CN105686960A - 牙齿抗敏组合物 - Google Patents

Abstract

本申请涉及包含羟基磷灰石、多羧基化合物、可溶性钙和口腔可接受的载体的口腔护理组合物，包含羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙的含水混合液及其用于缓解和预防牙齿敏感的用途。本申请发现，所述口腔护理组合物中的羟基磷灰石不仅能够封堵牙本质小管的开口，还能够深度进入到牙本质小管的内部数十微米的深度。所述口腔护理组合物可以通过将所述含水混合液与口腔可接受的载体混合制备得到。所述含水混合液可以通过将多羧基化合物、羟基磷灰石和可溶性钙在水溶液中混合制备得到。

Description

牙齿抗敏组合物

技术领域

本发明涉及口腔护理领域，具体涉及可用于封堵牙本质小管的组合物、其制备方法及其用途。

背景技术

牙本质过敏症是口腔科的常见病、多发病，也是临床上牙痛的常见原因之一。牙本质过敏症的发病机制尚不明确，但是Brannstrom等人(BrannstromM,AstromA.Thehydrodynamicsofthedentine；itspossiblerelationshiptodentinalpain.IntDentJ,1972,22(2):219～227)提出的流体动力学说目前已被广泛接受。流体动力学认为，牙本质小管中存在着牙本质小管液，当多种原因如牙龈萎缩或牙齿酸蚀导致牙本质小管口过度开放暴露时，外界的各种刺激(温度、化学、机械等)将导致牙本质小管内的体液过度内外流动，并机械刺激对压力十分敏感的牙髓神经末梢，产生冲动，传导痛觉。Absi等人(AbsiEG,AddyM,AdamsD.Dentinehypersensitivity:astudyofthepatencyofdentinaltubulesinsensitiveandnon-sensitivecervicaldentine.JClinPeriodontol,1987,14(5):280-284)的研究表明，敏感牙本质表面单位面积的牙本质小管开放数量和平均直径为不敏感的数倍，导致牙本质小管液的流动速度高于不敏感的100倍以上。所以封堵牙本质小管，降低牙本质的渗透性，以减少牙本质内的液体流动，是治疗牙本质过敏的根本途径。

关于通过封堵牙本质小管治疗牙本质敏感的脱敏材料，科研工作者也进行广泛的研究，如现在已被使用的锶盐、草酸盐材料，这些材料通过在牙本质表面沉积形成沉淀封堵牙本质小管。虽然体外实验时这些材料可以有效封堵牙本质小管，但是刷牙等对牙齿的摩擦很容易将这些沉淀物清除，使牙本质小管重新暴露，因此这些材料的抗敏持久性有待于进一步研究。

羟基磷灰石(hydroxyapatite,HAP)是牙齿的重要组成成分，具有良好的生物相容性。纳米羟基磷灰石(NanoHAP)由于其小尺寸效应使其具有更好的吸附与再矿化性能，被认为是有前景的脱敏材料，在牙科以及口腔护理领域引起国内外的广泛关注。柠檬酸根在抑制HAP生长以及控制HAP大小两方面起重要作用(BaoquanXieandGeorgeH.Nancollas,Howtocontrolthesizeandmorphologyofapatitenanocrystalsinbone.PNAS2010,107(52):22369-22370)。柠檬酸根与人体具有较好的生物相容性，对羟基磷灰石的生长以及再矿化起重要的作用。但至今未发现能使羟基磷灰石深入牙本质小管内的封堵方法。

发明内容

本发明提供一种可进入牙本质小管内部而封堵牙本质小管的组合物、其制备方法以及用途。

在一方面，本发明提供了一种口腔护理组合物，其包含羟基磷灰石、多羧基化合物、可溶性钙和口腔可接受的载体。在某些实施方式中，所述口腔护理组合物中的羟基磷灰石能够进入牙本质小管。在某些实施方式中，所述羟基磷灰石能够进入牙本质小管至少约5微米深。在某些实施方式中，所述多羧基化合物选自下组：柠檬酸根化合物，例如柠檬酸钾、柠檬酸钠等，聚天冬氨酸盐，例如聚天冬氨酸钠、聚天冬氨酸钾等，亚氨基二琥珀酸盐，例如亚氨基二琥珀酸钾、亚氨基二琥珀酸钠等，2-膦酸基丁烷-1，2，4-三羧酸盐，例如2-膦酸基丁烷-1，2，4-三羧酸四钠等，聚丙烯酸盐，例如聚丙烯酸钠、聚丙烯酸钾等。

在某些实施方式中，所述可溶性钙浓度(ppm)的范围为约7.34ppm–约800ppm。在某些实施方式中，所述可溶性钙的摩尔浓度(mol/L)：多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)的比例范围为约0.00178-约0.361。

在某些实施方式中，所述口腔护理组合物的特征在于：1)羟基磷灰石在组合物中的质量百分比(w/w)(以干重计)范围为约0.01％到约50％；2)多羧酸根在组合物中的质量百分比(w/w)范围(以干重计)为约0.001％到约30％；以及3)多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)：羟基磷灰石分子的摩尔浓度(mol/L)的比例范围为约1.238到约99.041。

在某些实施方式中，在所述口腔护理组合物中，所述羟基磷灰石的质量百分比(w/w)的范围为约0.1％-约20％。在某些实施方式中，在所述口腔护理组合物中，所述多羧基化合物中的多羧酸根在口腔护理组合物中的质量百分比(w/w)的范围为约0.01％-约12％，优选地为约0.0874％—约6.995％。在某些实施方式中，所述口腔可接受的载体包括增稠剂、磨擦剂、表面活性剂、调味剂中的一种或多种。在某些实施方式中，所述增稠剂包括黄原胶、卡拉胶或羧甲基纤维素钠中的一种或多种。在某些实施方式中，所述调味剂包含水杨酸甲酯和/或丁香酚。在某些实施方式中，所述口腔护理组合物进一步含有一种或多种活性成分。在某些实施方式中，所述活性成分包括抗龋剂、抗敏剂、和/或抗菌剂。在某些实施方式中，所述抗龋剂包含氟化物离子源。在某些实施方式中，所述抗敏剂包含钾离子源。在某些实施方式中，所述口腔护理组合物为牙膏、凝胶或漱口水。在某些实施方式中，所述口腔护理组合物为牙贴、口腔喷剂或牙粉。

在另一方面，本发明提供了制备口腔护理组合物的方法，其包括将多羧基化合物、羟基磷灰石、可溶性钙与口腔可接受的载体混合。

在另一方面，本发明提供了包含羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙的含水混合液。在某些实施方式中，在所述混合液中，所述可溶性钙的摩尔浓度(mol/L)：多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)的比例范围为约0.00178-约0.361。在某些实施方式中，在所述混合液中，所述多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)：羟基磷灰石分子的摩尔浓度(mol/L)的比例范围为约1.238到约99.041。在某些实施方式中，在所述混合液中，所述羟基磷灰石的颗粒大小的范围为约10nm到约100nm，优选地，为约20nm到约50nm。在某些实施方式中，所述混合液的pH值为约7到约14。在某些实施方式中，所述含水混合液进一步包含金属离子，例如铜离子、锌离子、银离子或其任意组合。在某些实施方式中，所述金属离子能够与多羧基化合物中的羧基相互作用。

在另一方面，本发明提供了一种制备口腔护理组合物的方法，其包括将所述的含水混合液与口腔可接受的载体混合。

在另一方面，本发明提供一种填充牙本质小管的方法，包括用本申请提供的口腔护理组合物接触牙本质，以允许所述羟基磷灰石进入牙本质小管。

在某些实施方式中，所述口腔护理组合物是牙膏，所述方法包括用所述牙膏刷牙，以允许所述羟基磷灰石进入牙本质小管。在某些实施方式中，所述口腔护理组合物是凝胶，所述方法包括用所述凝胶刷牙，或用所述凝胶与牙齿接触，以允许所述羟基磷灰石进入牙本质小管。在某些实施方式中，所述口腔护理组合物是漱口水，所述方法包括用所述漱口水接触牙齿，以允许所述羟基磷灰石进入牙本质小管。

在另一方面，本发明提供一种具有牙本质小管的牙科材料，其中在所述牙本质小管中填充有羟基磷灰石。

在某些实施方式中，其中所述牙科材料是牙齿。在某些实施方式中，所述羟基磷灰石在所述牙小管中的填充深度为至少约5微米、至少约10微米、至少约15微米、至少约20微米、至少约30微米、至少约40微米、至少约50微米、至少约60微米、或至少约70微米。在某些实施方式中，所述牙小管的直径为约1微米-约4微米，例如至少约1微米、至少约2微米、至少约3微米、至少约4微米。

在另一方面，本发明提供了包含羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙的含水混合液在制备用于缓解或预防牙齿敏感的口腔护理组合物中的用途。

在某些实施方式中，本发明提供了包含羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙的含水混合液在制备用于填充牙齿中的牙本质小管的口腔护理组合物中的用途。

在另一方面，本发明提供了制备本申请所述的包含羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙的含水混合液的方法，其包括将多羧基化合物、羟基磷灰石和可溶性钙在水溶液中混合。在某些实施方式中，所述多羧基化合物选自下组：柠檬酸根化合物、聚天冬氨酸盐、亚氨基二琥珀酸盐、2-膦酸基丁烷-1，2，4-三羧酸盐、聚丙烯酸盐。

附图说明

图1是短棒状NanoHAP原料(原料1)的扫描电子显微镜(SEM)图。

图2是针状NanoHAP原料(原料2)的扫描电子显微镜(SEM)图。

图3显示了NanoHAP(原料1)-柠檬酸钾-可溶性钙悬浮液(悬浮液1-I～1-VIII)的Zeta电位值结果，其中NanoHAP、柠檬酸钾的比例为1.25:0、1.25:0.05、1.25:0.5、1.25:1、1.25:2、1.25:4、1.25:8和1.25:16。

图4显示了NanoHAP(原料2)-柠檬酸钾-可溶性钙悬浮液(悬浮液2-IV～2-XI)的Zeta电位值结果，其中NanoHAP、柠檬酸钾的比例为1.25:0、1.25:0.05、1.25:0.5、1.25:1、1.25:2、1.25:4、1.25:8和1.25:16。

图5是不同放大倍数的垂直于牙本质小管观测面模型(模型A)的扫描电子显微镜(SEM)图。其中，图5(a)是放大500倍的模型A的SEM图；图5(b)是放大5000倍的模型A的SEM图。

图6是不同放大倍数的平行于牙本质小管观测面模型(模型B)的扫描电子显微镜(SEM)图。其中，图6(a)是放大1000倍的模型B的SEM图；图6(b)是放大10000倍的模型B的SEM图。

图7是经两种市售的NanoHAP分别处理的牙本质小管模型(模型A)的扫描电子显微镜(SEM)图，图7(a)和图7(b)分别对应于图1和图2中的两种NanoHAP。

图8是两种市售的NanoHAP经柠檬酸根和可溶性钙改性后，分别处理的牙本质小管模型(模型A)的扫描电子显微镜(SEM)图。图8(a)和图8(b)分别对应于图1和图2中的两种NanoHAP。

图9是经悬浮液1”-I(NanoHAP：柠檬酸钾＝2.25:0)处理的牙本质小管的扫描电子显微镜(SEM)图。图9(a)和图9(b)是垂直于牙本质小管的观测面图(模型A)，分别放大1000倍和20000倍。图9(c)和图9(d)是平行于牙本质小管的观测面图(模型B)，分别放大1000倍和5000倍。

图10是经悬浮液1”-II(NanoHAP：柠檬酸钾＝2.25:0.6)处理的牙本质小管的扫描电子显微镜(SEM)图。其中，图10(a)和图10(b)是垂直于牙本质小管的观测面图(模型A)，分别放大1000倍和20000倍。图10(c)和图10(d)是平行于牙本质小管的观测面图(模型B)，分别放大1000倍和10000倍。

图11是经悬浮液1”-III(NanoHAP：柠檬酸钾＝2.25:1.2)处理的牙本质小管的扫描电子显微镜(SEM)图。其中，图11(a)和图11(b)是垂直于牙本质小管的观测面图(模型A)，分别放大1000倍和20000倍。图11(c)和图11(d)是平行于牙本质小管的观测面图(模型B)，分别放大1000倍和10000倍。

图12是经悬浮液1”-IV(NanoHAP：柠檬酸钾＝2.25:2)处理的牙本质小管的扫描电子显微镜(SEM)图。其中，图12(a)和图12(b)是垂直于牙本质小管的观测面图(模型A)，分别放大1000倍和20000倍。图12(c)和图12(d)是平行于牙本质小管的观测面图(模型B)，分别放大1000倍和10000倍。

图13是经悬浮液2”-I(NanoHAP：可溶性钙＝2.25:4)处理的牙本质小管的扫描电子显微镜(SEM)图。其中，图13(a)是放大10000倍的垂直于牙本质小管的观测面图(模型A)，图13(b)是放大10000倍的平行于牙本质小管的观测面图(模型B)。

图14是经悬浮液2”-II(NanoHAP：可溶性钙＝2.25:56.97)处理的牙本质小管的扫描电子显微镜(SEM)图。其中，图14(a)和图14(b)分别是放大500倍和5000倍的垂直于牙本质小管的观测面图(模型A)。

图15是经悬浮液2”-II(NanoHAP：可溶性钙＝2.25:56.97)、2”-III(NanoHAP：可溶性钙＝2.25:113.94)、2”-IV(NanoHAP：可溶性钙＝2.25:224.89)、2”-V(NanoHAP：可溶性钙＝2.25:323.84)处理的牙本质小管的扫描电子显微镜(SEM)图。其中，图15(a)是放大10000倍的经悬浮液2”-II处理的平行于牙本质小管的观测面图(模型B)，图15(b)是放大10000倍的经悬浮液2”-III处理的平行于牙本质小管的观测面图(模型B)，图15(c)是放大10000倍的经悬浮液2”-IV处理的平行于牙本质小管的观测面图(模型B)，图15(d)是放大5000倍的经悬浮液2”-V处理的平行于牙本质小管的观测面图(模型B)。

图16显示了按照本发明的制备工艺制备的膏体。

具体实施方式

本发明提供一种可进入牙本质小管内部而封堵牙本质小管的组合物、其制备方法以及用途。

牙本质是牙齿的重要组成部分。牙本质中排列分布有牙本质小管，自牙髓端向釉牙本质界面辐射。通常认为，当牙本质小管在牙本质表面的开口暴露时，遇到冷、热、酸、甜、机械或化学等刺激时，牙髓神经末梢兴奋，产生短暂的疼痛即牙本质敏感症状。有研究表明，与牙本质不敏感的个体相比，牙本质敏感的个体中牙本质小管开放的数量更多，平均直径更大。因此，可以通过封堵牙本质小管降低牙本质的渗透性来缓解或治疗牙本质敏感。

牙本质的重要组成成分是羟基磷灰石，简称HAP。HAP具有良好的生物相容性，可用于封堵牙本质小管，但在实际使用中的封堵效率却并不理想，这大大限制了HAP在牙本质小管的封堵中的应用。本发明通过改变HAP的表面特性，增加了HAP与牙本质表面的亲和力，使其能够深度进入牙本质小管，这大大提高了HAP脱敏材料的使用效率，从根本上实现了持久有效的抗敏。

特别地，本发明提供了HAP、多羧基化合物和可溶性钙的组合物，其能够促进HAP深度进入牙本质小管。多羧基化合物与人体具有较好的生物相容性，对HAP的生长以及再矿化起重要的作用。钙是HAP的构势离子，对HAP的表面化学结构以及表面电性具有重要的影响。研究发现，这三种成分的组合物可以使HAP深度进入牙本质小管，从而为牙本质敏感的根除提供可能性。

口腔护理组合物

在一方面，本申请提供了一种口腔护理组合物，其包含羟基磷灰石、多羧基化合物、可溶性钙和口腔可接受的载体。在某些实施方式中，所述口腔护理组合物中的羟基磷灰石能够进入牙本质小管。在某些实施方式中，所述羟基磷灰石能够进入牙本质小管至少约5微米深。

“进入”在本申请中是指，羟基磷灰石深入到牙本质小管内部至少约5微米深，例如，至少约10微米、至少约20微米、至少约25微米、至少约30微米、至少约35微米、至少约40微米、至少约50微米等。进入牙本质小管内部的羟基磷灰石能够有效地降低牙本质的渗透性，减少牙本质内的液体流动。一般认为，与只在牙本质小管表面沉积相比，进入牙本质小管内部的封堵具有更显著和持久的效果，从而更有效地治疗牙本质过敏。

本发明意想不到地发现，多羧基化合物和可溶性钙能对羟基磷灰石表面进行改性，提高羟基磷灰石与牙齿或牙本质或牙本质小管的相互作用，不仅使羟基磷灰石沉积在牙本质表面，更使其能够深度进入牙本质小管内部。

本发明还意想不到地发现，多羧基化合物和可溶性钙还能对羟基磷灰石表面进行改性，改性后的羟基磷灰石分散更均匀，不仅具有较好的封堵牙本质小管开口的效果，并可以深度进入牙本质小管。甚至一些原本由于物理性质不佳而不具有封堵效果的羟基磷灰石，在加入多羧基化合物和可溶性钙后，也能够具有很好的封堵牙本质小管开口的效果并且深度进入牙本质小管。

在某些实施方式中，本申请所述的羟基磷灰石是纳米羟基磷灰石。纳米羟基磷灰石由于其小尺寸效应使其具有更好的吸附与再矿化性能，封堵牙小管开口的效果更好，并且在本发明的技术方案中能够深度进入牙本质小管。

“纳米羟基磷灰石”在本申请中是指颗粒大小小于1微米的羟基磷灰石。在某些实施方式中，在所述口腔护理组合物中，所述羟基磷灰石的颗粒大小的范围为约10nm到约100nm。口腔护理组合物中的羟基磷灰石颗粒可以在电子显微镜下观察和计数。例如，可以将所述口腔护理组合物用水或其它合适的溶剂稀释，通过不同的离心速率或其它本领域熟知的手段将羟基磷灰石与微米级的磨料或其它微米级不溶固体分离，干燥。取适当的样本，置于样品台上，在电子显微镜下观察，计数选定视野下羟基磷灰石颗粒的总数，并且对其中在预设粒径范围内的羟基磷灰石颗粒计数，计算得到预设粒径的羟基磷灰石颗粒占总颗粒数的百分比。在某些实施方式中，在所述口腔护理组合物中，至少约50％、约60％、约70％、约80％、或约90％的羟基磷灰石颗粒的粒径不超过约100纳米；或者至少约50％、约60％、约70％、约80％、或约90％的羟基磷灰石颗粒的粒径不超过约90纳米；或者至少约50％、约60％、约70％、约80％、或约90％的羟基磷灰石颗粒的粒径不超过约80纳米；或者至少约50％、约60％、约70％、约80％、或约90％的羟基磷灰石颗粒的粒径在约10纳米到约100纳米之间；或者至少约50％、约60％、约70％、约80％、或约90％的羟基磷灰石颗粒的粒径在约20纳米到约100纳米之间；或者至少约50％、约60％、约70％、约80％、或约90％的羟基磷灰石颗粒的粒径在约30纳米到约100纳米之间；或者至少约50％、约60％、约70％、约80％、或约90％的羟基磷灰石颗粒的粒径在约40纳米到约100纳米之间。

在某些实施方式中，在所述口腔护理组合物中，羟基磷灰石在口腔护理组合物中的质量百分比(w/w)范围为约0.01％到约50％，更优选地为约0.1％-约20％。例如，羟基磷灰石在口腔护理组合物中的质量百分比(w/w)范围可以为，约0.01％-约40％、约0.01％-约30％、约0.01％-约20％、约0.01％-约15％、约0.01％-约10％、约0.01％-约5％、约0.1％-约20％、约0.1％-约15％、约0.1％-约10％、约0.1％-约5％、约0.1％-约4.5％、约0.75％-约4.5％、约0.75％-约5％、约0.75％-约10％、约0.75％-约15％、约0.75％-约20％、约1％-约4.5％、约1.25％-约4.5％、约1.5％-约4.5％、约1.8％-约4.5％、或约2.25％-约4.5％等。在某些实施方式中，在所述口腔护理组合物中，羟基磷灰石在口腔护理组合物中的质量百分比(w/w)为约0.75％、约1％、约1.25％、约1.5％、约1.8％、约2.25％、约4.5％，以及以上述各点为端点任意组合而成的数值范围，如同这些数值范围在本申请中已经一一列出一样。在一些实施方式中，羟基磷灰石在口腔护理组合物中的含量可以通过口腔护理组合物的配方计算得到。

“可溶性钙”在本申请中是指，能够在溶剂(例如水)或基质(例如牙膏)中不以沉淀物的形式存在的钙。可溶性钙可以包括当分散在溶剂或基质中后，以离子形式存在的钙、以络合物或螯合物形式存在的钙、和以可分散的结合物形式存在的钙(比如与蛋白结合的钙)。可溶性钙主要区别于以不溶物形式存在的钙，如羟基磷灰石晶体中的钙。可溶性钙可以通过适当的方式获得。在某些实施方式中，可溶性钙来源于羟基磷灰石原料中的杂质，例如在羟基磷灰石的制备过程中由于反应不完全而残留的可溶性钙。在某些实施方式中，可溶性钙来源于羟基磷灰石的分解产物，例如，羟基磷灰石在酸性条件下或在一些螯合剂作用下或两种方式同时作用时可分解产生可溶性钙。在某些实施方式中，可溶性钙来源于外源加入的含钙化合物，例如可以将可溶性含钙化合物分散在溶剂中，优选地，分散在水中或水溶液中，从而形成可溶性钙。可溶性含钙化合物的固体可以是含钙化合物粉末、晶体等适合分散和溶解的固体形式。

可以通过本领域技术人员公知的方法测定可溶性钙浓度，例如原子吸收光谱、电感耦合等离子体发射光谱等方法。在某些实施方式中，使用电感耦合等离子体发射光谱(ICP-AES)测试可溶性钙浓度。该方法是把待测溶液经雾化装置形成气溶胶，经石英管喷入等离子体炬内，样品被分解形成激发态的原子、离子状态，这些激发态的粒子回到稳定的基态时要放出一定的能量，表现为一定波长的光谱，测定每种元素特有的谱线和强度，和标准溶液相比，就可以知道样品中所含元素的种类和数量。该方法通常包括以下步骤：精确称量一定重量的口腔护理组合物样品(例如牙膏或者凝胶或漱口水)并溶于水中，离心后取上清液，将上清液进行消解处理以完全消解其中的有机物，再测试所得消解产物中的钙元素的发射谱线和强度，与钙离子标准溶液的标准曲线比较即可推知样品中的可溶钙的浓度。可以使用本领域公知的适当的方法进行消解，包括但不限于使用高纯浓硝酸进行消解，或者微波消解法等，只要能完全消解上清液中的有机物并且不引入其他的钙源即可。

在某些实施方式中，在所述口腔护理组合物中，所述可溶性钙浓度(以ppm计)的范围为约7.34ppm–约800ppm。在本申请中，ppm是指可溶性钙的质量占口腔护理组合物的质量的百万分比，具体计算公式为ppm＝(可溶性钙的质量/口腔护理组合物的质量)×1000000。优选地，所述可溶性钙浓度(ppm)的范围为约7.34ppm-约739ppm、约8.33ppm–约739ppm、约8.92ppm–约739ppm、约13.25ppm–约739ppm、约14.4ppm-约739ppm、约14.84ppm–约739ppm、约28.4ppm–约739ppm、约33.8ppm–约739ppm、约43ppm–约739ppm、约48.5ppm–约739ppm、约48.71ppm–约739ppm、约50.0ppm–约739ppm、约56.97ppm–约739ppm、约65.13ppm–约739ppm、约76.5ppm–约739ppm、约87.75ppm–约739ppm、约87.88ppm–约739ppm、约98.5ppm–约739ppm、约109.4ppm–约739ppm、约113.94ppm–约739ppm、约157.87ppm–约739ppm、约159.5ppm–约739ppm、约162ppm–约739ppm、约168ppm–约739ppm、约185.34ppm–约739ppm、约224.89ppm–约739ppm、约234ppm–约739ppm、约238.5ppm–约739ppm、约308ppm–约739ppm、约312ppm–约739ppm、约323.84ppm–约739ppm、约341ppm–约739ppm、约354ppm–约739ppm、约395.80ppm–约739ppm、约415ppm–约739ppm、约600ppm–约739ppm。优选地，所述可溶性钙浓度(ppm)的范围为约7.34ppm–约600ppm、约7.34ppm–约395.80ppm、约7.34ppm–约185.34ppm、约7.34ppm–约87.88ppm、约7.34ppm–约65.13ppm、约7.34ppm–约48.71ppm、约7.34ppm–约14.84ppm、约7.34ppm–约13.25ppm、约7.34ppm–约8.92ppm。更优选地，所述可溶性钙浓度(ppm)的范围为约87.88ppm–约395.80ppm、约87.88ppm–约185.34ppm、约185.34ppm–约395.80ppm。

“多羧基化合物”在本申请中是指在化学结构式中具有至少两个羧基，或者更优选地具有三个或三个以上羧基的化合物。多羧基化合物溶于水后可以电离出多羧酸根。在一些实施方式中，所述多羧基化合物是柠檬酸根化合物，即溶于水后能够电离出柠檬酸根的化合物。在一些实施方式中，所述柠檬酸根化合物是柠檬酸盐，例如柠檬酸钾或柠檬酸钠。在一些实施方式中，所述多羧基化合物是聚天冬氨酸盐，例如聚天冬氨酸钠(例如，分子量为3000-5000或5000-8000)。在一些实施方式中，所述多羧基化合物是2-膦酸基丁烷-1，2，4-三羧酸盐，例如2-膦酸基丁烷-1，2，4-三羧酸四钠(PBTCA·Na₄)。在一些实施方式中，所述多羧基化合物是亚氨基二琥珀酸盐，例如亚氨基二琥珀酸钠、亚氨基二琥珀酸钾。在一些实施方式中，所述多羧基化合物是聚丙烯酸盐，例如聚丙烯酸钠(例如，分子量为3000-5000)。在一些实施方式中，所述多羧基化合物具有如下结构：

在某些实施方式中，在所述口腔护理组合物中，所述可溶性钙的摩尔浓度(mol/L)：多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)的比例范围为约0.00178-约0.361。“多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度”在本申请中是指在多羧基化合物中的-C(＝O)O-基团的摩尔浓度。举例来说，假设1分子的多羧基化合物中具有N个-C(＝O)O-基团，当用1摩尔的该多羧基化合物配置成1L的水溶液后，该多羧基化合物的羧酸根的摩尔浓度则被认为是Nmol/L。

在某些实施方式中，所述可溶性钙的摩尔浓度(mol/L)：多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)的比例范围为约0.00199-约0.169、约0.00542-约0.169、约0.0121-约0.169、约0.0247-约0.169、约0.0378-约0.169、约0.0414-约0.169、约0.0555-约0.169、约0.0619-约0.169、约0.0662-约0.169、约0.0676-约0.169、约0.0704-约0.169、约0.0715-约0.169、约0.0745-约0.169、约0.0747-约0.169、约0.0784-约0.169、约0.0902-约0.169、约0.0941-约0.169、约0.101-约0.169、约0.106-约0.169、约0.113-约0.169、约0.00199-约0.00542、约0.00199-约0.0121、约0.00199-约0.0247、约0.00199-约0.0378、约0.00199-约0.0414、约0.00199-约0.0555、约0.00199-约0.0619、约0.00199-约0.0662、约0.00199-约0.0676、约0.00199-约0.0704、约0.00199-约0.0715、约0.00199-约0.0745、约0.00199-约0.0747、约0.00199-约0.0784、约0.00199-约0.0902、约0.00199-约0.0941、约0.00199-约0.101、约0.00199-约0.106、约0.00199-约0.113。在某些实施方式中，所述可溶性钙的摩尔浓度(mol/L)：多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)的比例范围为约0.00403-约0.334、约0.00667-约0.334、约0.0219-约0.334、约0.0293-约0.334、约0.0396-约0.334、约0.0597-约0.334、约0.0835-约0.334、约0.178-约0.334、约0.271-约0.334、约0.00228-约0.216、约0.00403-约0.361、约0.00667-约0.361、约0.0219-约0.361、约0.0293-约0.361、约0.0396-约0.361、约0.0597-约0.361、约0.0835-约0.361、约0.178-约0.361、约0.271-约0.361。在某些实施方式中，所述多羧基化合物是柠檬酸根化合物，所述可溶性钙的摩尔浓度(mol/L)：柠檬酸根化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)的比例也满足上述任一比例范围。

在某些实施方式中，可溶性钙的摩尔浓度(mol/L)：柠檬酸根中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)的比例范围为约0.00178-约0.271、约0.00178-约0.178、约0.00178-约0.0835、约0.00178-约0.0396、约0.00178-约0.0219、约0.00178-约0.00667。在某些实施方式中，所述可溶性钙的摩尔浓度(mol/L)：柠檬酸根中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)的比例范围为约0.0396-约0.178、约0.0396-约0.0835、约0.0835-约0.178。

在某些实施方式中，多羧基化合物中的多羧酸根在口腔护理组合物中的质量百分比(w/w)范围为约0.001％到约30％，例如，约0.01％-约30％、约0.01％-约25％、约0.01％-约20％、约0.01％-约15％、约0.01％-约10％、约0.05％-约16％、约0.05％-约12％、约0.05％-约8％、约0.05％-约4％、约0.05％-约2.73％、约0.05％-约2.68％、约0.05％-约2.64％、约0.05％-约2.25％、约0.05％-约2％、约0.05％-约1.2％、约0.05％-约1％、约0.05％-约0.742％、约0.05％-约0.65％、约0.05％-约0.6％、约0.05％-约0.571％、约0.05％-约0.5％、约0.05％-约0.418％、约0.05％-约0.414％、约0.05％-约0.369％、约0.05％-约0.363％、约0.05％-约0.355％、约0.05％-约0.351％、约0.05％-约0.33％、约0.05％-约0.319％、约0.05％-约0.245％、约0.05％-约0.2％、约0.05％-约0.15％、约0.05％-约0.138％、约0.05％-约0.113％、约0.05％-约0.1％、约0.1％-约12％、约0.2％-约12％、约0.3％-约12％、约0.4％-约12％、约0.5％-约12％、约0.6％-约12％、约0.7％-约12％、约0.8％-约12％、约0.9％-约12％、约1％-约12％、约1.1％-约12％等。多羧酸根在口腔护理组合物中的含量可以通过本领域公知的方法进行测定。例如，可以使用高效液相色谱法、分光光度法(例如，请见，朱军利，分光光度法定量测定柠檬酸及其盐的含量，分析实验室，2012年2期)等方法进行测定。在某些实施方式中，使用紫外分光光度法测定多羧酸根的质量百分比，该方法是通过测定多羧酸根在特定波长或一定波长范围内光的吸光度或发光强度，对多羧酸根进行定性和定量分析的方法。该方法通常包括以下步骤：分别取不同浓度的多羧酸根标准溶液，以空白液调仪器零点，在紫外分光光度计上测定其在多羧酸根的特定吸收波长处(例如柠檬酸根的特定吸收波长是490nm)的吸光度，绘制标准曲线；精确称量一定重量的口腔护理组合物(例如牙膏或者凝胶或漱口水)并溶于水中，离心后取上清液，将上清液进行适当的稀释过滤后得到待测样品，测定其吸光度，从标准曲线上推算出相当的多羧酸根的含量。

在某些实施方式中，所述多羧基化合物为柠檬酸根化合物。柠檬酸根在口腔护理组合物中的质量百分比可以使用高效液相色谱法进行测定。该方法通常包括以下步骤：精确称量一定重量的口腔护理组合物(例如牙膏或者凝胶或漱口水)并溶于水中，离心后取上清液，将上清液进行适当的稀释过滤后进行高效液相色谱分析，与柠檬酸标准溶液的标准曲线比较，得到样品中的柠檬酸根的浓度，再根据稀释比例可反推得到柠檬酸根的质量百分比。在某些实施方式中，柠檬酸根化合物中的柠檬酸根在口腔护理组合物中的质量百分比(w/w)范围也满足多羧基化合物中的多羧酸根在口腔护理组合物中的质量百分比(w/w)范围的上述任一比例范围。

多羧基化合物与羟基磷灰石可以在较宽的比例范围内混合。不受理论限制，但认为在本申请的羟基磷灰石与多羧基化合物形成的混合物中，多羧基化合物主要分布在羟基磷灰石的表面，由此产生表面改性的效果，并使得所述混合物在多个方面区别于羟基磷灰石本身。在某些实施方式中，在所述口腔护理组合物中，多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)：羟基磷灰石分子的摩尔浓度(mol/L)的比例范围为约1.238到约99.041，例如，约1.238到约71.676、约1.238到约63.712、约1.238到约55.748、约1.238到约47.784、约1.238到约39.820、约1.238到约31.856、约1.238到约23.892、约1.238到约15.928、约1.238到约7.964、约15.928到约79.640、约23.892到约79.640、约31.856到约79.640、约39.820到约79.640、约47.784到约79.640、约55.748到约79.640、约63.712到约79.640、约71.676到约79.640等。在某些实施方式中，所述多羧基化合物为柠檬酸根化合物。在某些实施方式中，柠檬酸根化合物中的羧酸根的摩尔浓度(mol/L)：羟基磷灰石分子的摩尔浓度(mol/L)的比例范围也满足多羧基化合物中的羧酸根的摩尔浓度(mol/L)：羟基磷灰石分子的摩尔浓度(mol/L)的上述任一比例范围。羟基磷灰石分子的化学式为：Ca₁₀(PO₄)₆(OH)₂，其分子量为：1004，因此，羟基磷灰石分子的摩尔浓度可以通过用羟基磷灰石的质量除以其分子量(即1004)，再除以测试溶液的体积得到。

本申请所述的口腔护理组合物可以是本领域已知的任何适用于口腔护理的形式，例如，但不限于，牙膏、凝胶、漱口水、牙线、被用于清洁口腔表面的糊剂、粉末、片剂、或液体制剂等洁牙剂、牙胶、牙贴、口腔喷剂、牙粉、泡沫、口香糖、唇膏、海绵、漱口剂、咀嚼胶、或义齿产品等。

在某些实施方式中，所述口腔护理组合物为牙膏，其中羟基磷灰石的质量百分比为0.5％到10％，多羧酸根的质量百分比为0.0874％到6.995％，且多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)：羟基磷灰石分子的摩尔浓度(mol/L)的比例范围为1.238到54.155，可溶性钙的浓度范围为7.34-800ppm。

在某些实施方式中，所述口腔护理组合物为漱口水，其中羟基磷灰石的质量百分比为0.5％到5％，多羧酸根的质量百分比为0.0874％到6.995％，且多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)：羟基磷灰石分子的摩尔浓度(mol/L)的比例范围为1.238到54.155，可溶性钙的浓度范围为7.34-800ppm。

在某些实施方式中，所述口腔护理组合物为凝胶，其中羟基磷灰石的质量百分比为0.5％到10％，多羧酸根的质量百分比为0.0874％到6.995％，且多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)：羟基磷灰石分子的摩尔浓度(mol/L)的比例范围为1.238到54.155，可溶性钙的浓度范围为7.34-800ppm。

“口腔可接受的载体”是指这样一种载体，其能够可作为口腔护理组合物中的成分，适用于口腔的生理环境，且不导致过度的对口腔的副作用。所述载体可包含合适的美容和/或治疗活性物质。优选地，口腔可接受的载体与本申请提供的羟基磷灰石、多羧基化合物、可溶性钙兼容，不会过度影响羟基磷灰石对牙本质小管的封堵活性。

多种本领域公知的口腔可接受的载体都可以使用，例如但不限于，增稠剂、磨擦剂、表面活性剂、调味剂。

“增稠剂”是一种增加溶液或液体/固体混合物的粘度，但基本上不会改变其性质的物质。加入增稠剂的目的是为了给产品提供骨架、流动性和稳定性。示例的增稠剂包括，但不限于，以下一种或多种：羟乙基纤维素、羧甲基纤维素及其盐(例如羧甲基纤维素钠)、角叉菜聚糖(carrageenan)、羧基乙烯基聚合物、黄原胶(xanthangum)、卡拉胶、明胶、支链淀粉、海藻酸钠等。在某些实施方式中，所述增稠剂包括黄原胶、卡拉胶或羧甲基纤维素钠中的一种或多种。

“磨擦剂”是牙膏中起清洁作用的主要成分，在选择摩擦剂时应全面考虑摩擦剂的硬度、大小、形状和含量，确保有效清洁的同时不磨损牙齿。示例的磨擦剂包括，但不限于，碳酸钙、磷酸氢钙、焦磷酸钙、磷酸三钙、二氧化硅、硅酸铝、氢氧化铝、氧化铝、沸石、氧化钛、硅酸锆等。在某些实施方式中，所述摩擦剂包括二氧化硅。

“表面活性剂”是在牙膏中起到乳化香精和起泡的目的，在某种程度上可以辅助羟基磷灰石-多羧基化合物复合物的充分和完全分散。示例的表面活性剂包括，但不限于，阴离子表面活性剂，例如十二烷基磺酸钠；两性表面活性剂，例如甜菜碱；氨基酸表面活性剂如月桂醇肌氨酸钠和非离子表面活性剂，例如聚氧乙烯与聚氧丙稀共聚物、聚乙二醇等。

“调味剂”是指用于改善口腔护理组合物感官性质的物质。示例的调味剂包括，但不限于，糖精钠、调味油，例如绿薄荷油、欧薄荷油、冬青油、黄樟油、丁香油、洋苏草油、桉油、肉桂油、柠檬油和橙皮油，水杨酸甲酯以及丁香酚。在某些实施方式中，所述调味剂包括水杨酸甲酯和/或丁香酚。

在某些实施方式中，所述口腔护理组合物进一步含有一种或多种活性成分。“活性成分”是指能够治疗或缓解口腔状况或疾病的成分。在某些实施方式中，所述活性成分包括抗龋剂、抗敏剂、抗菌剂。

“抗龋剂”是指对龋病有抑制作用的物质，例如可以通过降低牙釉质中羟基磷灰石的溶解度增强牙齿的抗龋能力的物质，或控制菌斑、抑制细菌生长的物质。示例的抗龋剂包括，但不限于，氟化物离子源，例如氟化钠、氟化钾、氟化钙、氟化镁、氟化亚锡、氟化铵、单氟磷酸钠、单氟磷酸钾、氟硅酸盐等；含磷试剂，例如磷酸钙、三偏磷酸钠，甘油磷酸镁、肌醇六磷酸盐、乳磷酸钙、酪蛋白酸钠等，以及精氨酸及其衍生物等。在某些实施方式中，所述抗龋剂包含氟化物离子源。

“抗敏剂”是指通过抑制神经冲动或能够封闭牙本质小管或降低其通透性，从而预防或治疗牙本质过敏症的物质。示例的抗敏剂包括，但不限于，甘草酸二钾、氟化钾、硝酸钾、氯化钾等钾离子源。在某些实施方式中，所述抗敏剂包含钾离子源。

“抗菌剂”是指能够在一定时间内，使口腔护理组合物中某些微生物的生长或繁殖保持在必要水平以下的化学物质。示例的抗菌剂包括，但不限于，氧化锌、氯化亚锡、四氢姜黄素、氯化十六烷基吡啶、三氯生等。

本申请提供的口腔护理组合物可以通过将多羧基化合物、羟基磷灰石、可溶性钙与所述口腔可接受的载体混合制备得到。多羧基化合物、羟基磷灰石、可溶性钙和口腔可接受的载体可以按照上述含量和比例进行配方，并按照适当的顺序和适当的方式进行混合。

多羧基化合物、羟基磷灰石、和可溶性钙的组合物

本申请还提供了一种组合物，其包括羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙。羟基磷灰石可以是纳米羟基磷灰石，多羧基化合物可以是本申请所述的任一多羧基化合物(例如柠檬酸根化合物)。

在某些实施方式中，所述组合物可以分散于水中，形成本申请所述的含水混合液。当所述组合物分散于水或基质中形成均匀的混合物后，所述可溶性钙的摩尔浓度(mol/L)：多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)的比例范围可以是本申请前述的在口腔护理组合物中可溶性钙的摩尔浓度(mol/L)与多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)的任一比例范围。在某些实施方式中，当所述组合物分散于水或基质中形成均匀的混合物后，所述多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)：羟基磷灰石分子的摩尔浓度(mol/L)的比例范围可以是本申请前述的在口腔护理组合物中多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)：羟基磷灰石分子的摩尔浓度(mol/L)的任一比例范围。

多羧基化合物、羟基磷灰石、可溶性钙的含水混合液

本发明还提供了一种包含羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙的含水混合液。“含水混合液”是指，所述混合液中的溶剂大部分是由水组成，例如至少50％、70％、80％、90％、95％或100％由水组成。在某些实施方式中，含水混合液的溶剂是水，或缓冲盐的水溶液。在某些实施方式中，所述含水混合液基本上由羟基磷灰石、多羧基化合物、可溶性钙、水、和缓冲盐组成。

在所述含水混合液中，所述可溶性钙的摩尔浓度(mol/L)：多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)的比例范围可以是本申请前述的在口腔护理组合物中可溶性钙的摩尔浓度(mol/L)与多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)的任一比例范围。

在所述含水混合液中，所述多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)：羟基磷灰石分子的摩尔浓度(mol/L)的比例范围可以是本申请前述的在口腔护理组合物中多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)：羟基磷灰石分子的摩尔浓度(mol/L)的任一比例范围。

在所述含水混合液中，在满足上述比例的前提下，羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙的浓度可以根据需要进行适当调整，只要其浓度适合配置含水混合液和/或能够制备得到本申请的口腔护理组合物即可。在口腔护理组合物的制备中，可以将所述含水混合液与其他成分例如口腔可接受的载体进行混合，该混合过程可能会稀释含水混合液中的各组分的含量。因此，根据口腔护理组合物的制备过程中可能的稀释程度的不同，含水混合液中各组分的浓度也可以有所不同，例如，在某些实施方式中，可以高于在本申请的口腔护理组合物中对应组分的浓度，例如，是口腔护理组合物中组分浓度的1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、5倍、8倍、10倍、20倍等。

羟基磷灰石在所述含水混合液中的质量百分比(w/w)，或者当含水混合液被稀释1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、5倍、8倍、10倍、或20倍后羟基磷灰石在所述被稀释的含水混合液中的质量百分比，可以是本申请前述的羟基磷灰石在口腔护理组合物中的质量百分比(w/w)的任一范围内。

多羧酸根在所述含水混合液中的质量百分比(w/w)，或者当含水混合液被稀释1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、5倍、8倍、10倍、或20倍后多羧酸根在所述被稀释的含水混合液中的质量百分比，可以是本申请前述的多羧酸根在口腔护理组合物中的质量百分比(w/w)的任一范围内。

在所述含水混合液中的所述可溶性钙浓度(ppm)，或者当含水混合液被稀释1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、5倍、8倍、10倍、或20倍后可溶性钙在所述被稀释的含水混合液中的浓度，可以是本申请前述的口腔护理组合物中的可溶性钙浓度(ppm)的任一范围内。

在某些实施方式中，所述含水混合液中粒径大于约100纳米的羟基磷灰石颗粒不超过约50％、不超过约40％、不超过约30％、不超过约20％、或不超过约10％。

不受理论的限制，但认为羟基磷灰石与多羧基化合物和可溶性钙混合以后，羟基磷灰石在水溶液中的分散性能够被改善，例如，可以表现为同样浓度同样体积的羟基磷灰石水溶液中加入多羧基化合物和可溶性钙可以延长羟基磷灰石形成沉淀与分层的时间，如由2小时延长至12小时或更长。或表现为增大羟基磷灰石水溶液的Zeta电位绝对值。羟基磷灰石水溶液的分散性可以按照本领域熟知的手段去表征，如动态光散射，粒径分布等。

羟基磷灰石分散性的改善能带来诸多有益的效果。在某些实施方式中，分散性的改善能够提高羟基磷灰石对牙小管的封堵效果。例如，如图2所示的市售的羟基磷灰石的分散性较差，当用这种市售的羟基磷灰石进行牙本质小管封堵实验时，羟基磷灰石几乎难以封堵牙本质小管，如图7(b)所示。当将该市售的羟基磷灰石与多羧基化合物和可溶性钙混合后，其分散性和牙小管封堵效果都得到显著地提高，见图8(b)所示。此外，分散性的改善也有助于口腔护理组合物的制备。

因此，本申请还提供了一种提高羟基磷灰石在溶液中的分散性的方法，包括将羟基磷灰石与多羧基化合物和可溶性钙混合。在某些实施方式中，所述方法进一步包括将所述混合的羟基磷灰石与多羧基化合物和可溶性钙分散于溶液或基质中。

在某些实施方式中，本申请含水混合液中的羟基磷灰石能够进入牙本质小管。在某些实施方式中，所述羟基磷灰石能够进入牙本质小管至少约5微米、至少约10微米、至少约15微米、至少约20微米、至少约25微米、至少约30微米、至少约35微米、至少约40微米、至少约50微米、至少约55微米、至少约60微米、至少约65微米、至少约70微米、至少约75微米、至少约80微米等。

在某些实施方式中，包含羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙的含水混合液具有负数值的Zeta电位。

不受理论限制，但认为多羧基化合物和可溶性钙能够改变羟基磷灰石表面的电性，在羟基磷灰石的表面聚集负电荷的羧基。在某些实施方式中，包含羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙的含水混合液的Zeta电位范围可以在约-38到约-20mV。本领域公知，仪器测定通常会具有一定的测量误差。而上述范围内的测量误差是能够被本领域技术人员理解和接受的。在某些实施方式中，包含羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙的含水混合液的Zeta电位范围可以在-38到-20mV。相比之下，当不具有多羧基化合物时，羟基磷灰石和可溶性钙在适当的PH值条件下表面带有正电荷，其水溶液也呈正的Zeta电位，例如在某些浓度下可以在+30mV左右。

Zeta电位，也称为电动电位或电动电势(ζ-电位或ζ-电势)，是指剪切面的电位，是表征胶体分散系稳定性的重要指标。Zeta电位可以通过本领域公知的技术和/或设备进行测定，例如电泳法、电渗法、流动电位法以及超声波法等。在某些实施方式中，可以通过流动电位法测定Zeta电位，例如，使用适当的电位仪(如MalvernZetasizerNanoZS电位仪)测定混合液的电位。通过测定Zeta电位，可以确定羟基磷灰石的分散性和表面改性，从而帮助评估在所述含水混合液中的羟基磷灰石进入牙本质小管的能力。

在某些实施方式中，含水混合液的pH值为约7到约14。优选地，含水混合液的pH值在口腔生理可接受的范围内，即，当施用于口腔内时，不引起口腔内组织(例如牙齿、肌肉、粘膜等)过度的刺激或伤害。在某些实施方式中，含水混合液的pH值为约7到约10，约7到约9，或约7到约8。含水混合液的pH值可以通过本领域公知的方式进行调节。例如，可以使用适当的缓冲液配制所述包含羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙的含水混合液，和/或用适当的酸或碱调节pH至所需的范围。

在某些实施方式中，所述混合液进一步包含金属离子。在某些实施方式中，所述金属离子能够与多羧基化合物中的羧基相互作用，例如与羧基形成金属盐或络合物等。示例的金属离子例如，铜离子、锌离子、银离子或其任意组合。在某些实施方式中，金属离子对口腔健康有一定益处。例如，铜离子具有预防牙菌斑、美白的作用；锌离子能抑制牙菌斑和牙结石的形成，从而阻止烟斑、茶斑等各种色素在牙齿表面的粘附和沉积，达到去渍效果；银离子具有超强的抗菌能力和广谱的抗菌性能。

本申请所述的包含羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙的含水混合液可以通过适当的方法来制备。在某些实施方式中，所述方法包括将多羧基化合物与分散的羟基磷灰石、可溶性钙在水溶液中混合。

“分散的羟基磷灰石”是指，分散在溶剂中的羟基磷灰石。优选地，羟基磷灰石分散在水中或水溶液中，水溶液可以含有必要的溶质，例如但不限于调节pH的缓冲盐等。分散的羟基磷灰石可以具有适当的分散密度，以便于与多羧基化合物更好地形成复合物。

可以使用任意适当的混合方式将多羧基化合物、分散的羟基磷灰石、可溶性钙进行混合。在某些实施方式中，可以在分散的羟基磷灰石中加入多羧基化合物、可溶性钙并搅拌均匀。

在某些实施方式中，所述多羧基化合物选自下组：柠檬酸根化合物，例如柠檬酸钾、柠檬酸钠等，聚天冬氨酸盐，例如聚天冬氨酸钠、聚天冬氨酸钾等，亚氨基二琥珀酸盐，例如亚氨基二琥珀酸钾、亚氨基二琥珀酸钠等，2-膦酸基丁烷-1，2，4-三羧酸盐，例如2-膦酸基丁烷-1，2，4-三羧酸四钠等，聚丙烯酸盐，例如聚丙烯酸钠、聚丙烯酸钾等。优选不会对口腔产生副作用的盐。在某些实施方式中，可以将多羧基化合物的固体加入到分散的羟基磷灰石中。多羧基化合物的固体可以是多羧基化合物粉末、晶体等适合分散的固体形式。

在某些实施方式中，所述可溶性钙以钙离子形式存在。在某些实施方式中，将可溶性含钙化合物分散在溶剂中，优选地，分散在水中或水溶液中，从而形成可溶性钙。可溶性含钙化合物的固体可以是含钙化合物粉末、晶体等适合分散和溶解的固体形式。在某些实施方式中，可以将可溶性含钙化合物加入到羟基磷灰石的分散液中再与多羧基化合物形成混合物。在某些实施方式中，可溶性钙来源于羟基磷灰石制备过程中未反应的钙离子同时又没有将其通过本领域熟知的方法如离心清洗进行去除，未反应的钙离子来源于用于制备羟基磷灰石的可溶性的钙源，如氯化钙，硝酸钙等。在某些实施方式中，可溶性钙来源于羟基磷灰石在螯合剂或酸性条件下解离出的钙离子或与螯合剂结合的结合钙，所述的螯合剂如EDTA等，所述的酸如柠檬酸等。

在某些实施方式中，可以将含有可溶性钙、多羧基化合物的溶液加入到分散的羟基磷灰石中。可以选择适当的含有可溶性钙和多羧基化合物溶液的浓度和分散的羟基磷灰石的含量，使得混合后得到的含水混合液具有所需的浓度和含量。这些都是本领域技术人员所熟知的常规实验操作。

用途

在另一方面，本发明提供一种填充牙本质小管的方法，包括用本申请提供的口腔护理组合物接触牙本质，以允许所述羟基磷灰石进入牙本质小管。

本申请提供的口腔护理组合物中的羟基磷灰石能够进入牙本质小管。优选地，羟基磷灰石能够进入牙本质小管中至少约5微米、至少约10微米、至少约15微米、至少约20微米、至少约30微米、至少约40微米、至少约50微米、至少约60微米、至少约70微米。

羟基磷灰石进入牙本质小管的深度可以通过适当的实验方法测定。例如，可以用口腔护理组合物接触牙齿样本，例如动物的牙齿样本，接触一定时间后(例如10-120分钟)取所述牙齿样本，制备牙本质小管的平行剖面，电镜下观察和测量羟基磷灰石的进入深度。进入牙本质小管内部的羟基磷灰石对牙本质小管的封堵起重要的作用，其不仅能够封堵牙本质小管的开口，还能够持久地保持牙本质小管封堵的状态，有助于达到更好更持久的抗牙齿敏感效果。

口腔护理组合物可以是本申请提供的任何适合的口腔护理组合物，例如但不限于，牙膏、漱口水、凝胶、牙线、被用于清洁口腔表面的糊剂、粉末、片剂、或液体制剂等洁牙剂、牙胶、牙贴、口腔喷剂、牙粉、泡沫、口香糖、唇膏、海绵、漱口剂、咀嚼胶、或义齿产品等。通过用本申请提供的口腔护理组合物进行口腔护理，特别是进行牙齿护理，能够有效地促进羟基磷灰石进入牙本质小管。在某些实施方式中，所述口腔护理组合物是牙膏，所述方法包括用所述牙膏刷牙，以允许所述羟基磷灰石进入牙本质小管。在某些实施方式中，所述口腔护理组合物是凝胶，所述方法包括用所述凝胶刷牙，或用所述凝胶与牙齿接触，以允许所述羟基磷灰石进入牙本质小管。在某些实施方式中，所述口腔护理组合物是漱口水，所述方法包括用所述漱口水接触牙齿，以允许所述羟基磷灰石进入牙本质小管。

在某些实施方式中，本申请提供的包含羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙的含水混合液可以用于制备缓解或预防牙齿敏感的口腔护理组合物。牙齿敏感是一种常见的口腔不适，其主要原因是由于牙本质小管内液体流动改变，刺激牙髓神经末梢，产生冲动，传导痛觉。主要表现为刺激痛，当刷牙、吃硬物、酸、甜、冷、热等刺激时均引起酸痛，尤其对冷刺激最敏感。本申请提供的羟基磷灰石能够深度进入到牙本质小管中，深入封堵牙本质小管，从而减少外界环境对牙本质和/或牙神经的刺激，缓解或预防牙齿敏感。

在某些实施方式中，本申请提供的包含羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙的含水混合液可以用于制备用于填充牙齿中的牙本质小管的口腔护理组合物。如本申请所表明，羟基磷灰石能够填充牙本质小管，并且能够进入到一定的深度。

牙科材料

在另一方面，本发明提供一种具有牙本质小管的牙科材料，其特征在于在所述牙本质小管中填充有羟基磷灰石。在某些实施方式中，其中所述牙科材料是牙齿。

当用口腔护理组合物治疗或处理牙齿后，羟基磷灰石能够深入填充牙本质小管，形成在牙本质小管中填充有羟基磷灰石的牙科材料例如牙齿。

在某些实施方式中，所述羟基磷灰石在所述牙小管中的填充深度为至少约5微米、至少约10微米、至少约15微米、至少约20微米、至少约30微米、至少约40微米、至少约50微米、至少约60微米、或至少约70微米。在某些实施方式中，所述牙小管的直径为约1-4微米。

在本申请中，当“约”用于修饰数值时，是指数值上下浮动±10％、±5％、±4％、或±3％的范围内。

具体实施例

实施例1：制备纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的含水混合液

1.1原料

原料1：纳米羟基磷灰石(NanoHAP)为商业成品(购自葡萄牙Fluidinova公司)，为约15％NanoHAP水溶液，其中含有约1053ppm可溶性钙，可溶性钙来源于制备纳米羟基磷灰石时未反应完全的可溶性钙源氯化钙，同时又没有经过本领域技术人员公知的手段去除。

原料2：纳米羟基磷灰石(NanoHAP)为商业成品(购自上海紫林生物技术公司)，为NanoHAP干粉，将其配置成15％NanoHAP水溶液，测量其可溶性钙约为4ppm，由于NanoHAP的溶解度非常小，其在水中溶解产生的可溶性钙基本可以忽略。

两种NanoHAP的形貌和大小如图1、图2所示，图1为长20nm-50nm的短棒状，图2为20nm-50nm的针状。

柠檬酸钾为食品级原料。

制备过程中用到的其他原料和试剂都可以在市场上通过购买方式获得或者本领域技术人员根据已知技术经简单配置后获得。

1.2实验仪器

Zeta电位仪(MalvernZetasizerNanoZS)；扫描电子显微镜(HITACHIS-4800)。

1.3实验步骤及结果分析

1.3.1使用原料1

使用原料1作为NanoHAP和可溶性钙来源，将原料1加入去离子水稀释，混合均匀，然后再按照下表1中的不同比例加入不同剂量的柠檬酸钾，再混合均匀，配置得到悬浮液1-I～1-VIII。

表1.不同配比的NanoHAP与柠檬酸钾悬浮液

按照表1中的配比，分别将每组中的NanoHAP加入水中分散，然后再将柠檬酸钾加入溶液中分散，得到悬浮液1-I～1-VIII。通过Zeta电位仪分别测试悬浮液1-I～1-VIII的Zeta电位，从而表征不同剂量的柠檬酸钾对NanoHAP表面电性的影响。悬浮液1-I～1-VIII的Zeta电位测量结果如图3所示。

由图3可知，原料NanoHAP和可溶性钙作用后表面带有较强的正电荷，其水悬浮液的Zeta电位为+34.3mV。加入不同剂量的柠檬酸钾形成纳米羟基磷灰石-柠檬酸根复合物，不同量的柠檬酸根均使得NanoHAP表面带有较强的负电荷，其水悬浮液的Zeta电位在-30mV到-38mV附近。这说明带有负电荷的柠檬酸根吸附在NanoHAP表面使NanoHAP表面的电荷由较强的正电荷转变为较强的负电荷。

由上述表征方法结果可知，在悬浮液1-I～1-VIII中，柠檬酸根成功地吸附在NanoHAP表面，对NanoHAP进行表面改性。

1.3.2使用原料2

使用原料2为NanoHAP来源，加入去离子水稀释，并加入原料CaCl₂·2H₂O获得可溶性钙，其Zeta电位变化如下表2所示。加入可溶性钙使NanoHAP表面电性发生转变。在未加入可溶性钙之前，NanoHAP表面带有微弱的负电荷，加入少量可溶性钙离子之后，NanoHAP表面电性发生改变，由负电荷转变成正电荷。钙离子为NanoHAP的构势离子，对NanoHAP的表面结构以及表面电性有重要的影响。

表2.加入可溶性钙前后NanoHAP表面Zeta电位的改变

悬浮液编号	Nano HAP/wt/％	可溶性钙/ppm	H2O/wt/％	Zeta电位/MV
					2-I	1.25	4	余量为水	-2.33
2-II	1.25	8.33	余量为水	2.0
					2-III	1.25	50.0	余量为水	6.0

加入可溶性钙后再按照表3加入不同配比的柠檬酸钾，其表面电荷又发生转变变成负电荷，且Zeta电位的绝对值增大，如图4所示。这也说明纳米羟基磷灰石的分散性得到大幅度提高。

表3.不同配比的NanoHAP与柠檬酸钾悬浮液

悬浮液编号	Nano HAP/wt/％	柠檬酸钾/wt/％	可溶性钙/ppm	H2O/wt/％
					2-IV	1.25	0	50	余量为水
2-V	1.25	0.05	50	余量为水
					2-VI	1.25	0.5	50	余量为水
2-VII	1.25	1	50	余量为水
					2-VIII	1.25	2	50	余量为水
2-IX	1.25	4	50	余量为水
					2-X	1.25	8	50	余量为水
2-XI	1.25	16	50	余量为水

实施例2：纳米羟基磷灰石封堵和进入牙本质小管

2.1牙本质小管暴露模型制备方法

(A)垂直于牙本质小管观测面模型A的制备方法

取牛牙，在牙根与牙冠交界处向下3mm垂直于牛牙长轴方向切取2mm厚的圆盘，用抛磨机抹除圆盘边缘，得到2mmx6mm的长方形观测区域。然后分别用600目、1200目、2000目的砂纸打磨观测区域得到平整光滑的观测面。抛磨完成后，用6wt％柠檬酸进行酸蚀5分钟，暴露牙本质小管，然后用超声波清洗机冲洗3次，每次15分钟，得到垂直于牙本质小管观测面模型A。在SEM下观察到的垂直于牙本质小管观测面模型A如图5所示，可清晰看到开放的牙本质小管。

(B)平行于牙本质小管观测面模型B的制备方法

按照(A)中的方法得到垂直牙本质小管的模型A，用待测样品处理该模型，处理完成后，在40℃下于烘箱内烘干24小时。然后用手术刀将该模型平行于牙本质小管方向抛开，所得抛面平行于牙本质小管即为制备的平行于牙本质小管观测面模型B。在SEM下观察到的平行于牙本质小管观测面模型B如图6所示，可见牙本质小管管壁光滑，无沉积物，可见纤维状物质。

2.2实验过程

2.2.1纳米羟基磷灰石封堵牙本质小管开口实验

2.2.1.1原料

原料1：纳米羟基磷灰石(NanoHAP)为商业成品(购自葡萄牙Fluidinova公司)，为约15％NanoHAP水溶液，其中含有约1053ppm可溶性钙，可溶性钙来源于制备纳米羟基磷灰石时未反应完全的可溶性钙源氯化钙，同时又没有经过本领域技术人员公知的手段去除。

原料2：纳米羟基磷灰石(NanoHAP)为商业成品(购自上海紫林生物技术公司)，为NanoHAP干粉，将其配置成15％NanoHAP水溶液，测量其可溶性钙约为4ppm，由于NanoHAP的溶解度非常小，其在水溶中溶解产生的可溶性钙基本可以忽略。

两种NanoHAP的形貌和大小如图1、图2所示，图1为长20nm-50nm的短棒状，图2为20nm-50nm的针状。

柠檬酸钾为食品级原料。

2.2.1.2实验步骤

将两种不同的原料分别用去离子水配制成NanoHAP含量为2.25％的悬浮液，处理模型A2min，然后冲洗、干燥模型A，在SEM下观察模型A表面的封堵情况，如图7所示。

将两种NanoHAP分别与柠檬酸钾和可溶性钙按照表4的比例混合，其中1’-I组使用原料1，可溶性钙来源于原料制备时未反应完全的可溶性钙源。2’-II组使用原料2，可溶性钙源来源于加入的CaCl₂·2H₂O，用1’-I和2’-II悬浮液分别处理模型A2min，然后冲洗、干燥模型A，在SEM下观察模型A表面的封堵情况，如图8所示。

表4两种不同NanoHAP、柠檬酸钾、可溶性钙的悬浮液

悬浮液编号	Nano HAP/wt/％	柠檬酸钾/wt/％	可溶性钙/ppm	H2O/wt/％
					1’-I	2.25	2.25	157.87	其余
2’-II	2.25	2.25	162	其余

未经柠檬酸钾处理的原料1NanoHAP对牙本质小管表面的封堵效果由图7(a)所示，未经柠檬酸钾和可溶性钙处理的原料2NanoHAP对牙本质小管表面的封堵效果由图7(b)所示。原料1NanoHAP能够在牙本质小管的开口表面形成封堵(见图7(a))，而分散性较差的原料2NanoHAP对牙本质小管的封堵率较低(见图7(b))，说明NanoHAP与牙本质之间的作用力较差。

经柠檬酸钾、可溶性钙处理的两种NanoHAP对牙本质小管表面的封堵效果由图8(a)到8(b)所示。虽然两种NanoHAP原料在封堵效果上存在明显的差别，但在经过柠檬酸钾、可溶性钙处理后，两种NanoHAP都在牙本质小管表面形成封堵，如图8(a)、图8(b)所示。尤其是对于分散性较差的原料2(如图2所示)，其经过柠檬酸根、可溶性钙处理后对牙本质小管的封堵率显著提高。而原本具有一定封堵效果的原料1(如图1所示)在经柠檬酸根、可溶性钙处理前后在牙本质表面的沉积层形貌有所不同，经柠檬酸根、可溶性钙处理后的NanoHAP封堵层显得更加坚固(如图8(a)所示)，说明柠檬酸根、可溶性钙的引入增强了NanoHAP与牙本质之间的作用力。

2.2.2纳米羟基磷灰石进入牙本质小管内部实验

按照表5中不同比例配置悬浮液1”-I、1”-II、1”-III、1”-IV，其中的NanoHAP使用的是图1所示的NanoHAP原料，即原料1。取各悬浮液10ml，每组悬浮液中放入2只牙本质模型A，分别在各悬浮液中浸泡40min，同时放在摇床上震荡保证悬浮液混合均匀。浸泡完成后，用100ml去离子水清洗牙本质模型A观测面30秒，40℃下干燥。将每组悬浮液的2个模型A之一按照2.1中B方法得到模型B。分别将悬浮液1”-I、1”-II、1”-III和1”-IV处理得到的模型A和B放在SEM下进行观察，观察结果如图9-12所示。

表5不同配比的NanoHAP、柠檬酸钾、可溶性钙的悬浮液

使用原料2，在原料中加入不同浓度的可溶性钙，查看是否可以进入牙本质小管。结果如表6所示。

表6不同配比的NanoHAP、柠檬酸钾、可溶性钙的悬浮液

2.3实验结果与分析

在未经NanoHAP处理时，在模型A中的牙本质小管都是全部打开的状态(如图5所示)，在模型B中的牙本质小管管壁光滑，无任何沉积物，可见纤维状物质(如图6所示)。

当用未经柠檬酸根处理的NanoHAP悬浮液(即悬浮液1”-I)处理后，模型A表面沉积一层未经柠檬酸根改性的NanoHAP(如图9(a)和图9(b)所示)，而在模型B中可以看出，NanoHAP只是沉积在牙本质表面，并未进入牙本质小管，即进入牙本质小管的深度为0微米，牙本质小管的管壁光滑，可见纤维状物质(如图9(c)和图9(d)所示)。

当用含有柠檬酸根、可溶性钙的NanoHAP悬浮液(即悬浮液1”-II、1”-III或1”-IV)处理后，模型A表面的牙本质小管的开口被完全封堵(如图10(a)、图10(b)、图11(a)、图11(b)、图12(a)、图12(b)所示)，而在模型B中可以看出，NanoHAP进入到牙本质小管内部，其深度至少能达到5微米，甚至可达到100微米(如图10(c)、图10(d)所示、图11(c)、图11(d)、图12(c)、图12(d)所示)。当用含有柠檬酸钾，但可溶性钙含量非常低的NanoHAP悬浮液(即悬浮液2”-I)处理后，模型A表面有NanoHAP沉积(如图13(a)所示)，而在模型B中可以看出，NanoHAP只是沉积在牙本质表面，并未进入牙本质小管，牙本质小管的管壁光滑，可见纤维状物质(如图13(b)所示)。

当用含有柠檬酸根、可溶性钙含量比较高的NanoHAP悬浮液(即悬浮液2”-II、2”-III、2”-IV或2”-V)处理后，模型A表面的牙本质小管的开口被完全封堵(经悬浮液2”-II处理的模型A表面的牙本质小管的扫描电子显微镜(SEM)图如图14(a)、图14(b)所示。由于经悬浮液2”-III、2”-IV处理的模型A表面的牙本质小管的SEM图与经悬浮液2”-II处理的看起来一样，因此，在此只提供经悬浮液2”-II处理的模型A表面的牙本质小管的SEM图以供示例)，而在模型B中可以看出NanoHAP进入到牙本质小管内部，其深度至少能达到5微米(如图15(a)、图15(b)、图15(c)、图15(d)所示)。

由于沉积在牙本质表面的封堵层在每日的刷牙过程中会逐渐被刷掉，不能起到持久抗敏的效果，而进入牙本质小管内部的封堵物质却会起到持久的抗敏效果。本实验证明，经柠檬酸根、可溶性钙处理的羟基磷灰石与牙本质小管的结合力增强，可以进入到牙本质小管，深度至少能达到5微米，甚至可以达到100微米，起到持久的抗敏效果。

实施例3：纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙在牙膏、漱口水配方中的应用

3.1纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙在牙膏配方中的应用

原料1：15％NanoHAP溶液，含有1053ppm未反应的可溶性钙，原料为商业化成品，购自葡萄牙Fluidinova公司。

原料2：NanoHAP干粉，配制成15％NanoHAP水溶液，约含有4ppm可溶性钙，为NanoHAP分解得到。原料为商业化成品，购自于上海紫林生物技术公司。

原料3：15％NanoHAP溶液，合成工艺同原料1，但经过多次离心清洗去除大部分未反应的可溶性钙，原料中可溶性钙约为43ppm，原料为商业化成品，购自葡萄牙Fluidinova公司。

3.1.1含有4.5wt％纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的牙膏

配方1、2、3、4的组成如表7所示。配方1、3、4使用原料1，其中配方3、配方4加入十二水磷酸三钠调节钙离子的浓度。十二水磷酸三钠作为钙吸附剂，可以和配方中的一部分可溶性钙结合成磷酸钙沉淀，从而可以调节配方中可溶性钙的含量。配方2使用原料2，并加入可溶性钙。

表7含有4.5wt％Nano-HAP、柠檬酸根和可溶性钙的牙膏配方

制备工艺

1.配制NanoHAP的水混悬液，并调节其中的可溶性钙的含量，如有需要可添加可溶性钙，配制比例可根据配方含水量以及加入NanoHAP量自由确定，本实施例配制15％NanoHAP水溶液。

2.将步骤1所述混悬液与保湿剂山梨醇超声混合均匀。加入柠檬酸钾，继续超声混合均匀，加入十二水磷酸三钠溶解并混合均匀。

3.向步骤2的悬浮液中加入二氧化钛、糖精钠，搅拌均匀。

4.聚乙二醇和甘油混合，加入黄原胶，混合均匀。

5.将通过步骤4制备的混合物添加到步骤3制备的混合物中，加热，得到混合好的胶水。

6.将磨料二氧化硅加入到步骤5制备的胶水中，搅拌抽真空。

7.加入去离子水和表面活性剂，搅拌抽真空。

8.最后加入香精，搅拌抽真空。

按照上述工艺制备的膏体如图16所示，膏体表面细腻光滑。

按照本申请中所述的测试可溶性钙和柠檬酸根的方法测试配方中的可溶性钙和柠檬酸根结果如下表8所示。

表8.含有4.5wt％纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的牙膏中可溶性钙和柠檬酸根的测试结果

3.1.2含有2.25wt％纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的牙膏。

配方5、6、7、8、9的组成如表9所示。配方5、8、9使用原料1，可溶性钙来源于原料制备时未反应完全的可溶性钙。配方8、9中加入十二水磷酸三纳调节钙离子的浓度。十二水磷酸三钠作为钙吸附剂，可以和配方中的一部分可溶性钙结合成磷酸钙沉淀，从而可以调节配方中可溶性钙的含量。配方6、7使用原料3，并加入可溶性钙。

表9.含有2.25wt％纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的牙膏配方

制备工艺同3.1.1制备工艺。

按照本申请中所述的测试可溶性钙和柠檬酸根的方法测试配方中的可溶性钙和柠檬酸根结果如下表10所示。

表10.含有2.25wt％纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的牙膏中可溶性钙和柠檬酸根的测试结果

3.1.3含有1.8wt％纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的牙膏。

使用原料1，可溶性钙来源于原料制备时未反应的可溶性钙。

配方10如下表11所示。

表11.含有1.8wt％纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的牙膏配方

原料	百分含量/wt％
		山梨醇	30
聚乙二醇	1
		黄原胶	0.8
甘油	15
		含15％Nano-HAP的水混悬液	15
柠檬酸钾	0.6
		二氧化硅(增稠型)	8
二氧化硅(摩擦型)	12
		十二烷基磺酸钠	1.5
椰油酰胺丙基甜菜碱	1.25
		糖精钠	0.15
二氧化钛	0.3
		香料	1.2
去离子水	16.7
		水分损失	-0.5
总量	100

制备工艺同3.1.1制备工艺。制得的膏体同样光滑细腻。

按照本申请中所述的测试可溶性钙和柠檬酸根的方法测试配方中的可溶性钙和柠檬酸根结果如下表12所示。

表12.含有1.8wt％纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的牙膏中可溶性钙和柠檬酸根的测试结果

3.1.4含有1wt％纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的牙膏。

使用原料1，可溶性钙来源于原料未反应的可溶性钙。

配方11如下表13所示。

表13.含有1wt％纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的牙膏配方

原料	百分含量/wt％
		山梨醇	30
聚乙二醇	1
		黄原胶	0.8
甘油	18
		含15％Nano-HAP的水混悬液	6.7
柠檬酸钾	0.27
		二氧化硅(增稠型)	10
二氧化硅(摩擦型)	12
		十二烷基磺酸钠	2
糖精钠	0.15
		二氧化钛	0.3
香料	1.2

去离子水	17.58
		水分损失	-0.5
总量	100

制备工艺同3.1.1制备工艺。制得的膏体同样光滑细腻。

按照本申请中所述的测试可溶性钙和柠檬酸根的方法测试配方中的可溶性钙和柠檬酸根结果如下表14所示。

表14.含有1wt％纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的牙膏中可溶性钙和柠檬酸根的测试结果

3.1.5功效测试试验

(1)用3.1.1-3.1.4所述工艺制备的膏体，选用模型A进行刷牙实验，模型A刷牙2min后冲洗、干燥，在扫描电子显微镜下观察。

(2)将3.1.1-3.1.4所述工艺制备的膏体与去离子水以1：3比例配制成牙膏浆，将模型B在牙膏浆中浸泡40min，然后冲洗、干燥，在扫描电子显微镜下观察。

使用模型A和模型B进行功效测试，结果如下表15所示。

表15.含有纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的牙膏配方功效测试结果

由此可见，含有纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的牙膏配方可以有效封堵牙本质小管，并且可以进入牙本质小管内部，起到持久的抗敏效果，含有不同浓度可溶性钙的配方中纳米羟基磷灰石进入牙本质小管的深度不同。

3.2纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙在漱口水配方中的应用

3.2.1含有4.5wt％纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的漱口水

使用原料3，加入不同比例的可溶性钙。

配方12如下表16所示。

表16.含有4.5wt％纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的漱口水配方组成

原料	百分含量/wt％
		甘油	30
山梨醇	30
		黄原胶	0.15
含15％Nano-HAP的水混悬液	30
		柠檬酸钾	1.2
糖精钠	0.05
		椰油酰胺丙基甜菜碱	2.6
香料	0.15
		去离子水	5.85
总量	100.00

制备工艺

1.将黄原胶加入甘油中搅拌10min；

2.配制NanoHAP的水混悬液，加入可溶性钙，如果所购原料中含有适量可溶性钙此步骤省略，配制比例可根据配方含水量以及加入NanoHAP量自由确定，本实施例配制15％NanoHAP水溶液。

3.向步骤2制备的纳米羟基磷灰石悬浮液中加入山梨醇、去离子水超声混合均匀，加入柠檬酸钾后继续超声混合均匀。

4.加入糖精钠，搅拌均匀，得到纳米羟基磷灰石的悬浮液。

5.将步骤1制备的混合液加入步骤4制备的纳米羟基磷灰石的悬浮液中，加热成胶。

6.加入表面活性剂，搅拌10min。

7.加入香精持续搅拌30min结束。

按照本申请中所述的测试可溶性钙和柠檬酸根的方法测试配方中的可溶性钙和柠檬酸根结果如下表17所示。

表17.含有4.5wt％纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的漱口水中可溶性钙和柠檬酸根的测试结果

3.2.2含有2.25wt％纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的漱口水配方

使用原料3，加入不同比例的可溶性钙。

配方如下表18所示。

表18含有2.25wt％纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的漱口水配方

制备工艺同3.4.1制备工艺。

按照本申请中所述的测试可溶性钙和柠檬酸根的方法测试配方中的可溶性钙和柠檬酸根结果如下表19所示。

表19.含有2.25wt％纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的漱口水中可溶性钙和柠檬酸根的测试结果

3.2.3含有1.5wt％纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的漱口水配方。

使用原料3，加入不同比例的可溶性钙

配方17如下表20所示。

表20含有1.5wt％纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的漱口水配方

原料	百分含量/wt％
		甘油	25
山梨醇	30
		黄原胶	0.15
含15wt％Nano-HAP的水混悬液	10
		柠檬酸钾	0.4
糖精钠	0.05
		椰油酰胺丙基甜菜碱	2.6
香料	0.15
		去离子水	31.65
总量	100

制备工艺同3.2.1制备工艺。

按照本申请中所述的测试可溶性钙和柠檬酸根的方法测试配方中的可溶性钙和柠檬酸根结果如下表21所示。

表21.含有1.5wt％纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的漱口水中可溶性钙和柠檬酸根的测试结果

3.2.4含有0.75wt％纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的漱口水配方

使用原料3，加入不同比例的可溶性钙。

配方18如下表22所示。

表22.含有0.75wt％纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的漱口水配方

原料	百分含量/wt％
		甘油	25
山梨醇	30
		黄原胶	0.15
含15wt％Nano-HAP的水混悬液	5
		柠檬酸钾	0.2
糖精钠	0.05
		椰油酰胺丙基甜菜碱	2.6
香料	0.15
		去离子水	36.85
总量	100

制备工艺同3.2.1制备工艺。

按照本申请中所述的测试可溶性钙和柠檬酸根的方法测试配方中的可溶性钙和柠檬酸根结果如下表23所示。

表23.含有0.75wt％纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的漱口水中可溶性钙和柠檬酸根的测试结果

3.2.5功效测试试验

(1)用3.2.1-3.2.4所述工艺制备的漱口水，选用模型A进行浸泡实验，将模型A在漱口水中浸泡10min，然后冲洗、干燥，在扫描电子显微镜下观察。

(2)将模型B在漱口水中浸泡40min，然后冲洗、干燥，在扫描电子显微镜下观察。

使用模型A和模型B进行功效测试，结果如下表24所示。

表24.含有纳米羟基磷灰石、柠檬酸根和可溶性钙的牙膏配方功效测试结果

实施例4：口腔护理组合物的临床试验

在临床实验中心完成了为期2周的双盲、平行、随机、对照临床试验研究，进一步确认本发明在实际应用过程中的效果。按照以下入选标准选出40名受试者，随机平均分配进入试验组和对照组，每个组有20名受试者。受试者为符合纳入及排除标准的健康成年男性和女性。

4.1试验设计

本临床试验采用随机、双盲、平行设计。

1.对受试者进行基线访视，根据入选/排除标准评价其合格性，进行口腔软组织(OST)检查，以及牙齿敏感性(触觉评价(Yeaple探针)和蒸汽评价(Schiff敏感性评分和直观类比标尺(VAS)。

2.试验组的受试者使用本发明实施例3.1.1中配方1的牙膏(测试牙膏)，对照组的受试者使用对照牙膏，其为安慰剂配方，以同等质量的水代替实施例3.1配方中的NanoHAP。

3.受试者每天早晚用试验提供的牙膏和牙刷刷牙两次，每次牙膏挤满整个牙刷头，刷牙1分钟。在使用7天后，受试者完成口腔软组织(OST)检查、冷空气吹喷敏感评价和触压敏感评价。

4.2疗效评定方法

疗效评定采用冷空气吹喷敏感评价以及触压敏感评价方法。考虑到纳米羟基磷灰石治疗牙本质敏感的机理，本试验以冷空气吹喷敏感评价为主要的评价指数，触压敏感评价为次要的评价指数。

4.2.1冷空气吹喷敏感评价

使用牙科综合治疗台的气枪在离开敏感牙齿1cm距离喷吹1秒钟，空压机压力为60p.s.i.(±5p.s.i.)，吹气温度为19-21℃，吹气时将手指放在邻牙以避免影响结果的准确性。用Schiff冷空气敏感指数评价，计分如下：

0＝牙及受试者对空气刺激不反应；

1＝牙及受试者对空气刺激有反应，但不请求中止刺激；

2＝牙及受试者对空气刺激有反应，请求中止刺激或去除刺激；

3＝牙及受试者对空气刺激有反应，刺激导致疼痛，请求停止。

Schiff冷空气敏感指数计分越低，表明牙本质的敏感水平越低。

4.2.2触压敏感评价

使用一根被校准的Yeaple电子压力敏感探针。该仪器可以定量测量所加在牙面上的压力(克)。测试敏感性时，探针接触被选定牙的颊表面暴露的牙本质，放在牙釉质牙本质交界处探测。起始设定10克的探诊力，随后每次增加10克力，直到受试者表现有不舒服的感觉，最大探诊力为80克。探诊力的数值越高，表明牙本质的敏感水平越低。

4.3试验结果和分析

采用SPSS统计软件对本研究获得的数据进行单因素方差分析(ANOVA)和t检验，采用双侧检验，检验水准α取0.05。

4.3.1冷空气吹喷敏感结果

参加本研究的受试者的基线和治疗1周后冷空气吹喷敏感评估计分见表25。由表25可以看出，试验组的受试者使用测试牙膏1周后的吹气刺激敏感计分平均值为0.6，对照组为1.75。与基线相比分别降低了54.1％和23.9％，组内均有显著性差异(P<0.05)。使用1周后试验组和对照组相比，对冷空气的敏感度降低了44.3％，具有显著性差异(P<0.05)。

表25.基线和治疗1周后冷空气吹喷敏感评估总结

注：¹治疗1周后的计分平均值相对于基线计分平均值变化的百分比。正值表示治疗1周后敏感水平得到改善。

²用配对t-检验比较基线计分和治疗1周后计分之间的显著性差异。

³治疗1周后，试验组和对照组计分之间的差异：用相对于对照组1周后敏感计分平均值的百分比表示。正值表示试验组相对于对照组敏感水平得到改善。

⁴基线校正平均值的t-检验(双样本等方差假设)比较显著性差异。

4.4.2触压敏感结果

参见本研究的受试者的基线和治疗1周后触压敏感评估计分见表26。由表26可以看出，使用测试牙膏1周后的触压敏感计分平均值为25.75g，对照组为19.25g。与基线相比分别提高了134％和71％，组内均有显著性差异(P<0.05)。使用一周后试验组和对照组相比增加了33.76％，具有显著性差异(P<0.05)。

表26.基线和治疗1周后触压敏感评估总结

注：¹治疗1周后的计分平均值相对于基线计分平均值变化的百分比。正值表示治疗1周后敏感水平得到改善。

²用配对t-检验比较基线计分和治疗1周后计分之间的显著性差异。

³治疗1周后，试验组和对照组计分之间的差异：用相对于对照组1周后敏感计分平均值的百分比表示。正值表示试验组相对于对照组敏感水平得到改善。

⁴基线校正平均值的t-检验(双样本等方差假设)比较显著性差异。

4.4.3敏感评价结果分析

由上述冷空气吹喷敏感评价和触压敏感评价结果可见，在使用测试牙膏刷牙1周后，试验组受试者牙本质的敏感水平与对照组相比显著性降低(p<0.05)，表明测试牙膏具有优越的脱敏功效。

实施例5：柠檬酸根、可溶性钙对纳米羟基磷灰石进入牙本质小管的研究

由前述实施例可知，同时加入柠檬酸根和可溶性钙可以促使纳米羟基磷灰石进入牙本质小管，从而增强封堵牙本质小管的效果。为探讨是柠檬酸根单独、可溶性钙单独、还是柠檬酸根与可溶性钙共同促进纳米羟基磷灰石进入牙本质小管，发明人进行了如下实验。

5.1柠檬酸根的作用

原料1：购自葡萄牙的约15％NanoHAP水溶液，其中纳米羟基磷灰石的质量百分比为15％，可溶性钙浓度为约1053ppm。

用去离子水将NanoXIM稀释6.67倍，即纳米羟基磷灰石的质量百分比为2.25％，可溶性钙浓度为157.87ppm，查看有无柠檬酸根加入时，纳米羟基磷灰石是否进入牙本质小管。结果如表27所示。

表27.有无柠檬酸根加入时，纳米羟基磷灰石进入牙本质小管的情况

由表27可知，只存在可溶性钙、不存在柠檬酸根时，纳米羟基磷灰石不能进入牙本质小管。

5.1.1不同柠檬酸根比例的影响

使用原料1，加入不同含量的柠檬酸钾，查看纳米羟基磷灰石是否能进入牙本质小管，结果如表28所示。

表28.不同含量柠檬酸根加入时，纳米羟基磷灰石进入牙本质小管的情况

由此可知柠檬酸根在很宽的比例范围内起作用，但柠檬酸根量太多或柠檬酸根量太小无法进入牙本质小管，认为柠檬酸根和可溶性钙之间的比例关系在一定范围内起作用。

5.2可溶性钙的作用

原料1：15％NanoHAP溶液，含有1053ppm未反应的可溶性钙，原料为商业化成品，购自葡萄牙Fluidinova公司。

原料2：NanoHAP干粉，配制成15％NanoHAP水溶液，测量其可溶性钙约为4ppm，为NanoHAP分解得到，可以忽略。原料购自上海紫临生物技术公司。

原料3：15％NanoHAP溶液，合成工艺同原料1，但经过多次离心清洗去除大部分未反应的可溶性钙，原料中可溶性钙约为43ppm，原料为商业化成品，购自葡萄牙Fluidinova公司。

将三种原料均配制成纳米羟基磷灰石质量百分比为15％、可溶性钙浓度各不相同的膏体。各膏体中纳米羟基磷灰石的质量百分比和可溶性钙浓度如表29所示(可溶性钙为测试值)。

表29.各膏体中NanoHAP的质量百分比和可溶性钙浓度

名称	Nano HAP/wt％	可溶性钙/ppm
			原料1	15％	1053
原料3	15％	43
			原料2	15％	4

将上述配制好的三种水溶液稀释，加入质量百分比相同的柠檬酸钾，查看是否可以进入牙本质小管。结果如表30所示。

表30.加入质量百分比相同的柠檬酸钾之后纳米羟基磷灰石进入牙本质小管的情况

由表30可知，每种膏体中纳米羟基磷灰石和柠檬酸钾的质量百分比相同，而可溶性钙浓度各不相同。随着可溶性钙浓度的增加，纳米羟基磷灰石更容易进入牙本质小管。当可溶性钙浓度很低，例如4ppm时，即使同时存在柠檬酸根，纳米羟基磷灰石也无法进入牙本质小管。这表明，可溶性钙对纳米羟基磷灰石进入牙本质小管至关重要。

通过5.1和5.2的实验表明，柠檬酸根、可溶性钙均是纳米羟基磷灰石进入牙本质小管的重要条件，单独任何一种均无法促进纳米羟基磷灰石进入牙本质小管。只有柠檬酸根、可溶性钙和纳米羟基磷灰石三者相互作用时，才会促进纳米羟基磷灰石进入牙本质小管，进而封堵牙本质小管。

为探讨可溶性钙浓度与纳米羟基磷灰石进入牙本质小管的关系，进行如下实验，即固定纳米羟基磷灰石和柠檬酸根的质量百分比，改变可溶性钙浓度，从而找到能促进纳米羟基磷灰石进入牙本质小管的优选可溶性钙浓度。

5.3可溶性钙浓度与纳米羟基磷灰石进入牙本质小管的关系

使用原料3，在原料中加入不同浓度的可溶性钙，查看纳米羟基磷灰石是否可以进入牙本质小管，结果如表31所示。

表31.不同浓度的可溶性钙对纳米羟基磷灰石进入牙本质小管的影响

由表31可知，随着可溶性钙浓度的增加，纳米羟基磷灰石更容易进入牙本质小管。其中，在可溶性钙浓度为87.88ppm–395.80ppm时，纳米羟基磷灰石最容易进入牙本质小管。而当可溶性钙浓度过低(例如低于7.34ppm)或过高(例如高于739ppm)时，纳米羟基磷灰石也不能进入牙本质小管。

实施例6：纳米羟基磷灰石、其它多羧基化合物和可溶性钙制备悬浮液

6.1实验步骤

按照下表32中不同比例配置悬浮液3-I、3-II、3-III、3-IV、3-V，其中的NanoHAP使用的是图1所示的NanoHAP，2-膦酸基丁烷-1，2，4-三羧酸四钠(PBTCA.Na₄)需要用NaOH把pH值调节到8.0。分别将悬浮液3-I、3-II、3-III、3-IV、3-V处理得到的模型B在扫描电子显微镜下进行观察。

表32.不同多羧基物质与NanoHAP、可溶性钙的悬浮液

6.2实验结果分析

可溶性钙与多羧基物质质量百分比的质量百分比的比值(计算值)如下表33所示：

表33.可溶性钙质量百分比与多羧酸根的质量百分比的比值

使用模型B功效测试结果如下表所示：

表34.纳米羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙悬浮液功效测试结果

悬浮液编号	模型B功效测试结果
		3-I	Nano HAP进入牙本质小管，深度约为5-20微米
3-II	Nano HAP进入牙本质小管，深度约为5-20微米
		3-III	Nano HAP进入牙本质小管，深度约为20-30微米
3-IV	Nano HAP进入牙本质小管，深度约为100-145微米
		3-V	Nano HAP进入牙本质小管，深度约为5-10微米

尽管本申请已公开多个方面和实施方式，但是在不违背本申请主题精神和范围的前提下，本领域技术人员显然可以对其进行各种等同改变和修改。本申请公开的多个方面和实施方式仅用于举例说明，其并非旨在限制本申请，本申请的实际保护范围以权利要求为准。

Claims (40)

1.一种口腔护理组合物，其包含羟基磷灰石、多羧基化合物、可溶性钙和口腔可接受的载体。

2.根据权利要求1所述的口腔护理组合物，其中所述口腔护理组合物中的羟基磷灰石能够进入牙本质小管。

3.根据权利要求2所述的口腔护理组合物，其中所述羟基磷灰石能够进入牙本质小管至少约5微米深。

4.根据权利要求1所述的口腔护理组合物，其中所述多羧基化合物选自下组：柠檬酸根化合物、聚天冬氨酸盐、亚氨基二琥珀酸盐、2-膦酸基丁烷-1，2，4-三羧酸盐、聚丙烯酸盐。

5.根据权利要求1-4任一所述的口腔护理组合物，其中所述可溶性钙浓度(ppm)的范围为约7.34ppm–约800ppm。

6.根据权利要求1-5任一所述的口腔护理组合物，其中所述可溶性钙的摩尔浓度(mol/L)：多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)的比例范围为约0.00178-约0.361。

7.根据权利要求1-6任一所述的口腔护理组合物，其中：

1)羟基磷灰石在组合物中的质量百分比(w/w)范围为约0.01％到约50％；

2)多羧酸根在组合物中的质量百分比(w/w)范围为约0.001％到约30％，以及

3)多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)：羟基磷灰石分子的摩尔浓度(mol/L)的比例范围为约1.238到约99.041。

8.根据权利要求1-7任一所述的口腔护理组合物，其中所述羟基磷灰石的质量百分比(w/w)的范围为约0.1％-约20％。

9.根据权利要求8所述的口腔护理组合物，其中所述多羧基化合物中的多羧酸根在口腔护理组合物中的质量百分比(w/w)的范围为约0.01％-约12％。

10.根据权利要求9所述的口腔护理组合物，、其中所述多羧基化合物中的多羧酸根在口腔护理组合物中的质量百分比(w/w)为约0.0874％-约6.995％。

11.根据权利要求1-10任一所述的口腔护理组合物，其中所述口腔可接受的载体包括增稠剂、磨擦剂、表面活性剂、调味剂中的一种或多种。

12.根据权利要求1-11任一所述的口腔护理组合物，其进一步含有一种或多种活性成分。

13.根据权利要求12所述的口腔护理组合物，其中所述活性成分包括抗龋剂、抗敏剂、和/或抗菌剂。

14.根据权利要求13所述的口腔护理组合物，其中所述抗龋剂包含氟化物离子源。

15.根据权利要求13所述的口腔护理组合物，其中所述抗敏剂包含钾离子源。

16.根据权利要求1-15任一所述的口腔护理组合物，其为牙膏、凝胶或漱口水。

17.一种制备如权利要求1-16任一所述的口腔护理组合物的方法，其包括将多羧基化合物、羟基磷灰石、可溶性钙与口腔可接受的载体混合。

18.一种包含羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙的含水混合液。

19.根据权利要求18所述的含水混合液，其中所述可溶性钙的摩尔浓度(mol/L)：多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)的比例范围为约0.00178-约0.361。

20.根据权利要求18所述的含水混合液，其中多羧基化合物中羧酸根的摩尔浓度(mol/L)：羟基磷灰石分子的摩尔浓度(mol/L)的比例范围为约1.238到约99.041。

21.根据权利要求18-20任一所述的含水混合液，其中在所述含水混合液中，所述羟基磷灰石的颗粒大小的范围为约10nm到约100nm。

22.根据权利要求18-21任一所述的含水混合液，其中所述含水混合液的pH值为约7到约14。

23.根据权利要求18-22任一所述的混合液，其进一步包含金属离子。

24.根据权利要求23所述的混合液，其中所述金属离子能够与多羧基化合物中的羧基相互作用。

25.根据权利要求24所述的混合液，其中所述金属离子包括铜离子、锌离子、银离子或其任意组合。

26.一种制备如权利要求1-16任一所述的口腔护理组合物的方法，其包括将权利要求18-25所述的含水混合液与口腔可接受的载体混合。

27.一种填充牙本质小管的方法，包括用权利要求1-16任一所述的口腔护理组合物接触牙本质，以允许所述羟基磷灰石进入牙本质小管。

28.根据权利要求27所述的方法，其中所述口腔护理组合物是牙膏，所述方法包括用所述牙膏刷牙，以允许所述羟基磷灰石进入牙本质小管。

29.根据权利要求27所述的方法，其中所述口腔护理组合物是凝胶，所述方法包括用所述凝胶刷牙，或用所述凝胶与牙齿接触，以允许所述羟基磷灰石进入牙本质小管。

30.根据权利要求27所述的方法，其中所述口腔护理组合物是漱口水，所述方法包括用所述漱口水接触牙齿，以允许所述羟基磷灰石进入牙本质小管。

31.一种具有牙本质小管的牙科材料，其中在所述牙本质小管中填充有羟基磷灰石。

32.根据权利要求31所述的牙科材料，其中所述牙科材料是牙齿。

33.根据权利要求31-32任一所述的牙科材料，其中所述羟基磷灰石在所述牙小管中的填充深度为至少约5微米、至少约10微米、至少约20微米、至少约30微米、至少约40微米、至少约50微米、至少约60微米、或至少约70微米。

34.根据权利要求31-33任一所述的牙科材料，其中所述牙小管的直径为约1微米-约4微米。

35.权利要求18-25任一所述的包含羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙的含水混合液在制备用于缓解或预防牙齿敏感的口腔护理组合物中的用途。

36.权利要求18-25任一所述的包含羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙的含水混合液在制备用于填充牙齿中的牙本质小管的口腔护理组合物中的用途。

37.一种制备如权利要求18-25任一所述的包含羟基磷灰石、多羧基化合物和可溶性钙的含水混合液的方法，其包括将多羧基化合物、羟基磷灰石和可溶性钙在水溶液中混合。

38.根据权利要求37所述的方法，其中所述多羧基化合物选自下组：柠檬酸根化合物、聚天冬氨酸盐、亚氨基二琥珀酸盐、2-膦酸基丁烷-1，2，4-三羧酸盐、聚丙烯酸盐。

39.一种组合物，其包含羟基磷灰石、多羧基化合物、和可溶性钙。

40.根据权利要求39所述的组合物，其特征在于，当分散于水中后，形成如权利要求18-25任一所述的含水混合液。