TWI614032B - 牙齒抗敏組合物 - Google Patents

Abstract

本申請涉及包含羥基磷灰石、多羧基化合物、可溶性鈣和口腔可接受的載體的口腔護理組合物，包含羥基磷灰石、多羧基化合物和可溶性鈣的含水混合液及其用於緩解和預防牙齒敏感的用途。本申請發現，所述口腔護理組合物中的羥基磷灰石不僅能夠封堵牙本質小管的開口，還能夠深度進入到牙本質小管的內部數十微米的深度。所述口腔護理組合物可以通過將所述含水混合液與口腔可接受的載體混合製備得到。所述含水混合液可以通過將多羧基化合物、羥基磷灰石和可溶性鈣在水溶液中混合製備得到。

Description

牙齒抗敏組合物

本發明係關於口腔護理領域，具體係關於可用於封堵牙本質小管的組合物、其製備方法及其用途。

牙本質過敏症是口腔科的常見病、多發病，也是臨床上牙痛的常見原因之一。牙本質過敏症的發病機制尚不明確，但是Brannstrom等人(Brannstrom M,Astrom A.The hydrodynamics of the dentine；its possible relationship to dentinal pain.Int Dent J,1972,22(2)：219~227)提出的流體動力學說目前已被廣泛接受。流體動力學認為，牙本質小管中存在著牙本質小管液，當多種原因如牙齦萎縮或牙齒酸蝕導致牙本質小管口過度開放暴露時，外界的各種刺激(溫度、化學、機械等)將導致牙本質小管內的體液過度內外流動，並機械刺激對壓力十分敏感的牙髓神經末梢，產生衝動，傳導痛覺。Absi等人(Absi EG,Addy M,Adams D.Dentine hypersensitivity：a study of the patency of dentinal tubules in sensitive and non-sensitivecervical dentine.J Clin Periodontol,1987,14(5)：280-284)的研究表明，敏感牙本質表面單位面積的牙本質小管開放數量和平均直徑為不敏感的數倍，導致牙本質小管液的流動速度高於不敏感的100倍以上。所以封堵牙本質小管， 降低牙本質的滲透性，以減少牙本質內的液體流動，是治療牙本質過敏的根本途徑。

關於通過封堵牙本質小管治療牙本質敏感的脫敏材料，科研工作者也進行廣泛的研究，如現在已被使用的鍶鹽、草酸鹽材料，這些材料通過在牙本質表面沉積形成沉澱封堵牙本質小管。雖然體外實驗時這些材料可以有效封堵牙本質小管，但是刷牙等對牙齒的摩擦很容易將這些沉澱物清除，使牙本質小管重新暴露，因此這些材料的抗敏持久性有待於進一步研究。

羥基磷灰石(hydroxyapatite,HAP)是牙齒的重要組成成分，具有良好的生物相容性。奈米羥基磷灰石(Nano HAP)由於其小尺寸效應使其具有更好的吸附與再礦化性能，被認為是有前景的脫敏材料，在牙科以及口腔護理領域引起國內外的廣泛關注。檸檬酸根在抑制HAP生長以及控制HAP大小兩方面起重要作用(Baoquan Xie and George H.Nancollas,How to control the size and morphology of apatite nanocrystals in bone.PNAS 2010,107(52)：22369-22370)。檸檬酸根與人體具有較好的生物相容性，對羥基磷灰石的生長以及再礦化起重要的作用。但至今未發現能使羥基磷灰石深入牙本質小管內的封堵方法。

本發明提供一種可進入牙本質小管內部而封堵牙本質小管的組合物、其製備方法以及用途。

在一方面，本發明提供了一種口腔護理組合物，其包含羥基磷灰石、多羧基化合物、可溶性鈣和口腔可接受的載體。在某些實施方式 中，所述口腔護理組合物中的羥基磷灰石能夠進入牙本質小管。在某些實施方式中，所述羥基磷灰石能夠進入牙本質小管至少約5微米深。在某些實施方式中，所述多羧基化合物選自下組：檸檬酸根化合物，例如檸檬酸鉀、檸檬酸鈉等，聚天冬胺酸鹽，例如聚天冬胺酸鈉、聚天冬胺酸鉀等，亞胺基二琥珀酸鹽，例如亞胺基二琥珀酸鉀、亞胺基二琥珀酸鈉等，2-膦酸基丁烷-1,2,4-三羧酸鹽，例如2-膦酸基丁烷-1,2,4-三羧酸四鈉等，聚丙烯酸鹽，例如聚丙烯酸鈉、聚丙烯酸鉀等。

在某些實施方式中，所述可溶性鈣濃度(ppm)的範圍為約7.34ppm-約800ppm。在某些實施方式中，所述可溶性鈣的莫耳濃度(mol/L)：多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)的比例範圍為約0.00178-約0.361。

在某些實施方式中，所述口腔護理組合物的特徵在於：1)羥基磷灰石在組合物中的重量百分比(w/w)(以乾重計)範圍為約0.01%到約50%；2)多羧酸根在組合物中的重量百分比(w/w)範圍(以乾重計)為約0.001%到約30%；以及3)多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)：羥基磷灰石分子的莫耳濃度(mol/L)的比例範圍為約1.238到約99.041。

在某些實施方式中，在所述口腔護理組合物中，所述羥基磷灰石的重量百分比(w/w)的範圍為約0.1%-約20%。在某些實施方式中，在所述口腔護理組合物中，所述多羧基化合物中的多羧酸根在口腔護理組合物中的重量百分比(w/w)的範圍為約0.01%-約12%，較佳地為約0.0874%-約6.995%。在某些實施方式中，所述口腔可接受的載體包括增稠劑、磨擦劑、表面活性劑、調味劑中的一種或多種。在某些實施方式中， 所述增稠劑包括黃原膠、卡拉膠或羧甲基纖維素鈉中的一種或多種。在某些實施方式中，所述調味劑包含水楊酸甲酯和/或丁香酚。在某些實施方式中，所述口腔護理組合物進一步含有一種或多種活性成分。在某些實施方式中，所述活性成分包括抗齲劑、抗敏劑、和/或抗菌劑。在某些實施方式中，所述抗齲劑包含氟化物離子源。在某些實施方式中，所述抗敏劑包含鉀離子源。在某些實施方式中，所述口腔護理組合物為牙膏、凝膠或漱口水。在某些實施方式中，所述口腔護理組合物為牙貼、口腔噴劑或牙粉。

在另一方面，本發明提供了製備口腔護理組合物的方法，其包括將多羧基化合物、羥基磷灰石、可溶性鈣與口腔可接受的載體混合。

在另一方面，本發明提供了包含羥基磷灰石、多羧基化合物和可溶性鈣的含水混合液。在某些實施方式中，在所述混合液中，所述可溶性鈣的莫耳濃度(mol/L)：多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)的比例範圍為約0.00178-約0.361。在某些實施方式中，在所述混合液中，所述多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)：羥基磷灰石分子的莫耳濃度(mol/L)的比例範圍為約1.238到約99.041。在某些實施方式中，在所述混合液中，所述羥基磷灰石的顆粒大小的範圍為約10nm到約100nm，較佳地，為約20nm到約50nm。在某些實施方式中，所述混合液的pH值為約7到約14。在某些實施方式中，所述含水混合液進一步包含金屬離子，例如銅離子、鋅離子、銀離子或其任意組合。在某些實施方式中，所述金屬離子能夠與多羧基化合物中的羧基相互作用。

在另一方面，本發明提供了一種製備口腔護理組合物的方法，其包括將所述的含水混合液與口腔可接受的載體混合。

在另一方面，本發明提供一種填充牙本質小管的方法，包括用本申請提供的口腔護理組合物接觸牙本質，以允許所述羥基磷灰石進入牙本質小管。

在某些實施方式中，所述口腔護理組合物是牙膏，所述方法包括用所述牙膏刷牙，以允許所述羥基磷灰石進入牙本質小管。在某些實施方式中，所述口腔護理組合物是凝膠，所述方法包括用所述凝膠刷牙，或用所述凝膠與牙齒接觸，以允許所述羥基磷灰石進入牙本質小管。在某些實施方式中，所述口腔護理組合物是漱口水，所述方法包括用所述漱口水接觸牙齒，以允許所述羥基磷灰石進入牙本質小管。

在另一方面，本發明提供一種具有牙本質小管的牙科材料，其中在所述牙本質小管中填充有羥基磷灰石。

在某些實施方式中，其中所述牙科材料是牙齒。在某些實施方式中，所述羥基磷灰石在所述牙小管中的填充深度為至少約5微米、至少約10微米、至少約15微米、至少約20微米、至少約30微米、至少約40微米、至少約50微米、至少約60微米、或至少約70微米。在某些實施方式中，所述牙小管的直徑為約1微米-約4微米，例如至少約1微米、至少約2微米、至少約3微米、至少約4微米。

在另一方面，本發明提供了包含羥基磷灰石、多羧基化合物和可溶性鈣的含水混合液在製備用於緩解或預防牙齒敏感的口腔護理組合物中的用途。

在某些實施方式中，本發明提供了包含羥基磷灰石、多羧基化合物和可溶性鈣的含水混合液在製備用於填充牙齒中的牙本質小管的口 腔護理組合物中的用途。

在另一方面，本發明提供了製備本申請所述的包含羥基磷灰石、多羧基化合物和可溶性鈣的含水混合液的方法，其包括將多羧基化合物、羥基磷灰石和可溶性鈣在水溶液中混合。在某些實施方式中，所述多羧基化合物選自下組：檸檬酸根化合物、聚天冬胺酸鹽、亞胺基二琥珀酸鹽、2-膦酸基丁烷-1,2,4-三羧酸鹽、聚丙烯酸鹽。

第1圖是短棒狀Nano HAP原料(原料1)的掃描電子顯微鏡(SEM)圖。

第2圖是針狀Nano HAP原料(原料2)的掃描電子顯微鏡(SEM)圖。

第3圖顯示了Nano HAP(原料1)-檸檬酸鉀-可溶性鈣懸浮液(懸浮液1-I~1-VIII)的Zeta電位值結果，其中Nano HAP、檸檬酸鉀的比例為1.25：0、1.25：0.05、1.25：0.5、1.25：1、1.25：2、1.25：4、1.25：8和1.25：16。

第4圖顯示了Nano HAP(原料2)-檸檬酸鉀-可溶性鈣懸浮液(懸浮液2-IV~2-XI)的Zeta電位值結果，其中Nano HAP、檸檬酸鉀的比例為1.25：0、1.25：0.05、1.25：0.5、1.25：1、1.25：2、1.25：4、1.25：8和1.25：16。

第5圖是不同放大倍數的垂直於牙本質小管觀測面模型(模型A)的掃描電子顯微鏡(SEM)圖。其中，第5(a)圖是放大500倍的模型A的SEM圖；第5(b)圖是放大5000倍的模型A的SEM圖。

第6圖是不同放大倍數的平行於牙本質小管觀測面模型(模型B)的掃描電子顯微鏡(SEM)圖。其中，第6(a)圖是放大1000倍的模型B 的SEM圖；第6(b)圖是放大10000倍的模型B的SEM圖。

第7圖是經兩種市售的Nano HAP分別處理的牙本質小管模型(模型A)的掃描電子顯微鏡(SEM)圖，第7(a)圖和第7(b)圖(b)分別對應於第1圖和第2圖中的兩種Nano HAP。

第8圖是兩種市售的Nano HAP經檸檬酸根和可溶性鈣改性後，分別處理的牙本質小管模型(模型A)的掃描電子顯微鏡(SEM)圖。第8(a)圖和第8(b)圖分別對應於第1圖和第2圖中的兩種Nano HAP。

第9圖是經懸浮液1"-I(Nano HAP：檸檬酸鉀=2.25：0)處理的牙本質小管的掃描電子顯微鏡(SEM)圖。第9(a)圖和第9(b)圖是垂直於牙本質小管的觀測面圖(模型A)，分別放大1000倍和20000倍。第9(c)圖和第9(d)圖是平行於牙本質小管的觀測面圖(模型B)，分別放大1000倍和5000倍。

第10圖是經懸浮液1"-II(Nano HAP：檸檬酸鉀=2.25：0.6)處理的牙本質小管的掃描電子顯微鏡(SEM)圖。其中，第10(a)圖和第10(b)圖是垂直於牙本質小管的觀測面圖(模型A)，分別放大1000倍和20000倍。第10(c)圖和第10(d)圖是平行於牙本質小管的觀測面圖(模型B)，分別放大1000倍和10000倍。

第11圖是經懸浮液1"-III(Nano HAP：檸檬酸鉀=2.25：1.2)處理的牙本質小管的掃描電子顯微鏡(SEM)圖。其中，第11(a)圖和第11(b)圖是垂直於牙本質小管的觀測面圖(模型A)，分別放大1000倍和20000倍。第11(c)圖和第11(d)圖是平行於牙本質小管的觀測面圖(模型B)，分別放大1000倍和10000倍。

第12圖是經懸浮液1"-IV(Nano HAP：檸檬酸鉀=2.25：2)處理的牙本質小管的掃描電子顯微鏡(SEM)圖。其中，第12(a)圖和第12(b)圖(b)是垂直於牙本質小管的觀測面圖(模型A)，分別放大1000倍和20000倍。第12(c)圖和第12(d)圖是平行於牙本質小管的觀測面圖(模型B)，分別放大1000倍和10000倍。

第13圖是經懸浮液2"-I(Nano HAP：可溶性鈣=2.25：4)處理的牙本質小管的掃描電子顯微鏡(SEM)圖。其中，第13(a)圖是放大2000倍的垂直於牙本質小管的觀測面圖(模型A)，第13(b)圖是放大10000倍的平行於牙本質小管的觀測面圖(模型B)。

第14圖是經懸浮液2"-II(Nano HAP：可溶性鈣=2.25：56.97)處理的牙本質小管的掃描電子顯微鏡(SEM)圖。其中，第14(a)圖和第14(b)圖分別是放大500倍和5000倍的垂直於牙本質小管的觀測面圖(模型A)。

第15圖是經懸浮液2"-II(Nano HAP：可溶性鈣=2.25：56.97)、2"-III(Nano HAP：可溶性鈣=2.25：113.94)、2"-IV(Nano HAP：可溶性鈣=2.25：224.89)、2"-V(Nano HAP：可溶性鈣=2.25：323.84)處理的牙本質小管的掃描電子顯微鏡(SEM)圖。其中，第15(a)圖是放大10000倍的經懸浮液2"-II處理的平行於牙本質小管的觀測面圖(模型B)，第15(b)圖是放大10000倍的經懸浮液2"-III處理的平行於牙本質小管的觀測面圖(模型B)，第15(c)圖是放大10000倍的經懸浮液2"-IV處理的平行於牙本質小管的觀測面圖(模型B)，第15(d)圖是放大5000倍的經懸浮液2"-V處理的平行於牙本質小管的觀測面圖(模型B)。

第16圖顯示了按照本發明的製備工藝製備的膏體。

本發明提供一種可進入牙本質小管內部而封堵牙本質小管的組合物、其製備方法以及用途。

牙本質是牙齒的重要組成部分。牙本質中排列分佈有牙本質小管，自牙髓端向釉牙本質介面輻射。通常認為，當牙本質小管在牙本質表面的開口暴露時，遇到冷、熱、酸、甜、機械或化學等刺激時，牙髓神經末梢興奮，產生短暫的疼痛即牙本質敏感症狀。有研究表明，與牙本質不敏感的個體相比，牙本質敏感的個體中牙本質小管開放的數量更多，平均直徑更大。因此，可以通過封堵牙本質小管降低牙本質的滲透性來緩解或治療牙本質敏感。

牙本質的重要組成成分是羥基磷灰石，簡稱HAP。HAP具有良好的生物相容性，可用于封堵牙本質小管，但在實際使用中的封堵效率卻並不理想，這大大限制了HAP在牙本質小管的封堵中的應用。本發明通過改變HAP的表面特性，增加了HAP與牙本質表面的親和力，使其能夠深度進入牙本質小管，這大大提高了HAP脫敏材料的使用效率，從根本上實現了持久有效的抗敏。

特別地，本發明提供了HAP、多羧基化合物和可溶性鈣的組合物，其能夠促進HAP深度進入牙本質小管。多羧基化合物與人體具有較好的生物相容性，對HAP的生長以及再礦化起重要的作用。鈣是HAP的構勢離子，對HAP的表面化學結構以及表面電性具有重要的影響。研究發現，這三種成分的組合物可以使HAP深度進入牙本質小管，從而為牙本質敏感的根除提供可能性。

口腔護理組合物

在一方面，本申請提供了一種口腔護理組合物，其包含羥基磷灰石、多羧基化合物、可溶性鈣和口腔可接受的載體。在某些實施方式中，所述口腔護理組合物中的羥基磷灰石能夠進入牙本質小管。在某些實施方式中，所述羥基磷灰石能夠進入牙本質小管至少約5微米深。

“進入”在本申請中是指，羥基磷灰石深入到牙本質小管內部至少約5微米深，例如，至少約10微米、至少約20微米、至少約25微米、至少約30微米、至少約35微米、至少約40微米、至少約50微米等。進入牙本質小管內部的羥基磷灰石能夠有效地降低牙本質的滲透性，減少牙本質內的液體流動。一般認為，與只在牙本質小管表面沉積相比，進入牙本質小管內部的封堵具有更顯著和持久的效果，從而更有效地治療牙本質過敏。

本發明意想不到地發現，多羧基化合物和可溶性鈣能對羥基磷灰石表面進行改性，提高羥基磷灰石與牙齒或牙本質或牙本質小管的相互作用，不僅使羥基磷灰石沉積在牙本質表面，更使其能夠深度進入牙本質小管內部。

本發明還意想不到地發現，多羧基化合物和可溶性鈣還能對羥基磷灰石表面進行改性，改性後的羥基磷灰石分散更均勻，不僅具有較好的封堵牙本質小管開口的效果，並可以深度進入牙本質小管。甚至一些原本由於物理性質不佳而不具有封堵效果的羥基磷灰石，在加入多羧基化合物和可溶性鈣後，也能夠具有很好的封堵牙本質小管開口的效果並且深度進入牙本質小管。

在某些實施方式中，本申請所述的羥基磷灰石是奈米羥基磷灰石。奈米羥基磷灰石由於其小尺寸效應使其具有更好的吸附與再礦化性能，封堵牙小管開口的效果更好，並且在本發明的技術方案中能夠深度進入牙本質小管。

“奈米羥基磷灰石”在本申請中是指顆粒大小小於1微米的羥基磷灰石。在某些實施方式中，在所述口腔護理組合物中，所述羥基磷灰石的顆粒大小的範圍為約10nm到約100nm。口腔護理組合物中的羥基磷灰石顆粒可以在電子顯微鏡下觀察和計數。例如，可以將所述口腔護理組合物用水或其它合適的溶劑稀釋，通過不同的離心速率或其它本領域熟知的手段將羥基磷灰石與微米級的磨料或其它微米級不溶固體分離，乾燥。取適當的樣本，置於樣品臺上，在電子顯微鏡下觀察，計數選定視野下羥基磷灰石顆粒的總數，並且對其中在預設粒徑範圍內的羥基磷灰石顆粒計數，計算得到預設粒徑的羥基磷灰石顆粒占總顆粒數的百分比。在某些實施方式中，在所述口腔護理組合物中，至少約50%、約60%、約70%、約80%、或約90%的羥基磷灰石顆粒的粒徑不超過約100奈米；或者至少約50%、約60%、約70%、約80%、或約90%的羥基磷灰石顆粒的粒徑不超過約90奈米；或者至少約50%、約60%、約70%、約80%、或約90%的羥基磷灰石顆粒的粒徑不超過約80奈米；或者至少約50%、約60%、約70%、約80%、或約90%的羥基磷灰石顆粒的粒徑在約10奈米到約100奈米之間；或者至少約50%、約60%、約70%、約80%、或約90%的羥基磷灰石顆粒的粒徑在約20奈米到約100奈米之間；或者至少約50%、約60%、約70%、約80%、或約90%的羥基磷灰石顆粒的粒徑在約30奈米到約100 奈米之間；或者至少約50%、約60%、約70%、約80%、或約90%的羥基磷灰石顆粒的粒徑在約40奈米到約100奈米之間。

在某些實施方式中，在所述口腔護理組合物中，羥基磷灰石在口腔護理組合物中的重量百分比(w/w)範圍為約0.01%到約50%，更佳地為約0.1%-約20%。例如，羥基磷灰石在口腔護理組合物中的重量百分比(w/w)範圍可以為，約0.01%-約40%、約0.01%-約30%、約0.01%-約20%、約0.01%-約15%、約0.01%-約10%、約0.01%-約5%、約0.1%-約20%、約0.1%-約15%、約0.1%-約10%、約0.1%-約5%、約0.1%-約4.5%、約0.75%-約4.5%、約0.75%-約5%、約0.75%-約10%、約0.75%-約15%、約0.75%-約20%、約1%-約4.5%、約1.25%-約4.5%、約1.5%-約4.5%、約1.8%-約4.5%、或約2.25%-約4.5%等。在某些實施方式中，在所述口腔護理組合物中，羥基磷灰石在口腔護理組合物中的重量百分比(w/w)為約0.75%、約1%、約1.25%、約1.5%、約1.8%、約2.25%、約4.5%，以及以上述各點為端點任意組合而成的數值範圍，如同這些數值範圍在本申請中已經一一列出一樣。在一些實施方式中，羥基磷灰石在口腔護理組合物中的含量可以通過口腔護理組合物的配方計算得到。

“可溶性鈣”在本申請中是指，能夠在溶劑(例如水)或基質(例如牙膏)中不以沉澱物的形式存在的鈣。可溶性鈣可以包括當分散在溶劑或基質中後，以離子形式存在的鈣、以絡合物或螯合物形式存在的鈣、和以可分散的結合物形式存在的鈣(比如與蛋白結合的鈣)。可溶性鈣主要區別於以不溶物形式存在的鈣，如羥基磷灰石晶體中的鈣。可溶性鈣可以通過適當的方式獲得。在某些實施方式中，可溶性鈣來源於羥基磷 灰石原料中的雜質，例如在羥基磷灰石的製備過程中由於反應不完全而殘留的可溶性鈣。在某些實施方式中，可溶性鈣來源於羥基磷灰石的分解產物，例如，羥基磷灰石在酸性條件下或在一些螯合劑作用下或兩種方式同時作用時可分解產生可溶性鈣。在某些實施方式中，可溶性鈣來源於外源加入的含鈣化合物，例如可以將可溶性含鈣化合物分散在溶劑中，較佳地，分散在水中或水溶液中，從而形成可溶性鈣。可溶性含鈣化合物的固體可以是含鈣化合物粉末、晶體等適合分散和溶解的固體形式。

可以通過本領域技術人員公知的方法測定可溶性鈣濃度，例如原子吸收光譜、電感耦合等離子體發射光譜等方法。在某些實施方式中，使用電感耦合等離子體發射光譜(ICP-AES)測試可溶性鈣濃度。該方法是把待測溶液經霧化裝置形成氣溶膠，經石英管噴入等離子體炬內，樣品被分解形成激發態的原子、離子狀態，這些激發態的粒子回到穩定的基態時要放出一定的能量，表現為一定波長的光譜，測定每種元素特有的譜線和強度，和標準溶液相比，就可以知道樣品中所含元素的種類和數量。該方法通常包括以下步驟：精確稱量一定重量的口腔護理組合物樣品(例如牙膏或者凝膠或漱口水)並溶于水中，離心後取上清液，將上清液進行消解處理以完全消解其中的有機物，再測試所得消解產物中的鈣元素的發射譜線和強度，與鈣離子標準溶液的標準曲線比較即可推知樣品中的可溶鈣的濃度。可以使用本領域公知的適當的方法進行消解，包括但不限於使用高純濃硝酸進行消解，或者微波消解法等，只要能完全消解上清液中的有機物並且不引入其他的鈣源即可。

在某些實施方式中，在所述口腔護理組合物中，所述可溶性鈣濃度(以ppm計)的範圍為約7.34ppm-約800ppm。在本申請中，ppm是指可溶性鈣的品質占口腔護理組合物的品質的百萬分比，具體計算公式為ppm=(可溶性鈣的品質/口腔護理組合物的品質)×1000000。較佳地，所述可溶性鈣濃度(ppm)的範圍為約7.34ppm-約739ppm、約8.33ppm-約739ppm、約8.92ppm-約739ppm、約13.25ppm-約739ppm、約14.4ppm-約739ppm、約14.84ppm-約739ppm、約28.4ppm-約739ppm、約33.8ppm-約739ppm、約43ppm-約739ppm、約48.5ppm-約739ppm、約48.71ppm-約739ppm、約50.0ppm-約739ppm、約56.97ppm-約739ppm、約65.13ppm-約739ppm、約76.5ppm-約739ppm、約87.75ppm-約739ppm、約87.88ppm-約739ppm、約98.5ppm-約739ppm、約109.4ppm-約739ppm、約113.94ppm-約739ppm、約157.87ppm-約739ppm、約159.5ppm-約739ppm、約162ppm-約739ppm、約168ppm-約739ppm、約185.34ppm-約739ppm、約224.89ppm-約739ppm、約234ppm-約739ppm、約238.5ppm-約739ppm、約308ppm-約739ppm、約312ppm-約739ppm、約323.84ppm-約739ppm、約341ppm-約739ppm、約354ppm-約739ppm、約395.80ppm-約739ppm、約415ppm-約739ppm、約600ppm-約739ppm。較佳地，所述可溶性鈣濃度(ppm)的範圍為約7.34ppm-約600ppm、約7.34ppm-約395.80ppm、約7.34ppm-約185.34ppm、約7.34ppm-約87.88ppm、約7.34ppm-約65.13ppm、約7.34ppm-約48.71ppm、約7.34ppm-約14.84ppm、約7.34ppm-約13.25ppm、約7.34ppm -約8.92ppm。更佳地，所述可溶性鈣濃度(ppm)的範圍為約87.88ppm-約395.80ppm、約87.88ppm-約185.34ppm、約185.34ppm-約395.80ppm。

“多羧基化合物”在本申請中是指在化學結構式中具有至少兩個羧基，或者更佳地具有三個或三個以上羧基的化合物。多羧基化合物溶于水後可以電離出多羧酸根。在一些實施方式中，所述多羧基化合物是檸檬酸根化合物，即溶于水後能夠電離出檸檬酸根的化合物。在一些實施方式中，所述檸檬酸根化合物是檸檬酸鹽，例如檸檬酸鉀或檸檬酸鈉。在一些實施方式中，所述多羧基化合物是聚天冬胺酸鹽，例如聚天冬胺酸鈉(例如，分子量為3000-5000或5000-8000)。在一些實施方式中，所述多羧基化合物是2-膦酸基丁烷-1,2,4-三羧酸鹽，例如2-膦酸基丁烷-1,2,4-三羧酸四鈉(PBTCA．Na4)。在一些實施方式中，所述多羧基化合物是亞胺基二琥珀酸鹽，例如亞胺基二琥珀酸鈉、亞胺基二琥珀酸鉀。在一些實施方式中，所述多羧基化合物是聚丙烯酸鹽，例如聚丙烯酸鈉(例如，分子量為3000-5000)。在一些實施方式中，所述多羧基化合物具有如下結構：

聚天冬胺酸鈉、

PBTCA．Na₄、

亞胺基二琥珀酸鈉、

聚丙烯酸鈉。

在某些實施方式中，在所述口腔護理組合物中，所述可溶性鈣的莫耳濃度(mol/L)：多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)的比例範圍為約0.00178-約0.361。“多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度”在本申請中是指在多羧基化合物中的-C(=O)O-基團的莫耳濃度。舉例來說，假設1分子的多羧基化合物中具有N個-C(=O)O-基團，當用1莫耳的該多羧 基化合物配置成1L的水溶液後，該多羧基化合物的羧酸根的莫耳濃度則被認為是N mol/L。

在某些實施方式中，所述可溶性鈣的莫耳濃度(mol/L)：多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)的比例範圍為約0.00199-約0.169、約0.00542-約0.169、約0.0121-約0.169、約0.0247-約0.169、約0.0378-約0.169、約0.0414-約0.169、約0.0555-約0.169、約0.0619-約0.169、約0.0662-約0.169、約0.0676-約0.169、約0.0704-約0.169、約0.0715-約0.169、約0.0745-約0.169、約0.0747-約0.169、約0.0784-約0.169、約0.0902-約0.169、約0.0941-約0.169、約0.101-約0.169、約0.106-約0.169、約0.113-約0.169、約0.00199-約0.00542、約0.00199-約0.0121、約0.00199-約0.0247、約0.00199-約0.0378、約0.00199-約0.0414、約0.00199-約0.0555、約0.00199-約0.0619、約0.00199-約0.0662、約0.00199-約0.0676、約0.00199-約0.0704、約0.00199-約0.0715、約0.00199-約0.0745、約0.00199-約0.0747、約0.00199-約0.0784、約0.00199-約0.0902、約0.00199-約0.0941、約0.00199-約0.101、約0.00199-約0.106、約0.00199-約0.113。在某些實施方式中，所述可溶性鈣的莫耳濃度(mol/L)：多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)的比例範圍為約0.00403-約0.334、約0.00667-約0.334、約0.0219-約0.334、約0.0293-約0.334、約0.0396-約0.334、約0.0597-約0.334、約0.0835-約0.334、約0.178-約0.334、約0.271-約0.334、約0.00228-約0.216、約0.00403-約0.361、約0.00667-約0.361、約0.0219-約0.361、約0.0293-約0.361、約0.0396-約0.361、約0.0597-約0.361、約0.0835-約0.361、約0.178-約0.361、約0.271-約0.361。在某些實施方式中，所述多羧基化合物是檸檬酸根化合物，所述 可溶性鈣的莫耳濃度(mol/L)：檸檬酸根化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)的比例也滿足上述任一比例範圍。

在某些實施方式中，可溶性鈣的莫耳濃度(mol/L)：檸檬酸根中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)的比例範圍為約0.00178-約0.271、約0.00178-約0.178、約0.00178-約0.0835、約0.00178-約0.0396、約0.00178-約0.0219、約0.00178-約0.00667。在某些實施方式中，所述可溶性鈣的莫耳濃度(mol/L)：檸檬酸根中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)的比例範圍為約0.0396-約0.178、約0.0396-約0.0835、約0.0835-約0.178。

在某些實施方式中，多羧基化合物中的多羧酸根在口腔護理組合物中的重量百分比(w/w)範圍為約0.001%到約30%，例如，約0.01%-約30%、約0.01%-約25%、約0.01%-約20%、約0.01%-約15%、約0.01%-約10%、約0.05%-約16%、約0.05%-約12%、約0.05%-約8%、約0.05%-約4%、約0.05%-約2.73%、約0.05%-約2.68%、約0.05%-約2.64%、約0.05%-約2.25%、約0.05%-約2%、約0.05%-約1.2%、約0.05%-約1%、約0.05%-約0.742%、約0.05%-約0.65%、約0.05%-約0.6%、約0.05%-約0.571%、約0.05%-約0.5%、約0.05%-約0.418%、約0.05%-約0.414%、約0.05%-約0.369%、約0.05%-約0.363%、約0.05%-約0.355%、約0.05%-約0.351%、約0.05%-約0.33%、約0.05%-約0.319%、約0.05%-約0.245%、約0.05%-約0.2%、約0.05%-約0.15%、約0.05%-約0.138%、約0.05%-約0.113%、約0.05%-約0.1%、約0.1%-約12%、約0.2%-約12%、約0.3%-約12%、約0.4%-約12%、約0.5%-約12%、約0.6%-約12%、約0.7%-約12%、約0.8%-約12%、約0.9%-約12%、約1%-約12%、約1.1%-約12%等。多羧酸根在 口腔護理組合物中的含量可以通過本領域公知的方法進行測定。例如，可以使用高效液相色譜法、分光光度法(例如，請見，朱軍利，分光光度法定量測定檸檬酸及其鹽的含量，分析實驗室，2012年2期)等方法進行測定。在某些實施方式中，使用紫外分光光度法測定多羧酸根的重量百分比，該方法是通過測定多羧酸根在特定波長或一定波長範圍內光的吸光度或發光強度，對多羧酸根進行定性和定量分析的方法。該方法通常包括以下步驟：分別取不同濃度的多羧酸根標準溶液，以空白液調儀器零點，在紫外分光光度計上測定其在多羧酸根的特定吸收波長處(例如檸檬酸根的特定吸收波長是490nm)的吸光度，繪製標準曲線；精確秤量一定重量的口腔護理組合物(例如牙膏或者凝膠或漱口水)並溶於水中，離心後取上清液，將上清液進行適當的稀釋過濾後得到待測樣品，測定其吸光度，從標準曲線上推算出相當的多羧酸根的含量。

在某些實施方式中，所述多羧基化合物為檸檬酸根化合物。檸檬酸根在口腔護理組合物中的重量百分比可以使用高效液相色譜法進行測定。該方法通常包括以下步驟：精確稱量一定重量的口腔護理組合物(例如牙膏或者凝膠或漱口水)並溶于水中，離心後取上清液，將上清液進行適當的稀釋過濾後進行高效液相色譜分析，與檸檬酸標準溶液的標準曲線比較，得到樣品中的檸檬酸根的濃度，再根據稀釋比例可反推得到檸檬酸根的重量百分比。在某些實施方式中，檸檬酸根化合物中的檸檬酸根在口腔護理組合物中的重量百分比(w/w)範圍也滿足多羧基化合物中的多羧酸根在口腔護理組合物中的重量百分比(w/w)範圍的上述任一比例範圍。

多羧基化合物與羥基磷灰石可以在較寬的比例範圍內混合。不受理論限制，但認為在本申請的羥基磷灰石與多羧基化合物形成的混合物中，多羧基化合物主要分佈在羥基磷灰石的表面，由此產生表面改性的效果，並使得所述混合物在多個方面區別於羥基磷灰石本身。在某些實施方式中，在所述口腔護理組合物中，多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)：羥基磷灰石分子的莫耳濃度(mol/L)的比例範圍為約1.238到約99.041，例如，約1.238到約71.676、約1.238到約63.712、約1.238到約55.748、約1.238到約47.784、約1.238到約39.820、約1.238到約31.856、約1.238到約23.892、約1.238到約15.928、約1.238到約7.964、約15.928到約79.640、約23.892到約79.640、約31.856到約79.640、約39.820到約79.640、約47.784到約79.640、約55.748到約79.640、約63.712到約79.640、約71.676到約79.640等。在某些實施方式中，所述多羧基化合物為檸檬酸根化合物。在某些實施方式中，檸檬酸根化合物中的羧酸根的莫耳濃度(mol/L)：羥基磷灰石分子的莫耳濃度(mol/L)的比例範圍也滿足多羧基化合物中的羧酸根的莫耳濃度(mol/L)：羥基磷灰石分子的莫耳濃度(mol/L)的上述任一比例範圍。羥基磷灰石分子的化學式為：Ca10(PO4)6(OH)2，其分子量為：1004，因此，羥基磷灰石分子的莫耳濃度可以通過用羥基磷灰石的品質除以其分子量(即1004)，再除以測試溶液的體積得到。

本申請所述的口腔護理組合物可以是本領域已知的任何適用於口腔護理的形式，例如，但不限於，牙膏、凝膠、漱口水、牙線、被用於清潔口腔表面的糊劑、粉末、片劑、或液體製劑等潔牙劑、牙膠、牙 貼、口腔噴劑、牙粉、泡沫、口香糖、唇膏、海綿、漱口劑、咀嚼膠、或義齒產品等。

在某些實施方式中，所述口腔護理組合物為牙膏，其中羥基磷灰石的重量百分比為0.5%到10%，多羧酸根的重量百分比為0.0874%到6.995%，且多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)：羥基磷灰石分子的莫耳濃度(mol/L)的比例範圍為1.238到54.155，可溶性鈣的濃度範圍為7.34-800ppm。

在某些實施方式中，所述口腔護理組合物為漱口水，其中羥基磷灰石的重量百分比為0.5%到5%，多羧酸根的重量百分比為0.0874%到6.995%，且多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)：羥基磷灰石分子的莫耳濃度(mol/L)的比例範圍為1.238到54.155，可溶性鈣的濃度範圍為7.34-800ppm。

在某些實施方式中，所述口腔護理組合物為凝膠，其中羥基磷灰石的重量百分比為0.5%到10%，多羧酸根的重量百分比為0.0874%到6.995%，且多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)：羥基磷灰石分子的莫耳濃度(mol/L)的比例範圍為1.238到54.155，可溶性鈣的濃度範圍為7.34-800ppm。

“口腔可接受的載體”是指這樣一種載體，其能夠可作為口腔護理組合物中的成分，適用于口腔的生理環境，且不導致過度的對口腔的副作用。所述載體可包含合適的美容和/或治療活性物質。較佳地，口腔可接受的載體與本申請提供的羥基磷灰石、多羧基化合物、可溶性鈣相容，不會過度影響羥基磷灰石對牙本質小管的封堵活性。

多種本領域公知的口腔可接受的載體都可以使用，例如但不限於，增稠劑、磨擦劑、表面活性劑、調味劑。

“增稠劑”是一種增加溶液或液體/固體混合物的粘度，但基本上不會改變其性質的物質。加入增稠劑的目的是為了給產品提供骨架、流動性和穩定性。示例的增稠劑包括，但不限於，以下一種或多種：羥乙基纖維素、羧甲基纖維素及其鹽(例如羧甲基纖維素鈉)、角叉菜聚糖(carrageenan)、羧基乙烯基聚合物、黃原膠(xanthan gum)、卡拉膠、明膠、支鏈澱粉、海藻酸鈉等。在某些實施方式中，所述增稠劑包括黃原膠、卡拉膠或羧甲基纖維素鈉中的一種或多種。

“磨擦劑”是牙膏中起清潔作用的主要成分，在選擇摩擦劑時應全面考慮摩擦劑的硬度、大小、形狀和含量，確保有效清潔的同時不磨損牙齒。示例的磨擦劑包括，但不限於，碳酸鈣、磷酸氫鈣、焦磷酸鈣、磷酸三鈣、二氧化矽、矽酸鋁、氫氧化鋁、氧化鋁、沸石、氧化鈦、矽酸鋯等。在某些實施方式中，所述摩擦劑包括二氧化矽。

“表面活性劑”是在牙膏中起到乳化香精和起泡的目的，在某種程度上可以輔助羥基磷灰石-多羧基化合物複合物的充分和完全分散。示例的表面活性劑包括，但不限於，陰離子表面活性劑，例如十二烷基磺酸鈉；兩性表面活性劑，例如甜菜鹼；氨基酸表面活性劑如月桂醇肌胺酸鈉和非離子表面活性劑，例如聚氧乙烯與聚氧丙稀共聚物、聚乙二醇等。

“調味劑”是指用於改善口腔護理組合物感官性質的物質。示例的調味劑包括，但不限於，糖精鈉、調味油，例如綠薄荷油、歐薄荷油、冬青油、黃樟油、丁香油、洋蘇草油、桉油、肉桂油、檸檬油和橙皮 油，水楊酸甲酯以及丁香酚。在某些實施方式中，所述調味劑包括水楊酸甲酯和/或丁香酚。

在某些實施方式中，所述口腔護理組合物進一步含有一種或多種活性成分。“活性成分”是指能夠治療或緩解口腔狀況或疾病的成分。在某些實施方式中，所述活性成分包括抗齲劑、抗敏劑、抗菌劑。

“抗齲劑”是指對齲病有抑制作用的物質，例如可以通過降低牙釉質中羥基磷灰石的溶解度增強牙齒的抗齲能力的物質，或控制菌斑、抑制細菌生長的物質。示例的抗齲劑包括，但不限於，氟化物離子源，例如氟化鈉、氟化鉀、氟化鈣、氟化鎂、氟化亞錫、氟化銨、單氟磷酸鈉、單氟磷酸鉀、氟矽酸鹽等；含磷試劑，例如磷酸鈣、三偏磷酸鈉，甘油磷酸鎂、肌醇六磷酸鹽、乳磷酸鈣、酪蛋白酸鈉等，以及精胺酸及其衍生物等。在某些實施方式中，所述抗齲劑包含氟化物離子源。

“抗敏劑”是指通過抑制神經衝動或能夠封閉牙本質小管或降低其通透性，從而預防或治療牙本質過敏症的物質。示例的抗敏劑包括，但不限於，甘草酸二鉀、氟化鉀、硝酸鉀、氯化鉀等鉀離子源。在某些實施方式中，所述抗敏劑包含鉀離子源。

“抗菌劑”是指能夠在一定時間內，使口腔護理組合物中某些微生物的生長或繁殖保持在必要水準以下的化學物質。示例的抗菌劑包括，但不限於，氧化鋅、氯化亞錫、四氫薑黃素、氯化十六烷基吡啶、三氯生等。

本申請提供的口腔護理組合物可以通過將多羧基化合物、羥基磷灰石、可溶性鈣與所述口腔可接受的載體混合製備得到。多羧基化合 物、羥基磷灰石、可溶性鈣和口腔可接受的載體可以按照上述含量和比例進行配方，並按照適當的順序和適當的方式進行混合。

多羧基化合物、羥基磷灰石、和可溶性鈣的組合物

本申請還提供了一種組合物，其包括羥基磷灰石、多羧基化合物和可溶性鈣。羥基磷灰石可以是奈米羥基磷灰石，多羧基化合物可以是本申請所述的任一多羧基化合物(例如檸檬酸根化合物)。

在某些實施方式中，所述組合物可以分散于水中，形成本申請所述的含水混合液。當所述組合物分散于水或基質中形成均勻的混合物後，所述可溶性鈣的莫耳濃度(mol/L)：多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)的比例範圍可以是本申請前述的在口腔護理組合物中可溶性鈣的莫耳濃度(mol/L)與多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)的任一比例範圍。在某些實施方式中，當所述組合物分散于水或基質中形成均勻的混合物後，所述多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)：羥基磷灰石分子的莫耳濃度(mol/L)的比例範圍可以是本申請前述的在口腔護理組合物中多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)：羥基磷灰石分子的莫耳濃度(mol/L)的任一比例範圍。

多羧基化合物、羥基磷灰石、可溶性鈣的含水混合液

本發明還提供了一種包含羥基磷灰石、多羧基化合物和可溶性鈣的含水混合液。“含水混合液”是指，所述混合液中的溶劑大部分是由水組成，例如至少50%、70%、80%、90%、95%或100%由水組成。在某些實施方式中，含水混合液的溶劑是水，或緩衝鹽的水溶液。在某些實施方式中，所述含水混合液基本上由羥基磷灰石、多羧基化合物、可溶性鈣、 水、和緩衝鹽組成。

在所述含水混合液中，所述可溶性鈣的莫耳濃度(mol/L)：多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)的比例範圍可以是本申請前述的在口腔護理組合物中可溶性鈣的莫耳濃度(mol/L)與多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)的任一比例範圍。

在所述含水混合液中，所述多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)：羥基磷灰石分子的莫耳濃度(mol/L)的比例範圍可以是本申請前述的在口腔護理組合物中多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)：羥基磷灰石分子的莫耳濃度(mol/L)的任一比例範圍。

在所述含水混合液中，在滿足上述比例的前提下，羥基磷灰石、多羧基化合物和可溶性鈣的濃度可以根據需要進行適當調整，只要其濃度適合配置含水混合液和/或能夠製備得到本申請的口腔護理組合物即可。在口腔護理組合物的製備中，可以將所述含水混合液與其他成分例如口腔可接受的載體進行混合，該混合過程可能會稀釋含水混合液中的各組分的含量。因此，根據口腔護理組合物的製備過程中可能的稀釋程度的不同，含水混合液中各組分的濃度也可以有所不同，例如，在某些實施方式中，可以高於在本申請的口腔護理組合物中對應組分的濃度，例如，是口腔護理組合物中組分濃度的1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、5倍、8倍、10倍、20倍等。

羥基磷灰石在所述含水混合液中的重量百分比(w/w)，或者當含水混合液被稀釋1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、5倍、8倍、10倍、或20倍後羥基磷灰石在所述被稀釋的含水混合液中的重量百分比，可以是本申請 前述的羥基磷灰石在口腔護理組合物中的重量百分比(w/w)的任一範圍內。

多羧酸根在所述含水混合液中的重量百分比(w/w)，或者當含水混合液被稀釋1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、5倍、8倍、10倍、或20倍後多羧酸根在所述被稀釋的含水混合液中的重量百分比，可以是本申請前述的多羧酸根在口腔護理組合物中的重量百分比(w/w)的任一範圍內。

在所述含水混合液中的所述可溶性鈣濃度(ppm)，或者當含水混合液被稀釋1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、5倍、8倍、10倍、或20倍後可溶性鈣在所述被稀釋的含水混合液中的濃度，可以是本申請前述的口腔護理組合物中的可溶性鈣濃度(ppm)的任一範圍內。

在某些實施方式中，所述含水混合液中粒徑大於約100奈米的羥基磷灰石顆粒不超過約50%、不超過約40%、不超過約30%、不超過約20%、或不超過約10%。

不受理論的限制，但認為羥基磷灰石與多羧基化合物和可溶性鈣混合以後，羥基磷灰石在水溶液中的分散性能夠被改善，例如，可以表現為同樣濃度同樣體積的羥基磷灰石水溶液中加入多羧基化合物和可溶性鈣可以延長羥基磷灰石形成沉澱與分層的時間，如由2小時延長至12小時或更長。或表現為增大羥基磷灰石水溶液的Zeta電位絕對值。羥基磷灰石水溶液的分散性可以按照本領域熟知的手段去表徵，如動態光散射，粒徑分佈等。

羥基磷灰石分散性的改善能帶來諸多有益的效果。在某些實施方式中，分散性的改善能夠提高羥基磷灰石對牙小管的封堵效果。例如，如第2圖所示的市售的羥基磷灰石的分散性較差，當用這種市售的羥基磷灰 石進行牙本質小管封堵實驗時，羥基磷灰石幾乎難以封堵牙本質小管，如第7(b)圖所示。當將該市售的羥基磷灰石與多羧基化合物和可溶性鈣混合後，其分散性和牙小管封堵效果都得到顯著地提高，見第8(b)圖所示。此外，分散性的改善也有助於口腔護理組合物的製備。

因此，本申請還提供了一種提高羥基磷灰石在溶液中的分散性的方法，包括將羥基磷灰石與多羧基化合物和可溶性鈣混合。在某些實施方式中，所述方法進一步包括將所述混合的羥基磷灰石與多羧基化合物和可溶性鈣分散於溶液或基質中。

在某些實施方式中，本申請含水混合液中的羥基磷灰石能夠進入牙本質小管。在某些實施方式中，所述羥基磷灰石能夠進入牙本質小管至少約5微米、至少約10微米、至少約15微米、至少約20微米、至少約25微米、至少約30微米、至少約35微米、至少約40微米、至少約50微米、至少約55微米、至少約60微米、至少約65微米、至少約70微米、至少約75微米、至少約80微米等。

在某些實施方式中，包含羥基磷灰石、多羧基化合物和可溶性鈣的含水混合液具有負數值的Zeta電位。

不受理論限制，但認為多羧基化合物和可溶性鈣能夠改變羥基磷灰石表面的電性，在羥基磷灰石的表面聚集負電荷的羧基。在某些實施方式中，包含羥基磷灰石、多羧基化合物和可溶性鈣的含水混合液的Zeta電位範圍可以在約-38到約-20mV。本領域公知，儀器測定通常會具有一定的測量誤差。而上述範圍內的測量誤差是能夠被本領域技術人員理解和接受的。在某些實施方式中，包含羥基磷灰石、多羧基化合物和可溶性鈣的 含水混合液的Zeta電位範圍可以在-38到-20mV。相比之下，當不具有多羧基化合物時，羥基磷灰石和可溶性鈣在適當的PH值條件下表面帶有正電荷，其水溶液也呈正的Zeta電位，例如在某些濃度下可以在+30mV左右。

Zeta電位，也稱為電動電位或電動電勢(ζ-電位或ζ-電勢)，是指剪切面的電位，是表徵膠體分散系穩定性的重要指標。Zeta電位可以通過本領域公知的技術和/或設備進行測定，例如電泳法、電滲法、流動電位法以及超聲波法等。在某些實施方式中，可以通過流動電位法測定Zeta電位，例如，使用適當的電位儀(如Malvern Zetasizer Nano ZS電位儀)測定混合液的電位。通過測定Zeta電位，可以確定羥基磷灰石的分散性和表面改性，從而幫助評估在所述含水混合液中的羥基磷灰石進入牙本質小管的能力。

在某些實施方式中，含水混合液的pH值為約7到約14。優選地，含水混合液的pH值在口腔生理可接受的範圍內，即，當施用于口腔內時，不引起口腔內組織(例如牙齒、肌肉、粘膜等)過度的刺激或傷害。在某些實施方式中，含水混合液的pH值為約7到約10，約7到約9，或約7到約8。含水混合液的pH值可以通過本領域公知的方式進行調節。例如，可以使用適當的緩衝液配製所述包含羥基磷灰石、多羧基化合物和可溶性鈣的含水混合液，和/或用適當的酸或堿調節pH至所需的範圍。

在某些實施方式中，所述混合液進一步包含金屬離子。在某些實施方式中，所述金屬離子能夠與多羧基化合物中的羧基相互作用，例如與羧基形成金屬鹽或絡合物等。示例的金屬離子例如，銅離子、鋅離子、銀離子或其任意組合。在某些實施方式中，金屬離子對口腔健康有一定益 處。例如，銅離子具有預防牙菌斑、美白的作用；鋅離子能抑制牙菌斑和牙結石的形成，從而阻止煙斑、茶斑等各種色素在牙齒表面的粘附和沉積，達到去漬效果；銀離子具有超強的抗菌能力和廣譜的抗菌性能。

本申請所述的包含羥基磷灰石、多羧基化合物和可溶性鈣的含水混合液可以通過適當的方法來製備。在某些實施方式中，所述方法包括將多羧基化合物與分散的羥基磷灰石、可溶性鈣在水溶液中混合。

“分散的羥基磷灰石”是指，分散在溶劑中的羥基磷灰石。較佳地，羥基磷灰石分散在水中或水溶液中，水溶液可以含有必要的溶質，例如但不限於調節pH的緩衝鹽等。分散的羥基磷灰石可以具有適當的分散密度，以便於與多羧基化合物更好地形成複合物。

可以使用任意適當的混合方式將多羧基化合物、分散的羥基磷灰石、可溶性鈣進行混合。在某些實施方式中，可以在分散的羥基磷灰石中加入多羧基化合物、可溶性鈣並攪拌均勻。

在某些實施方式中，所述多羧基化合物選自下組：檸檬酸根化合物，例如檸檬酸鉀、檸檬酸鈉等，聚天冬胺酸鹽，例如聚天冬胺酸鈉、聚天冬胺酸鉀等，亞胺基二琥珀酸鹽，例如亞胺基二琥珀酸鉀、亞胺基二琥珀酸鈉等，2-膦酸基丁烷-1,2,4-三羧酸鹽，例如2-膦酸基丁烷-1,2,4-三羧酸四鈉等，聚丙烯酸鹽，例如聚丙烯酸鈉、聚丙烯酸鉀等。優選不會對口腔產生副作用的鹽。在某些實施方式中，可以將多羧基化合物的固體加入到分散的羥基磷灰石中。多羧基化合物的固體可以是多羧基化合物粉末、晶體等適合分散的固體形式。

在某些實施方式中，所述可溶性鈣以鈣離子形式存在。在某 些實施方式中，將可溶性含鈣化合物分散在溶劑中，較佳地，分散在水中或水溶液中，從而形成可溶性鈣。可溶性含鈣化合物的固體可以是含鈣化合物粉末、晶體等適合分散和溶解的固體形式。在某些實施方式中，可以將可溶性含鈣化合物加入到羥基磷灰石的分散液中再與多羧基化合物形成混合物。在某些實施方式中，可溶性鈣來源於羥基磷灰石製備過程中未反應的鈣離子同時又沒有將其通過本領域熟知的方法如離心清洗進行去除，未反應的鈣離子來源於用於製備羥基磷灰石的可溶性的鈣源，如氯化鈣，硝酸鈣等。在某些實施方式中，可溶性鈣來源於羥基磷灰石在螯合劑或酸性條件下解離出的鈣離子或與螯合劑結合的結合鈣，所述的螯合劑如EDTA等，所述的酸如檸檬酸等。

在某些實施方式中，可以將含有可溶性鈣、多羧基化合物的溶液加入到分散的羥基磷灰石中。可以選擇適當的含有可溶性鈣和多羧基化合物溶液的濃度和分散的羥基磷灰石的含量，使得混合後得到的含水混合液具有所需的濃度和含量。這些都是本領域技術人員所熟知的常規實驗操作。

用途

在另一方面，本發明提供一種填充牙本質小管的方法，包括用本申請提供的口腔護理組合物接觸牙本質，以允許所述羥基磷灰石進入牙本質小管。

本申請提供的口腔護理組合物中的羥基磷灰石能夠進入牙本質小管。較佳地，羥基磷灰石能夠進入牙本質小管中至少約5微米、至少約10微米、至少約15微米、至少約20微米、至少約30微米、至少約40微米、 至少約50微米、至少約60微米、至少約70微米。

羥基磷灰石進入牙本質小管的深度可以通過適當的實驗方法測定。例如，可以用口腔護理組合物接觸牙齒樣本，例如動物的牙齒樣本，接觸一定時間後(例如10-120分鐘)取所述牙齒樣本，製備牙本質小管的平行剖面，電鏡下觀察和測量羥基磷灰石的進入深度。進入牙本質小管內部的羥基磷灰石對牙本質小管的封堵起重要的作用，其不僅能夠封堵牙本質小管的開口，還能夠持久地保持牙本質小管封堵的狀態，有助於達到更好更持久的抗牙齒敏感效果。

口腔護理組合物可以是本申請提供的任何適合的口腔護理組合物，例如但不限於，牙膏、漱口水、凝膠、牙線、被用於清潔口腔表面的糊劑、粉末、片劑、或液體製劑等潔牙劑、牙膠、牙貼、口腔噴劑、牙粉、泡沫、口香糖、唇膏、海綿、漱口劑、咀嚼膠、或義齒產品等。通過用本申請提供的口腔護理組合物進行口腔護理，特別是進行牙齒護理，能夠有效地促進羥基磷灰石進入牙本質小管。在某些實施方式中，所述口腔護理組合物是牙膏，所述方法包括用所述牙膏刷牙，以允許所述羥基磷灰石進入牙本質小管。在某些實施方式中，所述口腔護理組合物是凝膠，所述方法包括用所述凝膠刷牙，或用所述凝膠與牙齒接觸，以允許所述羥基磷灰石進入牙本質小管。在某些實施方式中，所述口腔護理組合物是漱口水，所述方法包括用所述漱口水接觸牙齒，以允許所述羥基磷灰石進入牙本質小管。

在某些實施方式中，本申請提供的包含羥基磷灰石、多羧基化合物和可溶性鈣的含水混合液可以用於製備緩解或預防牙齒敏感的口腔 護理組合物。牙齒敏感是一種常見的口腔不適，其主要原因是由於牙本質小管內液體流動改變，刺激牙髓神經末梢，產生衝動，傳導痛覺。主要表現為刺激痛，當刷牙、吃硬物、酸、甜、冷、熱等刺激時均引起酸痛，尤其對冷刺激最敏感。本申請提供的羥基磷灰石能夠深度進入到牙本質小管中，深入封堵牙本質小管，從而減少外界環境對牙本質和/或牙神經的刺激，緩解或預防牙齒敏感。

在某些實施方式中，本申請提供的包含羥基磷灰石、多羧基化合物和可溶性鈣的含水混合液可以用於製備用於填充牙齒中的牙本質小管的口腔護理組合物。如本申請所表明，羥基磷灰石能夠填充牙本質小管，並且能夠進入到一定的深度。

牙科材料

在另一方面，本發明提供一種具有牙本質小管的牙科材料，其特徵在於在所述牙本質小管中填充有羥基磷灰石。在某些實施方式中，其中所述牙科材料是牙齒。

當用口腔護理組合物治療或處理牙齒後，羥基磷灰石能夠深入填充牙本質小管，形成在牙本質小管中填充有羥基磷灰石的牙科材料例如牙齒。

在某些實施方式中，所述羥基磷灰石在所述牙小管中的填充深度為至少約5微米、至少約10微米、至少約15微米、至少約20微米、至少約30微米、至少約40微米、至少約50微米、至少約60微米、或至少約70微米。在某些實施方式中，所述牙小管的直徑為約1-4微米。

在本申請中，當“約”用於修飾數值時，是指數值上下浮動 ±10%、±5%、±4%、或±3%的範圍內。

具體實施例

實施例1：製備奈米羥基磷灰石、檸檬酸根和可溶性鈣的含水混合液

原料

原料1：奈米羥基磷灰石(Nano HAP)為商業成品(購自葡萄牙Fluidinova公司)，為約15%Nano HAP水溶液，其中含有約1053ppm可溶性鈣，可溶性鈣來源於製備奈米羥基磷灰石時未反應完全的可溶性鈣源氯化鈣，同時又沒有經過本領域技術人員公知的手段去除。

原料2：奈米羥基磷灰石(Nano HAP)為商業成品(購自上海紫林生物技術公司)，為Nano HAP乾粉，將其配置成15%Nano HAP水溶液，測量其可溶性鈣約為4ppm，由於Nano HAP的溶解度非常小，其在水中溶解產生的可溶性鈣基本可以忽略。

兩種Nano HAP的形貌和大小如第1圖、第2圖所示，第1圖為長20nm-50nm的短棒狀，第2圖為20nm-50nm的針狀。

檸檬酸鉀為食品級原料。

製備過程中用到的其他原料和試劑都可以在市場上通過購買方式獲得或者本領域技術人員根據已知技術經簡單配置後獲得。

1.2實驗儀器

Zeta電位儀(Malvern Zetasizer Nano ZS)；掃描電子顯微鏡(HITACHI S-4800)。

1.3實驗步驟及結果分析

1.3.1使用原料1

使用原料1作為Nano HAP和可溶性鈣來源，將原料1加入去離子水稀釋，混合均勻，然後再按照下表1中的不同比例加入不同劑量的檸檬酸鉀，再混合均勻，配置得到懸浮液1-I~1-VIII。

按照表1中的配比，分別將每組中的Nano HAP加入水中分散，然後再將檸檬酸鉀加入溶液中分散，得到懸浮液1-I~1-VIII。通過Zeta電位儀分別測試懸浮液1-I~1-VIII的Zeta電位，從而表徵不同劑量的檸檬酸鉀對Nano HAP表面電性的影響。懸浮液1-I~1-VIII的Zeta電位測量結果如第3圖所示。

由第3圖可知，原料Nano HAP和可溶性鈣作用後表面帶有較強的正電荷，其水懸浮液的Zeta電位為+34.3mV。加入不同劑量的檸檬酸鉀形成奈米羥基磷灰石-檸檬酸根複合物，不同量的檸檬酸根均使得Nano HAP表面帶有較強的負電荷，其水懸浮液的Zeta電位在-30mV到-38mV附近。這 說明帶有負電荷的檸檬酸根吸附在Nano HAP表面使Nano HAP表面的電荷由較強的正電荷轉變為較強的負電荷。

由上述表徵方法結果可知，在懸浮液1-I~1-VIII中，檸檬酸根成功地吸附在Nano HAP表面，對Nano HAP進行表面改性。

1.3.2使用原料2

使用原料2為Nano HAP來源，加入去離子水稀釋，並加入原料CaCl2．2H2O獲得可溶性鈣，其Zeta電位變化如下表2所示。加入可溶性鈣使Nano HAP表面電性發生轉變。在未加入可溶性鈣之前，Nano HAP表面帶有微弱的負電荷，加入少量可溶性鈣離子之後，Nano HAP表面電性發生改變，由負電荷轉變成正電荷。鈣離子為Nano HAP的構勢離子，對Nano HAP的表面結構以及表面電性有重要的影響。

加入可溶性鈣後再按照表3加入不同配比的檸檬酸鉀，其表面電荷又發生轉變變成負電荷，且Zeta電位的絕對值增大，如第4圖所示。這也說明奈米羥基磷灰石的分散性得到大幅度提高。

實施例2：奈米羥基磷灰石封堵和進入牙本質小管

2.1牙本質小管暴露模型製備方法

(A)垂直於牙本質小管觀測面模型A的製備方法

取牛牙，在牙根與牙冠交界處向下3mm垂直于牛牙長軸方向切取2mm厚的圓盤，用拋磨機抹除圓盤邊緣，得到2mm x 6mm的長方形觀測區域。然後分別用600目、1200目、2000目的砂紙打磨觀測區域得到平整光滑的觀測面。拋磨完成後，用6wt%檸檬酸進行酸蝕5分鐘，暴露牙本質小管，然後用超聲波清洗機沖洗3次，每次15分鐘，得到垂直於牙本質小管觀測面模型A。在SEM下觀察到的垂直於牙本質小管觀測面模型A如第5圖所示，可清晰看到開放的牙本質小管。

(B)平行於牙本質小管觀測面模型B的製備方法

按照(A)中的方法得到垂直牙本質小管的模型A，用待測樣品處理該模型，處理完成後，在40℃下於烘箱內烘乾24小時。然後用手術刀將該模型平行於牙本質小管方向拋開，所得拋面平行於牙本質小管即為製備的平行於牙本質小管觀測面模型B。在SEM下觀察到的平行於牙本質小 管觀測面模型B如第6圖所示，可見牙本質小管管壁光滑，無沉積物，可見纖維狀物質。

2.2實驗過程

2.2.1奈米羥基磷灰石封堵牙本質小管開口實驗

2.2.1.1原料

原料1：奈米羥基磷灰石(Nano HAP)為商業成品(購自葡萄牙Fluidinova公司)，為約15%Nano HAP水溶液，其中含有約1053ppm可溶性鈣，可溶性鈣來源於製備奈米羥基磷灰石時未反應完全的可溶性鈣源氯化鈣，同時又沒有經過本領域技術人員公知的手段去除。

原料2：奈米羥基磷灰石(Nano HAP)為商業成品(購自上海紫林生物技術公司)，為Nano HAP乾粉，將其配置成15%Nano HAP水溶液，測量其可溶性鈣約為4ppm，由於Nano HAP的溶解度非常小，其在水溶中溶解產生的可溶性鈣基本可以忽略。

兩種Nano HAP的形貌和大小如第1圖、第2圖所示，第1圖為長20nm-50nm的短棒狀，第2圖為20nm-50nm的針狀。

檸檬酸鉀為食品級原料。

2.2.1.2實驗步驟

將兩種不同的原料分別用去離子水配製成Nano HAP含量為2.25%的懸浮液，處理模型A 2min，然後沖洗、乾燥模型A，在SEM下觀察模型A表面的封堵情況，如第7圖所示。

將兩種Nano HAP分別與檸檬酸鉀和可溶性鈣按照表4的比例混合，其中1'-I組使用原料1，可溶性鈣來源於原料製備時未反應完全的可 溶性鈣源。2'-II組使用原料2，可溶性鈣源來源於加入的CaCl2．2H2O，用1'-I和2'-II懸浮液分別處理模型A 2min，然後沖洗、乾燥模型A，在SEM下觀察模型A表面的封堵情況，如第8圖所示。

未經檸檬酸鉀處理的原料1 Nano HAP對牙本質小管表面的封堵效果由第7(a)圖所示，未經檸檬酸鉀和可溶性鈣處理的原料2 Nano HAP對牙本質小管表面的封堵效果由第7(b)圖所示。原料1 Nano HAP能夠在牙本質小管的開口表面形成封堵(見第7(a)圖)，而分散性較差的原料2 Nano HAP對牙本質小管的封堵率較低(見第7(b)圖)，說明Nano HAP與牙本質之間的作用力較差。

經檸檬酸鉀、可溶性鈣處理的兩種Nano HAP對牙本質小管表面的封堵效果由第8(a)到8(b)圖所示。雖然兩種Nano HAP原料在封堵效果上存在明顯的差別，但在經過檸檬酸鉀、可溶性鈣處理後，兩種Nano HAP都在牙本質小管表面形成封堵，如第8(a)圖、第8(b)圖所示。尤其是對於分散性較差的原料2(如第2圖所示)，其經過檸檬酸根、可溶性鈣處理後對牙本質小管的封堵率顯著提高。而原本具有一定封堵效果的原料1(如第1圖所示)在經檸檬酸根、可溶性鈣處理前後在牙本質表面的沉積層形貌有所不同，經檸檬酸根、可溶性鈣處理後的Nano HAP封堵層顯得更加堅固(如 第8(a)圖所示)，說明檸檬酸根、可溶性鈣的引入增強了Nano HAP與牙本質之間的作用力。

2.2.2奈米羥基磷灰石進入牙本質小管內部實驗

按照表5中不同比例配置懸浮液1"-I、1"-II、1"-III、1"-IV，其中的Nano HAP使用的是第1圖所示的Nano HAP原料，即原料1。取各懸浮液10ml，每組懸浮液中放入2只牙本質模型A，分別在各懸浮液中浸泡40min，同時放在搖床上震盪保證懸浮液混合均勻。浸泡完成後，用100ml去離子水清洗牙本質模型A觀測面30秒，40℃下乾燥。將每組懸浮液的2個模型A之一按照2.1中B方法得到模型B。分別將懸浮液1"-I、1"-II、1"-III和1"-IV處理得到的模型A和B放在SEM下進行觀察，觀察結果如第9-12圖所示。

使用原料2，在原料中加入不同濃度的可溶性鈣，查看是否可以進入牙本質小管。結果如表6所示。

表6 不同配比的Nano HAP、檸檬酸鉀、可溶性鈣的懸浮液

2.3實驗結果與分析

在未經Nano HAP處理時，在模型A中的牙本質小管都是全部打開的狀態(如第5圖所示)，在模型B中的牙本質小管管壁光滑，無任何沉積物，可見纖維狀物質(如第6圖所示)。

當用未經檸檬酸根處理的Nano HAP懸浮液(即懸浮液1"-I)處理後，模型A表面沉積一層未經檸檬酸根改性的Nano HAP(如第9(a)圖和第9(b)圖所示)，而在模型B中可以看出，Nano HAP只是沉積在牙本質表面，並未進入牙本質小管，即進入牙本質小管的深度為0微米，牙本質小管的管壁光滑，可見纖維狀物質(如第9(c)圖和第9(d)圖所示)。

當用含有檸檬酸根、可溶性鈣的Nano HAP懸浮液(即懸浮液1"-II、1"-III或1"-IV)處理後，模型A表面的牙本質小管的開口被完全封堵(如第10(a)圖、第10(b)圖、第11(a)圖、第11(b)圖、第12(a)圖、第12(b)圖所示)，而在模型B中可以看出，Nano HAP進入到牙本質小管內部，其深度至 少能達到5微米，甚至可達到100微米(如第10(c)圖、第10(d)圖所示、第11(c)圖、第11(d)圖、第12(c)圖、第12(d)圖所示)。當用含有檸檬酸鉀，但可溶性鈣含量非常低的Nano HAP懸浮液(即懸浮液2"-I)處理後，模型A表面有Nano HAP沉積(如第13(a)圖所示)，而在模型B中可以看出，Nano HAP只是沉積在牙本質表面，並未進入牙本質小管，牙本質小管的管壁光滑，可見纖維狀物質(如第13(b)圖所示)。

當用含有檸檬酸根、可溶性鈣含量比較高的Nano HAP懸浮液(即懸浮液2"-II、2"-III、2"-IV或2"-V)處理後，模型A表面的牙本質小管的開口被完全封堵(經懸浮液2"-II處理的模型A表面的牙本質小管的掃描電子顯微鏡(SEM)圖如第14(a)圖、第14(b)圖所示。由於經懸浮液2"-III、2"-IV處理的模型A表面的牙本質小管的SEM圖與經懸浮液2"-II處理的看起來一樣，因此，在此只提供經懸浮液2"-II處理的模型A表面的牙本質小管的SEM圖以供示例)，而在模型B中可以看出Nano HAP進入到牙本質小管內部，其深度至少能達到5微米(如第15(a)圖、第15(b)圖、第15(c)圖、第15(d)圖所示)。

由於沉積在牙本質表面的封堵層在每日的刷牙過程中會逐漸被刷掉，不能起到持久抗敏的效果，而進入牙本質小管內部的封堵物質卻會起到持久的抗敏效果。本實驗證明，經檸檬酸根、可溶性鈣處理的羥基磷灰石與牙本質小管的結合力增強，可以進入到牙本質小管，深度至少能達到5微米，甚至可以達到100微米，起到持久的抗敏效果。

實施例3：奈米羥基磷灰石、檸檬酸根和可溶性鈣在牙膏、漱口水配方中的應用

3.1奈米羥基磷灰石、檸檬酸根和可溶性鈣在牙膏配方中的 應用

原料1：15%Nano HAP溶液，含有1053ppm未反應的可溶性鈣，原料為商業化成品，購自葡萄牙Fluidinova公司。

原料2：Nano HAP乾粉，配製成15%Nano HAP水溶液，約含有4ppm可溶性鈣，為Nano HAP分解得到。原料為商業化成品，購自于上海紫林生物技術公司。

原料3：15%Nano HAP溶液，合成工藝同原料1，但經過多次離心清洗去除大部分未反應的可溶性鈣，原料中可溶性鈣約為43ppm，原料為商業化成品，購自葡萄牙Fluidinova公司。

3.1.1含有4.5wt%奈米羥基磷灰石、檸檬酸根和可溶性鈣的牙膏

配方1、2、3、4的組成如表7所示。配方1、3、4使用原料1，其中配方3、配方4加入十二水磷酸三鈉調節鈣離子的濃度。十二水磷酸三鈉作為鈣吸附劑，可以和配方中的一部分可溶性鈣結合成磷酸鈣沉澱，從而可以調節配方中可溶性鈣的含量。配方2使用原料2，並加入可溶性鈣。

製備工藝

配製Nano HAP的水混懸液，並調節其中的可溶性鈣的含量，如有需要可添加可溶性鈣，配製比例可根據配方含水量以及加入NanoHAP量自由確定，本實施例配製15%Nano HAP水溶液。

將步驟1所述混懸液與保濕劑山梨醇超聲混合均勻。加入檸檬酸鉀，繼續超聲混合均勻，加入十二水磷酸三鈉溶解並混合均勻。

向步驟2的懸浮液中加入二氧化鈦、糖精鈉，攪拌均勻。

聚乙二醇和甘油混合，加入黃原膠，混合均勻。

將通過步驟4製備的混合物添加到步驟3製備的混合物中，加熱，得到混合好的膠水。

將磨料二氧化矽加入到步驟5製備的膠水中，攪拌抽真空。

加入去離子水和表面活性劑，攪拌抽真空。

最後加入香精，攪拌抽真空。

按照上述工藝製備的膏體如第16圖所示，膏體表面細膩光滑。

按照本申請中所述的測試可溶性鈣和檸檬酸根的方法測試配方中的可溶性鈣和檸檬酸根結果如下表8所示。

3.1.2含有2.25wt%奈米羥基磷灰石、檸檬酸根和可溶性鈣的牙膏。

配方5、6、7、8、9的組成如表9所示。配方5、8、9使用原料1，可溶性鈣來源於原料製備時未反應完全的可溶性鈣。配方8、9中加入十二水磷酸三納調節鈣離子的濃度。十二水磷酸三鈉作為鈣吸附劑，可以和配方中的一部分可溶性鈣結合成磷酸鈣沉澱，從而可以調節配方中可溶 性鈣的含量。配方6、7使用原料3，並加入可溶性鈣。

製備工藝同3.1.1製備工藝。

按照本申請中所述的測試可溶性鈣和檸檬酸根的方法測試 配方中的可溶性鈣和檸檬酸根結果如下表10所示。

3.1.3含有1.8wt%奈米羥基磷灰石、檸檬酸根和可溶性鈣的牙膏。

使用原料1，可溶性鈣來源於原料製備時未反應的可溶性鈣。

配方10如下表11所示。

製備工藝同3.1.1製備工藝。制得的膏體同樣光滑細膩。

按照本申請中所述的測試可溶性鈣和檸檬酸根的方法測試配方中的可溶性鈣和檸檬酸根結果如下表12所示。

3.1.4含有1wt%奈米羥基磷灰石、檸檬酸根和可溶性鈣的牙膏。

使用原料1，可溶性鈣來源於原料未反應的可溶性鈣。

配方11如下表13所示。

製備工藝同3.1.1製備工藝。制得的膏體同樣光滑細膩。

按照本申請中所述的測試可溶性鈣和檸檬酸根的方法測試配方中的可溶性鈣和檸檬酸根結果如下表14所示。

表14. 含有1wt%奈米羥基磷灰石、檸檬酸根和可溶性鈣的牙

3.1.5功效測試試驗

(1)用3.1.1-3.1.4所述工藝製備的膏體，選用模型A進行刷牙實驗，模型A刷牙2min後沖洗、乾燥，在掃描電子顯微鏡下觀察。

(2)將3.1.1-3.1.4所述工藝製備的膏體與去離子水以1：3比例配製成牙膏漿，將模型B在牙膏漿中浸泡40min，然後沖洗、乾燥，在掃描電子顯微鏡下觀察。

使用模型A和模型B進行功效測試，結果如下表15所示。

由此可見，含有奈米羥基磷灰石、檸檬酸根和可溶性鈣的牙膏配方可以有效封堵牙本質小管，並且可以進入牙本質小管內部，起到持久的抗敏效果，含有不同濃度可溶性鈣的配方中奈米羥基磷灰石進入牙本質小管的深度不同。

3.2奈米羥基磷灰石、檸檬酸根和可溶性鈣在漱口水配方中的應用

3.2.1含有4.5wt%奈米羥基磷灰石、檸檬酸根和可溶性鈣的漱口水

使用原料3，加入不同比例的可溶性鈣。

配方12如下表16所示。

製備工藝

將黃原膠加入甘油中攪拌10min； 配製Nano HAP的水混懸液，加入可溶性鈣，如果所購原料中含有適量可溶性鈣此步驟省略，配製比例可根據配方含水量以及加入Nano HAP量自由確定，本實施例配製15%Nano HAP水溶液。

向步驟2製備的奈米羥基磷灰石懸浮液中加入山梨醇、去離子水超聲混合均勻，加入檸檬酸鉀後繼續超聲混合均勻。

加入糖精鈉，攪拌均勻，得到奈米羥基磷灰石的懸浮液。

將步驟1製備的混合液加入步驟4製備的奈米羥基磷灰石的懸浮液中，加熱成膠。

加入表面活性劑，攪拌10min。

加入香精持續攪拌30min結束。

按照本申請中所述的測試可溶性鈣和檸檬酸根的方法測試配方中的可溶性鈣和檸檬酸根結果如下表17所示。

3.2.2含有2.25wt%奈米羥基磷灰石、檸檬酸根和可溶性鈣的漱口水配方

使用原料3，加入不同比例的可溶性鈣。

配方如下表18所示。

製備工藝同3.4.1製備工藝。

按照本申請中所述的測試可溶性鈣和檸檬酸根的方法測試配方中的可溶性鈣和檸檬酸根結果如下表19所示。

3.2.3含有1.5wt%奈米羥基磷灰石、檸檬酸根和可溶性鈣的漱口水配方。

使用原料3，加入不同比例的可溶性鈣

配方17如下表20所示。

製備工藝同3.2.1製備工藝。

按照本申請中所述的測試可溶性鈣和檸檬酸根的方法測試 配方中的可溶性鈣和檸檬酸根結果如下表21所示。

3.2.4含有0.75wt%奈米羥基磷灰石、檸檬酸根和可溶性鈣的漱口水配方

使用原料3，加入不同比例的可溶性鈣。

配方18如下表22所示。

製備工藝同3.2.1製備工藝。

按照本申請中所述的測試可溶性鈣和檸檬酸根的方法測試配方中的可溶性鈣和檸檬酸根結果如下表23所示。

3.2.5功效測試試驗

(1)用3.2.1-3.2.4所述工藝製備的漱口水，選用模型A進行浸泡實驗，將模型A在漱口水中浸泡10min，然後沖洗、乾燥，在掃描電子顯微鏡下觀察。

(2)將模型B在漱口水中浸泡40min，然後沖洗、乾燥，在掃描電子顯微鏡下觀察。

使用模型A和模型B進行功效測試，結果如下表24所示。

實施例4：口腔護理組合物的臨床試驗

在臨床實驗中心完成了為期2周的雙盲、平行、隨機、對照臨床試驗研究，進一步確認本發明在實際應用過程中的效果。按照以下入選標準選出40名受試者，隨機平均分配進入試驗組和對照組，每個組有20名受試者。受試者為符合納入及排除標準的健康成年男性和女性。

4.1試驗設計

本臨床試驗採用隨機、雙盲、平行設計。

對受試者進行基線訪視，根據入選/排除標準評價其合格性，進行口腔軟組織(OST)檢查，以及牙齒敏感性(觸覺評價(Yeaple探針)和蒸汽評價(Schiff敏感性評分和直觀類比尺規(VAS)。

試驗組的受試者使用本發明實施例3.1.1中配方1的牙膏(測試牙膏)，對照組的受試者使用對照牙膏，其為安慰劑配方，以同等品質的水代替實施例3.1配方中的Nano HAP。

受試者每天早晚用試驗提供的牙膏和牙刷刷牙兩次，每次牙膏擠滿整個牙刷頭，刷牙1分鐘。在使用7天后，受試者完成口腔軟組織(OST)檢查、冷空氣吹噴敏感評價和觸壓敏感評價。

4.2療效評定方法

療效評定採用冷空氣吹噴敏感評價以及觸壓敏感評價方法。考慮到奈米羥基磷灰石治療牙本質敏感的機理，本試驗以冷空氣吹噴敏感評價為主要的評價指數，觸壓敏感評價為次要的評價指數。

4.2.1冷空氣吹噴敏感評價

使用牙科綜合治療台的氣槍在離開敏感牙齒1cm距離噴吹1秒鐘，空壓機壓力為60p.s.i.(±5p.s.i.)，吹氣溫度為19-21℃，吹氣時將手指放在鄰牙以避免影響結果的準確性。用Schiff冷空氣敏感指數評價，計分如下：0=牙及受試者對空氣刺激不反應；1=牙及受試者對空氣刺激有反應，但不請求中止刺激； 2=牙及受試者對空氣刺激有反應，請求中止刺激或去除刺激；3=牙及受試者對空氣刺激有反應，刺激導致疼痛，請求停止。

Schiff冷空氣敏感指數計分越低，表明牙本質的敏感水準越低。

4.2.2觸壓敏感評價

使用一根被校準的Yeaple電子壓力敏感探針。該儀器可以定量測量所加在牙面上的壓力(克)。測試敏感性時，探針接觸被選定牙的頰表面暴露的牙本質，放在牙釉質牙本質交界處探測。起始設定10克的探診力，隨後每次增加10克力，直到受試者表現有不舒服的感覺，最大探診力為80克。探診力的數值越高，表明牙本質的敏感水準越低。

4.3試驗結果和分析

採用SPSS統計軟體對本研究獲得的資料進行單因素方差分析(ANOVA)和t檢驗，採用雙側檢驗，檢驗水準α取0.05。

4.3.1冷空氣吹噴敏感結果

參加本研究的受試者的基線和治療1周後冷空氣吹噴敏感評估計分見表25。由表25可以看出，試驗組的受試者使用測試牙膏1周後的吹氣刺激敏感計分平均值為0.6，對照組為1.75。與基線相比分別降低了54.1%和23.9%，組內均有顯著性差異(P<0.05)。使用1周後試驗組和對照組相比，對冷空氣的敏感度降低了44.3%，具有顯著性差異(P<0.05)。

4.4.2觸壓敏感結果

參見本研究的受試者的基線和治療1周後觸壓敏感評估計分見表26。由表26可以看出，使用測試牙膏1周後的觸壓敏感計分平均值為25.75g，對照組為19.25g。與基線相比分別提高了134%和71%，組內均有顯著性差異(P<0.05)。使用一周後試驗組和對照組相比增加了33.76%，具有顯著性差異(P<0.05)。

⁴基線校正平均值的t-檢驗(雙樣本等方差假設)比較顯著性差異。

4.4.3敏感評價結果分析

由上述冷空氣吹噴敏感評價和觸壓敏感評價結果可見，在使用測試牙膏刷牙1周後，試驗組受試者牙本質的敏感水準與對照組相比顯著性降低(p<0.05)，表明測試牙膏具有優越的脫敏功效。

實施例5：檸檬酸根、可溶性鈣對奈米羥基磷灰石進入牙本質小管的研究

由前述實施例可知，同時加入檸檬酸根和可溶性鈣可以促使奈米羥基磷灰石進入牙本質小管，從而增強封堵牙本質小管的效果。為探討是檸檬酸根單獨、可溶性鈣單獨、還是檸檬酸根與可溶性鈣共同促進奈米羥基磷灰石進入牙本質小管，發明人進行了如下實驗。

5.1檸檬酸根的作用

原料1：購自葡萄牙的約15%Nano HAP水溶液，其中奈米羥基磷灰石的重量百分比為15%，可溶性鈣濃度為約1053ppm。

用去離子水將NanoXIM稀釋6.67倍，即奈米羥基磷灰石的重量百分比為2.25%，可溶性鈣濃度為157.87ppm，查看有無檸檬酸根加入時，奈米羥基磷灰石是否進入牙本質小管。結果如表27所示。

由表27可知，只存在可溶性鈣、不存在檸檬酸根時，奈米羥基磷灰石不能進入牙本質小管。

5.1.1不同檸檬酸根比例的影響

使用原料1，加入不同含量的檸檬酸鉀，查看奈米羥基磷灰石是否能進入牙本質小管，結果如表28所示。

由此可知檸檬酸根在很寬的比例範圍內起作用，但檸檬酸根 量太多或檸檬酸根量太小無法進入牙本質小管，認為檸檬酸根和可溶性鈣之間的比例關係在一定範圍內起作用。

5.2可溶性鈣的作用

原料1：15%Nano HAP溶液，含有1053ppm未反應的可溶性鈣，原料為商業化成品，購自葡萄牙Fluidinova公司。

原料2：Nano HAP乾粉，配製成15%Nano HAP水溶液，測量其可溶性鈣約為4ppm，為Nano HAP分解得到，可以忽略。原料購自上海紫臨生物技術公司。

原料3：15%Nano HAP溶液，合成工藝同原料1，但經過多次離心清洗去除大部分未反應的可溶性鈣，原料中可溶性鈣約為43ppm，原料為商業化成品，購自葡萄牙Fluidinova公司。

將三種原料均配製成奈米羥基磷灰石重量百分比為15%、可溶性鈣濃度各不相同的膏體。各膏體中奈米羥基磷灰石的重量百分比和可溶性鈣濃度如表29所示(可溶性鈣為測試值)。

將上述配製好的三種水溶液稀釋，加入重量百分比相同的檸檬酸鉀，查看是否可以進入牙本質小管。結果如表30所示。

表30. 加入重量百分比相同的檸檬酸鉀之後奈米羥基磷灰石進入牙本質小管的情況

由表30可知，每種膏體中奈米羥基磷灰石和檸檬酸鉀的重量百分比相同，而可溶性鈣濃度各不相同。隨著可溶性鈣濃度的增加，奈米羥基磷灰石更容易進入牙本質小管。當可溶性鈣濃度很低，例如4ppm時，即使同時存在檸檬酸根，奈米羥基磷灰石也無法進入牙本質小管。這表明，可溶性鈣對奈米羥基磷灰石進入牙本質小管至關重要。

通過5.1和5.2的實驗表明，檸檬酸根、可溶性鈣均是奈米羥基磷灰石進入牙本質小管的重要條件，單獨任何一種均無法促進奈米羥基磷灰石進入牙本質小管。只有檸檬酸根、可溶性鈣和奈米羥基磷灰石三者相互作用時，才會促進奈米羥基磷灰石進入牙本質小管，進而封堵牙本質小管。

為探討可溶性鈣濃度與奈米羥基磷灰石進入牙本質小管的關係，進行如下實驗，即固定奈米羥基磷灰石和檸檬酸根的重量百分比，改變可溶性鈣濃度，從而找到能促進奈米羥基磷灰石進入牙本質小管的優選可溶性鈣濃度。

5.3可溶性鈣濃度與奈米羥基磷灰石進入牙本質小管的關係

使用原料3，在原料中加入不同濃度的可溶性鈣，查看奈米 羥基磷灰石是否可以進入牙本質小管，結果如表31所示。

由表31可知，隨著可溶性鈣濃度的增加，奈米羥基磷灰石更容易進入牙本質小管。其中，在可溶性鈣濃度為87.88ppm-395.80ppm時，奈米羥基磷灰石最容易進入牙本質小管。而當可溶性鈣濃度過低(例如低於7.34ppm)或過高(例如高於739ppm)時，奈米羥基磷灰石也不能進入牙本質小管。

實施例6：奈米羥基磷灰石、其它多羧基化合物和可溶性鈣製備懸浮液

6.1實驗步驟

按照下表32中不同比例配置懸浮液3-I、3-II、3-III、3-IV、3-V，其中的Nano HAP使用的是第1圖所示的Nano HAP，2-膦酸基丁烷-1,2,4-三羧酸四鈉(PBTCA.Na4)需要用NaOH把pH值調節到8.0。分別將懸浮液3-I、3-II、3-III、3-IV、3-V處理得到的模型B在掃描電子顯微鏡下進行觀察。

6.2實驗結果分析

可溶性鈣與多羧基物質重量百分比的重量百分比的比值(計算值)如下表33所示：

使用模型B功效測試結果如下表所示：

儘管本申請已公開多個方面和實施方式，但是在不違背本申請主題精神和範圍的前提下，本領域技術人員顯然可以對其進行各種等同改變和修改。本申請公開的多個方面和實施方式僅用於舉例說明，其並非旨在限制本申請，本申請的實際保護範圍以權利要求為准。

Claims (30)

1. 一種口腔護理組合物，其包含奈米羥基磷灰石、多羧基化合物、可溶性鈣和口腔可接受的載體，其中所述可溶性鈣的莫耳濃度(mol/L)：多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)的比例範圍為約0.00178-約0.361。
2. 如申請專利範圍第1項所述之口腔護理組合物，其中所述口腔護理組合物中的奈米羥基磷灰石能夠進入牙本質小管。
3. 如申請專利範圍第2項所述之口腔護理組合物，其中所述奈米羥基磷灰石能夠進入牙本質小管至少約5微米深。
4. 如申請專利範圍第1項所述之口腔護理組合物，其中所述多羧基化合物選自下組：檸檬酸根化合物、聚天冬胺酸鹽、亞胺基二琥珀酸鹽、2-膦酸基丁烷-1,2,4-三羧酸鹽、聚丙烯酸鹽。
5. 如申請專利範圍第1至4項任一項所述之口腔護理組合物，其中所述可溶性鈣濃度(ppm)的範圍為約7.34ppm-約800ppm。
6. 如申請專利範圍第1至4項任一項所述之口腔護理組合物，其中：1)奈米羥基磷灰石在組合物中的重量百分比(w/w)範圍為約0.01%到約50%；2)多羧酸根在組合物中的重量百分比(w/w)範圍為約0.001%到約30%，以及 3)多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)：奈米羥基磷灰石分子的莫耳濃度(mol/L)的比例範圍為約1.238到約99.041。
7. 如申請專利範圍第6項所述之口腔護理組合物，其中所述奈米羥基磷灰石的重量百分比(w/w)的範圍為約0.1%-約20%。
8. 如申請專利範圍第6項所述之口腔護理組合物，其中所述多羧基化合物中的多羧酸根在口腔護理組合物中的重量百分比(w/w)的範圍為約0.01%-約12%。
9. 如申請專利範圍第8項所述之口腔護理組合物，其中所述多羧基化合物中的多羧酸根在口腔護理組合物中的重量百分比(w/w)為約0.0874%-約6.995%。
10. 如申請專利範圍第1項所述之口腔護理組合物，其中所述口腔可接受的載體包括增稠劑、磨擦劑、表面活性劑、調味劑中的一種或多種。
11. 如申請專利範圍第1項所述之口腔護理組合物，其進一步含有一種或多種活性成分。
12. 如申請專利範圍第11項所述之口腔護理組合物，其中所述活性成分包括抗齲劑、抗敏劑、和/或抗菌劑。
13. 如申請專利範圍第12項所述之口腔護理組合物，其中所述抗齲劑包含氟化物離子源。
14. 如申請專利範圍第12項所述之口腔護理組合物，其中所述抗敏劑包含鉀離子源。
15. 如申請專利範圍第1項所述之口腔護理組合物，其為牙膏、凝膠或漱口水。
16. 一種製備如申請專利範圍第1至15項任一項所述之口腔護理組合物之方法，其包括將多羧基化合物、奈米羥基磷灰石、可溶性鈣與口腔可接受的載體混合。
17. 一種包含奈米羥基磷灰石、多羧基化合物和可溶性鈣的含水混合液，其中所述可溶性鈣的莫耳濃度(mol/L)：多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)的比例範圍為約0.00178-約0.361。
18. 如申請專利範圍第17項所述之含水混合液，其中多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)：奈米羥基磷灰石分子的莫耳濃度(mol/L)的比例範圍為約1.238到約99.041。
19. 如申請專利範圍第17至18項任一項所述之含水混合液，其中在所述含水混合液中，所述奈米羥基磷灰石的顆粒大小的範圍為約10nm到約100nm。
20. 如申請專利範圍第17項所述之含水混合液，其中所述含水混合液的pH值為約7到約14。
21. 如申請專利範圍第17項所述之含水混合液，其進一步包含金屬離子。
22. 如申請專利範圍第21項所述之混合液，其中所述金屬離子能夠與多羧基化合物中的羧基相互作用。
23. 如申請專利範圍第22項所述之混合液，其中所述金屬離子包括銅離子、鋅離子、銀離子或其任意組合。
24. 一種製備如申請專利範圍第1至15項任一項所述之口腔護理組合物之方法，其包括將申請專利範圍第17-23項所述的含水混合液與口腔可接受的載體混合。
25. 一種如申請專利範圍第17-23項任一項所述之包含奈米羥基磷灰石、多羧基化合物和可溶性鈣的含水混合液在製備用於緩解或預防牙齒敏感的口腔護理組合物中的用途。
26. 一種如申請專利範圍第17-23項任一項所述之包含奈米羥基磷灰石、多羧基化合物和可溶性鈣的含水混合液在製備用於填充牙齒中的牙本質小管的口腔護理組合物中的用途。
27. 一種製備如申請專利範圍第17-23項任一項所述之包含奈米羥基磷灰石、多羧基化合物和可溶性鈣的含水混合液的方法，其包括將多羧基化合物、奈米羥基磷灰石和可溶性鈣在水溶液中混合。
28. 如申請專利範圍第27項所述之方法，其中所述多羧基化合物選自下組：檸檬酸根化合物、聚天冬胺酸鹽、亞胺基二琥珀酸鹽、2-膦酸基丁烷-1,2,4-三羧酸鹽、聚丙烯酸鹽。
29. 一種組合物，其包含奈米羥基磷灰石、多羧基化合物、和可溶性鈣，其中所述可溶性鈣的莫耳濃度(mol/L)：多羧基化合物中羧酸根的莫耳濃度(mol/L)的比例範圍為約0.00178-約0.361。
30. 如申請專利範圍第29項所述之組合物，其特徵在於，當分散於水中後，形成如申請專利範圍第17-23項任一所述的含水混合液。