CN105794636B - 一种适宜四倍体连翘增殖及生根的培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及四倍体连翘的栽培技术，具体的说是一种适宜四倍体连翘增殖及生根的培养基。培养基中添加不同激素种类和浓度，对影响四倍体连翘增殖和生根培养的因素进行了比较系统地研究，适宜四倍体连翘增殖培养的培养基为MS+6‑BA 9.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L。在此条件下，组培苗的增殖系数最高，达到3.93，并且分化的小苗长势较好，没有茎尖干死以及玻璃化现象的出现；适宜四倍体连翘生根的培养基为1/2MS+IBA 0.4 mg/L+IAA 0.4 mg/L，此时组培苗生根状况较好。本发明通过研究不同浓度配比对四倍体连翘增殖及生根的影响，切实达到了四倍体连翘快速、高效繁殖的目的。
Description
技术领域
本发明涉及四倍体连翘的组织培养，尤其是在增殖及生根培养的过程中，对四倍体连翘起到关键作用的一种培养基。
背景技术
连翘（Forsythia suspensa Vahl）为木犀科连翘属落叶灌木，是我国临床常用的大宗中药材之一，也是我国城市常见的绿化树种，具有广阔的发展前景。多倍体药用植物一般具有根、茎、叶和花果的巨型性，抗逆性强，药用成分含量高等特性，因此，培育四倍体连翘植株对连翘的药用及生态作用具有重要价值。组织培养具有增殖率高，生长健壮，繁殖迅速的优点，并且在一定程度上可以保持母本的优良性状。因此，组织培养技术应用于药用植物具有深远的意义，特别是对一些资源少、品质优的连翘品种，用组培繁殖尤为重要。
发明内容
本发明的目的在于为四倍体连翘快速繁殖提供一种合适的培养基。
为实现这个目的，本发明采用的技术方案为：1、四倍体连翘增殖培养基中添加6-BA、NAA，6-BA的浓度分别为7.0、8.0、9.0、10.0 mg/L，NAA的浓度为0.05、0.1、0.2 mg/L，以不添加任何激素的MS培养基作为对照。观察并记录外植体生长情况，由统计结果筛选出适合四倍体连翘增殖的培养基配方。一种适宜四倍体连翘增殖及生根的培养基，其特征在于：适宜四倍体连翘增殖培养的培养基为MS + 6-BA 9.0 mg/L + NAA 0.05 mg/L。
2、四倍体连翘生根培养基中添加IBA、IAA， IBA的浓度为0.2、0.4、0.6 mg/L，IAA的浓度为0.2、0.4、0.6 mg/L，以不添加任何激素的1/2MS培养基作为对照。筛选出适合诱导四倍体连翘组培苗生根的培养基配方。一种适宜四倍体连翘增殖及生根的培养基，其特征在于：适宜四倍体连翘生根培养的培养基为1/2MS + IBA 0.4 mg/L + IAA 0.4 mg/L。
本发明的有益效果：本发明在四倍体连翘增殖培养基中添加不同浓度配比的6-BA、NAA，根据组培苗的增殖系数结合小苗的生长情况，筛选出最合适的浓度配比；在生根培养基中添加不同浓度配比的IBA、IAA，根据组培苗的生根情况，筛选出最合适的培养基种类。本发明通过研究不同浓度配比对四倍体连翘增殖及生根的影响，切实达到了四倍体连翘快速、高效繁殖的目的。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明做进一步说明。
1 材料选择：2013年春季，选取栽植于河北农业大学标本园内生长健壮、无病虫害的四倍体连翘一年生幼嫩枝条。
2 培养条件：本发明均选用MS作为基本培养基，附加蔗糖30 g/L，琼脂6.5 g/L，pH5.8-6.0，培养室温度为25(±2)℃，光照强度为2500 Lx，光照时间12 h/d。培养基在分装后于121℃高温下灭菌25 min。
3 外植体的选择与消毒处理：于2013年4月上旬剪取四倍体连翘植株上木质化程度较轻的一年生幼嫩枝条，将嫩枝剪成3-4 cm长的茎段，剪去叶片，仅留部分叶柄，有利于腋芽的萌发。处理完毕后用洗衣粉水洗净，自来水下反复冲洗至无泡沫为止。然后拿到超净工作台上进行消毒处理。四倍体连翘茎段外植体的最佳处理方式是75%酒精处理30 s，无菌水冲洗3次，然后用2%次氯酸钠处理7 min，无菌水冲洗4-5次，用无菌滤纸吸取残留水分。于超净工作台上将茎段切成长约1-1.5 cm长带两个腋芽的小段，将茎段接触消毒剂的切面剪掉以避免影响其从培养基中吸收养分。将处理好的茎段接种到MS培养基上进行初代培养。
4 初代培养：四倍体连翘组织培养选择茎段作为外植体，适宜四倍体连翘腋芽诱导的培养基为MS + 6-BA 2.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L。此时，大部分腋芽萌发，生长情况较好，茎段基部长出愈伤组织。
5 增殖培养：在无菌条件下，将生长状况较好的组培苗剪成带有两个腋芽，长约1cm左右的小段，转接到分化培养基上，增殖培养基为MS + 6-BA 9.0 mg/L + NAA 0.05mg/L。继代增殖培养约4-5周一次。每个处理10瓶，每瓶接种2个外植体。培养30 d后，外植体增殖系数为3.93，分化的小苗长势较好，有4-8片叶。
6 生根培养：通过增殖培养，当诱导产生的丛生芽单芽长为2 cm以上时，将其中的一部分丛生芽继续进行继代增殖培养，进一步增加组培苗的数量；另一部分进行生根培养，将诱导产生的丛生芽分成单株，剪切为长1.5 cm～2.0 cm的小茎段，接种到生根培养基上。生根培养基为1/2MS + IBA 0.4 mg/L + IAA 0.4 mg/L。每个处理5瓶，每瓶4个茎段。培养15 d后，组培苗的生根率高达78.33%，根从小苗的基部长出，根粗壮，呈辐射状排列，此时组培苗生根状况较好。
本实施例只是对本发明构思和实现的一个说明，并非对其进行限制，在本发明构思下，未经实质变换的技术方案仍然在保护范围内。
Claims (3)
1.一种适宜四倍体连翘增殖及生根的培养基，其特征在于：适宜四倍体连翘增殖培养的培养基为MS+6-BA 9.0mg/L+NAA 0.05mg/L。
2.一种适宜四倍体连翘增殖及生根的培养基，其特征在于：适宜四倍体连翘生根培养的培养基为1/2MS+IBA 0.4mg/L+IAA 0.4mg/L。
3.如权利要求1或2所述的一种适宜四倍体连翘增殖及生根的培养基，其特征在于：四倍体连翘增殖以及生根培养过程中的PH值应保证在5.8-6.0范围之内。
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| "连翘二倍体与四倍体叶片特征比较";周玉丽等;《河北林果研究》;20110331;第26卷(第1期);第14页右栏最后一段 * |
| "连翘组织培养研究进展";袁小亚等;《河北林果研究》;20140331;第29卷(第1期);第4.1.2部分以及第4.1.3部分 * |
| 四倍体连翘组培快繁技术研究;袁小亚;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》;20150315;摘要 * |
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