CN102550543A - 用于保存脐带组织的液体 - Google Patents

Abstract

用于保存脐带组织的液体，为每毫升生理盐水中含青霉素50U-150U，含链霉素50mg-150mg的溶液。该保存液体来源广泛，质量稳定、价格便宜，且实验显示，本发明的液体与传统的PBS保存源在抑菌性、对采集的脐带组织的有效保存性等方面无明显差别，保存液的有效期至少可达半年，并可继续延长。

Description

用于保存脐带组织的液体

技术领域

发明涉及生物医学领域中的一种用于保存生物组织成分的保存液体，更具体讲是一种用于保存脐带组织成分的保存液体。

背景技术

人体脐带组织可以制备分离出优质的间充质干细胞（MSCs）。MSCs是一种具有自我更新和多项分化潜能的多能成体干细胞，其具有巨大的应用潜力，例如，可以为造血干细胞（HSCs）提供合适的微环境、 可以预防和治疗异体造血干细胞移植后产生的移植物抗宿主病（GVHD），以及治疗自生免疫性疾病，如红斑狼疮、风湿性关节炎和硬皮病等。

MSCs在通过体外的培养和扩增达到临床应用细胞的过程中，其组织/细胞在制备培养的全过程中都需要处于无菌状态。为保证采集好的脐带在运输和贮存过程中能保持无菌，传统采用将脐带组织浸没在PBS采集液里进行保存。由于PBS的配制复杂，自行配制时，在大批量制备上会增加大量的工作量，若购买成品，则因其价格昂贵，使用成本较高。

发明内容

    鉴于此，本发明提供了一种用于保存脐带组织的液体，实验表明可以满意解决上述问题。

    本发明用于保存脐带组织的液体，采用的是含有青霉素和链霉素的生理盐水溶液。其中，每毫升生理盐水中含青霉素50U-150U，含链霉素50mg-150mg。根据所使用的生理盐水来源或配制等不同，还允许含有可接受量的其它杂质性成分。

优选的是，上述用于保存脐带组织的液体为每毫升生理盐水中的青霉素含量为100U，和/或每毫升生理盐水中的链霉素含量为100mg。

上述用于保存脐带组织的液体中，所说的生理盐水优选为采用医用氯化钠注射液。

    实验结果显示，在用于脐带组织成分保存和/或培养、扩增时，本发明上述含有青霉素和链霉素（双抗）的生理盐水保存液体完全可以替代传统同样使用双抗的PBS。由于生理盐水的显著优点，是渗透压与人体的渗透压一致，pH值也与人体的生理环境相当，能很好地保护组织和细胞不受刺激和损害。特别是氯化钠注射液作为一种临床常用药剂，已有多家大型专业药厂生产，并都经过了严格的质量检验，来源广泛，质量可靠，价格便宜。实验结果还显示，本发明的上述保存液体的有效期限已超过半年，并还可以继续延长。

以下结合附图所示实施例的方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均应包括在本发明的范围内。

附图说明

图1是在存放0天的本发明的一种保存液体和传统保存液中储存24h内脐带分离制备的msc状态示意图。

图2是在存放0天的该同一种本发明和传统保存液中储存7天脐带分离制备的msc状态示意图。

图3是在存放30天的该同一种本发明和传统保存液中储存24小时内脐带分离制备的msc状态示意图。

图4是在存放30天的该同一种本发明和传统保存液中储存7天脐带分离制备的msc状态示意图。

图5是在存放9个月的该同一种本发明和传统保存液中储存24小时内脐带分离制备的msc状态示意图。

图6是在存放9个月的该同一种本发明和传统保存液中储存7天脐带分离制备的msc状态示意图。

图7是在本发明的另一种保存液体中储存24小时内脐带分离制备的msc状态示意图。

图8是在本发明的又一种保存液体中储存24小时内脐带分离制备的msc状态示意图。

具体实施方式

实施例1

    在无菌条件下将经过0.22um滤膜过滤HYCLONE公司生产的青-链霉素，用氯化钠注射液（四川科伦药业股份有限公司生产）配制成浓度为每毫升中含有青霉素100U和含链霉素100mg的混合溶液），然后无菌分装至已灭菌的采集瓶内，每瓶150ml。

实施例2

取本发明上述实施例1的保存液体，分别进行了抑菌效果试验和脐带存放后生长性实验，同时取该保存液体适量，分别在2~6℃和常温存放30天和9个月后，再进行抑菌效果测定和脐带存放后生长性实验，并与传统PBS保存液进行平行实验对照。对照用的传统PBS保存液的配制方法：

PBS溶剂组成：NaCl                       8.0g

                  KCl                        0.2g

              Na₂HPO₄·12H₂O              2.9g

              KH₂PO₄                            0.2g

              超纯水至                   1000ml。

PBS保存液组成：PBS灭菌溶剂             990ml

                青-链霉素混合溶液          10ml

               “PBS+双抗”保存液       1000ml。

PBS保存液配制方法：按以上组成称取各种药品，用超纯水溶解稀释至规定量，进行湿热蒸汽灭菌（121℃，20min），将灭菌好的溶液在超净工作台内按1:100的比例加入经过0.22um滤膜过滤的HYCLONE公司生产的青-链霉素混合液（每毫升液体中含青霉素100U，含链霉素100mg），分装到脐带采集瓶内，每瓶分装150ml，加盖旋紧后，用灭菌复合袋进行密封保存，放置在2~6℃和20℃下放置0天、30天和9个月后进行抑菌效果测定和脐带存放后，以同样方式做抑菌效果试验和脐带存放后生长性实验，进行对比。

一、采集品的抑菌实验

抑菌效果测定采用微量肉汤法，试验药物浓度最大为50μg (U)/ml，为实际药物浓度的一半。

微量肉汤稀释法步骤：根据计数结果，用常规的MH肉汤（营养肉汤）将增菌液稀释至10⁵-10⁶个/ml；

将混匀的菌液加至96孔板，每孔100μl；

在第一列分别加入采集液100μl，每批采集液两个，充分吹打混匀后吸取100μl至第二列，一直倍比稀释至第11列，37℃培养12-16h。

结果记录以无菌生长的最后一列对应的列数作为结果记录，以高浓度和底浓度都长菌为耐药，高浓度不长菌、低浓度长菌表示为中度抑菌，高浓度和低浓度都不长为高度抑菌。    保存液存储0天和30天的抑菌效果，以及存储9个月抑菌效果的实验结果，如表1所示。其中，本发明实验组和PBS对照组各有3组平行的试验样本。

、                                               

上述实验结果显示，本发明的保存液体与传统的“PBS+双抗”保存液存储存0天是均有高度抑菌性；在4℃和20℃储存30天后，抑菌性较0天时虽都有所下降但仍然表现为高度抑菌性。在4℃和20℃储存9个月后，抑菌性大都幅下降表现为中度抑菌，但仍均有抑菌性。实验结果表明，本发明的保存液体与传统的“PBS+双抗”保存液并无明显差别。

二、Msc生长实验

将本发明的不同浓度的保存液体和传统的“PBS+双抗”保存液分别在4℃条件下存储0天、30天、9个月后，再分别将采集的脐带浸没在其各自保存液体的液面下，并4℃储存24小时及7天后，进行分离制备。结果如图1～图6所示。各图中：a为采用的是本发明的保存液体，b为采用的是传统“PBS+双抗”的保存液。

由图中结果可以看出，在两种保存液体均能长出形态良好、均一和折光度高的Msc。

实施例3

    分别按照实施例1和实施例2的同样方式配制相应的保存液体和进行脐带存放后的生长性实验。其中的保存液体与实施例1的区别，仅在于所用的青霉素-链霉素混合液中的青霉素-链霉素的含量分别为50U-50mg。该保存液采集脐带24小时内脐带分离制备的msc状态如图7所示。

实施例4

分别按照实施例1和实施例2的同样方式配制相应的保存液体和进行脐带存放后的生长性实验。其中的保存液体与实施例1的区别，仅在于所用的青霉素-链霉素混合液中的青霉素-链霉素的含量分别为150U-150mg。该保存液采集脐带24小时内脐带分离制备的msc状态如图8所示。

由图7和图8的结果可以看出，在这两种保存液体中同样也都能长出形态良好、均一和折光度高的Msc。

Claims (4)

1.用于保存脐带组织的液体，其特征是为含有青霉素和链霉素的生理盐水溶液，每毫升生理盐水中含青霉素50U-150U，含链霉素50mg-150mg。

2.如权利要求1所述的用于保存脐带组织的液体，其特征是所说的每毫升生理盐水中含青霉素100U。

3.如权利要求1所述的用于保存脐带组织的液体，其特征是所说的每毫升生理盐水中含链霉素100mg。

4.如权利要求1至3之一所述的用于保存脐带组织的液体，其特征是所说的生理盐水为医用氯化钠注射液。

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