CN105669751A - 非环核苷酸磷酰胺类化合物及其盐的制备以及在抗病毒方面的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药化学抗病毒领域，涉及一种非环核苷酸磷酰胺类化合物及其盐的制备以及在用于治疗艾滋病(HIV)、乙型肝炎及其乙肝病毒(HBV)等病毒感染性疾病中的应用。一种非环核苷酸磷酰胺类化合物及其异构体、药学可接受的盐、水合物、溶剂合物或结晶，具有通式Ⅰ，通式Ⅰ的结构为，

Description

非环核苷酸磷酰胺类化合物及其盐的制备以及在抗病毒方面的应用

技术领域

本发明属于医药化学抗病毒领域，具体涉及一类新的氘代非环核苷酸磷酰胺类化合物或其异构体以及含有氘代非环核苷酸磷酰胺类化合物或其异构体的联合用药作为抗病毒的用途，特别是治疗HIV感染的或/和HBV感染的病人的用途。

背景技术

人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1,艾滋病)，仍然是世界上传染性最严重的疾病之一。尽管人类相继开发了多种药物和方法进行预防和治疗,现状是HIV-1感染仍处到大流行状态。估计世界上有3千9百万人感染艾滋病，每年约4百万人死亡。仅在2009年，大约有270万新发艾滋病感染。目前FDA批准22个药物用于治疗艾滋病，按照他们的作用方式至少有四类：(1)逆转录酶抑制剂分为两种，核苷类药物(NRTI)和非核苷类药物(NNRTI)；(2)蛋白酶抑制剂(PI)；(3)整合酶抑制剂(INSTI)；(4)进入抑制剂(CCR₅inhibitorsorfusioninhibitors).联合用药的鸡尾酒疗法(HAART)可以最大程度的控制HIV的复制(manageable)，降低体内的HIV病毒数量，延长病人的生命长度和提高生活质量。但是HAART长期治疗HIV感染，容易产生耐药性，使正在治疗的药物活性降低或失去活性，另外毒性和各种副作用也严重的影响病人的生活质量。由于艾滋病在现阶段不能治愈，疫苗开发进展缓慢，所以低毒，高效，并对临床的各种耐药株敏感的药物仍然是HIV药物开发的热点。

吉利德科学公司开发的特鲁瓦达(Truvada)(Tenofovir/emtricitabine)是非常广泛的治疗艾滋病的鸡尾酒疗法的组分之一，在2011年销售额为31.48亿美元，在21012年销售额为31.94亿美元。2012年7月16日,FDA批准每天一次的口服药特鲁瓦达作为第一个可减少性传播所致成人HIV-1型感染风险的药物。TDF是Truvada的成分之一。TDF尽管在活性和毒性方面已经非常优秀,但是在血浆中不稳定，极其容易被水解酶水解，导致TFV(PMPA)在血浆中的浓度很高。而在血浆中高浓度的TFV是产生肾毒性的因素之一。血浆中高浓度的TFV聚集在肾近曲小管，高浓度的PMPA在肾近曲小管的聚集直接导致了肾毒性，特别是对肾功能缺陷的病人更为显著。为了进一步减轻肾毒性和降低TDF在临床的用量，吉利德科学公司开发了活性更好，代谢更稳定的化合物替诺福韦艾拉酚胺(Tenofoviralafenamidefumarate(TAF))。TAF在血浆中更稳定，可以被组织中富含的CathepsinA代谢而不被血浆中的水解酶水解，所以可以有效地减少在血浆中PMPA的浓度，提高PMPA在组织中的浓度，由于PMPA在血浆中的暴露浓度低，所以TAF在临床中毒性更小，组织选择性更高。另外，低剂量的TAF也可以达到和300毫克的TDF相似的临床效果，并且在组织细胞的浓度更高，所以在临床应用中，TAF的剂量是10毫克，对比的TDF是300毫克，低剂量的TAF也是降低毒性的因素之一。USFDA已经批准TAF的联合用药用于治疗治疗HIV患者：单一片剂(elvitegravir/cobicistat/emtricitabine/tenofoviralafenamide)和固定配方(emtricitabine/tenofoviralafenamide).在二期临床研究的是单一片剂(darunavir/cobicistat/emtricitabine/tenofoviralafenamide).

在泰诺福韦alafenamide(GS-7340)(TAF)的临床一期和临床二期的研究中，TAF和TDF在药代动力学，安全性和抗病毒活性方面进行了比较¹：(1)药代动力学方面：(a)TAF作为一种新型的口服前药，在血浆中稳定，然后通过主动转运和被动扩散的方式进入细胞，在细胞内迅速地转化为替诺福韦。TDF在血浆中不稳定，容易被各种水解酶水解。所以在血浆中，TDF受试者的泰诺福韦浓度比TAF组的高出很多。(b)TAF组在细胞内有较高的替诺福韦浓度。当作为单一治疗，每日口服一次持续14天中的HIV-1感染治疗，受试者分别口服40mgTAF和比较组300mgTDF。C_max的数值为13和207ng/mL和AUC_0-t为383与1810ng·h/mL。在PBMC细胞中，口服TAF40mg和120mg的替诺福韦浓度为8.2μM和16.9μM，对照组口服300毫克的TDF的替诺福韦浓度为0.9μM。(2)安全性：不良反应如头痛，恶心，胀气,在三组受试者处于同一水平。(3)抗病毒活性：14天后，TDF受试组的HIV-1病毒的RNA的平均变化为-0.94log₁₀copies/mL。口服40mg的TAF和120mg的TAF的数值分别为-1.57log₁₀copies/mL和-1.71log₁₀copies/mL。

结果显示，TAF比TDF显示出更有效的抗HIV-1活性，具有更高细胞内的替诺福韦水平，同时在血浆中保持较低的替诺福韦浓度。

TAF和TDF同样具有优秀的抗乙肝活性。

全球超过3.5亿人有慢性乙肝，因乙肝导致的肝癌，肝硬化及其他并发症每年多达100万人死亡。乙肝目前的治疗方法包括5个上市的核苷类药物和α干扰素(interferon-αandpegylatedinterferonα-2a)。IFN-α显示临床益处的患者达60％，还有7％的清除率，但是严重的副反应，导致许多患者停止治疗。核苷类药物可以口服，低毒，并且对几乎所有患者有效，但是不能完全治愈和产生的耐药性是一个问题。将来开发不同作用机理的联合疗法和针对清除cccDNA小分子药物是治疗乙肝的热点。目前，寻找高效，低毒的核苷类药物仍然是一个重要的发展方向。

FDA批准的药物极其耐药性产生的速率²

2013年的AASLD会议上³，TAF显示了和TDF相似的抗乙肝活性和更低的肾毒性。在口服8、25、40、120毫克的TAF的受试者和口服300mg的对照组中，经过28天的治疗，HBVDNA的降低都具有可比性。根据临床1b的安全性评估，尽管口服40和120mg的TAF受试者显现出较多的不良反应，但没有与肾有关的毒性。目前，TAF正在进行抗乙肝的三期临床试验。

从上面的论述中，TAF和TDF在治疗乙肝有相同的临床效果，但是TAF的用量更小，毒性更低，在耐药性和将来的联合治疗中必将发挥更大的作用。

总之，由于TAF具有临床应用的低毒性和很高的抗HIV和HBV活性，因此开发具有独立知识产权的氘代TAF的类似物，保持结构的微小变化，维持TAF优秀的抗病毒活性，同时具有在血浆中更好的稳定性和口服生物利用度。

氘原子是一种无毒，自然界存在的氢原子的同位素。氘原子取代氢原子是一类的非常广泛的生物电子等排体，所得到的氘代化合物和氢的化合物在很多方面有极其的相似性，

但是这个概念应用到药物设计和开发方面，能提供很大的优越性。由于氢和氘在空间体积和物化性质极其接近，所以氘代的药物分子在整体的电性分布，药效基团的空间配置，以及分子的构象和药物和蛋白酶的相互作用都有极大的类似性，这些方面维持了原有药物的高活性和临床特征。另一方面，氘和氢在物化性质方面是不一样的。例如，氘的体积比氢小，C-D的键长比C-H短，氘的亲脂性差一些，这些都会反映到氘代药物的理化性质，从而影响药物的酸碱性，和结合蛋白的亲和力，特别是改变CYP450的氧化代谢，从而改变药物的药代动力学特征和毒性的各个侧面。美国的AuspexPharmaceuticals对氘代药物进行了成功的探索，在药物产品线上有5个氘代药物，其中两个氘代药物分别在一期和三期临床。SD-809是氘代的丁苯那嗪。丁苯那嗪是FDA批准的唯一用于治疗亨廷顿舞蹈病运动障碍性疾病。SD-809已经完成三期临床研究。2014年12月16号的新闻公告称，SD-809将在2015年中旬将报FDA批准，市值已经达到14亿美元，(auspex-shares-soar-on-late-stage-results-from-huntingtons-study)。SD-809提高了药物的耐受性和降低了毒性，在临床上已经证明了氘代药物确实改变了药物的代谢速率和提高了药物的安全性(http://www.auspexpharma.com/pipeline/)。在抗病毒领域，美国的AchillionPharmaceuticalsinc.开发的氘代ACH-3422抗丙肝药物正在一期临床，市值已达13亿美元。ACH-3422是一个氘代的2’-甲基的核苷的前药，和Sofosbuvir相比，具有更好的代谢稳定性。中国的贝达药业也公开了艾克替尼的氘代专利(WO2014028914).所以氘代药物是药物设计和开发的一个重要选择之一。

发明内容

本发明公开了一种非环核苷酸磷酰胺类化合物及其异构体、药学可接受的盐、水合物、溶剂合物或结晶，具有通式Ⅰ，通式Ⅰ的结构为，

其中：

(1)取代基R₁-R₁₂独立地选自氢、氘、烷基、取代烷基、氘代烷基、芳基、氘代芳基、卤代烷基、烷氧基烷基、芳基烷基、环烷基、杂环烷基、氘代烷氧基烷基、氘代芳基烷基、氘代环烷基或氘代杂环烷基，并且至少其中一个取代基R₁-R₁₂选择独立地选自氘、氘代烷基、氘代卤烷基、氘代芳基、氘代烷氧基烷基、氘代芳基烷基、氘代环烷基或氘代杂环烷基；

(2)R₁选自烷基、取代烷基、卤代烷基、氘代烷基、氘代卤烷基、烷氧基烷基、芳基烷基、环烷基或杂环烷基；取代烷基的取代基独立选自一个或多个烷氧基、环烷基、杂环烷基、氰基、羧基、酯基、酰胺基、氨基、羟基；R₁优先选自异丙基或氘代异丙基；

(3)R₂、R₃独立选自氢、氘、烷基、卤代烷基、氘代烷基、氘代卤烷基、烷氧基烷基、芳基烷基、环烷基或杂环烷基；R₂、R₃优先选自氢、氘、甲基或氘代甲基；

(4)R₂、R₃、R₆、R₇独立地选自氢、氘、甲基或包括CH₂D、CHD₂和CD₃的氘代甲基；

(5)R₂、R₃选自R₂、R₃可以形成C_3-8环或螺环，R₁选自氘代异丙基；

(6)R₄、R₅、R₈、R₉、R₁₀和R₁₁独立地选自氢或氘；

(7)R₁₂独立地选自取代或非取代的C_6-10芳基或杂芳基、氘代的C_6-10芳基或杂芳基，其中芳基选自苯基、萘基或联苯基；

所述的具有通式Ⅰ的非环核苷酸磷酰胺类化合物或其异构体、可药用盐、水合物、溶剂合物或结晶，所述通式Ⅰ所示化合物中磷原子具有手性，其构型是S-构型或R-构型，或者是S-构型和R-构型的混合物；根据氨基酸的性质，优先选择的磷原子的构型可以同；对于L-氨基酸，磷原子的构型优先选择S-构型。

所述的具有通式Ⅰ的非环核苷酸磷酰胺类化合物或其异构体、可药用盐、水合物、溶剂合物或结晶，其特征在于：所述通式Ⅰ所示化合物中氨基酸酯是L-氨基酸酯、D-氨基酸酯、氘代的L-氨基酸酯、氘代的D-氨基酸酯或非天然氨基酸酯。

所述的具有通式Ⅰ的非环核苷酸磷酰胺类化合物或其异构体、可药用盐、水合物、溶剂合物或结晶，其特征在于：其中R₁₂是芳基或杂芳基、氘代芳基或氘代杂芳基，芳基包括苯基、联苯基或萘基；优先的基团是苯基或氘代苯基。

所述的具有通式Ⅰ的非环核苷酸磷酰胺类化合物或其异构体、可药用盐、水合物、溶剂化物或结晶，其特征在于：其中R₁选自氘代异丙基，R₂选自氢，R₃选自甲基，氨基酸的手性为R或者S，R₁₂选自苯基。

所述的具有通式Ⅰ的非环核苷酸磷酰胺类化合物或其异构体、可药用盐、水合物、溶剂化物或结晶，其特征在于：其中R₁选自异丙基，R₂选自氘代甲基，R₃选自氢、氘或甲基，R₁₂选自苯基。

所述的具有通式Ⅰ的非环核苷酸磷酰胺类化合物或其异构体，与腺嘌呤氨基部分形成的盐包括富马酸盐、半富马酸盐、磷酸盐、盐酸盐、硫酸盐和其他药学可用盐。

如上述所述的具有通式Ⅰ的非环核苷酸磷酰胺类化合物或其异构体、可药用盐、水合物、溶剂合物或结晶的应用，与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合制备成药物制剂以及纳米制剂，以适合于经口或胃肠外给药；给药方法包括皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内和经口途径；所述制剂施用途径包括输注或推注，通过经上皮或皮肤粘膜吸收的途径施用；给药包括全身的或局部的；经口施用制剂包括固体或液体剂型，具体而言，包括片剂、丸剂、粒剂、粉剂、胶囊剂、糖浆、乳剂和混悬剂；所述制剂可通过本领域已知的方法制备，且包含药物制剂领域常规使用的载体、稀释剂或赋形剂，纳米制剂。

一种医药组合物，其包含上述所述的化合物或其异构体、可药用盐、水合物、溶剂合物或结晶和医学上可接受的赋形剂和纳米制剂。

所述的医药组合物，包含另外的治疗剂和增强剂。

所述的医药组合物，其中所述的另外的治疗剂独立的选自以下组成的群：HIV蛋白酶抑制剂、HIV逆转录酶非核苷抑制剂、HIV逆转录酶核苷抑制剂、HIV逆转录酶核苷酸抑制剂、HIV整合酶抑制剂和CCR5抑制剂、HBV衣壳抑制剂(capsidinhibitor)、cccDNA形成抑制剂、cccDNA表观遗传修饰剂或乙肝RNAi药物；增强剂包括利托那韦和可比西他(Cobicistat)。

一种治疗和预防感染人类免疫缺陷病毒HIV的方法，包括使用上述所述的化合物或其异构体、可药用盐、水合物、溶剂合物或结晶和包含所述的具有通式Ⅰ的非环核苷类化合物或其异构体的医学上可接受的赋形剂、纳米制剂和医药组合物。

一种治疗和预防感染乙肝和乙肝病毒的方法，包括上述所述的化合物或其异构体、可药用盐、水合物、溶剂合物或结晶和包含所述的具有通式Ⅰ的非环核苷类化合物或其异构体的医学上可接受的赋形剂、纳米制剂和医药组合物。

治疗和预防HIV和HBV的方法，包括上述所述的化合物或其异构体、可药用盐、水合物、溶剂化物或结晶和包含所述的具有通式Ⅰ的非环核苷酸磷酰胺类化合物或其异构体的医学上可接受的赋形剂、纳米制剂和医药组合物。

所述的具有通式Ⅰ的非环核苷酸磷酰胺类化合物或其异构体、药学可接受的盐、水合物、溶剂合物或结晶，通式Ⅰ所示的化合物包括以下结构：

(1)R₂选自H、氘、C_1-6烷基；优先地，R₂选自氢或甲基；

(2)R₃选自H、氘、C_1-6烷基；优先地，R₃选自氢或甲基；

(3)Ar选自苯基、氘代苯基、取代苯基、联苯基、取代联苯基、萘基或杂芳基；Ar优先选自苯基或氘代苯基。所述的通式I和通式II所示化合物或其立体异构、或药学上可接受的盐,包括以下结构：

术语定义

除非另外定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。术语“异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体。包括顺反异构体、对映异构体和构象异构体。所有异构体均属于本发明的范围。

术语“盐”是指本发明所述的化合物与酸形成的药学上可接受的盐，所述的酸选自：磷酸、硫酸、盐酸、氢溴酸、柠檬酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、琥珀酸、富马酸、半富马酸、醋酸、乳酸、硝酸、磺酸、对甲苯磺酸、苹果酸、甲烷磺酸或其类似物。

术语“溶剂化物”是指通过与溶剂分子配位形成固态或液态的配合物的本发明化合物的形式。水合物是溶剂合物的特殊形式，其中与水发生配位。在本发明范围内，溶剂合物优选是水合物。

术语“结晶”是指本发明所述的化合物形成的各种固体形态，包括晶型和无定形。

术语“芳基”是指苯基、连苯基和萘基等。其中苯基、连苯基和萘基都可以被一个或多个卤素、烷基、环烷基(包括环丙烷和环丁烷等)、烯基、酯基、烷基酯基、烷基羧基、烯基酯基、烯基羧基、氰基、氨基、酰胺基、磺胺基取代。

术语“烷基”是指直链、支链或环状的饱和烃基和取代的烷基，优选6个碳原子以下的烃基。烷基的实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环丁基、正戊基、异戊基、新戊基、环己基、正己基、异己基、2,2,-甲基丁基和2,3-二甲基丁基。术语“C_1-6烷基”是指含有1-6个碳原子的直链、支链或环状的饱和烃基。术语“C_1-4烷基”是指含有1-4个碳原子的直链、支链或环状的饱和烃基。

术语“卤素”是指氟、氯、溴、碘。

氘是氢的同位素，原子质量是后者的2倍，与碳的结合更强。氘化“和”氘“表示氢在指定位置被替换为氘。一个“氘化的取代基”是取代基，其中至少一个氢被以指定的百分比富集取代的氘。

积极有益效果：本发明的氘代非环核苷酸磷酰胺类化合物具有和TAF相似的抗病毒活性，在药代动力学方面本发明的化合物在血浆中更稳定，水解酶更难水解，进一步降低PMPA在血浆中的暴露，所以本发明的化合物比TAF在毒性方面特别是肾毒性方面具有优越性。另外本发明的化合物突破了原有药物的专利保护，具有自主的知识产权，并在药代动力学和毒性方面比现有的药物有明显的提高，可以用低剂量的氘代TAF或其异构体衍生物用来治疗HIV和/或HBV患者。

具体实施方式

下面结合具体实施例，对本发明做进一步的说明：

反应式1

实施例1

步骤1：

异丙基(叔丁氧羰基)-L-丙氨酸-3,3,3-d₃(47)

L-Boc-丙氨酸-3,3,3-d₃(20g,0.104mol)溶解在干燥的二氯甲烷(400mL)中，接着加入异丙醇(6.87g,0.114mol)。反应液冷却到0℃-5℃，分批加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCHCl)(30.02g,0.156mol)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)(1.2g,0.0104mol).混合物缓慢升至室温，搅拌过夜，用二氯甲烷稀释，有机相用饱和的碳酸氢钠，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱层析(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯:100/10)得到化合物47，18.2g,75％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)：δ7.24(d,1H),4.90(m,1H),3.92(m,1H),1.14-1.37(m,15H)。MS-ESI:235.32(M+H)⁺。

步骤2：

L-丙氨酸异丙酯-3,3,3-d₃盐酸盐(48)

异丙基(叔丁氧羰基)-L-丙氨酸-3,3,3-d₃(47)(18g,76.82mmol)溶解在无水乙醚(300mL),加入氯化氢的乙醚溶液(2.0M,200mL),在室温下搅拌过夜，加热至40℃，保持30分钟，冷到0℃，搅拌1小时，过滤，冷乙醚洗涤得到白色固体(48)，9.17g,70％。产物不需要进一步纯化，干燥后直接进行下一步反应。

步骤3和4：

异丙基((S)-(((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)2-丙基)氧基)甲基)(苯氧基)磷酰基)-L-丙氨酸-3,3,3-d₃(1)把苯基氢((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙烷-2-基)氧基)甲基)膦酸(1g,2.75mmol)、L-丙氨酸异丙酯-3,3,3-d₃盐酸盐(48)(0.94g,5.5mmol)、二硫二吡啶(1.2g,3.2mmol)、三苯基膦(1.44g,5.5mmol)溶解于25ml吡啶中，N₂保护下，在60℃搅拌6分钟后，加入三乙胺(2.2ml,16mmol)，在80℃反应过夜。反应液浓缩，得到的残留物溶于二氯甲烷。硅胶柱层析，先用石油醚：乙酸乙酯(100：20)洗脱然后二氯甲烷:乙醇＝100:5-7洗脱得到化合物49，1.18g,45％.磷酸酯的R/S的比例大致为1：1。

制备HPLC拆分产物1：异丙基((S)-((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基氧基)甲基)(苯氧基)磷酰基)-L-丙氨酸-3,3-3-d₃(1)

异丙基(((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)(苯氧基)磷酰基)-L-丙氨酸，3,3,3-d₃(49)(1g,2.08mmol)用HPLC(ChiralpakID)拆分，正己烷和乙醇为洗脱剂，UV254为检测手段，收集第二个峰的化合物，浓缩，得到400mg,40％.¹HNMR(400MHz,CDCl₃)：δ8.33(s,1H),8.02(s,1H),7.08-7.55(m,5H),6.00(bs,2H),5.02(m,1H),4.33(m,1H),4.01(m,4H),3.68(s,1H),1.22(m,9H)。MS-ESI:480.5(M+H)⁺。

步骤5：

异丙基((S)-((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基氧基)甲基)(苯氧基)磷酰基)-L-丙氨酸3,3-3-d₃(1)异丙基(((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)(苯氧基)磷酰基)-L-丙氨酸，3,3,3-d₃(49)(1g,2.08mmol)加到5.8mL乙腈中，然后减压下蒸去3.6mL乙腈，冷却到20℃，加入化合物1的晶种(5mg),在20℃搅拌1小时，加入苯酚(20mg,0.21mmol)和DBU(32mg,0.21mmol),继续搅拌24小时，冷到0℃，在此温度下搅拌18小时，过滤，用冷的乙酸异丙酯和乙腈的混合液(1：1；3mL)洗涤，干燥，得到单一的产物1，0.6g，60％。氢谱同上。

步骤6：

异丙基((S)-((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基氧基)甲基)(苯氧基)磷酰基)-L-丙氨酸-3,3-3-d₃富马酸盐(50)

异丙基((S)-((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基氧基)甲基)(苯氧基)磷酰基)-L-丙氨酸3,3-3-d₃

(1)(2g,4.17mmol),富马酸(440mg,3.79mmol)加到48.5mL乙腈,回流到所有的固体溶解，热过滤，冷到5℃，在5℃下静置12小时，过滤，用乙腈18mL洗涤，得到2g白色固体,80％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)：8.12,8.14(2s,2H),7.12-7.33(m,5H),6.63(s,2H),5.49(m,1H),4.92(m,1H),3.80-4.28(m,6H),1.08-1.18(m,9H)。MS-ESI:480.5(M+H)⁺。

实施例2

同样的方法合成磷酰胺D-氨基酸异丙酯：

异丙基((R)-((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基氧基)甲基)(苯氧基)磷酰基)-D-丙氨酸-3,3-3-d₃富马酸盐(51)

异丙基((R)-((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基氧基)甲基)(苯氧基)磷酰基)-D-丙氨酸3,3-3-d₃

(3)(0.4g,0.83mmol),富马酸(88mg,0.75mmol)加到9mL乙腈,回流到所有的固体溶解，热过滤，冷到5℃，在5℃下静置12小时，过滤，乙腈4mL洗涤，得到0.3g白色固体,61％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)：13.13(s,2H),8.11,8.14(2s,2H),7.02-7.34(m,5H),6.63(s,2H),5.59(m,1H),4.84(m,1H),3.83-4.26(m,6H),1.04-1.15(m,9H)。MS-ESI:480.5(M+H)⁺。

同样的方法合成了以下化合物和相应的富马酸盐：

反应式2

实施例3

步骤1:

丙烷-2-基的2-d(叔丁氧羰基)-L-丙氨酸(53)

L-Boc-丙氨酸(2.18g,11.5mmol)溶解在干燥的二氯甲烷(40mL)中，接着加入2-氘异丙醇(0.98mL,12.6mmol)。反应液冷却到0℃-5℃，分批加入EDCHCl(3.31g,17.2mmol)和DMAP(140mg,1.15mmol).混合物缓慢升至室温，搅拌过夜，用二氯甲烷稀释，有机相用饱和的碳酸氢钠,饱和的食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱层析(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯：100/10)得到化合物53,1.87g,70％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ7.23(d,1H),3.91(m,1H),1.12-1.38(m,18H)。MS-ESI:233.3(M+H)⁺。

步骤2:

丙烷-2-基的2-d的L-丙氨酸盐酸盐(54)

丙烷-2-基的2-d(叔丁氧羰基)-L-丙氨酸(53)(1g,4.3mmol)溶解在28mL无水乙醚中,加入氯化氢的乙醚溶液(2.0M,20mL),在室温下搅拌过夜，浓缩，加入少量的乙醇，浓缩，得到的白色固体过滤，冷乙醚洗涤，得到白色固体54，0.39g,54％。盐酸盐充分干燥，直接进行另一步反应。

步骤3:

丙-2-基的2-d((S)-((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)(苯氧基)磷酰基基)-L-丙氨酸(16)在4mL二氯甲烷中加入丙烷-2-基的2-d的L-丙氨酸盐酸盐(57)(1g,5.92mmol)和碳酸氢钾(1.45g,14.5mmol)，在室温下剧烈搅拌过夜，过滤，用少量的二氯甲烷洗涤，二氯甲烷相用干燥的分子筛干燥5h，过滤到另一个反应瓶中在-20℃低温保存。

向装有苯基氢((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙烷-2-基)氧基)甲基)膦酸(0.5g,1.37mmol)的反应瓶中加入3mL甲苯和二氯亚砜(0.15mL，2.05mmol)在70℃搅拌三天，减压下蒸干溶剂，再用干燥的3mL甲苯稀释。3mL甲苯的膦酰氯溶液缓慢地加入到-25℃的丙烷-2-基的2-d的L-丙氨酸的二氯甲烷溶液中，并持续加入少量的三乙胺使反应液维持中性，升至室温，搅拌3小时，碳酸氢钠水溶液，水，饱和食盐水洗涤，浓缩，HPLC分离，得到产物16，0.32g，50％。¹HNMR(400MHz,CDCl₃):δ8.34(s,1H),8.04(s,1H),7.05-7.19(m,5H),6.02(brs,2H),4.32(d,1H),3.70-4.15(m,6H),1.16-1.33(m,12H)。MS-ESI:478.49(M+H)⁺。

步骤4:

丙-2-基的2-d((S)-((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)(苯氧基)磷酰基基)-L-丙氨酸，富马酸盐(55)

丙-2-基的2-d((S)-((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)(苯氧基)磷酰基基)-L-丙氨酸(16)(100mg,0.21mmol),富马酸(22mg,0.189mmol)加到2.4mL乙腈中,回流到所有的固体溶解，冷到5℃，过滤，用乙腈(1mL)洗涤，得到80mg,65％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.13,8.11(2s,2H),7.12-7.33(m,5H),6.63(s,2H),4.82(m,1H),3.79-4.27(m,6H),1.08-1.18(m,12H)。MS-ESI:478.49(M+H)⁺。

同样的方法合成了一下化合物：

反应式3

实施例4

步骤1:

异丙基(((((R)-1-(6-氨基-8-溴-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)(苯氧基)磷酰基)-L-丙氨酸(57)

8-溴代PMPA(0.875g,2.39mmol)溶于吡啶(10mL),接着加入苯酚(1.12g,11.93mmol)和L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(0.72g,4.3mmol)，加入三乙胺(4.0mL,28.6mmol),在60℃反应6分钟，加入二硫二吡啶(3.68g,16.7mmol)、三苯基膦(4.38g,16.7mmol)溶解于吡啶(15mL)的溶液，N₂保护下，在80℃反应过夜。浓缩，得到的残留物溶于二氯甲烷。硅胶柱层析，先用石油醚：乙酸乙酯(100：20)洗脱然后二氯甲烷:乙醇＝100:5-7洗脱得到化合物57，0.69g，52％。MS-ESI:(M+H)⁺:556.38。

8-溴代PMPA的制备参考：TomasElbert；PetraBrehova；AntoninHoly.CollectionofCzechoslovakchemicalcommunications,2010,75(7),757-766.

步骤2:

异丙基((S)-((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基-8-d)丙-2-基)氧基)甲基)(苯氧基)磷酰基)-L-丙氨酸(28)

化合物57(1g,1.8mmol)溶解于乙醇和乙酸乙酯的混合液，加入催化量的10％Pd/C，在1个大气压的氘气下反应过夜，过滤，浓缩，得到的残留物用HPLC(ChiralpakID)拆分，正己烷和乙醇为洗脱剂，UV254为检测手段，收集第二个峰的化合物，浓缩，得到200mg，23％。¹HNMR(400MHz,CDCl₃):δ8.34(s,1H),7.05-7.19(m,5H),6.10(brs,2H),5.03(m,1H),4.34(d,1H),3.65-4.15(m,6H),1.16-1.33(m,12H)。MS-ESI:478.49(M+H)⁺。

步骤3:

异丙基((S)-((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基-8-d)丙-2-基)氧基)甲基)(苯氧基)磷酰基)-L-丙氨酸富马酸(58)

化合物28(150mg,0.31mmol),富马酸(32.4mg,0.279mmol)加到3.5mL乙腈中,回流到所有的固体溶解，冷到5℃，过滤，用乙腈1.5mL洗涤，得到85mg,45％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.18(s,1H),7.12-7.33(m,5H),6.63(s,2H),5.48-5.55(m,1H),4.83-4.84(m,1H),3.70-4.22(m,6H),1.06-1.16(m,12H)。MS-ESI:478.49(M+H)⁺。

同样的方法合成以下化合物：

反应式4

实施例5

步骤1:

4-d苯酚(60)

4-溴苯酚(4.2克，24mmol)加入氘代甲醇-d₄(30ml)和三乙胺(9.8mL)，室温搅拌下加入10％无水Pd/C(0.4g),再用氘气置换空气4次，反应过夜。过滤除去Pd/C，浓缩得到黄色油状残留物，硅胶柱层析纯化，流动相为二氯甲烷-乙酸乙酯(100:1，v/v)，得到4-氘代苯酚(0.98克，43％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃):δ7.23-7.20(d,2H),6.84-6.82(d,2H)。

步骤2:

异丙基((S)-((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)(苯氧基-4-d)磷酰基)-L-丙氨酸(43)PMPA(1.08g,3.82mmol)溶于吡啶(15mL),接着加入4-d苯酚(1.81g,19.08mmol)和L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(1.15g,6.88mmol)，加入三乙胺(6.4mL,45.76mmol),在60℃反应6分钟，加入二硫二吡啶(5.88g,26.72mmol)、三苯基膦(7.0g,26.72mmol)溶解于吡啶(30mL)的溶液，N₂保护下，在80℃反应过夜。浓缩，得到的残留物溶于二氯甲烷。硅胶柱层析，先用石油醚：乙酸乙酯(100：20)洗脱然后二氯甲烷:乙醇＝100:5-7洗脱得到化合物，1.27g,70％.得到的化合物进一步用HPLC(ChiralpakID)拆分，正己烷和乙醇为洗脱剂，UV254为检测手段，收集P(S)的化合物，浓缩，得到0.48克，38％。¹HNMR(400MHz,CDCl₃):δ8.32(s,1H),8.02(s,1H),7.05-7.19(m,4H),6.08(brs,2H),5.02(m,1H),4.34(d,1H),3.65-4.15(m,6H),1.16-1.33(m,12H)。MS-ESI:(M+H)⁺:478.49。

步骤3:

异丙基((S)-((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)(苯氧基-4-d)磷酰基)-L-丙氨酸富马酸盐(61)

化合物43(0.2g,0.42mmol),富马酸(44mg,0.37mmol)加到5mL乙腈,回流到所有的固体溶解，热过滤，冷到5℃，过滤，用2mL乙腈洗涤，得到0.12g白色固体,50％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.11和8.13(2s,2H),7.12-7.33(m,4H),6.63(s,2H),5.49-5.52(m,1H),4.82-4.83(m,1H),3.78-3.92(m,6H),1.06-1.16(m,12H)。

同样的方法合成以下化合物：

本发明的化合物抗病毒活性检测

HIV活性测试

将293T细胞按每孔6×10⁴的密度加到24孔板上，用DMSO溶解待测化合物，并配制不同的浓度，于感染前15分钟加入细胞培养液中，DMSO溶剂作空白对照，再加入0.5ml病毒液(根据p24浓度将病毒原液稀释至0.1–0.5ngp24/ml)。感染后48小时，去除上清液，每孔中加入50μl细胞裂解液(Promega)裂解细胞，再将20μl细胞裂解产物加入至30μl荧光素酶底物中(Promega)，用FB15荧光检测器(Sirius)仪器测定细胞荧光素酶的相对活性，以DMSO作对照，计算化合物对野生型HIV-1复制的半数抑制浓度。

将对数生长期的293T细胞按8000～10000个/孔的细胞密度接种至96孔板中，每孔100ul，37℃，5％CO2培养箱中培养24h后，加入待测化合物，并以DMSO为空白对照(终浓度为0.1％)，37℃，5％CO2培养箱中继续培养44小时。向每孔中加入20μlMTS/PMS现配的混合液，37℃，5％CO2培养箱中继续培养4h后显色。在酶联检测仪上，波长490nm和650nm处检测各孔的光吸收值(OD)，在Victor³V1420多标记记数器(PerkinElmer)中检测板的突光,应用MicrosoftExcel和XLfit4.1软件求出CC₅₀值。

合成化合物的抗HIV活性评价：

实验结论：合成的化合物都有很强的抗HIV活性。和TAF的抗HIV活性对比，化合物1，4，16，19，43都显示了更高的活性。所有的合成化合物都达到纳摩尔水平，在所测的细胞系中，没有显示毒性。

合成化合物的抗HBV活性评价：

HepG22.2.15细胞(SELLS,PNAS,1987andSELLS,JV,1988)的染色体整合有完整的HBV基因组，并稳定表达病毒RNA，cccDNA和病毒蛋白质。此外，该细胞还向培养基中分泌成熟的乙肝病毒颗粒。通过qPCR量化病毒粒子DNA的方法可以测量病毒的复制。待测化合物用DMSO溶解为30mM的储存液并保存在-20℃。在96孔细胞培养板中加入每孔10,000个HepG22.2.15细胞，每孔200μL细胞培养基，在37℃,5％CO2细胞培养箱中培养3天至细胞长满。弃掉旧的培养基并加入200μL新鲜的检测培养基(5％FBS)。加入100％DMSO稀释的化合物1μL：稀释为不同的指定的测试浓度，在CO2培养箱中孵育10天，每隔一天(第2,4,6,8,10天)换一次液(5％FBS)，并加入新鲜配制浓度的化合物。在第11天每孔取150μL上清提取病毒DNA。细胞毒性检测板也进行类似处理：最高浓度是150μM。病毒基因组DNA的提取试剂盒为QIAamp96DNABloodKit。经过常规的离心和QPCR过程。用包含HBV基因组的质粒(病毒拷贝数:2*10E6,2*10E5,2*10E4,2*10E3)做标准曲线，并以标准曲线来计算病毒拷贝数。抑制率的计算公式如下：抗病毒的抑制率＝100-(检测值-HPE平均值)/(ZPE平均值-HPE平均值)*100(ZPE:最低浓度化合物孔平均值,HPE:最高浓度化合物孔平均值).抑制率数据通过GraphpadPrism5软件处理并绘制曲线，EC50和EC90通过四参数非线性回归模型计算。细胞毒性％＝100-(检测值/DMSO对照孔平均值*100)。细胞毒性％数据通过GraphpadPrism5软件处理并绘制曲线，CC₅₀通过四参数非线性回归模型计算。

化合物的抗HBV活性评价：

实验结论：所有合成的化合物都有很强的抗HBV活性,优于文献报道的TDF的活性。合成的化合物和TAF比较，在不考虑ADMET的情况下，化合物1，4，7，16，19，28，40都显示了更优秀的活性。所有的合成化合物都达到纳摩尔水平，在所测的细胞系中，没有显示毒性。

TAF在体内经历两类代谢途径：(1)酶对TAF进行水解，最终生成PMPA，再进一步磷酸化生成TNFDP。TNFDP是抗HIV和HBV的有效活性成分。(2)TAF最终在体内大部分以PMPA的形式排出体外，有少量的是以氧化代谢产物的形式排出体外。根据TAF的代谢机理和药物分子设计的基本原理，本专利设计和合成的化合物可有效的增加药物的稳定度，降低药物在血浆的分解，延长作用时间，以及改善药物的生物利用度，从而进一步降低肾毒性和骨毒性。另一方面，由于在血浆中分解很少，在组织细胞和肝细胞中药物的浓度增加，可以使用更低的剂量得到更优秀的临床效果。

TAF的水解酶主要是蛋白酶组织蛋白酶A(lysosomalproteasecathepsinA(CatA))和羧酸酯酶-1。因为这两个酶的作用部位是氨基酸酯，所以对氨基酸的改变将影响酶和氨基酸的作用，改善药物在血浆中的稳定性。尽管腺嘌啉的氧化代谢在代谢过程中起很小的作用，但是腺嘌呤的2,8-位的氘代将增加设计化合物的代谢稳定性。

选择化合物1和16在人全血中的稳定性研究

将TDF、TAF、化合物1和化合物16按等当量的替诺福韦浓度加入人的全血中，再37℃处置1小时，加入Ficoll-Paque泛影钠溶液，分出血浆、PBMC，用甲醇提取，HPLC检测，结果显示化合物1和化合物16在血浆中有90％和93％的原药浓度，高于TAF在血浆中有85％的原药浓度，而在血浆中检测不到TDF。说明化合物1和化合物16在血浆中表现了较高的稳定性，并且在血浆中PMPA的浓度很低。进一步的实验将证明化合物1和16及其类似物作为新型的抗病毒化合物可以有效的降低TDF所引起的肾毒性和骨毒性。

参考文献：

1.MartinM.；AndrewZ.；KathleenS.；PeterR.；DionC.；BrianK.；LijieZh.；MichaelW.；MichaelD.M.；WilliamA.L.PhaseI/IIstudyofthepharmacokinetics,safetyandantiretroviralactivityoftenofoviralafenamide,anewprodrugoftheHIVreversetranscriptaseinhibitortenofovir,inHIV-infectedadults.J.Antimicrob.Chemother.2014,69(5),1362-1369.

2.KeeffeE.；DietrichD.；HanS.；etal.AtreatmentalgorithmforthemanagementofchronichepatitisBvirusinfectionintheUnitedStates:2008Update.Clin.GastroenterolHepatol.2008,6,1315-1341.

3.AgarwaK.；FungS.K.；NguyenT.T.；etal.Twenty-EightDaySafetyandEfficacyofTenofovirAlafenamide(TAF)FumarateinChronicHepatitisB(CHB)Patients.64thAnnualMeetingoftheAmericanAssociationfortheStudyofLiverDiseases(AASLD2013).Washington,DC,November1-5,2013.Abstract973.

以上实验结果表明，本发明的化合物具有高效的抗HIV和HBV病毒的能力，与阳性对照药TDF和TAF相比，部分化合物具有更优异的抗病毒活性，肾毒性小，安全性好，具有治疗HIV和HBV病毒具有好的前景。

尽管本发明的具体实施方式已经作了详细描述，但是根据本领域技术人员理解，在不偏离本发明的精神和范围的前提下可以对本发明进行各种修改和改变均在本发明的保护范围之内。本发明的权利范围并不限于上文所作的详细描述，而应归属于本发明的权利要求书。

Claims (16)

1.一种非环核苷酸磷酰胺类化合物及其异构体、药学可接受的盐、水合物、溶剂合物或结晶，其特征在于：具有通式Ⅰ，通式Ⅰ的结构为，

其中：

(1)取代基R₁-R₁₂独立地选自氢、氘、烷基、取代烷基、氘代烷基、芳基、氘代芳基、卤代烷基、烷氧基烷基、芳基烷基、环烷基、杂环烷基、氘代烷氧基烷基、氘代芳基烷基、氘代环烷基或氘代杂环烷基，并且至少其中一个取代基R₁-R₁₂选择独立地选自氘、氘代烷基、氘代卤烷基、氘代芳基、氘代烷氧基烷基、氘代芳基烷基、氘代环烷基或氘代杂环烷基；

(2)R₁选自烷基、取代烷基、卤代烷基、氘代烷基、氘代卤烷基、烷氧基烷基、芳基烷基、环烷基或杂环烷基；取代烷基的取代基独立选自一个或多个烷氧基、环烷基、杂环烷基、氰基、羧基、酯基、酰胺基、氨基、羟基；R₁优先选自异丙基或氘代异丙基；

(3)R₂、R₃独立选自氢、氘、烷基、卤代烷基、氘代烷基、氘代卤烷基、烷氧基烷基、芳基烷基、环烷基或杂环烷基；R₂、R₃优先选自氢、氘、甲基或氘代甲基；

(4)R₂、R₃、R₆、R₇独立地选自氢、氘、甲基或包括CH₂D、CHD₂和CD₃的氘代甲基；

(5)R₂、R₃选自R₂、R₃可以形成C_3-8环或螺环，R₁选自氘代异丙基；

(6)R₄、R₅、R₈、R₉、R₁₀和R₁₁独立地选自氢或氘；

(7)R₁₂独立地选自取代或非取代的C_6-10芳基或杂芳基、氘代的C_6-10芳基或杂芳基，其中芳基选自苯基、萘基或联苯基。

2.根据权利要求1所述的非环核苷酸磷酰胺类化合物或其异构体、可药用盐、水合物、溶剂合物或结晶，其特征在于：所述通式Ⅰ所示化合物中磷原子具有手性，其构型是S-构型或R-构型，或者是S-构型和R-构型的混合物；根据氨基酸的性质，优先选择的磷原子的构型可以同；对于L-氨基酸，磷原子的构型优先选择S-构型。

3.根据权利要求1所述的的非环核苷酸磷酰胺类化合物或其异构体、可药用盐、水合物、溶剂合物或结晶，其特征在于：所述通式Ⅰ所示化合物中氨基酸酯是L-氨基酸酯、D-氨基酸酯、氘代的L-氨基酸酯、氘代的D-氨基酸酯或非天然氨基酸酯。

4.根据权利要求1所述的非环核苷酸磷酰胺类化合物或其异构体、可药用盐、水合物、溶剂合物或结晶，其特征在于：其中R₁₂是芳基或杂芳基、氘代芳基或氘代杂芳基，芳基包括苯基、联苯基或萘基；优先的基团是苯基或氘代苯基。

5.根据权利要求1所述的非环核苷酸磷酰胺类化合物或其异构体、可药用盐、水合物、溶剂化物或结晶，其特征在于：其中R₁选自氘代异丙基，R₂选自氢，R₃选自甲基，氨基酸的手性为R或者S，R₁₂选自苯基。

6.根据权利要求1所述的具有通式Ⅰ的非环核苷酸磷酰胺类化合物或其异构体、可药用盐、水合物、溶剂化物或结晶，其特征在于：其中R₁选自异丙基，R₂选自氘代甲基，R₃选自氢、氘或甲基，R₁₂选自苯基。

7.如权利要求1所述的具有通式Ⅰ的非环核苷类化合物或其异构体，与腺嘌呤氨基部分形成的盐包括富马酸盐、半富马酸盐、磷酸盐、盐酸盐、硫酸盐和其他药学可用盐。

8.如权利要求1-7任意项所述的非环核苷酸磷酰胺类化合物或其异构体、可药用盐、水合物、溶剂合物或结晶的应用，其特征在于：与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合制备成药物制剂以及纳米制剂，以适合于经口或胃肠外给药；给药方法包括皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内和经口途径；所述制剂施用途径包括输注或推注，通过经上皮或皮肤粘膜吸收的途径施用；给药包括全身的或局部的；经口施用制剂包括固体或液体剂型，具体而言，包括片剂、丸剂、粒剂、粉剂、胶囊剂、糖浆、乳剂和混悬剂；所述制剂可通过本领域已知的方法制备，且包含药物制剂领域常规使用的载体、稀释剂或赋形剂，纳米制剂。

9.一种医药组合物，其特征在于：其包含根据权利要求1-8中任一项所述的化合物或其异构体、可药用盐、水合物、溶剂合物或结晶和医学上可接受的赋形剂和纳米制剂。

10.根据权利要求9所述的医药组合物，其特征在于：包含另外的治疗剂和增强剂。

11.根据权利要求10所述的医药组合物，其特征在于：其中所述的另外的治疗剂独立的选自以下组成的群：HIV蛋白酶抑制剂、HIV逆转录酶非核苷抑制剂、HIV逆转录酶核苷抑制剂、HIV逆转录酶核苷酸抑制剂、HIV整合酶抑制剂和CCR5抑制剂、HBV衣壳抑制剂(capsidinhibitor)、cccDNA形成抑制剂、cccDNA表观遗传修饰剂或乙肝RNAi药物；增强剂包括利托那韦和可比西他(Cobicistat)。

12.一种治疗和预防感染人类免疫缺陷病毒HIV的方法，其特征在于：包括使用权利要求1-7中任一项所述的化合物或其异构体、可药用盐、水合物、溶剂合物或结晶和包含所述的具有通式Ⅰ的非环核苷类化合物或其异构体的医学上可接受的赋形剂、纳米制剂和医药组合物。

13.一种治疗和预防感染乙肝和乙肝病毒的方法，其特征在于：包括权利要求1-7中任一项所述的化合物或其异构体、可药用盐、水合物、溶剂合物或结晶和包含所述的具有通式Ⅰ的非环核苷类化合物或其异构体的医学上可接受的赋形剂、纳米制剂和医药组合物。

14.治疗和预防HIV和HBV的方法，其特征在于：包括权利要求1-7中任一项所述的化合物或其异构体、可药用盐、水合物、溶剂化物或结晶和包含所述的具有通式Ⅰ的非环核苷类化合物或其异构体的医学上可接受的赋形剂、纳米制剂和医药组合物。

15.根据权利要求1所述的非环核苷酸磷酰胺类化合物或其异构体、药学可接受的盐、水合物、溶剂合物或结晶，其特征在于：所述的具有通式Ⅰ所示的化合物包括以下结构：

其中：

(1)R₂选自H、氘、C_1-6烷基；优先地，R₂选自氢或甲基；

(2)R₃选自H、氘、C_1-6烷基；优先地，R₃选自氢或甲基；

(3)Ar选自苯基、氘代苯基、取代苯基、联苯基、取代联苯基、萘基或杂芳基；Ar优先选自苯基或氘代苯基。

16.根据权利要求15所述的非环核苷酸磷酰胺类化合物或其异构体、药学可接受的盐、水合物、溶剂合物或结晶，其特征在于：所述的通式I和通式II所示化合物，其立体异构或药学上可接受的盐,包括以下结构：