CN105801666A - 一种米鱼鳔蛋白肽的制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种米鱼鳔蛋白肽的制备方法，该方法包括以下步骤：(1)米鱼鳔浆液的制备；(2)米鱼鳔的水解；(3)水解液脱腥以及(4)干燥，还涉及该米鱼鳔蛋白肽在水产品防腐保鲜中的应用。本发明采用乙酸进行酸水解，作用条件温和，反应过程易控、安全，能较好地保留米鱼鳔中的营养成分，去除腥味，制备的米鱼鳔蛋白肽对水产品中的常见细菌具有较好的抑制作用，可作为一种经济、环保的抑菌剂而广泛应用于水产品防腐保鲜中。

Description

一种米鱼鳔蛋白肽的制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及水产品加工技术领域，尤其涉及米鱼鳔蛋白肽的制备方法及其应用。

背景技术

米鱼，又叫鮸鱼，属于鲈形目石首鱼科，似鲈而肉粗，体色发暗呈灰褐并带有紫绿色，腹部灰白，米鱼体形为两侧扁平向后延长状，背、腹部浅弧形，产东海舟山洋面。米鱼性甘、咸、平，有养血、止血、补肾固精、润肺健脾和消炎功效，对治疗再生障碍性贫血，吐血，肾虚遗精，疮疖、痛肿、无名肿毒、乳腺炎等有效，米鱼的耳石有清热去瘀、利尿的作用。

鱼鳔的主要营养成分为蛋白质，含量一般在80％以上，脂肪含量较低，是理想的高蛋白低脂肪食物。在我国，食用鱼鳔有着悠久的历史，北魏贾思勰《齐民要术》中就有把石首鱼鳔进行加工食用的记载，到唐代，鱼鳔已成为贡品之一。鱼鳔不仅是筵席名菜，已有相当的滋补作用和药用价值，如滋阴养血、止血补血、补肾益精等，中医理论认为：“鱼鳔”具有滋补的功效，是女士养颜护肤美容保健佳品，医学研究发现，“鱼鳔”中含有海量的维生素族群，和多种微量元素，其中维生素A含量超过其他鱼类产品，对美容、补钙都有好处。大米鱼鳔俗称“鮸鱼胶”或“鳘肚”，具有养血、补肾、润肺健脾和消炎作用，采用米鱼鳔，与当归、红枣适量煎汤，长期坚持食用，对再生障碍性贫血有一定疗效，大米鱼鳔与等量的酒和水炖食，可治疗男子遗精和女子白带。

目前米鱼鳔主要通过水解加工处理后形成胶料，以药品的形式进行应用，而现有的米鱼鳔蛋白水解物普遍带有腥味等不良风味，影响了米鱼鳔的进一步加工利用和其经济价值。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术而提供有效保留米鱼鳔营养成分、有效去除腥味的米鱼鳔蛋白肽的制备方法。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种上述米鱼鳔蛋白肽在水产品防腐中的应用。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种米鱼鳔蛋白肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)米鱼鳔浆液的制备

选取新鲜的米鱼鳔，清洗、破碎处理后，按照固液比1:5～1:10加入饮用水，捣碎成浆，匀浆后得米鱼鳔浆液；

(2)米鱼鳔的水解

向上述制备的鱼鳔浆液中加入乙酸，加入的乙酸与米鱼鳔的质量比为2～4:1，90℃～110℃下水解8～11h，水解完毕后，5000～15000rpm离心5～15min，取上清液即得水解液，在该水解液中加入一定量的饱和碳酸钠，使得水解液呈中性；

(3)水解液脱腥

在上述制得的水解液中加入水解液体积1％～8％的柠檬酸，30～90℃下保温20～60min；

(4)干燥

将步骤(3)制得的溶液冷冻干燥得米鱼鳔蛋白肽粉末。

本发明解决第二个技术问题所采用的技术方案为：所述米鱼鳔蛋白肽在水产品防腐保鲜中的应用。

与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明中的米鱼鳔蛋白肽制备方法中采用乙酸进行酸水解，与现有的普通酸水解方法相比，作用条件比较温和，反应过程易控、安全，同时该方法能较好地将米鱼鳔中的蛋白质转化为易于人体吸收的多肽，能较好地保留米鱼鳔中的营养成分，去除腥味，成品风味较好；制备的米鱼鳔蛋白肽对水产品中的常见细菌具有较好的抑制作用，可作为一种经济、环保的抑菌剂而广泛于水产品防腐保鲜中。

附图说明

图1为本发明实施例4中米鱼鳔蛋白肽对梅鱼菌落总数的影响；

图2为本发明实施例4中米鱼鳔蛋白肽对梅鱼鱼肉中挥发性盐基氮(TVB-N)含量的影响。

具体实施方式

以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。

实施例1：米鱼鳔蛋白肽制备

1.1米鱼鳔浆液的制备

取0.5kg新鲜、无腐败变质的米鱼鳔，经行常规的清洗、破碎处理；按照固液比1:5加入2.5kg饮用水进行组织捣碎，捣碎时使用高速组织捣碎机且其转速为8000rpm，匀浆后得米鱼鳔浆液。

1.2米鱼鳔的水解

向鱼鳔浆液中加入乙酸，加入酸的量为2kg，加入酸的量为米鱼鳔湿重的4倍，反应温度为110℃，水解时间为8小时；水解完毕，用离心机离心水解液，离心机的转速为5,000rpm，离心时间为10min，取其上清液即为水解液。向上述制得的水解液中，加入一定量的饱和碳酸钠，使其溶液变成中性。

1.3水解液的脱腥

在上述制得的水解液中加入水解液体积5％的柠檬酸在30℃条件下保温60min，加入柠檬酸能够很好地去除水解液中的腥味，最后将其溶液冷冻干燥成粉末得米鱼鳔蛋白肽粉末。

实施例2：米鱼鳔蛋白肽制备

2.1米鱼鳔浆液的制备

取0.4kg新鲜、无腐败变质的米鱼鳔，经行常规的清洗、破碎处理；按照固液比1:8加入3.2kg饮用水进行组织捣碎，捣碎时使用高速组织捣碎机且其转速为9000rpm，匀浆后得米鱼鳔浆液。

2.2米鱼鳔的水解

向鱼鳔浆液中加入乙酸，加入酸的量1.2kg，反应温度为100℃，水解时间为10小时；水解完毕，用离心机离心水解液，离心机的转速为10,000rpm，离心时间为15min，取其上清液即为水解液。通过以上制得的水解液，加入一定量的饱和碳酸钠，使其溶液变成中性。

2.3水解液的脱腥

在上述所制得的水解液中加入水解液体积8％的柠檬酸在60℃条件下保温40min，加入柠檬酸能够很好地去除水解液中的腥味，最后将其溶液冷冻干燥成粉末得米鱼鳔蛋白肽粉末。

实施例3：米鱼鳔蛋白肽制备

3.1米鱼鳔浆液的制备

取0.4kg新鲜、无腐败变质的米鱼鳔，经行常规的清洗、破碎处理；按照固液比1:10加入4kg饮用水进行组织捣碎，捣碎时使用高速组织捣碎机且其转速为10000rpm，匀浆后得米鱼鳔浆液。

3.2米鱼鳔的水解

向鱼鳔浆液中加入乙酸，加入酸的量0.8kg，反应温度为90℃，水解时间为11小时；水解完毕，用离心机离心水解液，离心机的转速为15,000rpm，离心时间为5min，取其上清液即为水解液。通过以上制得的水解液，加入一定量的饱和碳酸钠，使其溶液变成中性。

3.3水解液的脱腥

在上述所制得的水解液中加入水解液体积1％的柠檬酸在90℃条件下保温90min，加入柠檬酸能够很好地去除水解液中的腥味，最后将其溶液冷冻干燥成粉末得米鱼鳔蛋白肽粉末。

实施例4：抗菌活性试验

抑菌圈法即水平扩散法基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌物质或杀菌剂，使之接触培养基和病菌，经定温培养一定时间后，因药剂的渗透扩散作用，施药部位周围因杀死了病菌而抑制了其在培养基上的生长，从而产生抑菌圈。在一定范围内，抑菌圈直径的平方或面积与药剂浓度的对数呈直线函数关系，从而可比较供试样品杀菌活性大小。

4.1供试菌株：大肠杆菌(Escherichiacoli)，金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)，荧光假单胞菌(Pseudomonasfluorescens)，巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)，普通变形菌(Proteusbulgaris)，八叠球菌(Sarcina)，绿脓杆菌(Pseudomonasaeruginosa)，藤黄八叠球菌(Sarcinalutea)，本发明中的实验菌株由浙江海洋学院食品与医药学院水产食品安全实验室提供。

4.2细菌固体培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，其主要组成成分如下：牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，氯化钠0.5g，琼脂2g，水100ml，灭菌前用浓度2MNaOH调节pH值为7.2～7.4。4.3抗菌活性测定采用牛津杯法。

牛津杯在121℃条件下高压灭菌20min，冷却干燥备用；将受试物用水成100mg/ml溶液并用0.22μm细菌滤器过滤除菌备用；将牛津杯放置于已冷却的含菌双碟平板表面，吸取200μl的受试物稀释液分别注入牛津杯中，然后放入37℃培养36h，观察各平板抑菌圈直径大小。每组4个平板，每个平板放置2个牛津杯，重复3次，用游标卡尺测定并记录结果，抑菌圈直径取平均值。结果如表1所示，由表1可见米鱼鳔蛋白肽对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有抑制作用，且对革兰氏阴性菌的影响大于革兰氏阳性菌，其中对大肠杆菌的抑制作用较强，抑菌圈直径达到17.7±0.3mm。

表1米鱼鱼鳔蛋白肽的抑菌性能

4.4任取实施例1、2、3中制备的米鱼鳔蛋白肽，用水调制成10mg/ml溶液，将梅鱼至于该溶液中浸泡30min。于无菌环境下，将上述浸泡后的梅鱼剁碎，称取5g剁碎梅鱼鱼肉于烧杯中，量筒量取45mL灭菌生理盐水注入，并用匀浆机均质后，用移液枪吸取稀释液1mL，缓缓注入至含9mL灭菌生理盐水的无菌试管中，轻微振摇混匀，制成1:100的样品匀液。重复上述操作步骤，制成以10倍梯度逐级递增的稀释溶液。然后选取2～3个适宜稀释度溶液，用移液枪吸取1mL样品匀液于灭菌平皿内，倾注不同的选择性培养基，及时转动平皿使其摇匀，静置冷却待其凝固后，将平皿倒置并放入恒温培养箱中，于适宜温度下培养一段时间，进行菌落计数。同时设置未经米鱼鳔蛋白肽浸泡的梅鱼鱼肉样品作为对照组，操作过程同上。

实验结果如图1所示，通过图1可得，贮藏3、6、9、12、15、18天时，浸泡过的梅鱼鱼肉的菌落总数均小于未浸泡的梅鱼鱼肉，未浸泡梅鱼鱼肉在储藏18天时的菌落总数为6.814lgCFU/g，浸泡过米鱼鳔蛋白肽的梅鱼鱼肉在贮藏18天时的菌落总数为6.205lgCFU/g，说明米鱼鳔蛋白肽对细菌有明显的抑制作用。

称取5g剁碎鱼肉(鱼肉处理同上)于烧杯中，加入45mL高氯酸溶液，均质过滤，取滤液置于4℃冰箱中冷藏待测。往锥形瓶中加入10mL的硼酸，再滴入2～3滴由亚甲基蓝与甲基红制成的混合指示剂，而后置于冷凝管末端，并使冷凝管没入硼酸吸收液中。量取放置于冰箱中的滤液5mL，注入至定氮仪的反应室内，再加入1～2滴的酚酞指示剂，5mL氢氧化钠溶液，迅速盖塞后加水液封。加热将蒸汽通入反应室内，蒸馏至冷凝管中有液滴滴落，然后开始计时5min，接着将冷凝管末端移离至液面之上，接着蒸馏1min后，水洗冷凝管末端。用0.01mol/L的盐酸标准溶液滴定锥形瓶中的吸收液至蓝紫色。挥发性盐基氮的计算公式：

$X=\frac{(V_1-V_2)\×C\×14}{m\×5/100}\×100$

式中：

X：样品中挥发性盐基氮的含量，mg/100g；

V1：消耗盐酸标准溶液的体积，mL；

V2：空白消耗盐酸标准溶液的体积，mL；

C：盐酸标准溶液的实际浓度，mL；

14：与1.00mL盐酸标准滴定溶液相当的氮的质量，mg；

m：样品质量，g。

实验结果如图2所示，由图2可得，贮藏3、6、9、12、15、18天时，浸泡过的梅鱼的挥发性盐基氮均小于未浸泡的梅鱼，未浸泡梅鱼在储藏18天时的挥发性盐基氮为135.62mg/100g，浸泡过米鱼鳔蛋白肽的梅鱼在贮藏18天时的挥发性盐基氮为48.96mg/100g，说明米鱼鳔蛋白肽有显著的保鲜作用。

Claims (2)

1.一种米鱼鳔蛋白肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)米鱼鳔浆液的制备

选取新鲜的米鱼鳔，清洗、破碎处理后，按照固液比1:5～1:10加入饮用水，捣碎成浆，匀浆后得米鱼鳔浆液；

(2)米鱼鳔的水解

向上述制备的鱼鳔浆液中加入乙酸，加入的乙酸与米鱼鳔的质量比为2～4:1，90℃～110℃下水解8～11h，水解完毕后，5000～15000rpm离心5～15min，取上清液即得水解液，在该水解液中加入一定量的饱和碳酸钠，使得水解液呈中性；

(3)水解液脱腥

在上述制得的水解液中加入水解液体积1％～8％的柠檬酸，30～90℃下保温20～60min；

(4)干燥

将步骤(3)制得的溶液冷冻干燥得米鱼鳔蛋白肽粉末。

2.一种如权利要求1的制备方法所制备的米鱼鳔蛋白肽的应用，其特征在于：所述米鱼鳔蛋白肽在水产品防腐保鲜中的应用。