CN105497022A - 奥拉西坦或左旋奥拉西坦在制药领域中的新应用 - Google Patents

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CN105497022A CN201610058296.1A CN201610058296A CN105497022A CN 105497022 A CN105497022 A CN 105497022A CN 201610058296 A CN201610058296 A CN 201610058296A CN 105497022 A CN105497022 A CN 105497022A
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Abstract

本发明提供奥拉西坦、左旋奥拉西坦在制备预防或治疗神经功能缺失药物中的应用。实验结果表明奥拉西坦作为治疗脑梗塞所致缺血性神经功能缺失的作用明显；左旋奥拉西坦作为治疗脑梗塞所致缺血性神经功能缺失、外伤所致神经功能缺失作用显著。

Description

奥拉西坦或左旋奥拉西坦在制药领域中的新应用
本申请是申请号为“201410317179.3”，发明名称为“奥拉西坦或左旋奥拉西坦在制药领域中的新应用”的发明专利申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及奥拉西坦药物的医药用途，具体涉及奥拉西坦或左旋奥拉西坦在制备预防或治疗神经功能缺失药物中的应用。
背景技术
左旋奥拉西坦((S)-4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺)是奥拉西坦(OxiracetamCAS62613-82-5)的左旋体，为白色微晶状粉末，熔点135～136℃，旋光度为-36.0°(C＝1.00inwater)，左旋奥拉西坦的溶解性明显优于混旋体。奥拉西坦是一种合成的羟基氨基丁酸(GABOB)环状衍生物，能促进脑内ATP，促进乙酰胆碱合成并增强神经兴奋的传导，对缺氧所致的逆行性健忘有改进作用，可以增强记忆，提高学习能力。由于奥拉西坦用于临床中治疗智障效果还未达到最理想状态，主要是活性成份中存在无效甚至是拮抗的右旋奥拉西坦。而左旋奥拉西坦目前尚无单独作为药物应用的报道。
业内人士清楚，神经功能缺失症是由大脑问题引发的功能障碍,包括肢体无力麻木、言语不清、饮水呛咳、共济失调、视野缺损、大小便失禁等。任何大脑的损伤都可能导致神经功能缺乏症，如：脑血管疾病、脑发育不良、脑变性疾病、脑萎缩、脑外伤、颅内占位等。
目前，治疗神经功能缺失症的药物，如：多奈哌齐(安理申)、美金刚(易倍申)等。但这些临床上使用的药物存在的不良影响，如多奈哌齐可引起腹泻、肌肉痉挛、乏力、恶心、呕吐和失眠等副作用；美金刚可引起有幻觉、意识混沌、头晕、头痛和疲倦等副作用，所以有必要开发出新的治疗认知功能障碍的药物。
CN101367757A公开了一种(S)-4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺的制备方法。它采用(S)-4-卤-3-羟基丁酸酯为原料在极性溶剂和碱性条件下反应得到左旋奥拉西坦，其中的碱性条件下反应是通过在所述反应过程中分次加碱，滴加氯代物控制反应pH的方式，粗品经过阳离子交换树脂后得到产品的酸性水溶液，再采用阴离子交换树脂中和，中和液浓缩后得到粗产品，粗产品通过乙醇重结晶一次，再用甲醇/丙酮混合溶剂结晶一次或异丙醇重结晶一次的方法制备左旋奥拉西坦。
发明内容
本发明目的在于提供奥拉西坦在制药领域的用途，具体提供奥拉西坦在制备预防或治疗神经功能缺失药物中的应用；左旋奥拉西坦在制备预防或治疗神经功能缺失药物中的应用。
本发明具体涉及奥拉西坦作为制备预防或治疗神经功能缺失药物中的应用；作为脑梗塞所致缺血性神经功能缺失药物中的应用。
涉及左旋奥拉西坦作为制备预防或治疗神经功能缺失药物中的应用；作为脑梗塞所致缺血性神经功能缺失药物中的应用；作为外伤所致神经功能缺失药物中的应用。
上述奥拉西坦或左旋奥拉西坦在制备预防或治疗神经功能缺失药物中的应用，具体来说可以制备成活性成分为左旋奥拉西坦的药物组合物，剂型可以是口服制剂，如片剂，滴丸剂，粉剂，颗粒剂，胶囊剂等；注射剂如注射用粉剂，注射用冻干粉等剂型，以上剂型均可以按照常规方法制得。
上述剂型优选为口服胶囊剂、片剂和注射剂。
上述口服制剂的给药剂量为左旋奥拉西坦19mg/kg/天，外消旋奥拉西坦76mg/kg/天。
具体地说涉及，使用左旋奥拉西坦化合物或含左旋奥拉西坦化合物的药物组合物制备用于预防或治疗神经功能缺失症的药物。
一种用于预防或治疗神经功能缺失症的药物组合物，其中含有左旋奥拉西坦化合物，以及药学上可接受的辅料。
一种制备用于预防或治疗神经功能缺失症的药物组合物的方法，其中包括将左旋奥拉西坦化合物与药学上可接受的辅料一起配制。
涉及，使用左旋奥拉西坦化合物或含左旋奥拉西坦化合物的药物组合物制备用于预防或治疗脑梗塞所致缺血性神经功能缺失症的药物。
一种用于预防或治疗脑梗塞所致缺血性神经功能缺失症的药物组合物，其中含有左旋奥拉西坦化合物，以及药学上可接受的辅料。
一种制备用于预防或治疗脑梗塞所致缺血性神经功能缺失症的药物组合物的方法，其中包括将左旋奥拉西坦化合物与药学上可接受的辅料一起配制。
涉及，使用左旋奥拉西坦化合物或含左旋奥拉西坦化合物的药物组合物制备用于预防或治疗外伤所致神经功能缺失症的药物。
一种用于预防或治疗外伤所致神经功能缺失症的药物组合物，其中含有左旋奥拉西坦化合物，以及药学上可接受的辅料。
一种制备用于预防或治疗外伤所致神经功能缺失症的药物组合物的方法，其中包括将左旋奥拉西坦化合物与药学上可接受的辅料一起配制。
优选地，上述含左旋奥拉西坦化合物的药物组合物为口服制剂或注射剂。
更优选地，上述含左旋奥拉西坦化合物的口服制剂或注射剂，其给药剂量为19～76mg/kg/天。
涉及，使用奥拉西坦化合物或含奥拉西坦化合物的药物组合物制备用于预防或治疗脑梗塞所致缺血性神经功能缺失症的药物。
一种用于预防或治疗脑梗塞所致缺血性神经功能缺失症的药物组合物，其中含有奥拉西坦化合物，以及药学上可接受的辅料。
一种制备用于预防或治疗脑梗塞所致缺血性神经功能缺失症的药物组合物的方法，其中包括将奥拉西坦化合物与药学上可接受的辅料一起配制。
优选地，上述含奥拉西坦化合物的药物组合物为口服制剂或注射剂；所述口服制剂为口服胶囊剂或片剂。
更优选地，上述含奥拉西坦化合物的口服制剂或注射剂，其给药剂量为76mg/kg/天。
本发明制备预防或治疗神经功能缺失的含奥拉西坦或左旋奥拉西坦药物中所使用的奥拉西坦或左旋奥拉西坦原料纯度最好是99.3％以上(光学纯度)，以重量百分数计。
为了进一步验证本发明药用效果，发明人进行了以下试验。
(一)左旋奥拉西坦动物体内药代动力学及绝对生物利用度研究
以和混旋体奥拉西坦的药代动力学对比为前提的研究，确定Beagle犬的灌胃和静注给药剂量为50mg/kg。
取成年Beagle犬6条，雄雌各半，体重10.0±0.5kg。随机等分成三组，每组2只，雌雄各半。采用拉丁方三交叉实验(见下表1)，对Beagle犬的灌胃和静注给药，剂量为50mg/kg。采用左旋奥拉西坦的纯度达99.3％(光学纯)的样品进行研究，每种给药途径间隔一周。灌胃给药于动物禁食12小时后给药，给药后继续禁食3小时。给药前取空白血，灌胃给药后0.083、0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0小时；静注给药后0.083、0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0小时从前肢静脉取血1mL于肝素化试管中，离心取血浆，用LC-MS-MS法测定血浆中药物浓度。结果见下表2-7。
表1三周期三交差拉丁方实验设计Beagle犬分组情况
注：ORT为奥拉西坦；s-ORT为左旋奥拉西坦
犬静注和灌胃50mg/kg奥拉西坦、左旋奥拉西坦后血浆中药物浓度分别列于表2-4。
表2Beagle犬静注50mg/kg奥拉西坦后血浆中药物浓度(μg/mL)
ND：低于0.5μg/mL
表3Beagle犬灌胃50mg/kg左旋奥拉西坦后血浆中药物浓度(μg/mL)
ND：低于0.5μg/mL
表4Beagle犬静注50mg/kg左旋奥拉西坦后血浆中药物浓度(μg/mL)
ND：低于0.5μg/mL
表5Beagle犬灌注50mg/kg奥拉西坦后药代动力学参数
表6Beagle犬灌胃50mg/kg左旋奥拉西坦后药代动力学参数
表7Beagle犬静注50mg/kg左旋奥拉西坦后药代动力学参数
由此可见：Beagle犬灌胃50mg/kg奥拉西坦后，AUC0-∞为165.04±24.02h，清除率为0.31±0.04L/h/kg，达峰时间和达峰浓度分别为1.25±0.27h，39.67±7.55μg/mL；灌胃给药50mg/kg左旋奥拉西坦后，AUC0-∞为160.97±27.86h，达峰时间和达峰浓度分别为1.21±0.53h，41.28±11.29μg/mL；静注给药后AUC0-∞为242.72±37.75h估算的绝对生物利用度为65.76±9.12％。
得出结论：左旋奥拉西坦保留原奥拉西坦的药代参数特征。
(二)毒理试验
在GLP实验条件下比较左旋奥拉西坦和奥拉西坦的ICR小鼠毒性，设定剂量为5g/kg，每组20只动物，雌雄各半，用0.5％CMC液配制后口服灌服。结果显示：两组动物活动正常，无明显毒性呈现，连续观察14天无一动物发生死亡两组间无明显的毒性差异。说明左旋奥拉西坦并没有药效的增加而同时增加毒性。
奥拉西坦为市售药物，其药代动力学、毒理等均为公知常识。
(三)奥拉西坦、左旋奥拉西坦对大脑中动脉永久栓塞性大鼠神经保护作用的实验研究
一、材料与方法
1、试剂与药品
奥拉西坦市售GAM生产原料，纯度为99.8％；左旋奥拉西坦CK-SOX纯度为99％，由重庆东泽医药科技发展有限公司提供；戊巴比妥钠和TTC购自Sigma公司。
2、动物与分组
实验动物采用SD大鼠，雄性，实验时体重为250～300g,购自第三军医大学大坪动物所。随机分为7组，每组10～12只：对照组(注射生理盐水)；左旋3组(60，120，240mg/kg体重)；消旋3组(120,240,480mg/kg体重)。
3、动物模型建立
大鼠大脑中动脉永久栓塞模型(pMCAO)建立步骤：
(1)颈前正中切口、暴露目标血管颈前正中切口，顿性分离、自制拉钩充分暴露右侧颈前三角。分离颈前三角表面的薄层筋膜，拨起低边-锁骨舌骨肌下缘，可见与此肌肉平行的纵行搏动的动脉，打开动脉壳，暴露颈动脉分叉，并向近心端游离约0.5cm颈总动脉(CCA)。
(2)挂线、结扎在已分离的CCA段，分别于分叉处向近心端0mm、2.5mm、4mm处挂三根手术丝线(12cm/根的1－0)。先在分叉处打一活结并拉紧阻断血流，再将中间丝线打活结不拉紧、不阻断血流，最后近心端丝线单结结扎并阻断血流，均不剪线备用。
(3)剪口、插线提起近心端丝线尾端使CCA稍稍抬离原来位置约2mm高，眼科剪直视下于两结扎丝线间靠近近心端丝线处(约距离动脉分叉3mm处)剪一小口，可见少许动脉血冒出。右手改用眼科镊持准备好的尼龙栓线自已剪好的小口置入CCA内向前推进至遇阻力(分叉处结扎线)，用止血钳夹住左手丝线，保持CCA一定张力。拉紧中间丝线防止CCA内丝线脱出及防止分叉处半单节打开后出血，但不宜过紧，以免送线困难。最后，解开分叉处活结、取下近心端丝线止血钳。
(4)送线入颅，实现MCAO左手再次提起近心端丝线尾端，稍向外上牵拉CCA,右手用眼科镊持尼龙栓线距CCA开口约2mm处调整栓线方向，直视下送线使栓线向外下方向进入颈内动脉(ICA)约5mm左右，调整栓线头端方向，向稍内上进线，至稍有阻力感，稍后退(线头距动脉分叉18±0.5mm)，此时大鼠呼吸可有短暂加速，提示模型成功。拉紧、结扎中间丝线，剪断丝线及尼龙栓线尾(尾留约2mm)。消毒皮肤、缝合切口。(假手术组不使用栓线，其他步骤与对照组相同)。
(5)造模成功标志
缺血2h，动物麻醉清醒后，出现对侧前肢倦曲或行走转圈或行走向对侧倒体征则纳入，动物无此体征或于2h后仍不清醒者弃去。
4、给药方式
分别将奥拉西坦和左旋奥拉西坦溶于生理盐水，配成相应的浓度梯度(左旋：6，12，24mg/ml；消旋：12，24，48mg/ml)，每天动物实验评分后30min进行腹腔注射给药，按1ml/100g体重计。
5、神经功能评分
每天给药前10min进行神经功能评分(5分制)：
前肢屈曲：提尾无任何屈曲症状，0分；轻度左前肢内旋、肩内收，0.5分；
侧向推挡阻力：在一平面上，自动物肩后向两侧推挡阻力相等者，0分；向健侧推挡阻力有轻度减弱者，0.5分；向健侧推动物，失去推挡阻力者，1.0分。
躯体旋转：提尾动物无旋转体征者，0分；向患侧有轻度旋转者，0.5分；中度以上并有躯体扭曲者，1.0分。
自主活动：活动正常者，0分；自主活动减少者，1.0分；活动需激惹者，1.5分；失去爬动能力者，2.0分。
6、TTC染色及梗塞面积计算
模型建立7d后用3％戊巴比妥钠麻醉老鼠，断头，取出大脑。置于10cm玻璃皿中-20℃冷冻10min。离额极2～3cm处冠状位切片，每片2mm厚，切5片。置于1.5％TTC溶液中37℃孵育30min。4％多聚甲醛固定切片，照相。正常组织染成红色，梗塞区不着色，呈白色。
梗塞面积统计是由第三方研究人员进行，运用软件为Image－ProPlus，为了补偿创伤后脑水肿带来的误差，梗塞面积用校正公式S＝左半球面积-(右半球面积-梗塞面积)，梗塞体积以其所占正常一侧半球的百分比表示。
7、统计方法
结果以mean±SEM表示。采用SPSS10.0进行χ2检验分析。P<0.05认为有显著差异。
二、实验结果
1、神经功能评分：建模成功6天内，对照组相较于假手术组表现出明显的神经功能障碍。各组动物(对照组、左旋奥拉西坦240mg/kg组组除外)行为学评分均有改善趋势。其中，左旋奥拉西坦60mg/kg组动物神经功能评分从2.18±0.23分降到1.75±0.25分；左旋奥拉西坦120mg/kg组从2.2±0.25分降到1.72±0.22分；消旋奥拉西坦120mg/kg从2.25±0.21分降到2.0±0.2分；消旋奥拉西坦240mg/kg从2.35±0.22分降到1.625±0.23分；消旋奥拉西坦480mg/kg从2.13±0.3分降到1.59±0.3分。对上述数据进行统计学分析，左旋奥拉西坦60、120mg/kg组动物从第4天开始行为学评分显著低于对照组(p<0.05)，消旋奥拉西坦240、480mg/kg组动物从第5天开始行为学评分显著低于对照组(p<0.05)；消旋奥拉西坦120mg/kg组动物第6天行为学评分低于对照组(p<0.05)。左旋奥拉西坦240mg/kg组及上述各组的其他时间点与对照组相比没有统计学差异(p>0.05)，见图1、图2。进一步对左旋奥拉西坦60和120mg/kg,消旋奥拉西坦480mg/kg三个个剂量组之间进行比较分析，此3组之间并无统计学差异(p>0.05)，见图3。术后6天以后，可能由于动物感染等因素的影响，动物整体状况明显恶化，甚至出现死亡。
如图1所示，建模成功6天内，对照组与假手术组相比，大鼠表现出明显的神经功能障碍(##p<0.01)。与对照组相比，腹腔注射消旋奥拉西坦的动物神经功能评分都有下降趋势，评分下降说明动物的神经功能状态好转。如图示，消旋奥拉西坦120、240和480剂量组分别在第5、第6天神经功能损伤有明显改善(p<0.05)。尤以240和480mg/kg组效果最为明显(p<0.01)。*p<0.05vs.对照组,n＝10～12
如图2所示，建模成功6天内，与对照组相比,腹腔注射左旋奥拉西坦动物神经功能评分也普遍有所下降。如图示，除注射左旋奥拉西坦24mg/kg剂量时，效果不明显(p>0.05),左旋奥拉西坦120和60剂量组对神经功能损伤均有改善(p<0.05)。尤以120mg/kg组效果最为明显。*p<0.05vs.对照组,n＝10～12
图3：图1和图2的合成。综合左旋组与消旋组显示，左旋奥拉西坦60和120mg/kg组,消旋奥拉西坦480mg/kg组效果要明显好于其他组。但是，此3个剂量组之间并无统计学差异(*p>0.05S-60vsS-120组；**p>0.05S-60vsRS-480组；***p>0.05S-120vsRS-480组n＝10-12)
表8各组术后不同时间神经功能评分(mean±SEM)
经方差齐性检验，P＞0.1，认为各组总体方差齐同。与sham组比较，control组神经功能障碍评分明显升高(##P<0.01)，各给药组与control组比较，﹡P<0.05
2、梗塞面积统计结果显示，MCAO建模后7天，相较于假手术组，各组动物相应脑区都有不同程度的梗死灶，对照组最为明显(见图4).对照组老鼠的脑梗死体积为57.33％±4.86％。左旋奥拉西坦120mg/kg组脑梗死体积为39.08％±12％，与对照组比有明显减少(**p<0.01)；消旋奥拉西坦480mg/kg组脑梗死体积为44.9％±7.18％，与对照组比有明显减少(**p<0.01)；其余剂量组：消旋奥拉西坦120mg/kg组脑梗死体积为54.9％±6.5％；消旋奥拉西坦240mg/kg组脑梗死体积为51.13％±4.68％；左旋奥拉西坦60mg/kg组脑梗死体积为50.99％±6.29％；左旋奥拉西坦240mg/kg组脑梗死体积为49.68％±0.23％.与对照组相比，梗死体积缩小不明显。(*p>0.05消旋奥拉西坦120vs对照组；**p>0.05消旋奥拉西坦240vs对照组；***p>0.05左旋奥拉西坦60vs对照组；****p>0.05左旋奥拉西坦240mg/kgvs对照组n＝10-12,见图5)。
如图4所示,TTC染色结果显示大脑中动脉栓塞后，中动脉供血区脑组织出现大面积梗死灶。腹腔注射左奥拉西坦120mg/kg后，梗塞体积缩小明显.注射消旋奥拉西坦480mg/kg后，脑梗死体积缩小也很明显。其他剂量组，在缩小梗死体积上，效果不明显。
如图5所示，与对照组(57.33％)相比，腹腔注射消旋奥拉西坦480mg/kg与左奥拉西坦120mg/kg后，梗死灶体积缩小最明显(**p<0.01)；注射消旋奥拉西坦240mg/kg后，与对照组比较梗死体积也有一定程度的缩小(*p<0.05)；在注射消旋奥拉西坦的3组中，消旋奥拉西坦480mg/kg组明显好于消旋奥拉西坦120mg/kg组(*p<0.05)；在注射左奥拉西坦的3组中，左旋奥拉西坦120mg/kg组明显好于左旋奥拉西坦60mg/kg组(*p<0.05)。
表9各组术后7天TTC染色显示脑梗塞体积(mean±SEM)
SPSS13.0软件单因素方差分析，与sham组比较，control组脑梗塞明显(# #P<0.01)，各给药组与control组比较，﹡P<0.05，左旋奥拉西坦120mg/kg组与消旋奥拉西坦480mg/kg组比较，△P<0.05。
以上结果可见，左旋奥拉西坦60、120mg/kg,消旋奥拉西坦240、480mg/kg组对神经功能缺损均有改善作用，尤以左旋奥拉西坦120mg/kg、消旋奥拉西坦480mg/kg组最明显。脑梗死体积评估：术后5天，左旋奥拉西坦120mg/kg、消旋奥拉西坦480mg/kg组脑梗死体积占半脑的比例分别为39.09％和44.90％，与对照组(57.33％)相比有明显较少(p﹤0.01)。左旋奥拉西坦、消旋奥拉西坦均对治疗梗塞所致缺血性神经功能缺失的效果显著，能有效改善大脑中动脉永久栓塞性大鼠的神经功能评分，降低脑梗塞体积。
(四)左旋奥拉西坦对大鼠自由落体性脑外伤神经保护作用的实验研究
一、材料与方法
1、试剂与药品
奥拉西坦市售GAM生产原料，纯度为99.8％；左旋奥拉西坦CK-SOX纯度为99％，由重庆东泽医药科技发展有限公司提供；水合氯醛购自第三军医大学附属西南医院。
2、动物与分组
实验动物采用SD大鼠，雄性，实验时体重为250～300g,购自第三军医大学大坪动物所。随机分为8组，每组10～12只：对照组(注射生理盐水)；左旋3组(60，120，240mg/kg体重)；消旋3组(120,240,480mg/kg体重)。
3、动物模型建立
参照Feeney法建立大鼠实验性重型颅脑创伤模型。以2％戊巴比妥钠按照40mg/kg进行肌肉麻醉,颅顶部脱毛、消毒；将大鼠固定于立体定向仪上,正中切口开颅,以牙科钻在冠状缝后3mm与矢状缝右侧3mm交会处钻孔,扩大骨窗至6mm×6mm(前至冠状缝,左界为矢状缝右旁2mm),保持硬膜完整；将重30g的圆柱状打击杆(打击端直径4.5mm)沿垂直固定于立体定向仪上的套管内自20cm高度释放,打击中心即为钻孔点；以明胶海绵局部止血,至无活动性出血后间断缝合头皮。(假手术组除不打击外，其他步骤与对照组相同)
4、给药方式
分别将奥拉西坦和左旋奥拉西坦溶于生理盐水，配成相应的浓度梯度(左旋：6，12，24mg/ml；消旋：12，24，48mg/ml)，每天动物实验评分后30min进行腹腔注射给药，按1ml/100g体重计。
5、神经功能评分
表1大鼠行为学评分标准
6、脑水肿测定
各组每个亚组于相应时相点,采用断头法处死,处死后立即开颅,快速取右侧大脑半球伤灶区部分全层脑组织,电子分析天平称脑湿重,在105℃干燥箱干至恒重,按公式:脑组织含水量(％)＝(湿重-干重)÷湿重×100％。
7、统计方法
结果以mean±SEM表示。采用SPSS10.0进行χ2检验分析。P<0.05认为有显著差异。
二、实验结果
1、神经功能评分
建模成功7天内，各组动物行为学评分均有改善趋势(所得分数越高，动物神经功能状态越好。其中，假手术组神经功能评分从20.±0.36上升到21；对照组神经功能评分从13.6±0.3上升为16.2±0.46；左旋奥拉西坦60mg/kg组神经功能评分从14.0±0.34上升为16.75±0.39；左旋奥拉西坦120mg/kg组神经功能评分从14.8±0.24上升为17.8±0.32；左旋奥拉西坦240mg/kg组神经功能评分从13.8±0.2上升为16.4±0.24；消旋奥拉西坦120mg/kg组神经功能评分从14.25±0.22上升为17.0±0.29；消旋奥拉西坦240mg/kg组神经功能评分从13.2±0.17上升为16.2±0.23；消旋奥拉西坦480mg/kg组神经功能评分从14.75±0.29上升为17.0±0.19。对上述数据进行统计学分析，左旋奥拉西坦120mg/kg组动物从第2天(第4天除外)开始行为学评分显著高于对照组(p<0.05)，消旋奥拉西坦120和480mg/kg组动物从第6天开始行为学评分显著高于对照组(p<0.05)，左旋奥拉西坦60、240mg/kg，消旋奥拉西坦240mg/kg组及上述各组的其他时间点与对照组相比没有统计学差异(p>0.05)，见图6、7。进一步对左旋奥拉西坦120mg/kg,消旋奥拉西坦120和480mg/kg等三个剂量组之间进行比较分析,其中左旋奥拉西坦120mg/kg组神经功能评分显著高于消旋奥拉西坦480和120mg/kg组(p<0.01)，见图8。
如图6所示，手术后7天过程中，与对照组相比,腹腔注射左旋奥拉西坦的动物神经功能评分普遍有所上升。如图示，除注射左旋奥拉西坦120mg/kg剂量时，效果明显(*p<0.05vs.对照组,n＝10～12),左旋奥拉西坦240和60mg/kg剂量组对神经功能评分均有上升，但与注射生理盐水的对照动物相比，效果并不明显(p>0.05)。
如图7所示，手术后7天过程中，与对照组相比,腹腔注射消旋奥拉西坦的动物神经功能评分也普遍有所上升。如图示，注射消旋奥拉西坦120mg/kg和480mg/kg剂量时，效果明显(*p<0.05vs.对照组,n＝10～12),RS-240剂量组对神经功能评分有所上升，但与注射生理盐水的对照动物相比，效果并不明显(p>0.05vs.对照组,n＝10～12)。
图8：图6、图7的合成。综合左旋组与消旋组显示，左旋奥拉西坦120mg/kg,消旋奥拉西坦480和120mg/kg组效果要明显好于其他组。同时，此3个剂量组之间，左旋奥拉西坦120mg/kg组神经功能评分显著高于消旋奥拉西坦480和120mg/kg组(*p<0.01左旋奥拉西坦120mg/kgvs消旋奥拉西坦120mg/kg组；**p<0.01左旋奥拉西坦120mg/kgvs消旋奥拉西坦480mg/kg组),但是消旋奥拉西坦480mg/kg，消旋奥拉西坦120mg/kg两组之间并无显著差异(***p>0.05RS-消旋奥拉西坦120mg/kgvs480mg/kg组n＝10-12)。
表10术后不同时间点神经功能评分(mean±SEM)
SPSS13.0软件单因素方差分析，各给药组与control组比较，神经功能评分明显改善，﹡P<0.05，S-120组与RS-120组比较，神经保护效果更好，△P<0.05
2、脑水肿测定
手术后1天，生理盐水组(saline)脑水肿测定值为79.57％±0.08％，与假手术组(sham,78.69％±0.06％)相比，水肿明显(*p<0.05见图9)；左旋奥拉西坦60mg/kg组脑水肿测定值为79.06％±0.12％，与生理盐水组相比，水肿明显(*p<0.05见图9)；其他实验组：消旋奥拉西坦120mg/kg组脑水肿测定值为79.35％±0.14％，与生理盐水组相比，水肿程度没有明显差异(p>0.05见图9)；左旋奥拉西坦120mg/kg组脑水肿测定值为79.4％±0.1％，与生理盐水组相比，水肿程度没有明显差异(p>0.05见图9)；消旋奥拉西坦240mg/kg组脑水肿测定值为79.46％±0.16％，与生理盐水组相比，水肿程度没有明显差异(p>0.05见图9)；左旋奥拉西坦240mg/kg组脑水肿测定值为79.54％±0.17％，与生理盐水组相比，水肿程度没有明显差异(p>0.05见图9)；消旋奥拉西坦480mg/kg组脑水肿测定值为79.43％±0.15％，与生理盐水组相比，水肿程度没有明显差异(p>0.05见图9)。
手术后3天，生理盐水组(saline)脑水肿测定值为79.83％±0.13％，与假手术组(sham,78.62％±0.07％)相比，水肿明显(**p<0.01见图10)；左旋奥拉西坦120mg/kg组脑水肿测定值为79.05％±0.08％，与生理盐水组相比，水肿明显(**p<0.01见图10)；左旋奥拉西坦60mg/kg组组脑水肿测定值为79.34％±0.11％，与生理盐水组相比，水肿明显(*p<0.05见图10)；消旋奥拉西坦120mg/kg组脑水肿测定值为79.38％±0.15％，与生理盐水组相比，水肿明显(*p<0.05见图10)；消旋奥拉西坦240mg/kg脑水肿测定值为79.32％±0.14％，与生理盐水组相比，水肿明显(*p<0.05见图10)。其他实验组：左旋奥拉西坦240mg/kg组脑水肿测定值为79.77％±0.11％，与生理盐水组相比，水肿程度没有明显差异(p>0.05见图10)；消旋奥拉西坦480mg/kg组脑水肿测定值为79.61％±0.17％，与生理盐水组相比，水肿程度没有明显差异(p>0.05见图10)。
手术后7天，生理盐水组(saline)脑水肿测定值为79.28％±0.06％，与假手术组(sham,78.64％±0.06％)相比，水肿明显(*p<0.05见图11)；其他所有给药组：左旋奥拉西坦60mg/kg组脑水肿测定值为78.97％±0.11％，与生理盐水组相比，水肿程度没有明显差异(p>0.05见图11)；消旋奥拉西坦120mg/kg组脑水肿测定值为79.08％±0.12％，与生理盐水组相比，水肿程度没有明显差异(p>0.05见图11)；左旋奥拉西坦120mg/kg组脑水肿测定值为78.88％±0.09％，与生理盐水组相比，水肿程度没有明显差异(p>0.05见图11)；消旋奥拉西坦240mg/kg组脑水肿测定值为79.06％±0.15％，与生理盐水组相比，水肿程度没有明显差异(p>0.05见图11)；S-240组脑水肿测定值为79.21％±0.12％，与生理盐水组相比，水肿程度没有明显差异(p>0.05见图11)；消旋奥拉西坦480mg/kg组脑水肿测定值为79.14％±0.14％，与生理盐水组相比，水肿程度没有明显差异(p>0.05见图11)。
如图9所示，假手术组(sham)为造模时，只开等面积大小骨窗，不给药也不做自由落体打击的实验组。所有打击外伤组，都有脑水肿。且每天腹腔注射左奥拉西坦60mg/kg后，与注射生理盐水的动物相比，脑水肿下降明显。在手术后1天，还看不出注射消旋奥拉西坦的动物脑水肿与对照组相比有所下降。
如图10所示，手术后3天，假手术组与只注射生理盐水的打击外伤组水肿差异明显(**p<0.01ANOVA假手术组vs对照组n＝10-12)。腹腔注射左奥拉西坦120mg/kg的动物比注射生理盐水动物脑水肿下降明显(**p<0.01)。同时，注射左奥拉西坦60mg/kg和注射生理盐水组相比脑水肿下降也很明显(*p<0.05)。注射消旋奥拉西坦120mg/kg和240mg/kg的动物与生理盐水组相比脑水肿也有明显下降(*p<0.05)。但是注射左奥拉西坦240mg/kg组和注射消旋奥拉西坦480mg/kg组与生理盐水组相比，脑水肿并没有明显下降(*p>0.05ANOVA左旋奥拉西坦240mg/kgvs对照组；**p>0.05ANOVA消旋奥拉西坦480mg/kgvs对照组n＝10-12)。
如图11所示，手术后第7天，如图所示，假手术组与只注射生理盐水的打击外伤组水肿差异仍然明显(*p<0.05ANOVA假手术组vs对照组n＝10-12)。但是其他所有给药组，与对照组相比，脑水肿虽然有所下降，但没有统计学差异(p>0.05)。
表11术后不同时间点脑含水量测定(mean±SEM)
One-way-ANOVA检验，对照组与假手术组比较，水肿明显，P<0.05；术后3天达水肿高峰，#P<0.01。各给药组与对照组比较，P<0.05，其中，左旋奥拉西坦120mg/kg组在术后3天与对照组比较降低脑水肿效果明显，P<0.01。
由图12的神经功能评分显示：脑撞击伤7天后，左旋奥拉西坦120mg/kg(S120)，消旋奥拉西坦480(RS480)和120mg/kg(RS120)组神经功能评分，与对照组比较，上升显著。尤其腹腔注射左奥拉西坦120mg/kg组效果最好。
如图13脑水肿测定显示：水肿急性期(1～3天)腹腔给予奥拉西坦，能有效降低动物脑水肿，到7天时，效果已经不明显；急性期，左旋奥拉西坦60(S60)和120mg/kg(S120)组效果明显，消旋奥拉西坦120(RS120)和240mg/kg(RS240)组对降低撞击性脑外伤所致脑水肿，在急性期也有一定效果。
由以上结论表明，左旋奥拉西坦能够更有效改善大鼠自由落体脑损伤所致的神经功能缺失及降低脑水肿。
附图说明
图1：大鼠大脑中动脉永久栓塞模型(pMCAO)的消旋组神经功能评分图；
图2：大鼠大脑中动脉永久栓塞模型(pMCAO)的左旋组神经功能评分图；
图3：大鼠大脑中动脉永久栓塞模型(pMCAO)的左旋组、消旋组神经功能评分图；
图4：大鼠大脑中动脉永久栓塞模型(pMCAO)TTC染色结果图；
图5：大鼠大脑中动脉永久栓塞模型(pMCAO)脑梗塞体积图；
图6：大鼠实验性重型颅脑创伤模型左旋组神经功能评分图；
图7：大鼠实验性重型颅脑创伤模型消旋组神经功能评分图；
图8：大鼠实验性重型颅脑创伤模型左旋组、消旋组神经功能评分图；
图9：大鼠实验性重型颅脑创伤模型脑手术后1天水肿测定结果图；
图10：大鼠实验性重型颅脑创伤模型手术后3天水肿测定结果图；
图11：大鼠实验性重型颅脑创伤模型手术后7天水肿测定结果图；
图12：大鼠实验性重型颅脑创伤模型手术后7天神经功能评分图；
图13：大鼠实验性重型颅脑创伤模型手术后大鼠脑含水量测定图。
具体实施方式
下面将描述本发明的几个实施例，但本发明的内容并不局限于此。
实施例1：
原料组成：
(a)左旋奥拉西坦(纯度为99.5％)200mg/粒
(b)乳糖80mg/粒
(c)微晶纤维素70mg/粒
以制成1000粒左旋奥拉西坦胶囊剂为例，具体制备方法是：先将原辅料过80目筛，称取处方量的左旋奥拉西坦、乳糖、微晶纤维素混合均匀，直接充填胶囊。
实施例2：
原料组成：
以制成1000片左旋奥拉西坦片剂为例，具体制备方法是：先将原辅料过80目筛，称取处方量的左旋奥拉西坦、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加2％HPMC水溶液制软材，制粒，烘干，整粒，向颗粒中加入处方量的滑石粉，混合均匀，压片。
实施例3：
原料组成：
以制成1000粒左旋奥拉西坦胶囊剂为例，具体制备方法是：先将原辅料过80目筛，称取处方量的左奥拉西坦、乳糖、羧甲基淀粉钠混合均匀，加10％PVP乙醇溶液制软材，制粒，烘干，整粒，向颗粒中加入处方量的滑石粉，混合均匀，充填胶囊。

Claims (5)

1.一种用于预防或治疗脑梗塞所致缺血性神经功能缺失症的药物组合物，其中含有左旋奥拉西坦化合物，以及药学上可接受的辅料。
2.一种制备用于预防或治疗脑梗塞所致缺血性神经功能缺失症的药物组合物的方法，其中包括将左旋奥拉西坦化合物与药学上可接受的辅料一起配制。
3.一种用于预防或治疗外伤所致神经功能缺失症的药物组合物，其中含有左旋奥拉西坦化合物，以及药学上可接受的辅料。
4.一种制备用于预防或治疗外伤所致神经功能缺失症的药物组合物的方法，其中包括将左旋奥拉西坦化合物与药学上可接受的辅料一起配制。
5.如权利要求1-4任一项所述的药物组合物，其特征在于：所述含有左旋奥拉西坦化合物的药物组合物为左旋奥拉西坦口服制剂或注射剂，其给药剂量为19～76mg/kg/天。
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