CN105579059B - 热稳定的疫苗配制物、工艺和包含疫苗配制物的微针 - Google Patents

热稳定的疫苗配制物、工艺和包含疫苗配制物的微针 Download PDF

Info

Publication number
CN105579059B
CN105579059B CN201480052624.6A CN201480052624A CN105579059B CN 105579059 B CN105579059 B CN 105579059B CN 201480052624 A CN201480052624 A CN 201480052624A CN 105579059 B CN105579059 B CN 105579059B
Authority
CN
China
Prior art keywords
vaccine composition
maltodextrin
influenza
arginine
vaccine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201480052624.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105579059A (zh
Inventor
马修·约瑟夫·米斯蒂利斯
威廉·克里斯多佛·埃登斯
安德烈亚斯·塞巴斯蒂安·伯姆马里尤斯
马克·普劳斯尼茨
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Georgia Tech Research Corp
Original Assignee
Georgia Tech Research Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Georgia Tech Research Corp filed Critical Georgia Tech Research Corp
Publication of CN105579059A publication Critical patent/CN105579059A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105579059B publication Critical patent/CN105579059B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A61K9/0021—Intradermal administration, e.g. through microneedle arrays, needleless injectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
    • A61K39/165—Mumps or measles virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
    • C12N2760/16234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16311—Influenzavirus C, i.e. influenza C virus
    • C12N2760/16334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18411—Morbillivirus, e.g. Measles virus, canine distemper
    • C12N2760/18434—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Media Introduction/Drainage Providing Device (AREA)

Abstract

本发明提供了用于稳定干燥的固体疫苗中的抗原的配制物和方法。一个方面涉及流感疫苗的干燥固体配制物，其包含一种或更多种认为赋予流感抗原的稳定性的赋形剂。另一个方面涉及麻疹疫苗的干燥固体配制物，其包含一种或更多种认为赋予麻疹抗原的稳定性的赋形剂。所述的配制物可以为适用于在生理学可接受的液体媒介物中重新构成的形式，从而形成用于给予患者的可注射的溶液或悬液；或者为可溶的微针或涂敷的微针的形式。

Description

热稳定的疫苗配制物、工艺和包含疫苗配制物的微针
相关申请的交叉引用
本申请要求2013年9月4日提交的美国临时专利申请No.61/873,419和在2013年9月3日提交的美国临时专利申请No.61/873,032的优先权，这些申请文献的公开内容以引用方式并入本文。
关于联邦政府资助的研究或研发的声明
本发明是根据the National Institutes of Health的协议U01EB012495，由美国政府支持而作出的。
技术领域
本申请涉及但不限于热稳定的疫苗配制物、工艺和包含疫苗配制物的微针。
背景技术
本申请涉及用于稳定在疫苗(特别是用于流感和麻疹的疫苗)中使用的病毒的配制物和方法。本申请进一步涉及适用于可溶性微针或涂布微针的流感和麻疹疫苗的干燥固体配制物。
世界卫生组织(WHO)统计显示，每年上百万人患上传染性疾病。例如估计流感每年会导致3至5百万人患上严重的疾病，并导致多达250,000至500,000人死亡。估计麻疹每年会感染超过2千万人，并导致超过150,000人死亡(大部分为5岁以下的儿童)。预防这些感染的主要方式是成功的疫苗运动。
例如WHO估计麻疹传播的中断需要疫苗覆盖率超过90％。这样高的阻碍(bar)需要有效的疫苗，以及疫苗生产商、公共健康专家和现场给予疫苗的健康护理人员之间的协同努力。因此，存在许多使此类疫苗广泛传播更困难的障碍。
尽管活的麻疹疫苗自从二十世纪60年代早期便开始利用，并且当正确给予时是特别有效的，但是由于其被公认为经批准用于人类使用的多个不稳定的活疫苗之一，所以储存需要妨碍了其广泛地传播。WHO估计传递至现场的超过60％的麻疹疫苗储备由于损耗、处理不当或不适当地重新构成而不能使用。
流感疫苗面对相似的障碍，目前流感疫苗仅在液体配制物中使用，而该配制物必须保持在2-8℃的温度。因此，需要疫苗的干燥的固体配制物，其允许生产具有改良的稳定性、更易于运输并且对大规模的疫苗接种更方便的疫苗。尽管具有这种需要，但是干燥疫苗配制物的研发涉及必须考虑的多个变量。例如参见Chen et al.,“Opportunities andchallenges of developing thermostable vaccines,”Expert Rev.Vaccines 8(5),547-557(2009)。
与制备干燥的疫苗配制物有关的一些重要的考虑包括将病毒暴露于多种热和机械应力，并选择赋形剂从而使这些破坏达到最低。此外，所述的配制物成分必须与所选的处理方法相容。
冷冻干燥和喷雾干燥是制药工业中干燥活性药物成分(API)溶液的2种最广泛使用的方法。冷冻干燥已经用于生产多种商业API产品，包括麻疹疫苗。对不稳定的生物分子使用冷冻干燥工艺的挑战包括(例如)将病毒暴露于低温，将病毒颗粒吸附于冰晶表面，以及脱水应力。
喷雾干燥提供了给予超过其他蛋白质保存/干燥技术(例如冷冻干燥)的大量产品生产量(>5,000lb/hr)和降低的制造时间。使用喷雾干燥以稳定热不稳定的API(例如病毒)的挑战涉及3个重要领域的控制：雾化条件，干燥条件，以及所得的干燥材料的固态性质。例如在雾化过程中，液态蒸汽分散成细小的雾滴的工艺可以涉及施加在产品上的过多的剪切应力、表面张力和压力。另一个挑战涉及液体干燥速率的控制以及各个液滴内多个组分的相互作用。根据所述的工艺的参数(例如干燥速率和液滴的大小)和配制物的组分(例如表面活性和分子大小(即，扩散速率))，可以操纵所得的干燥颗粒的性质，其包括颗粒的大小、表面组成和表面形态学。由于生物药品的储存稳定性通常受到其表面富集程度以及喷雾干燥的颗粒的孔隙率和表面积的影响。因此，许多缺点与制备疫苗配制物的最广泛使用的方法有关，包括与最常用的脱水技术有关的许多缺点。
因此，理想的是通过提供简单、方便和容易给予的剂量呈现来提供改良的流感疫苗配制物和改良的麻疹疫苗配制物，其是更稳定的并且更好地适用于大量疫苗接种。同样理解的是提供用于制备干燥稳定的疫苗配制物的改良的方法。
发明概述
本申请通过提供具有改良的稳定性的流感和麻疹疫苗的干燥固体配制物来解决一个或更多个之前所述的要求和需要。还提供了所述的配制物的制备方法，以及将它们给予患者的装置和方法。
在一个方面中，提供了一种疫苗组合物，其包含流感抗原、和选自以下的赋形剂：麦芽糊精17,麦芽糊精4,精氨酸,麦芽糖,组氨酸,葡庚糖酸钙,麦芽糊精13,肝素,棉子糖,肌肉肌醇,蔗糖,山梨糖醇,阿拉伯糖醇,果糖,葡糖酸钾,核糖醇,木糖醇,硫代硫酸钠,天冬酰胺,2-羟丙基-β-环糊精,TRIS,柠檬酸钠,半乳糖醇和它们的组合。
在另一个方面中，提供了疫苗组合物，其包含流感疫苗、和选自以下的赋形剂的共混物：海藻糖和精氨酸；海藻糖和葡庚糖酸钙；海藻糖和麦芽糊精13；蔗糖和精氨酸；精氨酸和葡庚糖酸钙；精氨酸和麦芽糊精13；葡庚糖酸钙和麦芽糊精13；麦芽糊精13和柠檬酸钠；麦芽糊精13和乳糖；以及山梨糖醇和柠檬酸钠。
在另一个方面中，提供了疫苗组合物，其包含麻疹疫苗和选自以下的赋形剂：丝氨酸,蔗糖,天冬酰胺,甘氨酸,苏氨酸,组氨酸,海藻糖,脯氨酸,山梨糖醇,麦芽糖,牛磺酸,半乳糖醇和它们的组合。
在另一个方面中，疫苗组合物包含麻疹抗原、和赋形剂的共混物，其中所述的共混物包含氨基酸和碳水化合物。氨基酸可以选自丝氨酸,天冬酰胺,甘氨酸,苏氨酸,组氨酸,脯氨酸,牛磺酸和它们的组合。碳水化合物可以选自蔗糖,海藻糖,山梨糖醇,麦芽糖,卫矛醇(ducitol)和它们的组合。
在另一个方面中，提供了经皮贴剂，其包含微针的阵列，所述的微针包含一种所提供的疫苗组合物。
在另一个方面中，提供了制备疫苗组合物的方法，其包括制备水溶液，其包含流感抗原或麻疹抗原、以及一种或更多种特定的赋形剂或赋形剂的共混物；以及在环境温度下干燥溶液，从而形成干燥的固体疫苗组合物。
在另一个方面中，提供了给患者接种疫苗的方法。在一个实施方案中，所述的方法包括将一个或更多个微针插入穿过患者皮肤的角质层，其中所述的一个或更多个微针包含一种所提供的疫苗组合物。在另一个实施方案中，所述的方法包括在生理学可接受的液体媒介物中重新构成一种所提供的疫苗组合物，从而形成可注射的溶液或悬液；以及将可注射的溶液或悬液给予患者。
其他方面由以下说明书中部分列出，并且部分由本说明书是显而易见的，或者可以通过实施下文所述的方面来学习。借助于所附的权利要求书中特别指出的要素和组合来实现和获得下文所述的益处。应该理解的是上文的发明概述和下文的发明详述仅是示例性的和说明书的，而不是限定性的。
附图简述
图1为根据一个实施方案的、包含疫苗组合物的多个微针的侧视图。
图2为柱状图，其显示在多种疫苗配制物干燥后，相对血凝素(HA)的活性保留。
图3为柱状图，其显示在赋形剂的多种共混物干燥后，与单独的赋形剂相比，相对HA的活性。
图4为线形图，其显示在多种疫苗配制物干燥后，在储存不同时期后，相对HA的活性保留。
图5为柱状图，其显示在微针贴剂中的多种三价亚单元流感疫苗配制物干燥后，并且在储存不同时期后，HA的活性。
图6为柱状图，其显示在微针贴剂中的多种一价亚单元流感疫苗配制物干燥后，并且在储存不同时期后，HA的活性。
图7为柱状图，其显示在微针贴剂中的多种一价亚单元流感疫苗配制物干燥后，并且在加速储存不同时期后，相对HA的活性。
图8为柱状图，其显示在干燥具有不同的赋形剂的多种麻疹疫苗配制物后，并且在37℃下储存1周后，相对eGFP-MeV的活性保留。
图9为柱状图，其显示在干燥具有不同的赋形剂的多种麻疹疫苗配制物后，并且在37℃下储存1个月后，相对eGFP-MeV的活性保留。
图10为柱状图，其显示在干燥具有赋形剂共混物的多种疫苗配制物后，并且在37℃下储存1个月后，相对eGFP-MeV的活性保留。
图11为柱状图，其显示在干燥具有赋形剂共混物的多种疫苗配制物后，并且在45℃下储存1个月后，相对eGFP-MeV的活性保留。
图12为线形图，其显示在干燥包含苏氨酸和蔗糖的共混物的疫苗配制物后，并且在不同时间和不同温度储存后，相对eGFP-MeV的活性保留。
图13A-13C显示储存在干燥剂袋中的微针贴剂中的示例性麻疹疫苗配制物(图13C)与重新构成的市售的麻疹疫苗(图13A)和市售的冷冻的麻疹疫苗(图13B)相比的稳定性。
参考实施方案的描述
已经研发出用于流感或麻疹的具有改良的稳定性的干燥固体形式的疫苗组合物。使用筛选工艺由本领域已知的用于药物配制物的多种赋形剂中识别为流感或麻疹抗原意外地提供改良的热稳定性的赋形剂或赋形剂共混物的种类。已经发现通过提供干燥固体形式的疫苗组合物(其包含与某些赋形剂组合的抗原)，可以避免许多通常与活性损失和疫苗损耗有关的问题，由此降低疫苗的消耗并增加在疫苗运动或其他疫苗接种方案中可以利用的产品的量。
除非本领中或者在以下说明书的其余部分中另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语都具有本发明所属技术领域那些普通技术人员通常理解的含义。还应该理解的是本文使用的术语均是仅为了描述特定的实施方案，并且无意于进行限定。在描述和要求本发明的过程中，根据下文中列出的定义来使用以下术语。
如本文所用，术语“大约”是指给定量的值可以包含在所述的值的10％范围内的量，或者可任选地在所述的值的5％范围内，或者在一些实施方案中，在所述的值的1％范围内。
如本文所用，术语“环境温度”是指通常受控的室内温度，例如大约16℃至大约27℃，或者更通常为大约18℃至大约24℃，并且通常为大约22℃。
“稳定的”配制物或组合物为其中其中的生物活性材料在储存时基本保持其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物活性的配制物或组合物。可以在所选的温度下在所选的时期内测量稳定性。可以使用趋势分析来估计预期的保质期，然后实际上将材料储存所述的时期。
如本文所用，针对本文所述的固体疫苗配制物的术语“干燥”或“干燥的”是指这样的组合物，其中任何水的实质部分已经被除去，从而产生固相的组合物。所述的术语无需水份完全缺乏。本文所述的疫苗组合物通常具有大约0.1重量％至大约25重量％的水份含量。
本申请的实施方案包括干燥固体形式的疫苗组合物，其包含一种或更多种抗原、和一种或更多种所选的赋形剂。已经发现一种或更多种所选的赋形剂在疫苗组合物的干燥和储存过程中有利地改良了一种或更多种抗原的稳定性。
在优选的实施方案中，疫苗组合物为微针形式或者为在由另一种材料形成的微针上的涂层形式。疫苗组合物在将微针插入生物组织(例如插入患者的皮肤中)后将在体内溶解。因此，配制物微针或配制物涂层在本文中称为“可溶的”。在备选的实施方案中，干燥固体形式的疫苗配制物可以为颗粒或适用于在给予患者前重新构成的其他形式。例如疫苗组合物可以在生理学可接受的液体中重新构成，从而产生适用于通过空心针或空心微针注射的溶液或悬液。
具有多个可溶的微针的示例性微针示于图1中。微针阵列10包含具有多个微针14的基材12。在多个实施方案中，多个微针14具有大约100μm至大约2000μm、大约100μm至大约1500μm、大约100μm至大约1000μm、或者大约500μm至大约1000μm的高度。微针的阵列可以具有任何合适的密度。例如阵列中的微针可以以均匀的或错开的行排列，其中各个微针通过与微针的高度大约相等的距离与其最近相邻的微针分开。所述的阵列基本上可以包含任何合适数量的微针。在一个实施方案中，阵列的微针中疫苗组合物的总质量适用于将预防有效量的抗原传递给患者。在肺限定性的实例中，所述的阵列可以包含5至10,000微针，例如50至1000微针，或者50至200微针。
在一些实施方案中，可溶的微针可以使用下文所述的方法通过在合适的模具中干燥疫苗组合物来形成。在其他的实施方案中，可以将疫苗组合物涂敷到包含生物相容性材料(例如金属、聚合物或硅)的一个或更多个微针上。此类微针和它们的制造方法的非限定性实例在美国专利No.6,334,856和美国专利公开No.2008/0213461中公开。
疫苗组合物可以包含生物有效量的一种或更多种抗原。如本文所用，“生物有效量”是指刺激或引发所需的免疫应答所必需的一种或更多种抗原的量。因此，取得所需的免疫应答所必需的一种或更多种抗原的量必须根据多个因素而改变，其中所述的因素包括抗原的类型、传递的位点(例如皮下或肌肉内)、以及用于抗原传递的溶解和释放动力学。例如在多个实施方案中，理想的是疫苗组合物被配制成在大约1分钟至大约60分钟的溶解时期内在体内溶解。如本文所用，“溶解时期”或“溶解期”是指：在可溶的微针的情况下，在给予过程中微针充分润湿从而使得微针基本上由基材上脱离所花费的时间；或者在微针上的涂层的情况下，在给予过程中，微针上的涂层基本上由微针上脱离所花费的时间。
流感疫苗配制物
在多个实施方案中，抗原为流感抗原。抗原可以由流感病毒粒子制备，或者在重组宿主中表达并以纯化的形式使用。抗原可以采用活病毒或失活的病毒的形式，并且可以为完整的病毒、断裂的病毒、亚单元病毒或病毒样颗粒。例如流感抗原可以为完整的失活的流感病毒、断裂的失活的流感病毒、亚单元的失活的流感病毒、流感病毒样颗粒、或它们的组合。
流感抗原可以包括流感病毒的一个或更多个毒株，其分类为流感A、流感B或流感C。所述的组合物可以包含一种抗原(一价)、2种抗原(2价)、三种抗原(三价/3价)、或者4或更多的抗原(4价或n价)。例如在多个实施方案中，流感抗原可以为2种流感A毒株和一种流感B毒株的组合，或者2种流感A毒株和2种流感B毒株的组合。流感A毒株的非限定性实例包括血凝素(HA)亚型H1,H2,H3,H4,H5,H6,H7,H8,H9,H10,H11,H12,H13,H14,H15,H16,H17或H18；以及神经氨酸苷酶(NA)亚型N1,N2,N3,N4,N5,N6,N7,N8或N9。流感抗原的特定毒株可以包括H1N1,H2N2,H3N2,H5N1,H5N3,H7N1,H7N7,H7N9或H9N2。
可以调节疫苗配制物中一种或更多种流感抗原的量，从而获得所需的免疫应答。在多个实施方案中，生物有效量的流感抗原可以为大约1μg至大约100μg HA/流感抗原毒株。例如在剂量节省型流感疫苗中流感抗原的生物有效量可以为大约1μg至大约10μg HA/流感抗原毒株；在正常剂量的季节性流感疫苗中流感抗原的生物有效量可以为大约15μgHA/流感抗原毒株；或者在高剂量季节性流感疫苗中流感抗原的生物有效量可以为大约60μg HA/流感抗原毒株。例如在3价疫苗中各个毒株的HA含量通常设定为：对于单一人类剂量而言为15μg，即，45μg总HA。
流感疫苗组合物进一步包含一种或更多种所选的赋形剂，发现与不具有任何赋形剂的流感抗原的干燥固体配制物相比，所述的流感疫苗组合物会增加干燥固体配制物中流感抗原的稳定性。在多个实施方案中，增加流感抗原的稳定性的赋形剂包括麦芽糊精17,麦芽糊精4,精氨酸,treaholse,麦芽糖,组氨酸,葡庚糖酸钙,麦芽糊精13,肝素,棉子糖,肌肉肌醇,蔗糖,葡萄糖,乳糖,山梨糖醇,阿拉伯糖醇,果糖,葡糖酸钾,环糊精-γ,核糖醇,木糖醇,硫代硫酸钠,天冬酰胺,2-羟丙基-β-环糊精,TRIS,柠檬酸钠和半乳糖醇。在疫苗组合物中存在的赋形剂的量可以为大约1重量％至大约90重量％、大约2重量％至大约75重量％、大约5重量％至大约50重量％、或者大约5重量％至大约20重量％。
在特定的实施方案中，流感疫苗组合物进一步包含所选的2种或更多种赋形剂的共混物，发现与不具有任何赋形剂的流感抗原的干燥固体配制物相比，所述的流感疫苗组合物会增加干燥固体配制物中流感抗原的稳定性。在特定的实施方案中，2种或更多种赋形剂的共混物惊人地提供比任何单独的赋形剂的共混物更高的作用，并且在一些情况下，对流感抗原的稳定性提供高于多种赋形剂相加的作用。在多个实施方案中，增加流感抗原的稳定性的赋形剂的共混物包含海藻糖和精氨酸；海藻糖和葡庚糖酸钙；海藻糖和蔗糖,海藻糖和麦芽糊精13；蔗糖和精氨酸；精氨酸和葡庚糖酸钙；精氨酸和麦芽糊精13；葡庚糖酸钙和麦芽糊精13；麦芽糊精13和柠檬酸钠；麦芽糊精13和乳糖；以及山梨糖醇和柠檬酸钠。
在所述的组合物中可以存在的赋形剂的共混物的总量为大约1重量％至大约90重量％。例如在所述的组合物中可以存在的赋形剂的共混物的总量为大约2重量％至大约75重量％、大约5重量％至大约50重量％、或者大约5重量％至大约20重量％。各种赋形剂在共混物中的比率可以改变。在某些实施方案中，在疫苗组合物中2种赋形剂的共混物中的赋形剂以大约1:15至大约15:1的比例存在。例如在所述的组合物中共混物的赋形剂可以以大约1:9至大约9:1、大约1:2、或者大约1:1的比例存在。
在多个实施方案中，疫苗组合物进一步包含用于增加患者对抗原的免疫应答的一种或更多种佐剂。合适的免疫应答增强佐剂包括但不限于铝凝胶或铝盐。例如左杰可以为氢氧化铝、磷酸铝或硫酸铝钾。其他的佐剂可以包括聚肌苷酸胞苷酸(poly(I:C))、咪喹莫特和本领域已知的其他佐剂。
本文提供的流感疫苗组合物可以有利地表征为具有改良的稳定性。如本文所用，流感疫苗组合物的“改良的稳定性”可以通过以下方法测定：使用单向免疫扩散(SRID)或酶联免疫吸附检测(ELISA)测量所述的组合物在溶解于水溶液中时，在给定的时间和温度下储存后的HA活性。例如ELISA可以为典型的夹心ELISA，其中将毒株特异性抗体涂敷在微孔板上，并温育疫苗的水溶液，从而使靶抗原与固定的抗体结合。然后使与辣根过氧化物酶(HRP)缀合的另一种毒株特异性抗体与靶抗原结合。将3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)加入至微孔中，将HRP转化成蓝色信号，这可以读取并与对照比较。
例如疫苗组合物可以通过以下方法表征：与包含流感抗原的不具有赋形剂的比较组合物相比，在1个月内在所述的组合物中，流感抗原具有改良的稳定性；与所述的比较组合物相比，在3个月内在所述的组合物中，流感抗原具有改良的稳定性；与所述的比较组合物相比，在6个月内在所述的组合物中，流感抗原具有改良的稳定性；与所述的比较组合物相比，在9个月内在所述的组合物中，流感抗原具有改良的稳定性；或者与所述的比较组合物相比，在1年内在所述的组合物中，流感抗原具有改良的稳定性。
在一些实施方案中，组合物的稳定性通过以下过程显示：与流感抗原的初始活性相比，流感抗原在室温或在至多40℃的升高的温度下储存后的相对活性。例如组合物的稳定性可以表征为流感抗原在至多40℃的温度下储存3个月后保留其活性的至少50％，在至多40℃的温度下储存3个月后保留其活性的至少60％，在至多40℃的温度下储存3个月后保留其活性的至少70％，在至多40℃的温度下储存3个月后保留其活性的至少75％，在至多40℃的温度下储存3个月后保留其活性的至少80％，或者在至多40℃的温度下储存3个月后保留其活性的至少90％。
麻疹疫苗配制物
在另一个方面中，抗原为麻疹抗原。尽管抗原可以采用活病毒或失活的病毒的形式，但是麻疹抗原通常为活的减毒病毒的形式。在一些实施方案中，麻疹抗原可以与腮腺炎抗原、风疹抗原、水痘抗原或它们的组合结合(它们的每一种最通常为活的减毒病毒的形式)。
可以调节疫苗组合物中麻疹抗原的量，从而获得所需的免疫应答。例如对于单一人类剂量而言，疫苗中的麻疹含量通常设定为1000TCID50至大约10,000TCID50(其中TCID50定义为半数组织培养感染量)。例如疫苗组合物中麻疹疫苗的生物有效量可以为大约1,000TCID50。
麻疹疫苗组合物进一步包含一种或更多种所选的赋形剂，发现与不具有任何赋形剂的麻疹抗原的干燥固体配制物相比，所述的麻疹疫苗组合物能够增加干燥固体配制物中麻疹抗原的稳定性。在多个实施方案中，增加麻疹抗原的稳定性的赋形剂包括丝氨酸,蔗糖,天冬酰胺,甘氨酸,苏氨酸,组氨酸,海藻糖,脯氨酸,山梨糖醇,麦芽糖,牛磺酸,半乳糖醇和它们的组合。
在特定的实施方案中，麻疹疫苗组合物进一步包含所选的赋形剂的共混物，其包含一种或更多种氨基酸，和碳水化合物。在某些实施方案中，所述的共混物包含一种或更多种选自丝氨酸,天冬酰胺,甘氨酸,苏氨酸,组氨酸,脯氨酸,牛磺酸和它们的组合的氨基酸，以及一种或更多种选自蔗糖,海藻糖,山梨糖醇,麦芽糖,卫矛醇和它们的组合的碳水化合物。在优选的实施方案中，氨基酸包括牛磺酸或苏氨酸，碳水化合物包括蔗糖,海藻糖或山梨糖醇。能够有效地稳定麻疹抗原的赋形剂的其他共混物包括苏氨酸和蔗糖；苏氨酸和海藻糖；苏氨酸和山梨糖醇；天冬酰胺和海藻糖；天冬酰胺和山梨糖醇；丝氨酸和蔗糖；丝氨酸和山梨糖醇；甘氨酸和蔗糖；甘氨酸和海藻糖；组氨酸和蔗糖；牛磺酸和蔗糖；以及牛磺酸和海藻糖。
在麻疹疫苗组合物中存在赋形剂的共混物的总量可以为大约1重量％至大约90重量％。例如在所述的组合物中存在赋形剂的共混物的总量可以为大约2重量％至大约75重量％、大约5重量％至大约50重量％、或者大约5重量％至大约20重量％。各种赋形剂在共混物中的比率可以改变。在某些实施方案中，在疫苗组合物中2种赋形剂的共混物中的赋形剂以大约1:15至大约15:1的比例存在。例如在所述的组合物中共混物的赋形剂可以以大约1:9至大约9:1、大约1:2、或者大约1:1的比例存在。
本文提供的麻疹疫苗组合物可以有利地表征为具有改良的稳定性。如本文所用，可以通过使用组织培养感染量(TCID50)在给定的时间和给定的温度下储存后来测定麻疹疫苗组合物的“改良的稳定性”。备选地，可以使用遗传改造的麻疹变体来测定改良的稳定性，其中所述的变体在复制时会产生GFP，如实施例8所述。
例如所述的疫苗组合物可以表征为与包含麻疹抗原的不具有赋形剂的比较组合物相比，麻疹抗原在所述的组合物中在1个月内具有改良的稳定性；与所述的比较组合物相比，在3个月内具有改良的稳定性；与所述的比较组合物相比，在6个月内具有改良的稳定性；与所述的比较组合物相比，在9个月内具有改良的稳定性；或者与所述的比较组合物相比，在1年内具有改良的稳定性。
在多个实施方案中，所述的组合物的稳定性可以通过与麻疹抗原的初始活性相比，麻疹抗原在室温或至多40℃的升高的温度下储存后的相对活性来显示。例如所述的组合物的稳定性可以表征为麻疹抗原在至多40℃的温度下储存1周后保留其活性的至少10％，在至多40℃的温度下储存1个月后保留其活性的至少10％，在至多40℃的温度下储存1个月后保留其活性的至少25％，在至多40℃的温度下储存1个月后保留其活性的至少50％，在至多40℃的温度下储存1个月后保留其活性的至少80％，在至多40℃的温度下储存3个月后保留其活性的至少10％，在至多40℃的温度下储存3个月后保留其活性的至少50％，在至多40℃的温度下储存3个月后保留其活性的至少80％，在至多40℃的温度下储存6个月后保留其活性的至少10％，在至多40℃的温度下储存3个月后保留其活性的至少50％，或者在至多40℃的温度下储存6个月后保留其活性的至少80％，
制造方法
通常通过在合适的基材上干燥包含抗原和所选的赋形剂(多种)的水溶液来制备本文所述的流感和麻疹疫苗配制物。可以通过在包含水性缓冲盐的溶液中混合一种或更多种抗原、以及一种或更多种赋形剂来制备水溶液，其中水性缓冲盐的非限定性实例包括HEPES、乙酸铵、磷酸盐缓冲盐水和磷酸氢二钾。
可以在多种合适的基材上干燥水溶液，但是优选的是选择在干燥工艺中使抗原活性损失最低的基材。例如水溶液可以在金属基材、聚合物基材、硅基材或织物基材上干燥。在多个实施方案中，水溶液在聚二甲硅氧烷(PDMS)基材上干燥。在一个实施方案中，基材为用于形成一个或更多个微针的模具。
可以在任何合适的温度和压力条件下干燥水溶液，优选地选择这些条件从而保持抗原的生物活性。在优选的实施方案中，将水溶液在环境温度下干燥足以形成干燥固体形式的疫苗组合的时间。例如可以使水溶液在环境温度下干燥大约30分子至大约1周的时间，从而形成干燥的固体的疫苗配制物(例如大约45分子至大约1周，大约1小时至大约1周，大约1小时至大约1天等)。在其他的实施方案中，可以使用空气干燥和真空干燥的组合将水溶液真空干燥或干燥。尽管可已使用不同的温度和湿度水平来干燥水溶液，但是优选的是在1℃至60℃的温度(例如15℃至大约45℃、大约25℃至大约45℃、或者大约环境温度)和0至10％相对湿度下干燥所述的配制物。
在其中疫苗组合物为可溶的微针形式的一个实施方案中，在干燥水溶液前，将该水溶液倒入用于形成微针或微针阵列的模具中。如本文所用，“倒入的”或“倒入”水溶液包括用于使用水溶液填满模具的任何合适的方法，该方法的非限定性实例包括沉积、涂敷、印刷、喷雾和微填充(microfilling)技术。
在其中所述的配制物为涂敷的微针的形式的实施方案中，例如使用在美国专利公开No.2008/0213461中所述的浸涂方法，使用水溶液涂敷微针或微针阵列，然后干燥该溶液。
在制造后且使用前，将疫苗组合物包装，并且在例如大约2℃至大约8℃的温度下冷冻储存；例如在温度低于0℃的冰箱中；在环境温度下；或者在不受控的温度下，例如至多50℃。所述的储存可以为产品的保质期，或者为短于产品的保质期的时间。可以使用疫苗热标签或其他温度指示剂来表明疫苗组合物超过可允许的热暴露水平的时刻。有利地，本文提供的疫苗组合物比现存的配制物提供更高的热稳定性，由此减少在疫苗组合物暴露于可变的温度时可能发生的污染、降解和活性损失。因此，用于本文提供的疫苗组合物的储存温度与现存的配制物相比，重要性低一些。
给予方法
可以通过任何合适的手段将本文提供的流感和麻疹疫苗配制物给予患者。如本文所用，术语“患者”通常是指需要疫苗接种的儿童或成人。合适的给予手段的实例包括注射和/或通过微针的经皮传递。例如可以通过将一个或更多个微针插入患者皮肤的角质层而对患者接种疫苗，其中所述的微针是使用疫苗组合物形成的或涂敷的。
在另一个实例中，疫苗组合物在生理学可接受的液体媒介物重新构成，从而形成可注射的溶液或悬液，然后将可注射的溶液或悬液注射至患者中。疫苗配制物可以在皮下注射器中或者在无菌瓶或其其他容器中直接重新构成。然后，例如通过肌肉内、经皮或皮下注射将重新构成的疫苗组合物注射至患者中。
可以参照以下非限定性实例而进一步理解本发明的实施方案。
实施例
实施例1
使用多种表面活性剂来制备流感疫苗溶液，从而识别任何表面活性剂是否不利地影响流感抗原的活性。将所述的表面活性剂(Lutrol F68,Tween20,SDS,CTAB,CHAPS)加入至不具有其他赋形剂的亚单元流感疫苗溶液(B/Brisbane/60/2008,60μg/mL HA)中，将所述的溶液在环境温度下在不锈钢表面上干燥40分钟。随后，将疫苗重新溶解于盐水溶液中。使用用于测量HA活性的酶联免疫吸附测试(ELISA)评价所述的溶液，并将其与未干燥的疫苗原液比较。当考虑表面活性剂对对照溶液的作用时，发现所检测的任何表面活性剂对干燥后的疫苗稳定性之间不具有显著性的差异(数据未示出)。
实施例2
将亚单元流感疫苗(B/Brisbane/60/2008,60μg/mL HA)与150mM乙酸铵中浓度为15％w/v多种可行的赋形剂混合(表1)。将这些溶液在环境温度下在聚二甲硅氧烷表面上干燥，并与干燥剂储存总计24小时。然后，将疫苗溶解于盐水溶液中，并如实施例1中所述，针对活性进行测试。
表1：所检测的赋形剂
Figure GDA0001109610950000151
结果示于图2中(与未配制的疫苗相比，p值<0.05)。图中右侧的柱表明未加入赋形剂的疫苗。赋形剂通常分成3类：显示阳性结果并赋予稳定作用的赋形剂(麦芽糊精4,精氨酸,海藻糖,麦芽糖,组氨酸,葡庚糖酸钙,麦芽糊精13,蔗糖,葡萄糖,肝素,棉子糖,肌肉肌醇,乳糖,山梨糖醇,阿拉伯糖醇,果糖,环糊精-γ,葡糖酸钾,核糖醇,木糖醇,硫代硫酸钠,天冬酰胺,2-羟丙基-β-环糊精,TRIS,柠檬酸钠和半乳糖醇)；显示不具有统计学意义的作用的赋形剂(柠檬酸钾,卵清蛋白,甘氨酸,甲基葡糖苷,环糊精-β,赖氨酸,磷酸钠,缬氨酸,苏氨酸,半乳糖,丙氨酸,蛋氨酸,脯氨酸,甘露醇,人血清清蛋白2,谷氨酰胺,人血清清蛋白1,色氨酸,酪氨酸,丝氨酸,牛血清白蛋白,肌酸,亮氨酸和硫酸钾)；以及在干燥时进一步降低疫苗活性的赋形剂(琥珀酸钠,异亮氨酸,乳酸乙酯,苯丙氨酸,阿拉伯糖,磷酸钾,木糖,亚硫酸钾,半胱氨酸,甘油和硫代乙酸钠)。
实施例3
选择赋形剂的组合来与由单一构成的赋形剂提供的稳定性比较。使用相同的总赋形剂浓度(15％w/v)的一种或2种赋形剂配制亚单元流感疫苗(B/Brisbane/60/2008,60μg/mL HA)，然后在环境温度下在聚二甲硅氧烷表面上干燥1小时，再在40℃下使用干燥剂储存1周。将疫苗重新溶解于盐水溶液中，然后如实施例1中所述，针对活性进行测试。结果示于图3中。大部分的组合均保留了在构成赋形剂的范围内的活性的量，但是2种组合(麦芽糊精17/乳糖和山梨糖醇/柠檬酸钠)显示比它们的构成赋形剂具有优异的活性。
实施例4
在环境温度下，将亚单元流感疫苗(B/Brisbane/60/2008,60μg/mL HA)与多种赋形剂(15％w/v)的配制物在聚二甲硅氧烷表面上干燥1小时，并在40℃下使用干燥剂储存至多1个月。将疫苗重新溶解于盐水溶液中，然后如实施例1中所述，针对活性进行测试。结果示于图4中。
未配制的疫苗极快地失去了其活性。所有其他的配制物在短期储存中均良好地执行，但是仅几种配制物在整个研究中，其活性不具有统计学意义的差异。这些配制物包括赋形剂的组合，例如海藻糖/蔗糖,蔗糖/精氨酸,和精氨酸/葡庚糖酸钙。
实施例5
使用赋形剂(总浓度为15％w/v)的多种组合配制三价亚单元流感疫苗(B/Brisbane/60/2008,A/Brisbane/59/2007(H1N1),和A/Victoria/210/2009(H3N2),1700-1850μg/mL)。使用这些配制物，通过在环境温度下并且在真空下将这些配制物在聚二甲硅氧烷模具上干燥4小时，然后在环境温度下在干燥器中额外干燥2天，此后将微针脱模，包装于具有干燥剂的铝袋中，并储存在25℃下，从而生产溶解型微针贴剂。在给定的时间点，将一些贴剂溶解于盐水溶液中，并如实施例1中所述，针对3种毒株的活性进行测试。结果示于图5中。
实施例6
使用多种赋形剂(10％w/v)或赋形剂的组合(总浓度为10％w/v，并且为相等的比率)配制一价亚单元流感疫苗(B/Brisbane/60/2008,630μg/mL)。如实施例5中所述，使用这些配制物来生产溶解型微针贴剂，并在25℃下使用干燥剂储存。在给定的时间点，将一些贴剂溶解于盐水溶液中，并如实施例1中所述，针对活性进行测试。结果示于图6中。
实施例7
使用赋形剂(10％w/v)或赋形剂的组合(总浓度为10％w/v，并且为相等的比率)配制亚单元流感疫苗(B/Brisbane/60/2008,60μg/mL)。然后，在环境温度下将这些配制物在聚二甲硅氧烷表面上干燥1小时，并在40℃下使用干燥剂储存。在给定的时间点，将疫苗重新溶解于盐水溶液中，并如实施例1中所述，针对活性进行测试。结果示于图7中。
实施例8
使用eGFP-MeV研发高通量的测试，从而检验在干燥并在多个温度范围内储存后麻疹病毒的稳定性。遗传改变的麻疹疫苗病毒(其在复制过程中被改造从而产生eGFP)得自Boston University的Dr.Paul DuPrex试验室。然后，按照之前所述，使原液在Vero细胞中繁殖，从而增加病毒的效价。使用TCID50测试测量最终效价为3.0x 105病毒单位/mL。
选择多种赋形剂来评价所改变的麻疹病毒的稳定性。赋形剂的列表和所检验的浓度在表2中提供。所有列出的百分率均表示干燥前水溶液的重量/体积百分率。
表2：所检验的赋形剂与浓度
Figure GDA0001109610950000171
Figure GDA0001109610950000181
所有赋形剂配制物均与效价为3.0x 105TCID50/mL的eGFP-麻疹疫苗病毒(eGFP-MeV)原液以1:1的比例混合。然后，将3μL该配制物样品涂敷在不锈钢芯片上，其中所述的芯片放置在离心管中并与变色干燥剂(Drierite,Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)一起储存在不透明袋中，所述的不透明袋被密封以防止水分污染。所有的样品均在22℃下在通风橱中干燥22小时，然后储存不同的时间。在由储存袋中移出时，检测用于指示水分的各个样品的干燥剂。如果检测到任何污染，则丢弃该样品。
使用包含2％胎牛血清(FBS,Gibco)的1mL Dulbecco’s Modified Eagle Medium(DMEM)(Gibco,Grand Island,NY)溶液重新构成干燥的样品，使用包含单层Vero细胞的96孔板针对荧光活性进行检验。向平板的各孔中加入100μL重新构成的病毒溶液。在37℃下将平板温育72小时，以促进病毒繁殖。在温育后，使用300μL无菌磷酸盐缓冲的盐水(PBS,Sigma-Aldrich)洗涤各孔，从而除去培养基和未感染的病毒粒子。在检验前，由孔中吸出任何剩余的溶液。使用激发波长为485、发射波长为520nm的96孔板读取器通过测量各孔来完成荧光的检测。将各样品的检测信号与包含相同浓度的液体eGFP-MeV的阳性对照比较。
在多个时间和温度下储存包含所列的赋形剂的样品，从而评估它们在干燥后保留eGF-MeV活性的能力。通过暴露于更严谨的条件下，逐步由所考虑的范围内删除赋形剂。
创建由300mM苏氨酸(Sigma-Aldrich)和15w/v％蔗糖(Sigma-Aldrich)在DI-H2O中组成的稳定溶液用于最终的储存试验。使用上文所述的方法创建样品，并在4℃、22℃和45℃下储存1至24周。还包含由eGFP-MeV的干燥的样品组成的对照(不包含稳定剂)，其在22℃下储存1至4周。
使用Prism软件6.02版(Graphpad,La Jolla,CA)计算所有的统计。使用未配对的t检验进行单个样品之间的比较，并且显著性的临界值p<0.05。使用Tukey后检验，使用双因素ANOVA进行多个样品之间的比较，并且显著性的临界值p<0.05。使用Excel 2013(Microsoft,Redmond,WA)测定指数的最佳拟合线。所有结合的平均值表示检验样品的算数平均值。
在进入稳定性筛选之前，实施初始试验以便更好地理解eGFP测试的参数。使用浓度降低的eGFP-MeV感染包含汇合的Vero细胞层的多个96孔板，然后使其温育2、3或4天，从而检测荧光活性随着时间变化的方式。结果显示在温育3天后，病毒浓度(起始浓度为250TCID50/mL)与荧光强度之间呈线性相关(未示出)。对所有随后的试验均选择该温育时间。
为了快速评估赋形剂初始列举物的稳定潜力，实施高温、短时的储存研究。初始筛选删除了大部分所选的赋形剂。在37℃下储存7天后，大约41％的检验样品保留其初始活性的低于1％。选择10％保留活性的临界值，因为其对应于WHO对活的减毒麻疹疫苗在37℃下储存1周的要求。这删除了大约60％的初始列举物(图8)。在初始筛选后，选择14种样品用于在二次筛选试验中进一步研究。
为了进一步评估剩余赋形剂的稳定潜力，选择更长的储存条件用于二次筛选。在37℃下1个月后，仅4种样品证明保留活性超过1％(图9)。在该二次筛选中，注意的是当赋形剂甘氨酸和蔗糖单独地展示出极低的稳定活性(活性保留分别为0.53％和0.61％)时，然而当这些赋形剂组合时，干燥的疫苗的保留活性显著升高至30.45％(p<0.0005)。这得以进行使用更广泛的碳水化合物糖和氨基酸来稳定麻疹疫苗的作用的研究。
将在初始筛选过程中展现出任何稳定活性的这2类中的所有赋形剂都形成组合。还单独地检验所有的氨基酸以起到对照的作用。在37℃下储存1个月后，结果与早期的观察匹配，其中所检验的每种氨基酸当与碳水化合物糖配对时均展示更高的温度能力(图10)。由于包含蔗糖的组合具有最高的保留活性(7种检验氨基酸中的6种)，所以测定蔗糖为最有潜力的二级稳定剂。该筛选使用40％的临界限定，从而排除具有较低活性的稳定组合。
实施最终的筛选以测定用于更广泛的稳定性试验的赋形剂的最佳组合。在45℃下储存1个月后，检验各个样品的保留活性。该筛选显示氨基酸苏氨酸和糖蔗糖的组合具有最高的稳定潜力(图11)，在这种严厉的温度条件下储存后保留了其原始活性的接近14％。
然后使最高性能的赋形剂混合物经历更长时期的试验，以进一步检验其保留eGFP-MeV的感染性的能力。将样品储存在一定的温度范围内储存至多2个月。在室温(25℃)下储存1周后，不包含任何稳定赋形剂的对照样品丧失了100％的感染性，其可以使用eGFP测试来测量。包含稳定溶液(苏氨酸+蔗糖)的样品执行的更好(图12)。储存在4℃和25℃下的样品在储存1个月后分别保留其活性的95％和89％(平均)。在更高温度(45℃)下储存的样品在上述时间点下明显损失的更多，仅保留32％的它们的感染性，其可以使用eGFP荧光检测来测量。在最终6个月的时间点，储存在较低温度下的样品显示极其稳定。4℃和25℃下的样品分别保留它们原始感染性的100％和90％。储存在45℃下的样品在所述的时间点下暴露它们活性的低于1％。发现在45℃下的样品的衰变率为k＝-0.216，其是通过指数最佳拟合线计算的，其中R2＝0.9961。未计算在4℃和25℃下的样品的衰变率，因为这些样品到6个月的时间点时未损失显著量的活性。
尽管之前已经研究了活的减毒麻疹疫苗的稳定，备选地是在环境温度和压力下的干燥，这些尚未良好地研究。诸如微针贴剂之类的许多疫苗传递系统不能良好地适用于使用喷雾干燥、冷冻干燥或相似方法干燥的化合物。因此，这些试验检验了市售可得的人类批准的赋形剂化合物用于在干燥和随后的储存后稳定麻疹疫苗的能力。包含糖和氨基酸的赋形剂配制物证明比单独检验时显示的任意一种赋形剂优于得多的稳定潜力。最有效的配制物包含苏氨酸和蔗糖的混合物，并且能够保留几乎完全的麻疹疫苗活性，其是通过在4℃和25℃下6个月后我们的eGFP测试来测量的。其还能够在45℃下在超过8周中保留超过10％的活性。
实施例9
包含微米级别的聚合物针的贴剂配制成囊封麻疹疫苗。微针贴剂是通过2步工艺生产的，其中稳定的麻疹疫苗填充至微模具中，从而使疫苗定位于微针的尖端。然后，将微针基质材料溶液浇铸至模具上，从而形成微针和贴剂背衬的其余部分。
微针贴剂包含100个锥形微针，每个微针量度为600μm高，在基材上的宽度为300μm，并且逐渐变细至尖端的半径低于3μm。所述的微针包含标准计量的在每个贴剂中囊封的活的减毒麻疹疫苗。
通过测量在不同的温度下储存几乎4个月的微针贴剂上的疫苗病毒效价来评估麻疹微针疫苗的稳定性。重新构成的液体麻疹疫苗是不稳定的，并且在25℃下在28天内以及在40℃下在不到1周内损失基本上所有的潜力。(图13A-13C)。还证明市售可得的冷冻的疫苗在40℃下是不稳定的，在28天后损失超过100倍的感染性，并且在3个月内损失超过1000倍的感染性。相反，微针贴剂在25℃下在几乎4个月内保留了完全的潜力，并且在40℃下在几乎4个月后损失低于10倍的感染性。
图13A和13B的比较证明有效地稳定固体状态下的麻疹疫苗的配制物未必有效地稳定液体状态下的麻疹疫苗。尽管相同的疫苗配制物用于液体和固体，但是液体和固体的稳定性概括是极其不同的。这些观察得到多个研究的广泛支持，其中所述的研究显示当干燥的疫苗在液体中重新构成时，疫苗配制物的稳定性可以显著降低。
赋形剂是否有效地稳定液体或固体疫苗配制物的不可预测性还可以通过在液体疫苗稳定性的现有技术的研究与本申请的结果之间所观察到的差异来证明。例如尽管现有的研究将乳糖确认为稳定液体麻疹疫苗配制物，但是乳糖不能稳定干燥的麻疹疫苗配制物。例如比较Kissmann J,et al.,“Stabilization of measles virus for vaccineformulation,”Hum.Vaccine4(5):350-9(2008)和实施例8。然而，蔗糖有效地稳定液体和固体形式的麻疹疫苗配制物。同上比较。
实施例10
在恒河猴中评价在使用实施例9所述的微针贴剂进行麻疹疫苗接种后的免疫应答。由于恒河猴中的免疫应答显示出与人类免疫应答具有强的相关性，所以恒河猴是用于麻疹疫苗接种的良好建立的模型。一组猴子通过微针接受标准人类剂量的活的减毒麻疹疫苗，并且阳性对照组通过皮下注射接受相同剂量的疫苗。
与之前的发现较好的一致，使用28N的力将微针贴剂加入皮肤中，其相当于每个微针0.28N。该力可以容易地由人类拇指施加。在微针插入猪尸体的皮肤中是快速地溶解。在1分钟之内，微针的尖端溶解。在10分钟之内，微针几乎完全溶解。
为了减少疫苗的浪费并提供精确的剂量，已经证实麻疹疫苗浓缩在微针(其进入皮肤)中而非贴剂背衬中。在使用前，用于猴子的接种疫苗的每个贴剂均包含大约3100TCID50麻疹疫苗。在对恒河猴的皮肤人工施加后的10分钟，微针贴剂背衬和任何剩余的微针根部包含加载到微针贴剂中的原始疫苗的9.4±2.2％，表明超过90％的疫苗剂量已经传递至皮肤中。
每周获得血清样品并针对麻疹病毒的抗体进行检验。为了监控免疫应答的进程，通过ELISA针对麻疹特异性IgM的存在来检验血清样品。在疫苗接种后的第14天，在2个组中对每只动物检测麻疹特异性IgM。麻疹特异性IgM抗体的存在证明所有的动物在疫苗接种后均产生对麻疹的初次免疫应答。
在疫苗接种后的21天开始，初次检测中和抗体，并且在2组中在第28天时增加至峰值，为大约4700mIU/mL。在2组中，峰值效价和达到峰值效价的时间没有显著性差异(p>0.05)。在微针贴剂和皮下注射组中，所有的动物都发生血清转换，并且所有的动物都具有>120mIU/mL的效价，在人类中，认为这种情况是保护性的。中和抗体的效价在疫苗接种后保持至少133天。总之，在恒河猴中2种疫苗均产生强劲的抗体应答，并且这些数据显示使用微针贴剂进行麻疹疫苗接种会诱导与传统的皮下注射疫苗接种相当的中和抗体效价。抗体应答的定时和量级与现有研究中通过皮下注射对恒河猴进行试验疫苗接种后所观察到的那些类似。
在恒河猴中将微针贴剂的免疫原性与皮下注射的免疫原性(猕猴(Macacamulatta))比较，其是通过the Institutional Animal Care and Use Committees of theCDC和the Georgia Institute of Technology批准的。通过空斑减少中和试验来测量麻疹中和抗体的效价。以1:4稀释开始，在2倍稀释的血清中检验。之前在CDC41下研发的酶联免疫吸附IgM测试用于检测麻疹病毒的血清IgM抗体。使用标准的临界值测定结果。
微针贴剂无需使用稀释剂重新构成，其在10分钟之内溶解于皮肤中，并且仅产生温和的短暂的皮肤红斑。2组恒河猴均产生对麻疹的中和抗体应答(符合保护的情况)，并且中和抗体的效价是相等的。此外，微针贴剂在升高的温度下储存后保持可接受水平的潜力，表明比标准的冷冻的疫苗具有改良的热稳定性。因此，麻疹微针贴剂疫苗在非人类灵长动物中是免疫原性的，并且该方法提供了能够有助于改良疫苗接种覆盖率的有前途的传递方法。
尽管参照具体的实施方案详细描述了本发明，但是应该理解的是本领域的那些技术人员在理解上文所述时，可以容易地设想这些实施方案的改变、变化和等价物。因此，本发明的范围应该评定为所附的权利要求书及其任何等价物的范围。

Claims (34)

1.一种疫苗组合物，其包含：
流感抗原；以及
选自以下的赋形剂：麦芽糊精17,麦芽糊精4,精氨酸,组氨酸,葡庚糖酸钙,麦芽糊精13,肝素,棉子糖,阿拉伯糖醇,果糖,葡糖酸钾,核糖醇,木糖醇,硫代硫酸钠,天冬酰胺,2-羟丙基-β-环糊精,TRIS,柠檬酸钠,半乳糖醇和它们的组合，
其中所述的疫苗组合物为干燥的固体形式并且其中所述的疫苗组合物为可溶的微针或微针涂层的形式。
2.权利要求1所述的疫苗组合物，其中所述的赋形剂以1重量％至20重量％的量存在。
3.权利要求1所述的疫苗组合物，其中所述的流感抗原选自流感A、流感B、流感C和它们的组合。
4.权利要求1所述的疫苗组合物，其中所述的流感抗原包括完整的失活的流感病毒、断裂的失活的流感病毒、亚单元的失活的流感病毒、流感病毒样颗粒、或它们的组合。
5.权利要求1所述的疫苗组合物，其进一步包含一种或更多种佐剂。
6.权利要求1所述的疫苗组合物，其中所述的流感抗原表征为与包含所述的流感抗原但不包含赋形剂的比较组合物相比，在所述的疫苗组合物中在6个月内具有改良的稳定性。
7.权利要求1所述的疫苗组合物，其中所述的流感抗原表征为与包含所述的流感抗原但不包含赋形剂的比较组合物相比，在所述的疫苗组合物中在3个月内具有改良的稳定性。
8.权利要求1所述的疫苗组合物，其中所述的流感抗原在至多40℃的温度下储存3个月后保持其活性的至少50％。
9.权利要求1所述的疫苗组合物，其中所述的流感抗原在至多40℃的温度下储存3个月后保持其活性的至少75％。
10.一种疫苗组合物，其包含：
流感抗原；以及
选自以下的赋形剂的共混物：海藻糖和精氨酸；海藻糖和葡庚糖酸钙；海藻糖和麦芽糊精13；蔗糖和精氨酸；精氨酸和葡庚糖酸钙；精氨酸和麦芽糊精13；葡庚糖酸钙和麦芽糊精13；麦芽糊精13和柠檬酸钠；麦芽糊精13和乳糖；以及山梨糖醇和柠檬酸钠，
其中所述的疫苗组合物为干燥固体形式并且其中所述的疫苗组合物为可溶的微针或微针涂层的形式。
11.权利要求10所述的疫苗组合物，其中所述的赋形剂的共混物以1重量％至20重量％的总量存在于所述的疫苗组合物中。
12.权利要求10所述的疫苗组合物，其中所述的赋形剂的共混物的赋形剂以1:15至15:1的比例存在于所述的疫苗组合物中。
13.权利要求10所述的疫苗组合物，其中所述的赋形剂的共混物的赋形剂以1:1的比例存在于所述的疫苗组合物中。
14.权利要求10所述的疫苗组合物，其中所述的流感抗原选自流感A、流感B、流感C和它们的组合。
15.权利要求10所述的疫苗组合物，其中所述的流感抗原包括完整的失活的流感病毒、断裂的失活的流感病毒、亚单元的失活的流感病毒、流感病毒样颗粒、或它们的组合。
16.权利要求10所述的疫苗组合物，其进一步包含一种或更多种佐剂。
17.权利要求10所述的疫苗组合物，其中所述的流感抗原表征为与包含所述的流感抗原但不包含一种或更多种赋形剂的比较组合物相比，在所述的疫苗组合物中在6个月内具有改良的稳定性。
18.权利要求10所述的疫苗组合物，其中所述的流感抗原表征为与包含所述的流感抗原但不包含一种或更多种赋形剂的比较组合物相比，在所述的疫苗组合物中在3个月内具有改良的稳定性。
19.权利要求10所述的疫苗组合物，其中所述的流感抗原在至多40℃的温度下储存3个月后保持其活性的至少50％。
20.权利要求10所述的疫苗组合物，其中所述的流感抗原在至多40℃的温度下储存3个月后保持其活性的至少75％。
21.一种疫苗组合物，其包含：
流感抗原；以及
包含蔗糖和精氨酸的赋形剂共混物，
其中所述的疫苗组合物为干燥的固体形式并且其中所述的疫苗组合物为可溶的微针或微针涂层的形式。
22.权利要求1-21中任一项所述的疫苗组合物，其中所述的微针的高度为100μm至2000μm。
23.一种制备疫苗组合物的方法，其包括：
制备包含流感抗原和赋形剂的水溶液，其中所述的赋形剂选自麦芽糊精17,麦芽糊精4,精氨酸,组氨酸,葡庚糖酸钙,麦芽糊精13,肝素,棉子糖,阿拉伯糖醇,果糖,葡糖酸钾,核糖醇,木糖醇,硫代硫酸钠,天冬酰胺,2-羟丙基-β-环糊精,TRIS,柠檬酸钠,半乳糖醇和它们的组合；以及
在1℃至60℃的温度下干燥所述的溶液，从而形成干燥的固体疫苗组合物，
其中所述的疫苗组合物为可溶的微针或微针涂层的形式。
24.一种制备疫苗组合物的方法，其包括：
制备包含流感抗原和赋形剂的共混物的水溶液，其中所述的赋形剂的共混物选自海藻糖和葡庚糖酸钙；海藻糖和麦芽糊精13；精氨酸和葡庚糖酸钙；精氨酸和麦芽糊精13；葡庚糖酸钙和麦芽糊精13；麦芽糊精13和柠檬酸钠；麦芽糊精13和乳糖；以及山梨糖醇和柠檬酸钠；以及
在1℃至60℃的温度下干燥所述的溶液，从而形成干燥的固体疫苗组合物，其中所述的疫苗组合物为可溶的微针或微针涂层的形式。
25.权利要求23或24所述的方法，其中将所述的水溶液倒入用于形成微针阵列的模具中，然后干燥所述的溶液。
26.一种包含基材和微针阵列的经皮贴剂，其中所述的微针由所述的基材上伸出，并且包含权利要求1至21的任意一项所述的疫苗组合物。
27.流感抗原在制备疫苗组合物中的用途，
其中所述的疫苗组合物还包含选自由以下组成的组的赋形剂：麦芽糊精17,麦芽糊精4,精氨酸,组氨酸,葡庚糖酸钙,麦芽糊精13,肝素,棉子糖,阿拉伯糖醇,果糖,葡糖酸钾,核糖醇,木糖醇,硫代硫酸钠,天冬酰胺,2-羟丙基-β-环糊精,TRIS,柠檬酸钠,半乳糖醇和它们的组合，并且
其中所述的疫苗组合物为干燥的固体形式并且被包含于一个或更多个微针中，
当所述的疫苗组合物被使用时，所述一个或更多个微针被插入患者皮肤的角质层。
28.流感抗原在制备疫苗组合物中的用途，
其中所述的疫苗组合物还包含选自由以下组成的组的赋形剂的共混物：海藻糖和精氨酸；海藻糖和葡庚糖酸钙；海藻糖和麦芽糊精13；蔗糖和精氨酸；精氨酸和葡庚糖酸钙；精氨酸和麦芽糊精13；葡庚糖酸钙和麦芽糊精13；麦芽糊精13和柠檬酸钠；麦芽糊精13和乳糖；以及山梨糖醇和柠檬酸钠，并且
其中所述的疫苗组合物为干燥的固体形式并且被包含于一个或更多个微针中，
当所述的疫苗组合物被使用时，所述一个或更多个微针被插入患者皮肤的角质层。
29.流感抗原在制备疫苗组合物中的用途，
其中所述的疫苗组合物还包含赋形剂共混物，所述的赋形剂共混物包含蔗糖和精氨酸，并且
其中所述的疫苗组合物为干燥的固体形式并且被包含于一个或更多个微针中，
当所述的疫苗组合物被使用时，所述一个或更多个微针被插入患者皮肤的角质层。
30.权利要求27-29的任意一项所述的用途，其中所述的疫苗组合物在1秒至1个小时的溶解时期在体内溶解。
31.流感抗原在制备疫苗组合物中的用途，
其中所述的疫苗组合物还包含选自由以下组成的组的赋形剂：麦芽糊精17,麦芽糊精4,精氨酸,组氨酸,葡庚糖酸钙,麦芽糊精13,肝素,棉子糖,阿拉伯糖醇,果糖,葡糖酸钾,核糖醇,木糖醇,硫代硫酸钠,天冬酰胺,2-羟丙基-β-环糊精,TRIS,柠檬酸钠,半乳糖醇和它们的组合，并且
其中所述的疫苗组合物为干燥的固体形式并且其中所述的疫苗组合物为可溶的微针或微针涂层的形式，
当所述的疫苗组合物被使用时，所述的疫苗组合物在生理学可接受的液体媒介物中被重新构成从而形成可注射的溶液或悬液，并且所述的可注射的溶液或悬液被给予至患者。
32.流感抗原在制备疫苗组合物中的用途，
其中所述的疫苗组合物还包含选自由以下组成的组的赋形剂的共混物：海藻糖和精氨酸；海藻糖和葡庚糖酸钙；海藻糖和麦芽糊精13；蔗糖和精氨酸；精氨酸和葡庚糖酸钙；精氨酸和麦芽糊精13；葡庚糖酸钙和麦芽糊精13；麦芽糊精13和柠檬酸钠；麦芽糊精13和乳糖；以及山梨糖醇和柠檬酸钠，并且
其中所述的疫苗组合物为干燥的固体形式并且其中所述的疫苗组合物为可溶的微针或微针涂层的形式，
当所述的疫苗组合物被使用时，所述的疫苗组合物在生理学可接受的液体媒介物中被重新构成从而形成可注射的溶液或悬液，并且所述的可注射的溶液或悬液被给予至患者。
33.流感抗原在制备疫苗组合物中的用途，
其中所述的疫苗组合物还包含赋形剂共混物，所述的赋形剂共混物包含蔗糖和精氨酸，并且
其中所述的疫苗组合物为干燥的固体形式并且其中所述的疫苗组合物为可溶的微针或微针涂层的形式，
当所述的疫苗组合物被使用时，所述的疫苗组合物在生理学可接受的液体媒介物中被重新构成从而形成可注射的溶液或悬液，并且所述的可注射的溶液或悬液被给予至患者。
34.权利要求31-33的任意一项所述的用途，其中所述的疫苗组合物通过肌肉内、经皮或皮下注射给予。
CN201480052624.6A 2013-09-03 2014-09-03 热稳定的疫苗配制物、工艺和包含疫苗配制物的微针 Active CN105579059B (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361873032P 2013-09-03 2013-09-03
US61/873,032 2013-09-03
US201361873419P 2013-09-04 2013-09-04
US61/873,419 2013-09-04
PCT/US2014/053902 WO2015034924A1 (en) 2013-09-03 2014-09-03 Thermally stable vaccine formulations and microneedles

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105579059A CN105579059A (zh) 2016-05-11
CN105579059B true CN105579059B (zh) 2020-07-31

Family

ID=52628897

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201480052624.6A Active CN105579059B (zh) 2013-09-03 2014-09-03 热稳定的疫苗配制物、工艺和包含疫苗配制物的微针

Country Status (8)

Country Link
US (1) US10736840B2 (zh)
EP (1) EP3041504B1 (zh)
JP (2) JP6611720B2 (zh)
CN (1) CN105579059B (zh)
CA (1) CA2923010C (zh)
ES (1) ES2897659T3 (zh)
RU (1) RU2720808C2 (zh)
WO (1) WO2015034924A1 (zh)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0402131D0 (en) 2004-01-30 2004-03-03 Isis Innovation Delivery method
EP4233839A3 (en) 2011-10-12 2023-09-27 Vaxxas Pty Limited Delivery device
CN106232577B (zh) 2014-04-25 2019-02-22 味之素株式会社 免疫刺激剂
WO2016123665A1 (en) 2015-02-02 2016-08-11 Vaxxas Pty Limited Microprojection array applicator and method
US20160296149A1 (en) * 2015-04-08 2016-10-13 Sandia Corporation In Vivo Extraction of Interstitial Fluid Using Hollow Microneedles
CN104984357B (zh) * 2015-06-02 2018-01-30 长春百克生物科技股份公司 不含明胶的疫苗保护剂组合物及流感减毒活疫苗
US11103259B2 (en) 2015-09-18 2021-08-31 Vaxxas Pty Limited Microprojection arrays with microprojections having large surface area profiles
EP3359132B1 (en) * 2015-10-06 2023-08-16 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Methods for preventing plastic-induced degradation of biologicals
EP3511318A1 (en) 2015-10-28 2019-07-17 Ajinomoto Co., Inc. Immunostimulating agent
TW201720426A (zh) * 2015-11-27 2017-06-16 Nitto Denko Corp 流感疫苗乾燥製劑、及流感疫苗乾燥製劑之製造方法
WO2017090766A1 (ja) * 2015-11-27 2017-06-01 日東電工株式会社 口腔内投与用ワクチン医薬組成物及び口腔内投与用ワクチン医薬組成物の製造方法
WO2017090767A1 (ja) * 2015-11-27 2017-06-01 日東電工株式会社 インフルエンザワクチン乾燥製剤、及び、インフルエンザワクチン乾燥製剤の製造方法
JP2019511255A (ja) 2016-01-11 2019-04-25 バーンダリ，インク． マイクロニードル組成物およびそれを使用する方法
CN117462479A (zh) * 2016-03-01 2024-01-30 佐治亚科技研究公司 微针粒子、组合物，以及处理和递送目标物质的方法
EP4306803A3 (en) 2017-03-31 2024-04-10 Vaxxas Pty Limited Device and method for coating surfaces
CA3065371A1 (en) 2017-06-13 2018-12-20 Vaxxas Pty Limited Quality control of substrate coatings
WO2019023757A1 (en) 2017-08-04 2019-02-07 Vaxxas Pty Limited COMPACT MECHANICAL HIGH ENERGY STORAGE ACTUATOR WITH LOW TRIGGER STRENGTH FOR ADMINISTRATION OF MICROPROJECTION NETWORK (PRM) PATCHES
AU2018315629A1 (en) * 2017-08-10 2020-02-27 Vaxxas Pty Limited Differential coating of microprojections and microneedles on arrays
CN110870913A (zh) * 2018-08-31 2020-03-10 成都夸常奥普医疗科技有限公司 氨基酸类营养素作为疫苗佐剂的应用以及包含氨基酸营养素作为佐剂的疫苗
TW202100197A (zh) * 2019-03-28 2021-01-01 日商富士軟片股份有限公司 含有流感疫苗的微針陣列及微針陣列之製造方法
US12005220B2 (en) * 2019-11-22 2024-06-11 Veradermics Incorporated Microneedle patch for immunostimulatory drug delivery
CN111154833B (zh) * 2020-01-03 2022-08-23 浙江夸克生物科技有限公司 一种α-L-岩藻糖苷酶测定试剂盒
WO2021252962A1 (en) * 2020-06-11 2021-12-16 Aquavit Pharmaceuticals, Inc, Methods and compositions for delivering bioactive compositions to ocular tissue using microneedle devices
JP2024511102A (ja) * 2021-03-23 2024-03-12 ベラデルミクス インコーポレイテッド 皮膚疾患の治療

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080286369A1 (en) * 2004-07-27 2008-11-20 University Of Strathclyde Process for Preparing Microcrystals
US20090232894A1 (en) * 2008-03-05 2009-09-17 Sanofi Pasteur Process for Stabilizing an Adjuvant Containing Vaccine Composition
US20110081380A1 (en) * 2009-10-07 2011-04-07 Sanofi Pasteur Stabilizing Excipient for Inactivated Whole Virus Vaccine
US20110243988A1 (en) * 2009-10-01 2011-10-06 Aridis Pharmaceuticals Methods and Compositions for Stabilization of a Virus Vaccine
WO2012145739A1 (en) * 2011-04-21 2012-10-26 Trustees Of Tufts College Compositions and methods for stabilization of active agents
WO2013082418A1 (en) * 2011-11-30 2013-06-06 3M Innovative Properties Company Microneedle device having a peptide therapeutic agent and an amino acid, methods of making and using the same

Family Cites Families (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999064580A1 (en) 1998-06-10 1999-12-16 Georgia Tech Research Corporation Microneedle devices and methods of manufacture and use thereof
US6503231B1 (en) 1998-06-10 2003-01-07 Georgia Tech Research Corporation Microneedle device for transport of molecules across tissue
US6743211B1 (en) 1999-11-23 2004-06-01 Georgia Tech Research Corporation Devices and methods for enhanced microneedle penetration of biological barriers
US6623457B1 (en) 1999-09-22 2003-09-23 Becton, Dickinson And Company Method and apparatus for the transdermal administration of a substance
EP1345646A2 (en) 2000-12-14 2003-09-24 Georgia Tech Research Corporation Microneedle devices and production thereof
US6887484B2 (en) * 2001-07-31 2005-05-03 Posco Vaccine composition containing a promoter peptide
US6945952B2 (en) 2002-06-25 2005-09-20 Theraject, Inc. Solid solution perforator for drug delivery and other applications
WO2004024224A1 (en) 2002-09-16 2004-03-25 Sung-Yun Kwon Solid micro-perforators and methods of use
US7314613B2 (en) 2002-11-18 2008-01-01 Maxygen, Inc. Interferon-alpha polypeptides and conjugates
AU2004251699A1 (en) 2003-06-04 2005-01-06 Georgia Tech Research Corporation Drilling microneedle device
US9744227B2 (en) 2004-06-02 2017-08-29 Universal Stabilization Technologies, Inc. Compositions containing ambient-temperature stable, inactivated but therapeutically active biopharmaceuticals and methods for formulation thereof
US20080269666A1 (en) 2005-05-25 2008-10-30 Georgia Tech Research Corporation Microneedles and Methods for Microinfusion
US20080213461A1 (en) 2005-06-17 2008-09-04 Georgia Tech Research Corporation Coated Microstructures and Methods of Manufacture Thereof
SI1954308T1 (sl) * 2005-09-16 2011-12-30 Merial Ltd Stabilizatorji za liofilizirana cepiva
US20090182306A1 (en) 2006-07-21 2009-07-16 Georgia Tech Research Corporation Microneedle Devices and Methods of Drug Delivery or Fluid Withdrawal
AR065640A1 (es) 2007-03-09 2009-06-17 Otsuka Pharma Co Ltd Preparado liofilizado que contiene una vacuna contra la influenza y metodo para producir la misma
WO2009048607A1 (en) 2007-10-10 2009-04-16 Corium International, Inc. Vaccine delivery via microneedle arrays
GB0725018D0 (en) 2007-12-21 2008-01-30 Univ Cardiff Monitoring system for microneedle delivery
CN102014873A (zh) 2008-02-25 2011-04-13 诺瓦瓦克斯股份有限公司 糖玻璃化的病毒样颗粒
TWI489994B (zh) 2008-03-17 2015-07-01 Baxter Healthcare Sa 供免疫球蛋白及玻尿酸酶之皮下投藥之用的組合及方法
JPWO2010001671A1 (ja) 2008-06-30 2011-12-15 久光製薬株式会社 マイクロニードルデバイスおよびマイクロニードルデバイスによるインフルエンザワクチンの奏功性を上昇させる方法
RU2577698C2 (ru) * 2009-03-26 2016-03-20 Пулмэтрикс, Инк. Сухие порошкообразные составы и способы лечения легочных заболеваний
US8865182B2 (en) 2009-07-31 2014-10-21 Paxvax, Inc. Adenoviral-based vectors
ES2543795T3 (es) * 2010-03-31 2015-08-21 Stabilitech Ltd. Estabilización de partículas virales
CN102933230B (zh) * 2010-04-15 2016-03-02 株式会社新日本科学 用于鼻内递送的方法和组合物
GB201007207D0 (en) 2010-04-29 2010-06-16 Univ Cork Method
PL2575873T3 (pl) 2010-06-01 2016-06-30 Novartis Ag Zatężanie i liofilizacja antygenów szczepionkowych grypy
WO2011156641A2 (en) 2010-06-09 2011-12-15 Kaspar Roger L Microneedle arrays for active agent delivery
JP5808102B2 (ja) 2010-07-22 2015-11-10 コスメディ製薬株式会社 抗原を含有する経皮免疫製剤およびその製造方法
CA2808965C (en) 2010-08-20 2020-01-07 Novartis Ag Soluble needle arrays for delivery of influenza vaccines
JP5558311B2 (ja) 2010-10-27 2014-07-23 株式会社バイオセレンタック ワクチン抗原表皮デリバリー用溶解性３層マイクロニードル・アレイ・パッチ
US9089677B2 (en) 2011-01-25 2015-07-28 The Regents Of The University Of California Transcutaneous multimodal delivery system (TMDS)
CN103781491A (zh) 2011-05-17 2014-05-07 索利吉尼克斯公司 热稳定性疫苗组合物及其制备方法
US20130096532A1 (en) 2011-10-17 2013-04-18 Rutgers, The State University Of New Jersey Polymer-Based Micro-Needle Array Designs, Fabrication Processes, and Methods of Use Thereof for Drug Delivery
EP2817027A4 (en) 2012-04-03 2015-12-16 Theraject Inc SOLUBLE MICRONADELFELDER FOR BUCCULAR ADMINISTRATION OF VACCINES
US20130345638A1 (en) 2012-06-25 2013-12-26 Flugen, Inc. Multiple drug delivery device
JP6395800B2 (ja) 2013-03-15 2018-09-26 インキューブ ラブズ， エルエルシー 多段階生分解性薬物送達プラットフォーム
EP3215188A1 (en) 2014-11-03 2017-09-13 Merial, Inc. Methods of using microneedle vaccine formulations to elicit in animals protective immunity against rabies virus

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080286369A1 (en) * 2004-07-27 2008-11-20 University Of Strathclyde Process for Preparing Microcrystals
US20090232894A1 (en) * 2008-03-05 2009-09-17 Sanofi Pasteur Process for Stabilizing an Adjuvant Containing Vaccine Composition
US20110243988A1 (en) * 2009-10-01 2011-10-06 Aridis Pharmaceuticals Methods and Compositions for Stabilization of a Virus Vaccine
US20110081380A1 (en) * 2009-10-07 2011-04-07 Sanofi Pasteur Stabilizing Excipient for Inactivated Whole Virus Vaccine
WO2012145739A1 (en) * 2011-04-21 2012-10-26 Trustees Of Tufts College Compositions and methods for stabilization of active agents
WO2013082418A1 (en) * 2011-11-30 2013-06-06 3M Innovative Properties Company Microneedle device having a peptide therapeutic agent and an amino acid, methods of making and using the same

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Development of Stable Influenza Vaccine Powder Formulations: Challenges and Possibilities;J-P. Amorij 等;《Pharmaceutical Research》;20080313;第25卷(第6期);第1256-1273页 *
Dissolvable Microneedle Patches for the Delivery of Cell-Culture-Derived Influenza Vaccine Antigens;SUSHMA KOMMAREDDY 等;《JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES》;20111220;第101卷(第3期);第1021页摘要、第1022页图1、第1023页左栏第1段 *
Dissolving polymer microneedle patches for influenza vaccination;Sean P Sullivan 等;《Nature Medicine》;20100718;第16卷(第8期);第915页摘要、第916页图1和2、 Online Methods *
Formulation and coating of microneedles with inactivated influenza virus to improve vaccine stability and immunogenicity;Yeu-Chun Kim 等;《Journal of Controlled Release》;20091017;第142卷;第187页摘要、第187页第2.2-2.4节、第189页图1 *
Microneedles for drug and vaccine delivery;Yeu-Chun Kim 等;《Advanced Drug Delivery Reviews》;20120501;第64卷;第1556页第3.1.3.2.1节 *

Also Published As

Publication number Publication date
EP3041504A4 (en) 2018-02-21
JP7358068B2 (ja) 2023-10-10
US20160220483A1 (en) 2016-08-04
RU2016111354A (ru) 2017-10-09
RU2016111354A3 (zh) 2018-07-16
EP3041504A1 (en) 2016-07-13
CA2923010A1 (en) 2015-03-12
EP3041504B1 (en) 2021-08-25
JP2019163271A (ja) 2019-09-26
WO2015034924A1 (en) 2015-03-12
CA2923010C (en) 2022-08-30
JP2016535065A (ja) 2016-11-10
RU2720808C2 (ru) 2020-05-13
JP6611720B2 (ja) 2019-11-27
US10736840B2 (en) 2020-08-11
ES2897659T3 (es) 2022-03-02
CN105579059A (zh) 2016-05-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105579059B (zh) 热稳定的疫苗配制物、工艺和包含疫苗配制物的微针
Jain et al. Formulation and stabilization of recombinant protein based virus-like particle vaccines
US8313897B2 (en) Method for preserving viral particles
Kim et al. Formulation of microneedles coated with influenza virus-like particle vaccine
RU2560675C2 (ru) Стабилизирующий эксципиент для вакцины с инактивированными целыми вирусами
JP5960120B2 (ja) ウイルス粒子の安定化
EP2552478B1 (en) Excipients for stabilising viral particles
JP7051132B2 (ja) ワクチン接種または遺伝子治療のための効率的なウイルスベクターベースの組成物を得るための新規方法
US8216588B2 (en) Lyophilized preparation comprising influenza vaccine, and method for preparation thereof
Tian et al. Intradermal administration of influenza vaccine with trehalose and pullulan-based dissolving microneedle arrays
US11813324B2 (en) Methods for immunizing pre-immune subjects against respiratory syncytial virus (RSV)
ES2731636T3 (es) Composición adyuvante que contiene citrulina
WO2020246584A1 (ja) ペプチド核酸を基盤としたアジュバント
US20210252132A1 (en) Composition and method for stabilising vaccines in a solid dosage format
WO2023194699A2 (en) Vaccine composition
Beukema Intradermal administration of influenza accine ith trehalose and pullulan-based dissol ing microneedle arra s
Zhang et al. Silk Fibroin-Coated Nano-MOFs Enhance the Thermal Stability and Immunogenicity of HBsAg
Soema Formulation of influenza T cell peptides: in search of a universal influenza vaccine
Mistilis THERMOSTABILIZATION OF INFLUENZA VACCINE IN MICRONEEDLE PATCHES
Budimir et al. Induction of Heterosubtypic Cross-Protection against Influenza by a Whole

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant