CN105734165A - 一种舒伯特气单胞菌特异性引物及其在大菱鲆养殖过程中的应用 - Google Patents

一种舒伯特气单胞菌特异性引物及其在大菱鲆养殖过程中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN105734165A
CN105734165A CN201610308350.3A CN201610308350A CN105734165A CN 105734165 A CN105734165 A CN 105734165A CN 201610308350 A CN201610308350 A CN 201610308350A CN 105734165 A CN105734165 A CN 105734165A
Authority
CN
China
Prior art keywords
aeromonas schubertii
turbot
aeromonas
specific primer
schubertii
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610308350.3A
Other languages
English (en)
Inventor
刘宏生
顾颖
张新刚
胡桓
艾海新
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Liaoning University
Original Assignee
Liaoning University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Liaoning University filed Critical Liaoning University
Priority to CN201610308350.3A priority Critical patent/CN105734165A/zh
Publication of CN105734165A publication Critical patent/CN105734165A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/689—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种舒伯特气单胞菌特异性引物及其在大菱鲆养殖过程中的应用。本发明设计的舒伯特气单胞菌特异性引物由上游引物F：GGGCCCGTTATGACCAGTTT和下游引物R：AGGAGTGATCTTGAGCTTGACC构成。本发明设计的舒伯特气单胞菌特异性引物，能有效从各常见致病菌株中区分出舒伯特气单胞菌，表现出很强的特异性和灵敏性。本发明所提供的在大菱鲆养殖过程中舒伯特气单胞菌的PCR检测方法，使得养殖过程中舒伯特气单胞菌的检测更为简便。本发明方法的确立为今后大菱鲆养殖过程中高发致病菌的检测和分析提供了必要的理论依据和完善的方法体系，同时为促进我国养殖产业的规模化健康发展奠定了基础。

Description

一种舒伯特气单胞菌特异性引物及其在大菱鲆养殖过程中的应用
技术领域
本发明属于病原微生物检测领域，具体涉及一种大菱鲆养殖过程中常见的致病菌：舒伯特气单胞菌(Aeromonasschubertii)的PCR检测方法。
背景技术
有“多宝鱼”之称的大菱鲆已被引进我国长达10年之久，凭借其优良的苗种，先进的创新模式和工业化养殖的潮流，逐渐成为全国引人注目的重要养鱼工业。这一全新产业的发展，对我国的水产经济拉动均有很大作用，并为我国北方沿海城市工业化养鱼的纵向发展奠定了雄厚的理论和实践基础。然而随着养殖规模的快速增长，养殖密度的增加，以及水体环境的恶化，一系列的疾病也随之而来。近年来在大菱鲆养殖过程中细菌性疾病的急剧爆发严重影响并制约了我国大菱鲆养殖产业的健康发展，给养殖户带来了巨大的经济损失。
发明内容
本发明的目的是提供一种对舒伯特气单胞菌具有特异性强且灵敏性高的特异性引物。
本发明的另一目的是提供一种在大菱鲆养殖过程中，可快速鉴定致病源，为养殖户挽回经济损失的大菱鲆养殖过程中舒伯特气单胞菌的PCR检测方法。
本发明采用的技术方案是：一种舒伯特气单胞菌特异性引物，所述的舒伯特气单胞菌特异性引物由上游引物F和下游引物R构成；
所述的上游引物F的序列为：GGGCCCGTTATGACCAGTTT；
所述的下游引物R的序列为：AGGAGTGATCTTGAGCTTGACC。
优选的，上述的一种舒伯特气单胞菌特异性引物，所述的舒伯特气单胞菌是Aeromonasschubertii。
一种大菱鲆养殖过程中舒伯特气单胞菌的PCR检测方法，方法如下：
1)提取大菱鲆病灶部位细菌的总DNA；
2)以所提取的DNA为模板，采用上述的舒伯特气单胞菌特异性引物，进行PCR扩增；
3)根据PCR扩增产物的琼脂糖凝胶呈像结果判断大菱鲆是否被舒伯特气单胞菌感染；如果琼脂糖凝胶呈现结果有704bp条带产生，则大菱鲆被舒伯特气单胞菌感染，否则没有被感染。
上述的一种大菱鲆养殖过程中舒伯特气单胞菌的PCR检测方法：
PCR反应条件：第一阶段：94℃1min；
第二阶段：94℃30s，60℃1min，72℃30s；30循环；
第三阶段：72℃2min；
第四阶段：4℃保存。
本发明的有益效果是：
1.本发明，设计的舒伯特气单胞菌特异性引物，能有效从各常见致病菌株中区分出舒伯特气单胞菌，表现出很强的特异性。
2.本发明，设计的舒伯特气单胞菌特异性引物，灵敏性高，可有效检出养殖过程中的舒伯特气单胞菌，其最低检测浓度可达到10-4ng/ul。
3.本发明，所提供的在大菱鲆养殖过程中舒伯特气单胞菌的PCR检测方法，使得养殖过程中舒伯特气单胞菌的检测更为简便。在大菱鲆养殖过程中，一旦有被气单胞菌感染的风险，即能够做到快速鉴定致病源，为养殖户挽回大量损失。本发明的检测方法可有效检出大菱鲆养殖过程中的高危致病菌舒伯特气单胞菌，经验证此检测方法特异性强，灵敏度高。该检测方法的确立为今后大菱鲆养殖过程中高发致病菌的检测和分析提供了必要的理论依据和完善的方法体系，不仅为今后大菱鲆养殖产业的健康发展做出了贡献，同时为促进我国养殖产业的规模化健康发展奠定了基础。
附图说明
图1是舒伯特气单胞菌特异性引物Sc的PCR反应条件优化；
其中，M:MarkerDL2000，1-6:退火温度分别为55，56，57，58，59，60℃。
图2是舒伯特气单胞菌特异性引物Sc的特异性验证；
其中，1.Aeromonasbivalvium；2.Aeromonascaviae；3-4.Aeromonashydrophila；
5.Aeromonasjandaei；6.Aeromonassalmonicida；7.Aeromonasschubertii；
8.Aeromonassobria；9.Aeromonasveronii；10.Pseudomonasaeruginosa；
11.Pseudomonasfragi；12.Pseudomonasgessardii；
13.Pseudomonashelmanticensis；14.Pseudomonaskilonensis；
15.Pseudomonasmarginalis；16.Vibrioalginolyticus；17.Vibriocyclitrophicus；
18.Vibriogigantis；M:MarkerDL2000。
图3是舒伯特气单胞菌特异性引物Sc的PCR反应灵敏性验证。
其中，M:MarkerDL2000，1-6:模板浓度分别为10，100，10-1，10-2，10-3，10-4ng/ul。
具体实施方式
下面的实施例将对本发明予以进一步的说明，但并不因此而限制本发明。
实施例1一种舒伯特气单胞菌特异性引物
(一)舒伯特气单胞菌特异性引物的设计
本实施例针对菌种舒伯特气单胞菌Aeromonasschubertii的dnaJ基因，利用MEGA6软件，设计出对舒伯特气单胞菌Aeromonasschubertii具有特异性强且灵敏性高的一对特异性引物Sc，该舒伯特气单胞菌特异性引物的具体信息如表1所示。
表1
(二)舒伯特气单胞菌特异性引物最佳PCR反应条件的探索
1、待试菌株DNA的提取
使用Ezup柱氏基因组DNA抽提试剂盒(细菌)，提取舒伯特气单胞菌(Aeromonasschubertii)菌种的DNA，具体步骤如下：
1.1)取1ml过夜培养的含有菌种舒伯特气单胞菌(Aeromonasschubertii)的菌液，加入1.5ml离心管中，室温8000rmp离心1min，弃上清，收集菌体，加入180ulBufferDigestion，再加入20ulProteinaseK溶液，震荡混匀。56℃水浴1h至细胞完全裂解。水浴过程中，每10分钟颠倒混匀一次，促进细胞裂解。
1.2)加入200ulBufferBD，充分颠倒混匀。加入BufferBD后，如有沉淀产生，可70℃水浴10分钟。
1.3)加入200ul的无水乙醇，充分颠倒混匀。加入无水乙醇后可能产生半透明纤维状悬浮物，不影响DNA的提取和应用。
1.4)将吸附柱放入收集管中，用移液器将步骤1.3)获得的溶液和半透明纤维状悬浮物全部加入吸附柱中，静置2min，在12000rmp室温离心1min，倒掉收集管中的废液。
1.5)将吸附柱重新放回收集管，加入500ulPWSolution，10000rmp离心30s，倒掉滤液。
1.6)将吸附柱重新放回收集管，加入500ulWashSolution，10000rmp离心30s，倒掉滤液。
1.7)将吸附柱重新放回收集管中，于12000rmp室温离心2min，弃去残留的WashSolution。将吸附柱打开盖子于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残留的WashSolution，WashSolution的残留会影响基因组DNA的产量和后续的实验。
1.8)取出吸附柱，放入一个新的1.5ml离心管中，加入50-100ulCEBuffer静置3min，12000rmp室温离心2min，收集DNA溶液，即为舒伯特气单胞菌(Aeromonasschubertii)的DNA。提取的DNA可立即进行下一步实验或-20℃保存。
2、舒伯特气单胞菌特异性引物最佳退火温度的探索
分别以舒伯特气单胞菌的DNA为模板做PCR扩增，并将目的引物的退火温度范围分别设置为55-60℃，PCR扩增产物在2％琼脂糖1×TAE缓冲系统中电泳，每孔加样5ul，用凝胶成像系统观察并摄影记录，根据PCR后的凝胶电泳结果确定各引物最佳退火温度。具体PCR反应条件和体系如表2所示，结果如图1。
表2目的引物最佳PCR反应探索条件
由图1可见，温度对该引物并无明显影响，但根据PCR基本原则，温度越高越有利于引物的特异性结合，故确定最佳退火温度为60℃。
(三)舒伯特气单胞菌特异性引物的特异性探索
1、待试菌株DNA的提取
使用Ezup柱氏基因组DNA抽提试剂盒(细菌)，分别提取如表3所示的不同菌种的DNA，具体步骤如上述(二)中步骤1。
2、特异性探索
分别以表3中，不同菌种的DNA为模板做PCR扩增，具体PCR反应条件和体系如表4所示，PCR后的凝胶电泳结果如图2所示。
表3待试菌株如下：
表4目的引物最佳PCR反应条件
由图2可见，该特异性引物在气单胞菌属内，以及假单胞菌和弧菌属内均表现出很强的特异性，只能和目的菌株舒伯特气单胞菌产生特异性扩增，而未和非目的菌株产生特异性扩增。故可见其表现出很强的特异性。
(四)舒伯特气单胞菌特异性引物的灵敏性的探索
1、待试菌株DNA的提取
使用Ezup柱氏基因组DNA抽提试剂盒(细菌)，提取舒伯特气单胞菌(Aeromonasschubertii)菌种的DNA，具体步骤如上述(二)中步骤1。
2、灵敏性的探索
将舒伯特气单胞菌的DNA浓度调至10ng/ul，并且依次稀释为100、10-1、10-2、10-3、10- 4ng/ul，分别取2ulDNA作为PCR反应模板，具体PCR反应条件和体系如表5所示，PCR后的凝胶电泳结果如图3所示。
表5目的引物最佳PCR反应探索条件
由图3可见，该引物在舒伯特气单胞菌DNA浓度为10、100、10-1、10-2、10-3、10-4ng/ul时均可产生特异性扩增，其最低检测浓度可达到10-4ng/ul。
实施例2一种大菱鲆养殖过程中舒伯特气单胞菌的PCR检测方法
方法如下：
1、提取大菱鲆病灶部位细菌的总DNA；
将其病灶处组织用1ml无菌水反复冲洗，至少三次，然后收集液体，使用Ezup柱氏基因组DNA抽提试剂盒(细菌)，提取大菱鲆病灶部位细菌的总DNA，具体步骤如上述实例1中(二)的步骤1。
2、以DNA为模板，采用实施例1所述的舒伯特气单胞菌特异性引物，利用PCR方法扩增，得到PCR产物；
上游引物F:GGGCCCGTTATGACCAGTTT
下游引物R:AGGAGTGATCTTGAGCTTGACC
PCR反应条件：第一阶段：94℃1min；
第二阶段：94℃30s，60℃1min，72℃30s；30循环；
第三阶段：72℃2min；
第四阶段：4℃保存。
3、PCR扩增产物在2％琼脂糖1×TAE缓冲系统中电泳，每孔加样5ul，用凝胶成像系统观察并摄影记录。
4、判断标准：根据PCR扩增产物的琼脂糖凝胶呈像结果判断大菱鲆是否被舒伯特气单胞菌感染；如果琼脂糖凝胶呈现结果有704bp条带产生，则大菱鲆被舒伯特气单胞菌感染，否则没有被感染。
制作感染舒伯特气单胞菌的大菱鲆模型，然后对该特异性引物进行多次测试，测试结果表明使用该引物进行舒伯特气单胞菌结果准确性高；其中感染舒伯特气单胞菌的7尾大菱鲆检测率为100％，未感染舒伯特气单胞就的12尾大菱鲆的未检出率也为100％，综上所述，该特异性引物可准确检出舒伯特气单胞就，检测结果准确率达到100％。

Claims (5)

1.一种舒伯特气单胞菌特异性引物，其特征在于：所述的舒伯特气单胞菌特异性引物由上游引物F和下游引物R构成；
所述的上游引物F的序列为：GGGCCCGTTATGACCAGTTT；
所述的下游引物R的序列为：AGGAGTGATCTTGAGCTTGACC。
2.根据权利要求1所述的一种舒伯特气单胞菌特异性引物，其特征在于：所述的舒伯特气单胞菌是Aeromonasschubertii。
3.权利要求1或2所述的舒伯特气单胞菌特异性引物在大菱鲆养殖过程中的应用。
4.一种大菱鲆养殖过程中舒伯特气单胞菌的PCR检测方法，其特征在于方法如下：
1)提取大菱鲆病灶部位细菌的总DNA；
2)以所提取的DNA为模板，采用权利要求1或2所述的舒伯特气单胞菌特异性引物，进行PCR扩增；
3)根据PCR扩增产物的琼脂糖凝胶呈像结果判断大菱鲆是否被舒伯特气单胞菌感染；如果琼脂糖凝胶呈现结果有704bp条带产生，则大菱鲆被舒伯特气单胞菌感染，否则没有被感染。
5.根据权利要求4所述的一种大菱鲆养殖过程中舒伯特气单胞菌的PCR检测方法，其特征在于：
PCR反应条件：第一阶段：94℃1min；
第二阶段：94℃30s，60℃1min，72℃30s；30循环；
第三阶段：72℃2min；
第四阶段：4℃保存。
CN201610308350.3A 2016-05-11 2016-05-11 一种舒伯特气单胞菌特异性引物及其在大菱鲆养殖过程中的应用 Pending CN105734165A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610308350.3A CN105734165A (zh) 2016-05-11 2016-05-11 一种舒伯特气单胞菌特异性引物及其在大菱鲆养殖过程中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610308350.3A CN105734165A (zh) 2016-05-11 2016-05-11 一种舒伯特气单胞菌特异性引物及其在大菱鲆养殖过程中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105734165A true CN105734165A (zh) 2016-07-06

Family

ID=56288282

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610308350.3A Pending CN105734165A (zh) 2016-05-11 2016-05-11 一种舒伯特气单胞菌特异性引物及其在大菱鲆养殖过程中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105734165A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106148379A (zh) * 2016-07-26 2016-11-23 中国水产科学研究院珠江水产研究所 一种绿色荧光蛋白基因标记鳢源舒伯特气单胞菌的方法
CN108148815A (zh) * 2017-12-11 2018-06-12 中国水产科学研究院珠江水产研究所 一株鱼类细菌的噬菌体及其应用
CN108642195A (zh) * 2018-06-26 2018-10-12 中国水产科学研究院珠江水产研究所 一种舒伯特气单胞菌TaqMan-MGB实时荧光定量PCR检测方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102965438A (zh) * 2012-11-16 2013-03-13 中国水产科学研究院珠江水产研究所 一种致病性鳢源舒伯特气单胞菌的双重pcr检测引物组、试剂盒及方法
CN103571950A (zh) * 2013-10-15 2014-02-12 浙江省淡水水产研究所 一种舒伯特气单胞菌快速检测试剂盒及其检测方法
CN105420373A (zh) * 2015-12-22 2016-03-23 于辉 同时检测三种气单胞菌的多重pcr引物组及探针和检测方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102965438A (zh) * 2012-11-16 2013-03-13 中国水产科学研究院珠江水产研究所 一种致病性鳢源舒伯特气单胞菌的双重pcr检测引物组、试剂盒及方法
CN103571950A (zh) * 2013-10-15 2014-02-12 浙江省淡水水产研究所 一种舒伯特气单胞菌快速检测试剂盒及其检测方法
CN105420373A (zh) * 2015-12-22 2016-03-23 于辉 同时检测三种气单胞菌的多重pcr引物组及探针和检测方法

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106148379A (zh) * 2016-07-26 2016-11-23 中国水产科学研究院珠江水产研究所 一种绿色荧光蛋白基因标记鳢源舒伯特气单胞菌的方法
CN108148815A (zh) * 2017-12-11 2018-06-12 中国水产科学研究院珠江水产研究所 一株鱼类细菌的噬菌体及其应用
CN108642195A (zh) * 2018-06-26 2018-10-12 中国水产科学研究院珠江水产研究所 一种舒伯特气单胞菌TaqMan-MGB实时荧光定量PCR检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104862420B (zh) Rpa‑侧流层析检测口蹄疫病毒气溶胶的引物、探针及试剂盒
CN109609688A (zh) 鹅星状病毒、鹅副黏病毒、鹅细小病毒多重pcr检测引物对及检测方法和应用
US11725252B2 (en) PCR detection kit for rapidly identifying Salmonella of specific serotypes
CN104059975B (zh) 对普罗威登斯菌o3，o4，o8，o12，o13和o20特异的核苷酸及其应用
CN105734165A (zh) 一种舒伯特气单胞菌特异性引物及其在大菱鲆养殖过程中的应用
CN113151522A (zh) 基于lfd-rpa技术的水稻细菌性条斑病菌检测试剂盒及其引物探针组合物与应用
CN110283936A (zh) 一种非洲猪瘟病毒lamp-hnb可视化检测试剂盒
CN114634990A (zh) 一种用于检测鰤诺卡氏菌的rpa引物、探针以及检测方法
CN104263845B (zh) 一种同时检测猪肺炎支原体、猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的三重pcr方法
CN105734166A (zh) 一种多重pcr引物及其在大菱鲆养殖过程中的应用
CN103468806B (zh) 扇贝致病性灿烂弧菌Vibrio splendidus的快速检测方法
CN104342496B (zh) 一种快速检测、鉴定李斯特属细菌的方法
CN105755156A (zh) 一种杀鲑气单胞菌特异性引物及其在大菱鲆养殖过程中的应用
WO2015180484A1 (zh) 对普罗威登斯菌031，041，042，043和050特异的核苷酸及其应用
CN106244690B (zh) 一种快速鉴定肠炎沙门菌、鸡白痢/鸡伤寒沙门菌以及都柏林沙门菌的多重pcr检测试剂盒
CN106086209B (zh) 一种快速鉴定鸡白痢和鸡伤寒沙门菌的pcr检测试剂盒
CN103060447B (zh) 四种菌的三重实时荧光pcr检测引物、探针、检测试剂盒和检测方法
AU2019100071A4 (en) Pcr detection kit for rapidly identifying salmonella of specific serotypes
CN106435007A (zh) 一种荧光定量pcr检测猪丹毒杆菌的引物、探针、试剂盒及方法
CN103952483B (zh) 利用dpo-pcr方法检测溶藻弧菌的dpo引物序列及检测试剂盒
CN108103152A (zh) 一种鳗利斯顿氏菌快速检测方法
CN105886637A (zh) 一种温和气单胞菌特异性引物及其在大菱鲆养殖过程中的应用
CN105969850A (zh) 一种嗜水气单胞菌特异性引物及其在大菱鲆养殖过程中的应用
CN106868198A (zh) 一种同时检测鲇形目鱼类四种致病菌的多重pcr引物组及检测方法
CN105132554A (zh) 一种棘腹蛙感染腐败希瓦氏菌的pcr检测试剂盒及检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20160706

RJ01 Rejection of invention patent application after publication