CN105582534A - 一种无明胶水痘疫苗冻干制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种水痘疫苗冻干制剂，所述的冻干制剂含有水痘疫苗原液和疫苗稳定剂，其中，所述疫苗稳定剂按疫苗原液初始浓度计，含有以下组分：蔗糖3-10％，谷氨酸钠0.01-1％，任选的缓冲液余量；且所述的冻干制剂不含明胶、右旋糖酐、和/或动物源性蛋白。利用本发明不含明胶或动物源性蛋白的稳定剂所制备的疫苗无论是原液还是冻干成品，其稳定性均与现有技术的配方相当，但安全性更好，有望取代现有技术中含有明胶和动物源性蛋白的稳定剂。

Description

一种无明胶水痘疫苗冻干制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及疫苗制造领域。具体地，涉及制备具有高安全性的无明胶水痘疫苗冻干制剂及其制备方法。

背景技术

水痘是一种高度传染性疾病，其发生具有明显的季节性和周期性。通过预防接种水痘疫苗是目前控制病毒传播的唯一方法。由日本大阪大学微生物疾病研究所(BIKEN)的学者建立的VZVOka株，是目前国际上唯一获得WHO认可的疫苗株。临床研究证明，Oka株水痘疫苗接种反应轻微，能诱导机体产生良好的、持久的免疫应答和保护效果。

现行水痘减毒活疫苗所用稳定剂为含谷氨酸钠、蔗糖和明胶的磷酸盐缓冲液，其中明胶成分是动物源性辅料，不但容易引起过敏反应，还存在潜在感染动物源性病毒的安全隐患。然而，在冻干制剂的制备过程中，若缺少了明胶，会造成冻干支架建立不足，制剂呈薄膜状，冻干制剂的水份蒸发少，从而极易导致减毒病毒株的死亡，而这样制备的疫苗制剂则极不稳定。

目前，现有技术中也尝试开发各种替代明胶的疫苗制剂，然而，新加入的制剂却造成了更多比明胶更为严重的副作用，例如右旋糖酐与海藻糖的组合反而造成偶有过敏反应如荨麻疹、皮肤瘙痒、发热、恶心、呕吐等的副作用。因此无明胶的水痘制剂至今迟迟无法上市。因此，尚无一种能够合理替代明胶的水痘疫苗制剂辅料，能达到相同的病毒株稳定性的同时还使其安全性更高。

因此，本领域迫切需要开发一种稳定、安全、副作用少的疫苗稳定剂以及相应的水痘疫苗。

发明内容

本发明提供了一种不含明胶、右旋糖酐或动物蛋白的水痘疫苗冻干制剂及其制备方法。

本发明第一方面，提供了一种水痘疫苗冻干制剂，所述的冻干制剂含有水痘疫苗原液和疫苗稳定剂，其中，所述疫苗稳定剂按疫苗原液初始浓度计，含有以下组分：

蔗糖3-10％，

谷氨酸钠0.01-1％；

任选的缓冲液余量；

且所述的冻干制剂不含明胶、右旋糖酐、和/或动物源性蛋白。

在另一优选例中，所述的冻干制剂在加入生理盐水后能形成pH为7.0的水痘疫苗复溶液。

在另一优选例中，所述的缓冲液含有氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾；较佳地，含有氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾。

在另一优选例中，所述的缓冲液中，各组分的浓度为：氯化钠0.9％、氯化钾0.1％、磷酸氢二钠1.5％、磷酸二氢钾0.2％。

在另一优选例中，所述的动物源性蛋白包括人血白蛋白。

在另一优选例中，所述的蔗糖按疫苗原液初始浓度计为5-8％，较佳地，为5.5-7.5％。

在另一优选例中，所述的疫苗稳定剂还含有海藻糖。

在另一优选例中，所述的海藻糖的量基于疫苗原液初始浓度计，为0.8-5％，较佳地，为2-4％。

在另一优选例中，所述的冻干制剂在10℃以下保存18-24个月后病毒滴度下降0.5-0.6。

在另一优选例中，所述的冻干制剂制备如下：

(i)以水痘病毒为毒种，感染MRC-5人二倍体细胞株并培养，从而获得受水痘病毒毒株感染的MRC-5人二倍体细胞；

(ii)将(i)中受水痘病毒毒株感染的MRC-5人二倍体细胞破细胞并收集上清液，从而获得水痘疫苗原液；

(iii)将(ii)中所述的水痘疫苗原液与权利要求1所述的稳定剂混合，从而获得水痘疫苗制剂；

(iv)将(iv)中的水痘疫苗制剂经冻干工艺后获得水痘疫苗的冻干制剂，其中所述冻干工艺中，冻结温度为-32±2℃，和/或干燥时间为16±1小时。

在另一优选例中，所述水痘疫苗的毒株来自水痘Oka株。

本发明第二方面，提供了一种制备本发明第一方面所述水痘疫苗冻干制剂的方法，其特征在于，包括步骤：

(i)以水痘病毒为毒种，感染MRC-5人二倍体细胞株并培养，从而获得受水痘病毒毒株感染的MRC-5人二倍体细胞；

(ii)将(i)中受水痘病毒毒株感染的MRC-5人二倍体细胞破细胞并收集上清液，从而获得水痘疫苗原液；

(iii)将(ii)中所述的水痘疫苗原液与本发明第一方面所述的稳定剂混合，从而获得水痘疫苗制剂；

(iv)将(iv)中的水痘疫苗制剂经冻干工艺后获得水痘疫苗的冻干制剂，其中所述冻干工艺中，冻结温度为-32±2℃，和/或干燥时间为16±1小时。

在另一优选例中，所述的步骤(i)中，还包括在感染毒株前，用细胞培养液对MRC-5株人二倍体细胞进行扩增传代，其中传代比例为1:2或1:4，生产工艺为细胞工厂，以36±1℃培养3～5天。

在另一优选例中，待MRC-5人二倍体细胞株生长成均匀、致密的单层细胞后，更换培养基为细胞维持液，并加入Oka株毒种感染细胞。

在另一优选例中，待MRC-5人二倍体细胞株出现35％～65％的典型病变时，弃去细胞维持液，用不少于原液量体积的洗涤液洗涤细胞表面。

在另一优选例中，所述的细胞培养液为含红霉素60μg/ml和含胎牛血清10％～15％的MEM。

在另一优选例中，所述细胞扩增传代的接种浓度为4.2×10⁷个细胞/层。

在另一优选例中，所述的毒种按0.001～0.01MOI接种MRC-5人二倍体细胞。

在另一优选例中，所述细胞维持液为含胎牛血清3％的MEM。

在另一优选例中，所述的洗涤液为PBS缓冲液。

在另一优选例中，所述的破细胞包括将受水痘病毒毒株感染的MRC-5人二倍体细胞经冻融、超声后获得。

在另一优选例中，所述的冻融温度为-60℃。

本发明第三方面，提供了一种预防水痘的方法，包括步骤：

(a)将本发明第一方面所述的冻干制剂复溶，从而获得复溶后的水痘疫苗；

(b)向需要的对象施用(a)中所述复溶后的水痘疫苗。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1显示了5种水痘减毒活疫苗成品和复溶后的外观照片，其中，图1a是冻干疫苗成品，图1b是复溶后疫苗，其中，从左到右依次为A、B、C、D、E疫苗。

具体实施方式

本发明人经过广泛而深入的研究，首次意外地发现，由特定比例的蔗糖、谷氨酸钠构成的体系能够有效地形成良好的疫苗稳定系统，能够代替明胶制成水分含量合适的冻干制剂，并使水痘疫苗能够长期保存且不造成毒株滴度的显著下降，所制备的疫苗冻干制剂的稳定性与含明胶的对照制剂相似。此外，实验还证明，缓冲溶液的pH值以及冻干制剂制备过程中的冻干工艺参数也能够对无明胶水痘疫苗冻干制剂具有一定的影响。在此基础上，完成了本发明。

术语

如本文所用，术语“疫苗原液”指的是对感染水痘病毒的细胞培养、破细胞壁、分离的含有水痘减毒病毒的原液。

如本文所用，术语“水痘疫苗制剂”指的是加入本发明稳定剂后的液体疫苗，而当在将本发明水痘疫苗冻干制剂加入生理盐水复溶后，所产生的疫苗液体也可以被称作“水痘疫苗制剂”或“水痘疫苗复溶液”。

如本文所用，术语“水痘疫苗冻干制剂”、“无明胶本发明制剂”可互换使用，均指将水痘疫苗制剂经冻干工艺后获得的特殊冻干制剂形式。

如本文所用，若非另行定义，本发明稳定剂中各成分的浓度均为以水痘疫苗原液的质量计。

水痘毒株

可用于本发明的水痘毒株没有特殊限制，可以为任何WHO批准认可的临床可应用的疫苗株。例如，目前常用的是由日本大阪大学微生物疾病研究所(BIKEN)的学者建立的VZVOka株，其可通过商业购买方式获得。Oka株水痘疫苗接种反应轻微，能诱导机体产生良好的、持久的免疫应答和保护效果。

疫苗稳定剂

如本文所用，术语“疫苗稳定剂”通常指的是一类疫苗组合物中维持疫苗稳定性的药学上可接受的载体。而可用于本发明的疫苗稳定剂不含有任何明胶、右旋糖酐或动物源性蛋白(如人血白蛋白)。本发明所述的疫苗稳定剂所含有的组分如下：

蔗糖3-10％，

谷氨酸钠0.01-1％；

任选的缓冲液余量；

此外，本发明疫苗稳定剂还能够含有海藻糖。

优选地，所述的蔗糖按疫苗原液初始浓度计为5-8％，较佳地为5.5-7.5％；所述的海藻糖按疫苗原液初始浓度计为0.8-2％，较佳地为1-1.5％；所述的谷氨酸钠按疫苗原液初始浓度计为0.05-0.5％，较佳地，为0.1-0.3％。

实验证明，蔗糖不仅具有保护制品生物学活性的效果，而且具有冻干赋形作用，因此稳定剂中蔗糖含量的微小不同能够直接影响制品的外观、溶解度和水分。而当蔗糖浓度为5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％时，均可获得形貌良好、含水量、溶解度优秀的疫苗成品制剂。

通常，本发明的疫苗组合物除了含有本发明疫苗稳定剂，还可以含有除明胶、右旋糖酐和动物蛋白之外的药学上可接受的载体。

可接收的载体指这样一些药剂载体：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在组合物中药学上可接受的载体可含有液体，如水、盐水、缓冲液。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如填充剂、润滑剂、助流剂、润湿剂或乳化剂、pH缓冲物质等。

本发明疫苗稳定剂的制备可按照药学上可接受的常规方法进行。例如将疫苗稳定剂中的各组分按照其具体的可接受的浓度进行混合，并调节pH值，从而使得在冻干制剂复溶后使疫苗制剂的pH值维持为7。

缓冲液

可用于本发明水痘疫苗冻干制剂的缓冲液没有特别限制，可以为任何使本发明水痘疫苗冻干制剂在复溶后pH为7.0的缓冲液。优选地，可用于本发明的缓冲液为PBS(磷酸盐)缓冲液。含有氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾；较佳地，含有氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾。

在另一优选例中，所述的缓冲液中，各组分的浓度为：氯化钠0.9％、氯化钾0.1％、磷酸氢二钠1.5％、磷酸二氢钾0.2％。

制备方法

本发明水痘疫苗冻干制剂的制备方法包括以下步骤：

(i)以水痘病毒为毒种，感染MRC-5人二倍体细胞株并培养，从而获得受水痘病毒毒株感染的MRC-5人二倍体细胞；

(ii)将(i)中受水痘病毒毒株感染的MRC-5人二倍体细胞破细胞并收集上清液，从而获得水痘疫苗原液；

(iii)将(ii)中所述的水痘疫苗原液与本发明第一方面所述的稳定剂混合，从而获得水痘疫苗制剂；

(iv)将(iv)中的水痘疫苗制剂经冻干工艺后获得水痘疫苗的冻干制剂，其中所述冻干工艺中，冻结温度为-32±2℃，和/或干燥时间为16±1小时。

其中，所述的步骤(i)中，还包括在感染毒株前，用细胞培养液对MRC-5株人二倍体细胞进行扩增传代c其中传代比例为1:2或1:4，在获得水痘疫苗原始疫苗病毒后，可采用常规技术对水痘病毒进行培养，例如常规的细胞瓶单瓶和转瓶培养，或细胞工厂培养。优选地，本发明的疫苗组合物中的疫苗原液可采用细胞工厂培养。生产工艺为细胞工厂，以36±1℃培养3～5天。待MRC-5人二倍体细胞株生长成均匀、致密的单层细胞后，更换培养基为细胞维持液，并加入Oka株毒种感染细胞。待MRC-5人二倍体细胞株出现35％～65％的典型病变时，弃去细胞维持液，用不少于原液量体积的洗涤液洗涤细胞表面。

此外，所述的细胞培养液为含红霉素60μg/ml和含胎牛血清10％～15％的MEM；所述细胞维持液为含胎牛血清3％的MEM；所述的洗涤液为PBS缓冲液；所述细胞扩增传代的接种浓度为4.2×10⁷个细胞/层；所述的毒种按0.001～0.01MOI接种MRC-5人二倍体细胞；所述的破细胞包括将受水痘病毒毒株感染的MRC-5人二倍体细胞经冻融、超声后获得；所述的冻融温度为-60℃。

其中，当进行冻干操作时，可根据成分的不同对冻干工艺参数进行选择。例如，本发明采用的冻干工艺参数为冻结温度为-32±2℃，和/或干燥时间为16±1小时。

应用

本发明冻干制剂可以有效地应用于水痘的预防接种中，由于成分简单，尤其不含有明胶、右旋糖酐、和/或动物源性蛋白，因此，本发明冻干制剂在稳定性与传统含明胶制剂相似的情况下，能够提供更好的安全性。因此，本发明水痘疫苗冻干制剂有望在临床得到推广，并替代现有技术中含有明胶或右旋糖酐的水痘制剂。

本发明有益效果

本发明采用了不含明胶的水痘疫苗冻干制剂，在不影响冻干制剂形貌、病毒活性的情况下，有效降低了接种的过敏反应和动物源性病毒传染病的风险，降低了疫苗接种时对人体的不良影响，增强了疫苗质量的可控性，在安全性上好于传统的含明胶水痘减毒活疫苗。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。

通用方法

材料

1.1.1病毒株及细胞系人二倍体MRC-5细胞，由美国菌种保藏中心提供；水痘毒种Oka株，由日本阪大微生物病研究会提供。

1.1.2稳定剂辅料明胶，购自美国BD公司；蔗糖、谷氨酸钠，均购自日本和光纯药工业株式会社。所有疫苗稳定剂使用的辅料质量均符合《中华人民共和国药典》2010年版二部的要求。

1.1.3仪器设备定量分液器，美国Wheaton公司产品；离心机，德国Heraeus公司产品；超低温冰箱，美国REVCO公司产品；超声匀质机，美国BRANSON公司产品；旋冻机，德国CHRIST公司；倒置显微镜，德国CarlZeiss公司产品。

方法

1.2.1稳定剂的配制以现行稳定剂(A配方)为基础，选用非动物源性辅料谷氨酸纳、蔗糖、甘露醇、海藻糖，以磷酸盐缓冲液配制4种新型无明胶稳定剂(B、C、D、E配方)，并将配制的4种无明胶稳定剂与现行含明胶稳定剂进行比效。其中，A-E的配方如下表所示(表1)：

表1

1.2.2水痘减毒活疫苗的制备

1.2.2.1疫苗原液的制备将24代MRC-5细胞复苏后，37℃静置培养3～5d，细胞株按1︰2的比例进行扩增，当细胞连续传至32代时接种水痘Oka株工作毒种。接种毒种的细胞于37℃静置培养2～3d，当细胞病变达35％～65％时收获感染细胞，分别加入上述5种配方的稳定剂，经超声处理、离心、澄清后，将收获于同批的细胞的上清液合并制成原液。

1.2.2.2疫苗成品的制备将检定合格的疫苗原液加入上述5种配方的稳定剂配制成半成品，半成品经分装、冻干后制成品。

1.2.3疫苗的检定根据《水痘减毒活疫苗注册标准》对疫苗进行检定，比较含各稳定剂配方的疫苗的病毒滴度、稳定性、水分等关键质量指标，筛选出最合适的稳定剂配方。

实施例1无明胶稳定剂对疫苗原液的保护作用

1.1疫苗原液的相关质量指标

表2显示，以4种无明胶稳定剂(B、C、D、E配方)配制的水痘减毒活疫苗原液的病毒滴度与含明胶稳定剂(A配方)配制的疫苗原液基本相同，均符合规定的要求；5种疫苗原液的鉴别试验、异常毒性试验、无菌检查和支原体检查均合格。研究表明，4种无明胶稳定剂配方对水痘减毒活疫苗原液具有保护作用。

表25种水痘减毒活疫苗原液的相关质量指标检定结果

1.2疫苗原液的病毒稳定性试验

将以上5种稳定剂配制的疫苗原液放置-60℃以下保存不同时间后进行病毒滴度测定。

表3显示，5种疫苗原液于-60℃以下放置不同时间的病毒滴度均符合规定的要求。其中于-60℃以下放置15个月后，B、C疫苗原液与A疫苗原液病毒滴度间的差异没有统计学意义(t值分别为1.63和2.14，P值分别为0.178和0.099)，但D、E疫苗原液与A疫苗原液病毒滴度间的差异则具有统计学意义(t值分别为3.16和6.00，P值分别为0.034和0.004)。5种疫苗原液于-60℃以下放置不同时间后的其他相关质量指标均合格。

研究表明，4种无明胶稳定剂配方在-60℃下均可稳定水痘减毒活疫苗原液的病毒滴度。

表35种水痘减毒活疫苗原液的病毒稳定性试验结果

实施例2无明胶稳定剂对疫苗成品的保护作用

2.1疫苗成品的相关质量指标

2.1.1外观

按《水痘减毒活疫苗注册标准》对5种疫苗成品检定显示(图1)，5种疫苗冻干后的外观均呈白色疏松体，表面光滑，无收缩、起泡和膨胀现象。加入灭菌注射用水后迅速溶解，无异物出现。除A疫苗因使用含明胶稳定剂在溶解后呈淡黄色外，其余疫苗因使用无明胶稳定剂在溶解后均呈微白色。

2.1.2成品短期热稳定性

在常温下短期保存的热稳定性实验结果(表4)显示，5种疫苗成品的病毒滴度基本相同，均符合规定的要求。

然而，从表3也可以看到，C、D、E疫苗在37℃放置7d后的病毒滴度虽符合规定的标准(37℃放置7d后，疫苗的病毒滴度应不低于3.3lgPFU/0.5ml，病毒滴度下降应不高于1.0lg)，但病毒滴度均已降至临界值，且下降幅度均大于0.7lgPFU/0.5ml，表明C、D、E稳定剂配方对水痘活病毒的保护作用并不理想。

而B疫苗的热稳定试验结果较理想，37℃放置7d后，病毒滴度下降幅度较小，为3.5lgPFU/0.5ml，符合规定的要求，且与对照疫苗(A疫苗)没有差异，表明在各种无明胶稳定剂中，B稳定剂配方对水痘活病毒的保护作用最好。

此外，对疫苗成品水分检定显示，使用无明胶配方稳定剂的疫苗成品的水分均符合规定的要求，其中B、D疫苗的水分与A疫苗相差最小，而C、E疫苗的水分则分别高于A疫苗42％和83％，差异较为明显。

表45种水痘减毒活疫苗成品的相关质量指标检定结果

2.2疫苗成品的病毒长期稳定性试验

对5种疫苗成品按照《水痘减毒活疫苗注册标准》进行检定显示(表5)：

12个月：疫苗成品于2～8℃放置12个月后，5种疫苗的病毒滴度均符合规定的要求，且B、C、D、E疫苗与A疫苗病毒滴度间的差异没有统计学意义(t值分别为2.00、1.74、2.00、4.00，P值分别为0.184、0.225、0.184、0.057)。

18个月：疫苗成品于2～8℃放置18个月后，D、E疫苗的病毒滴度下降明显，分别为3.1和3.0lgPFU/0.5ml，均已低于规定的标准，其余疫苗的病毒滴度均符合规定的要求。

24个月：疫苗成品于2～8℃放置24个月后，除D、E疫苗外，C疫苗的病毒滴度也低于规定的标准，为3.2lgPFU/0.5ml；但B疫苗的病毒滴度仍符合规定的标准，为3.4lgPFU/0.5ml，且与A疫苗的差异无统计学意义(t值为1.63，P值为0.178)。

表55种水痘减毒活疫苗成品的病毒稳定性试验结果

由此可见，C、D、E稳定剂配方对水痘活病毒的保护作用较差，不能作为水痘减毒活疫苗的稳定剂，而B稳定剂配方对水痘活病毒的保护作用较理想，且与现行稳定剂的保护作用相似，因此，B稳定剂是用于水痘减毒活疫苗制备的较理想无明胶稳定剂。

实施例3无明胶稳定剂PH对疫苗原液病毒滴度的影响

取实施例1中的B配方，并将其中的磷酸盐缓冲溶液的pH值进行微调，即调整缓冲液组分浓度后，从而观察缓冲溶液的pH值对稳定剂的影响。其中，3个配方的缓冲液组分及浓度如表6所示。

表6

表73种磷酸盐缓冲液原液的病毒稳定性试验结果

配制磷酸盐缓冲液是稳定剂的基础液，通过对不同配方浓度磷酸盐缓冲液比较，由表7可见水痘病毒对PH变化较敏感，病毒在偏酸环境中滴度有所下降，而在PH7.0缓冲液中保存活病毒存活率最高，b配方磷酸盐缓冲液最适合作为水痘病毒缓冲液。

实施例4稳定剂不同浓度蔗糖含量对疫苗成品质量的影响

取实施例1中的B配方，并对蔗糖的浓度进行微调，从而观察蔗糖的浓度对稳定剂及疫苗的影响。具体对比结果见表8

表83种蔗糖浓度对疫苗成品质量的影响

由表8可见，蔗糖浓度在3％-10％之间时，稳定剂均能使疫苗成品形成干粉状制剂，然而，在蔗糖浓度为5％-8％之间时，成品冻干制剂的疏松程度最为理想，而水分控制也最佳。

可见，蔗糖不仅要具有保护制品生物学活性的效果，而且具有冻干赋形作用，因此稳定剂中蔗糖含量的微小不同能够直接影响制品的外观、溶解度和水分，例如，当蔗糖浓度为5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％时，均可获得形貌良好、含水量、溶解度优秀的疫苗成品制剂。

实施例5冻干工艺对疫苗成品质量的影响

冷冻干燥就是把含有大量水分物质，预先进行降温冻结成固体，然后在真空的条件下使水蒸汽直接升华出来，而物质本身剩留在冻结时的冰架中，因此它干燥后体积不变，疏松多孔在升华时要吸收热量，整个干燥是在较低的温度下进行的，因此冻干制剂含水量低，易长期稳定保存。

取实施例1中的B配方，通过对冻干过程中冻结温度、干燥时间的调整，摸索确认出最佳冻干工艺，B冻干工艺冻干的成品的病毒滴度、热稳定性、水分全部符合水痘疫苗质量合格标准，具体结果见表9。

表93种冻干工艺对疫苗成品质量的影响

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种水痘疫苗冻干制剂，其特征在于，所述的冻干制剂含有水痘疫苗原液和疫苗稳定剂，其中，所述疫苗稳定剂按疫苗原液初始浓度计，含有以下组分：

蔗糖3-10％，

谷氨酸钠0.01-1％，

任选的缓冲液余量；

且所述的冻干制剂不含明胶、右旋糖酐、和/或动物源性蛋白。

2.如权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于，所述的冻干制剂在加入生理盐水后能形成pH为7.0的水痘疫苗复溶液。

3.如权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于，所述的缓冲液含有氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾；较佳地，含有氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾。

4.如权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于，所述的蔗糖按疫苗原液初始浓度计为5-8％，较佳地，为5.5-7.5％。

5.如权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于，所述的疫苗稳定剂还含有海藻糖。

6.如权利要求5所述的冻干制剂，其特征在于，所述的海藻糖的量基于疫苗原液初始浓度计，为0.8-5％，较佳地，为2-4％。

7.如权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于，所述的冻干制剂在10℃以下保存18-24个月后病毒滴度下降0.5-0.6。

8.如权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于，所述的冻干制剂制备如下：

(i)以水痘病毒为毒种，感染MRC-5人二倍体细胞株并培养，从而获得受水痘病毒毒株感染的MRC-5人二倍体细胞；

(ii)将(i)中受水痘病毒毒株感染的MRC-5人二倍体细胞破细胞并收集上清液，从而获得水痘疫苗原液；

(iii)将(ii)中所述的水痘疫苗原液与权利要求1所述的稳定剂混合，从而获得水痘疫苗制剂；

(iv)将(iv)中的水痘疫苗制剂经冻干工艺后获得水痘疫苗的冻干制剂，其中所述冻干工艺中，冻结温度为-32±2℃，和/或干燥时间为16±1小时。

9.如权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于，所述水痘疫苗的毒株来自水痘Oka株。

10.一种制备权利要求1所述水痘疫苗冻干制剂的方法，其特征在于，包括步骤：

(i)以水痘病毒为毒种，感染MRC-5人二倍体细胞株并培养，从而获得受水痘病毒毒株感染的MRC-5人二倍体细胞；

(ii)将(i)中受水痘病毒毒株感染的MRC-5人二倍体细胞破细胞并收集上清液，从而获得水痘疫苗原液；

(iii)将(ii)中所述的水痘疫苗原液与权利要求1所述的稳定剂混合，从而获得水痘疫苗制剂；

(iv)将(iv)中的水痘疫苗制剂经冻干工艺后获得水痘疫苗的冻干制剂，其中所述冻干工艺中，冻结温度为-32±2℃，和/或干燥时间为16±1小时。