CN105754987A - 一种快速批量粉碎植物提取叶片生物大分子的方法 - Google Patents
一种快速批量粉碎植物提取叶片生物大分子的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105754987A CN105754987A CN201410762957.XA CN201410762957A CN105754987A CN 105754987 A CN105754987 A CN 105754987A CN 201410762957 A CN201410762957 A CN 201410762957A CN 105754987 A CN105754987 A CN 105754987A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sample
- centrifuge tube
- biomacromolecule
- pulverizes
- steel ball
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 claims abstract description 12
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000010959 steel Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 7
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 5
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 claims description 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 3
- 230000009514 concussion Effects 0.000 claims description 2
- 239000011435 rock Substances 0.000 claims description 2
- 108020005120 Plant DNA Proteins 0.000 abstract 1
- 108010064851 Plant Proteins Proteins 0.000 abstract 1
- 108020005089 Plant RNA Proteins 0.000 abstract 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 abstract 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 abstract 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 7
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000005204 segregation Methods 0.000 description 2
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- 235000017166 Bambusa arundinacea Nutrition 0.000 description 1
- 235000017491 Bambusa tulda Nutrition 0.000 description 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001477873 Cornus sanguinea Species 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 244000082204 Phyllostachys viridis Species 0.000 description 1
- 235000015334 Phyllostachys viridis Nutrition 0.000 description 1
- 239000006004 Quartz sand Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000011425 bamboo Substances 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000007096 poisonous effect Effects 0.000 description 1
- 238000005498 polishing Methods 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 description 1
Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了一种快速批量粉碎植物提取叶片生物大分子的方法，本发明具有快速、批量、用时少、不费力、成本低的特点。本发明仅使用液氮、离心管、仅小钢珠与抗冻容器，可在几分钟内粉碎若干叶片样品成粉末状，经该方法粉碎的叶片粉末，可直接用于提取植物DNA、RNA、蛋白质等生物大分子。
Description
技术领域
本发明涉及分子生物学领域，特别是一种快速批量粉碎植物叶片提取生物大分子的方法。
背景技术
分子生物学是通过研究生物大分子(核酸、蛋白质)的结构、功能和生物合成等方面来阐明各种生命现象的本质。研究生物大分子先要对其进行提取，目前提取的第一个步骤是进行样品研磨。
目前主要的实验室研磨方法是有两种：一种方法是常规的研磨样品的方法。在加有石英砂与样品研钵中加入液氮、β-巯基乙醇进行研磨；第二种方法是使用电钻研磨的方法。磨样的电钻头可以是经过打磨的没有尖锐棱角的铁钻头，也可是经过削磨的木签、竹签，选用以上的钻头，只为尽量不把1.5ml锥形底离心管磨破。在离心管中加入样品经及β-巯基乙醇（提取液），利用电钻高速转动对样品进行研磨。而这种方法缺点时容易把管子磨破，浪费样品。以上两种方法中β-巯基乙醇的作用是防止研磨时产生的高温将生物大分子氧化，但是这两种方法费时费力，一个人每次只能研磨一个样品。本发明提出一种可以大批量快速粉碎植物叶片的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种快速粉碎植物叶片提取生物的方法，开拓其在分子生物科技中的应用，特别是生物实验室中提取生物大分子的应用。
本发明的目的通过以下技术方案来实现。
一种快速批量粉碎植物叶片提取生物大分子的方法，其特征在于包括下列步骤：
1）称取要进行研磨的叶片样品；
2）把1）中的样品放入一个圆底离心管中，再加入一粒小钢珠，盖上管盖；
3）根据需要重复步骤1）、2），制作若干装有小钢珠和样品的离心管；
4）把3）中所述离心管放入抗冻容器中，并加入液氮淹过所有离心管，盖上容器盖子，10s-90s后震荡遥晃抗冻容器1-5分钟；
5）打开容器盖子，在离心管未完全解冻里取出管中小钢珠，便可得到叶片样品粉末，保存于4℃备用；
6）该粉末可用于DNA、RNA、蛋白质等生物大分子的提取。
所述步骤1）是根据实验要求称取叶片样品，叶片样品最好为植物新鲜嫩叶。
所述步骤2）离心管内径大于小钢珠直径1-10mm。
所述步骤2）中使用的小钢珠重量大于0.5g。
所述步骤4）中抗冻容器为任何不被液氮冻破的容器。
所述步骤4）中震荡遥晃可以利用仪器也可人工亲手进行震荡摇晃。
本发明与现有技术相比具有以下优点。
本发明可以一性次粉碎若干个叶片样品，一次性粉碎样品数量与抗冻容器大小相关。
本发明粉碎叶片样品用时少，不费力，粉末大小足以用来提取生物大分子。
本发明安全无毒，不添加如β-巯基乙醇有毒的生物抗氧化剂。操作过程简单不复杂。
附图说明
图1是SSR引物多形态筛选结果图；图2是群体基因分离结果图
具体实施方式
本发明的一种快速批量粉碎植物叶片提取生物大分子的方法，其特征在于包括下列步骤：
1）称取要进行研磨的叶片样品；
2）把1）中的样品放入一个圆底离心管中，再加入一粒小钢珠，盖上管盖；
3）根据需要重复步骤1）、2），制作若干装有小钢珠和样品的离心管；
4）把3）中所述离心管放入抗冻容器中，并加入液氮淹过所有离心管，盖上容器盖子，10s-90s后震荡遥晃抗冻容器1-5分钟；
5）打开容器盖子，在离心管未完全解冻里取出管中小钢珠，便可得到叶片样品粉末，保存于4℃备用；
6）该粉末可用于DNA、RNA、等生物大分子的提取。
为证明通过本发明的一种快速批量粉碎植物叶片提取生物大分子的方法，所得叶片粉末可以用以提取DNA等生物大分子。以提取DNA为例对本发明的可行性进行阐明。
（1）样品来自仲恺农业工程学院作物研究作普通玉米四交群体的亲本、F1、F2代，将样品以本发明所提供的方法粉碎至粉末。
（2）DNA提取采用CTAB法。
（3）引物为从MaizeGDB（www.maizgdb.org）筛选出500对均匀分布于玉米基因组的SSR引物。
（4）PCR反应体系与反应程序：
PCR反应体系：1μlDNATemplate(10—20ng/μl)，1μlForwardPrimer(5μmol/μl)，1μlReversePrimer(5μmol/μl)，3μl10×Taqbuffer(含20mMMg2+)，0.6μlTaqase(2U/μl)，0.6μldNTPs(10mM/μl)，补ddH2O至30μl。
反应程序为：预变性95℃5min，然后以95℃45s,45-65℃45s,72℃1min循环30到40次，72℃10min,程序结束后4℃低温保存。
（5）PCR扩增产物聚丙烯酰胺凝胶电泳
PCR扩增产物采用非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳，凝胶浓度30%，凝胶大小1801202mm,电泳缓冲液1TBA，220V恒压，电泳30min-3h.电泳结束后依程序进行银染：固定（10%乙醇、0.5%冰乙酸）10-15min，渗透（0.2%硝酸银）10-15min,蒸馏漂洗10-30s两次，显色（1.5%氢氧化钠、0.4%甲醛）适度。
经上述步骤，可得到SSR引物多形态筛选结果（见说明书附图1）以及群体基因分离结果（见说明书附图2）。可见使用本发明方法得到的叶片粉末可用于提取生物大分子提取。
Claims (3)
1.一种快速批量粉碎植物叶片提取生物大分子的方法，其特征在于包括下列步骤：
1）称取要进行研磨的叶片样品；
2）把1）中的样品放入一个圆底离心管中，再加入一粒小钢珠，盖上管盖；
3）根据需要重复步骤1）、2），制作若干装有小钢珠和样品的离心管；
4）把3）中所述离心管放入抗冻容器中，并加入液氮淹过所有离心管，盖上容器盖子，10s-90s后震荡遥晃抗冻容器1-5分钟；
5）打开容器盖子，在离心管未完全解冻里取出管中小钢珠，便可得到叶片样品粉末，保存于4℃备用；
6）该粉末可用于DNA、RNA、蛋白质等生物大分子的提取；
根据权利要求1所述的一种快速批量粉碎植物叶片提取生物大分子的方法，其特征在于：所述步骤2）中的圆底离心管可以是任何容量大小的离心管。
2.根据权利要求1所述的一种快速批量粉碎植物叶片提取生物大分子的方法，其特征在于：所述步骤3）中的抗冻容器可以为任何不被液氮冻破的容器。
3.根据权利要求1所述的一种快速批量粉碎植物叶片提取生物大分子的方法，其特征在于：所述步骤4）中震荡遥晃可以利用仪器也可人工亲手进行震荡摇晃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410762957.XA CN105754987A (zh) | 2014-12-14 | 2014-12-14 | 一种快速批量粉碎植物提取叶片生物大分子的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410762957.XA CN105754987A (zh) | 2014-12-14 | 2014-12-14 | 一种快速批量粉碎植物提取叶片生物大分子的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105754987A true CN105754987A (zh) | 2016-07-13 |
Family
ID=56336024
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410762957.XA Pending CN105754987A (zh) | 2014-12-14 | 2014-12-14 | 一种快速批量粉碎植物提取叶片生物大分子的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105754987A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108593496A (zh) * | 2018-04-25 | 2018-09-28 | 江汉大学 | 一种农作物镉离子含量的测量方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101650274A (zh) * | 2009-08-31 | 2010-02-17 | 宁波新芝生物科技股份有限公司 | 一种高通量组织研磨机及研磨方法 |
| CN102896033A (zh) * | 2012-08-22 | 2013-01-30 | 王丽华 | 一种高通量植物叶片粉碎器的使用方法 |
| CN102978200A (zh) * | 2012-12-24 | 2013-03-20 | 上海市农业生物基因中心 | 一种提取水稻dna的方法 |
| CN103018072A (zh) * | 2012-11-30 | 2013-04-03 | 安徽科技学院 | 一种集束式植物叶片采集、粉碎器的使用方法 |
| CN103275866A (zh) * | 2013-06-09 | 2013-09-04 | 河南农业大学 | 一种植物样品粉碎装置及其粉碎方法 |
| CN103882010A (zh) * | 2014-03-25 | 2014-06-25 | 北京市农林科学院 | 快速高通量提取植物基因组dna的方法 |
-
2014
- 2014-12-14 CN CN201410762957.XA patent/CN105754987A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101650274A (zh) * | 2009-08-31 | 2010-02-17 | 宁波新芝生物科技股份有限公司 | 一种高通量组织研磨机及研磨方法 |
| CN102896033A (zh) * | 2012-08-22 | 2013-01-30 | 王丽华 | 一种高通量植物叶片粉碎器的使用方法 |
| CN103018072A (zh) * | 2012-11-30 | 2013-04-03 | 安徽科技学院 | 一种集束式植物叶片采集、粉碎器的使用方法 |
| CN102978200A (zh) * | 2012-12-24 | 2013-03-20 | 上海市农业生物基因中心 | 一种提取水稻dna的方法 |
| CN103275866A (zh) * | 2013-06-09 | 2013-09-04 | 河南农业大学 | 一种植物样品粉碎装置及其粉碎方法 |
| CN103882010A (zh) * | 2014-03-25 | 2014-06-25 | 北京市农林科学院 | 快速高通量提取植物基因组dna的方法 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108593496A (zh) * | 2018-04-25 | 2018-09-28 | 江汉大学 | 一种农作物镉离子含量的测量方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106318934B (zh) | 胡萝卜β(1,2)木糖转移酶的基因全序列及用于转染双子叶植物的CRISPR/CAS9的质粒构建 | |
| Rogers et al. | Extraction of total cellular DNA from plants, algae and fungi | |
| CN103740698B (zh) | 一种热带植物多糖多酚小rna提取方法 | |
| CN103409516B (zh) | 一种斑点叉尾鮰物种的鉴定方法 | |
| CN1970751A (zh) | 一种从罗布麻属植物叶片中提取完整基因组dna的方法 | |
| CN105754987A (zh) | 一种快速批量粉碎植物提取叶片生物大分子的方法 | |
| CN105255857A (zh) | 一种茶树dna的提取方法 | |
| CN103409515B (zh) | 一种斑点叉尾鮰物种鉴定试剂盒及其使用方法 | |
| CN104694532A (zh) | 一种橡胶树白粉病菌rna的提取方法 | |
| CN103333902B (zh) | 一种提高橡胶草花青素含量的方法 | |
| Kaufman et al. | DNA isolation method for high polysaccharide Lesquerella species | |
| CN102477423B (zh) | 一种从克氏原螯虾虾壳中提取dna的方法 | |
| Fauchery et al. | Purification of fungal high molecular weight genomic DNA from environmental samples | |
| CN104031909A (zh) | 一种酒精长期保存后河蟹基因组dna的高效提取方法 | |
| CN102925430A (zh) | 适用于pcr的棉花基因组dna快速、批量制备方法 | |
| CN102140448A (zh) | 动物组织dna提取方法 | |
| CN110272896A (zh) | 一种花生基因组的提取方法 | |
| CN103243085A (zh) | 一种从绵羊毛囊组织中提取总rna的方法 | |
| Danilevich et al. | A new approach to the isolation of genomic DNA from yeast and fungi: preparation of DNA-containing cell envelopes and their use in PCR | |
| Hossen et al. | Cyto-molecular characterization of three Tacca species from Bangladesh | |
| CN103966198A (zh) | 一种植物dna的快速提取方法 | |
| KR101693616B1 (ko) | 해파리 9 종의 종 동정을 위한 28S ribosomal DNA 기원의 PCR 프라이머 | |
| Yari et al. | Optimization of a rapid DNA extraction protocol in rice focusing on age of plant and EDTA concentration | |
| CN105018472A (zh) | 一种高效提取食用菌菌丝体营养生长阶段rna的方法 | |
| CN103952399A (zh) | 一种使用含有指示剂的酚胍盐裂解液提取核糖核酸的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20160713 |