1小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
2-2)液相色谱检测和结果计算：采用与步骤1)建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，结果为：虾青素含量0.50wt％。
实施例21
1)建立虾青素的浓度-峰面积标准曲线：
1-1)虾青素储备液的制备：称取虾青素对照品(SIGMA公司，纯度>97％)适量，精密称定，置于棕色容量瓶中，用乙酸乙酯制成每1mL含虾青素为108.30μg的溶液，作为储备液。
1-2)标准系列溶液的配置：分别精密量取不同体积的上述制得的储备液，置于10mL的棕色容量瓶中，用乙酸乙酯配置成一系列浓度的标准溶液：5.42、10.80、21.66、32.50、37.91、43.33μg/ml。
1-3)液相色谱仪和色谱条件：液相色谱仪型号为岛津LC-20AT高效液相色谱仪；色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水为流动相A，以甲醇为流动相B，按照A：B＝12:88的比例进行等度洗脱，检测波长为485nm；柱温为30℃，进样池温度为4℃，流速为1.0mL/min；进样量：5μL。
1-4)测定：精密吸取上述对照品溶液各5μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以进样浓度(μg/mL)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，计算回归方程。
2)成方制剂中虾青素含量的检测：
2-1)测试样品制备：成方制剂待测样品(待测样品名称：涵睿胶囊，厂家：江苏康缘药业股份有限公司，批号：20141001)20粒，胶囊内容物研细混匀，取混匀的供试品0.5g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，精密加入含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯50mL，称定重量，超声提取1小时，放冷至室温，称重，离心，过滤；取滤液10mL，置25ml量瓶中，精密加入5mL的2wt％KOH水溶液，加含0.02wt％丁基羟基茴香醚的乙酸乙酯稀释并定容，4℃反应1小时，离心，得到上清液。所述上清液即为后续进行色谱检测时使用的测试样品。
2-2)液相色谱检测和结果计算：采用与步骤1)建立标准曲线时相同的色谱条件对所述上清液进行液相色谱检测，并根据色谱检测结果计算得到成方制剂待测样品中的虾青素含量，结果为：虾青素含量0.50wt％。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种成方制剂中虾青素含量的检测方法，包括以下步骤：
a)、成方制剂待测样品、丁基羟基茴香醚和乙酸乙酯混合，进行过滤后，得到滤液；
b)、采用色谱法检测所述滤液中的虾青素含量，得到滤液中虾青素的含量；
c)、根据所述滤液中虾青素的含量，得到成方制剂待测样品中虾青素的含量。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述丁基羟基茴香醚和乙酸乙酯的用量比为0.005～0.05(g)：100(mL)。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述成方制剂待测样品与乙酸乙酯的用量比为0.5(g)：30～200(mL)。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤a)中，所述待测样品、丁基羟基茴香醚和乙酸乙酯在超声波存在下和/或在回流条件下进行混合。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤a)中，所述混合的时间为40～240min。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤b)为：
b1)、所述滤液与碱混合反应，反应得到的反应液进行离心，得到上清液；
b2)、采用色谱法检测所述上清液中的虾青素含量，得到上清液中虾青素的含量；
b3)、根据所述上清液中虾青素的含量，得到滤液中虾青素的含量。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，步骤b1)中，所述滤液与碱的用量比为10(mL)：0.08～0.2(g)。
8.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，步骤b1)中，所述反应的温度为2～6℃；所述反应的时间为0.8～3h。
9.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述步骤b2)具体为：
b2.1)、对所述上清液进行液相色谱检测，得到上清液中虾青素的峰面积；
b2.2)、根据所述上清液中虾青素的峰面积与预定的虾青素的浓度-峰面积标准曲线，得到上清液中虾青素的含量。
10.根据权利要求1～9任一项所述的检测方法，其特征在于，所述成方制剂待测样品中含有虾青素、红景天苷提取物、葡萄籽提取物和姜黄提取物中的一种或多种。
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Cited By (1)
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| CN107703232A (zh) * | 2017-11-24 | 2018-02-16 | 北京康比特体育科技股份有限公司 | 一种虾青素含量的检测方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1548420A (zh) * | 2003-05-17 | 2004-11-24 | 浙江工业大学 | 红发夫酵母中虾青素的提取方法 |
| CN104480013A (zh) * | 2014-12-02 | 2015-04-01 | 云南爱尔康生物技术有限公司 | 雨生红球藻细胞破壁方法 |
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1548420A (zh) * | 2003-05-17 | 2004-11-24 | 浙江工业大学 | 红发夫酵母中虾青素的提取方法 |
| CN104480013A (zh) * | 2014-12-02 | 2015-04-01 | 云南爱尔康生物技术有限公司 | 雨生红球藻细胞破壁方法 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| MARC DAVID GRYNBAUM ET AL.: "Unambiguous detection of astaxanthin and astaxanthin fatty acid esters in krill (Euphausia superba Dana)", 《J.SEP.SCI.》 * |
| 张影霞 等: "虾青素的提取及其稳定性的研究", 《现代食品科技》 * |
| 张琇 等: "红酵母虾青素的分离与纯化初探", 《中国农学通报》 * |
| 毛丽哈·艾合买提 等: "虾壳虾青素的提取及其稳定性研究", 《食品安全质量检测学报》 * |
| 袁三平 等: "虾青素检测方法技术研究进展", 《山东食品发酵》 * |
| 饶毅 等: "高效液相色谱法测定虾青素的含量", 《江西中医药大学学报》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107703232A (zh) * | 2017-11-24 | 2018-02-16 | 北京康比特体育科技股份有限公司 | 一种虾青素含量的检测方法 |
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