CN110354120A

CN110354120A - 普罗托品或其盐在制备防治脑血管疾病药物中的应用

Info

Publication number: CN110354120A
Application number: CN201810252927.2A
Authority: CN
Inventors: 柴玉爽; 李吉来; 陈纹平; 徐毅敏; 何源峰; 尹震; 张春波
Original assignee: GUANGZHOU BAIYUNSHAN ZHONGYI PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: GUANGZHOU BAIYUNSHAN ZHONGYI PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2018-03-26
Filing date: 2018-03-26
Publication date: 2019-10-22

Abstract

本发明公开了普罗托品或其盐在制备防治脑血管疾病药物中的应用，普罗托品、普罗托品盐酸盐均在预防和治疗脑缺血再灌注损伤中能显著改善脑组织病理损伤和神经功能学形态，同时能改善自由基损伤，减小脑梗死体积。且与普罗托品相比，普罗托品盐酸盐在更低剂量下即可表现出显著的保护作用，能够有效防治脑血管疾病。此外，本发明还提供了一种防治脑血管疾病的新药物，其活性成分包括普罗托品盐酸盐，为临床上防治脑血管疾病提供了更多的选择。

Description

普罗托品或其盐在制备防治脑血管疾病药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，特别是涉及普罗托品或其盐在制备防治脑血管疾病药物中的应用。

背景技术

随着生活水平的提高和生活节奏的加快，心脑血管疾病已成为威胁中老年人健康和长寿的第一号杀手。其中，脑血管疾病是人类三大致死原因之一，具有患病率高、致死率高、复发率高的特点。据统计，50-70％的脑血管疾病幸存患者遗留下了严重的残疾，包括躯体功能障碍、视力听力缺失、认知功能下降等一系列症状，给个人、家庭和社会带来了极大的痛苦、巨大的精神压力和沉重的负担。因此，加强对脑血管疾病的预防和治疗，对提高人类健康水平和生活质量具有积极作用。

普罗托品(protopine)又称普鲁托品、原阿片碱、原托品碱，结构式为：

是从罂粟科、蓝堇科的紫金龙、夏天无等植物中提取的一种异喹啉生物碱，为无色棱柱形或斜方形片状结晶，分子式C₂₀H₁₉NO₅，微溶于乙酸乙酯、苯、石油醚，几乎不溶于水。本品具有镇痛、解痉、止咳、平喘、改善微血管循环、抗血小板聚集，并有弱的杀菌和抗肿瘤作用。

由于普罗托品水中溶解性相对较差，本发明人进一步地将其转化为盐酸盐形式，结构式为：

发明内容

基于此，本发明的目的是提供普罗托品或其盐在制备防治脑血管疾病药物中的应用。

具体的技术方案如下：

普罗托品或其盐在制备防治脑血管疾病药物中的应用。

在其中一个实施例中，所述普罗托品盐为普罗托品盐酸盐。

在其中一个实施例中，所述脑血管疾病为脑缺血。

在其中一个实施例中，所述脑血管疾病为脑水肿。

在其中一个实施例中，所述脑血管疾病为脑缺氧。

在其中一个实施例中，所述脑血管疾病为脑血栓。

在其中一个实施例中，所述脑血管疾病为脑神经功能损伤、血管性痴呆。

本发明的另一目的是提供一种防治脑血管疾病的药物。

具体的技术方案如下：

一种防治脑血管疾病的药物，其活性成分包括普罗托品盐酸盐。

在其中一个实施例中，所述药物的制剂剂型为口服制剂、注射剂、局部给药制剂。

在其中一个实施例中，所述药物的制剂剂型为丸剂、颗粒剂、口服液、胶囊剂、片剂、滴丸剂、注射剂、注射用冻干粉针剂、滴眼液、霜剂、软膏剂、贴剂、喷雾剂。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明提供了普罗托品及其盐在制备防治脑血管疾病药物中的应用，发现普罗托品和普罗托品盐在预防和治疗脑缺血再灌注损伤中能显著改善脑组织病理损伤和神经功能学形态，同时能改善自由基损伤，减小脑梗死体积。且与普罗托品相比，普罗托品盐酸盐在更低剂量下即可表现出显著的保护作用，能够有效防治脑血管疾病。

本发明还提供了一种防治脑血管疾病的新药物，为临床上防治脑血管疾病提供了更多的选择。

附图说明

图1为普罗托品及其盐酸盐对缺血再灌注大鼠神经症状的影响；

图2为普罗托品对脑缺血再灌注大鼠脑梗死面积的影响；

图3为普罗托品盐酸盐对脑缺血再灌注大鼠脑梗死面积的影响；

图4为普罗托品及其盐酸盐对大鼠脑梗死组织的病理形态的影响。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细的说明。

实施例1普罗托品盐酸盐对脑缺血再灌注损伤的作用

1实验材料

1.1药品与试剂

生理盐水，DMSO，吐温80，4％多聚甲醛，2％TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)，普罗托品(5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg，溶于4％DMSO与4％吐温80的生理盐水中)，普罗托品盐酸盐(5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg，溶于4％DMSO与4％吐温80的生理盐水中)，对照溶液(含4％DMSO与4％吐温80的生理盐水)。

1.2仪器

镊子，鼠板，剪刀，线栓，动脉夹，止血钳，缝合线，缝合针

1.3动物

雄性SD大鼠80只，体重250g左右，正常饲养条件，每天12h光照及12h黑暗环境，自由获得水及食物。

2实验方法

2.1实验分组

将SD大鼠随机分为8组，每组10只：(A)假手术组；(B)溶剂对照组；(C)普罗托品(5mg/kg)组；(D)普罗托品(10mg/kg)组；(E)普罗托品(20mg/kg)组；(F)普罗托品盐酸盐(5mg/kg)组；(G)普罗托品盐酸盐(10mg/kg)组；(H)普罗托品盐酸盐(20mg/kg)组。给药组在造模前30min和缺血2h后分别腹腔注射对应剂量(5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg)的普罗托品或普罗托品盐酸盐溶液，假手术组和溶剂对照组腹腔给予等量对照溶液。

2.2脑缺血再灌注损伤模型的建立

采用线栓法制作大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)局灶性脑缺血再灌注损伤模型，具体操作如下：大鼠腹腔注射10％水合氯醛(3.5mL/kg)麻醉，仰卧固定，分离左侧颈总动脉(CCA)、颈内动脉(ICA)及颈外动脉(ECA)，结扎ECA与CCA，用动脉夹夹闭ICA远心端后，迅速于距ECA与ICA分叉处约0.5cm的颈总动脉处作一切口，插入一端圆钝的线栓(直径为0.3mm)，插入深度为(18.0±2.0)mm，至大脑中动脉起始部以完全阻断供血。线栓外留约1cm，缝合皮肤。缺血2h后，拔线栓，再灌注24h。假手术组只进行麻醉和血管分离术，不插入线栓。

2.3神经功能评分

各组大鼠脑缺血再灌注24h后，参照Zea-Longa评分标准进行神经功能缺失程度评分，分值越高，说明行为障碍越严重。评分标准见表1。

表1.神经功能评分标准表

Table1.Neurological deficit score criteria

2.4脑梗死体积

评分后麻醉大鼠，断头取脑，去嗅球小脑和低位脑干，于-20°冰箱中冷冻30min冻。用刀片将大脑沿冠状面进行切片，每片厚约2mm，放入2％TTC染色液中，37℃恒温箱中避光染色30min。再将脑片置4％多聚甲醛中固定24h并拍照留用。其中正常组织呈红色，梗死组织呈白色，采用Image-Pro Plus图像分析软件计算脑梗死体积。

脑梗死体积＝脑梗死区体积/全脑体积*100％

2.5脑组织病理

大鼠麻醉后，进行心脏灌流。先灌注预冷的生理盐水，待全身血液排除后，再用4％多聚甲醛溶液缓缓灌流固定，过程持续约15min。灌流后大鼠断头取脑，并放入4％多聚甲醛溶液中固定过夜。固定后脑组织经脱水、透明、石蜡包埋，制备成蜡块并进行切片，片厚为5μm。石蜡切片在二甲苯中脱蜡10min，梯度乙醇水化后，苏木素溶液染色5min。水洗，75％乙醇分化数秒，再水洗返蓝。伊红溶液染色1min，梯度乙醇脱水，二甲苯透明2min，中性树脂封片并在显微镜明场下观察、拍照。

3实验结果

3.1神经功能评分

神经功能评分结果见图1。与假手术组相比，溶剂对照组大鼠在缺血2h再灌注24h后其神经行为学评分显著增加(P<0.01)，出现明显偏瘫样症状，表现为手术对侧前肢内收，肩内旋，前肢肌张力降低，肩抗力下降，向健侧倾倒。而与溶剂对照组相比，普罗托品高剂量组(20mg/kg)可明显改善大鼠神经症状(P＜0.05)。普罗托品盐酸盐组表现出更强的活性，中剂量下(10mg/kg)即可显著改善小鼠神经症状(P＜0.05)。

3.2脑梗死体积

缺血再灌注24h，溶剂对照组与各普罗托品剂量组大鼠均有不同程度梗死灶，参见图2A。普罗托品给药组大鼠的脑缺血梗死体积小于溶剂对照组，其中20mg/kg组与溶剂对照组间的差异有统计学意义(P＜0.05)，结果参见图2B。

普罗托品盐酸盐组脑梗死情况如图3所示。由图可知，缺血再灌注24h后，溶剂对照组脑组织可见较大面积的梗死灶，而普罗托品盐酸盐各组(5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg)与溶剂对照组组相比大鼠脑梗死面积均显著降低(P＜0.05)。且与普罗托品相比，普罗托品盐酸盐对MCAO大鼠脑组织梗死的改善作用起效剂量为5mg/kg，而普罗托品的起效剂量为20mg/kg，说明普罗托品盐酸盐对脑缺血大鼠脑组织梗死的改善作用更强。说明在更低剂量下，普罗托品盐酸即可表现出显著的改善脑梗死作用。

3.3脑组织病理

脑组织病理结果如图4所示，图(A)假手术组，图(B)溶剂对照组，图(C)普罗托品5mg/kg组，图(D)普罗托品10mg/kg组，图(E)普罗托品20mg/kg组，图(F)普罗托品盐酸盐5mg/kg组，图(G)普罗托品盐酸盐10mg/kg组，图(H)普罗托品盐酸盐20mg/kg组。

假手术组大鼠大脑皮层组织细胞排列整齐、致密，形态完整。溶剂对照组大鼠脑皮层细胞排列稀疏，细胞核固缩，细胞形态不完整，有明显水肿产生。与溶剂对照组相比，普罗托品及其盐酸盐可改善MCAO模型大鼠脑皮层细胞的病理性变化和减轻水肿现象且盐酸盐的作用较明显。说明普罗托品和普罗托品盐酸盐对脑缺血再灌注损伤大鼠均具有保护作用，普罗托品盐酸盐更强。

大脑中动脉是临床上缺血性脑血管病的易患部位,在脑梗死患者中,大脑中动脉主干分布区梗死占82.2％。本发明采用颈内动脉栓线法,造成大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,与临床病变较为接近。脑缺血再灌注损伤最明显的变化是神经元损伤、脑梗死和脑水肿，因此本发明通过神经功能评分、脑梗死体积和脑组织病理学研究，探索普罗托品和普罗托品盐酸盐对大鼠脑缺血性再灌注损伤的作用。结果表明，普罗托品和普罗托品盐酸盐均可显著改善大脑中动脉闭塞所致局灶性脑缺血再灌注大鼠的神经功能，降低脑梗死体积，改善脑缺血再灌注大鼠脑皮层细胞的病理性变化和水肿，且与普罗托品相比，普罗托品盐酸盐在更低剂量下即可表现出显著的保护作用。

实施例2普罗托品盐酸盐片剂的制备

取普罗托品盐酸盐90g，粉碎成粉末，加入淀粉900g、阿拉伯胶4g、羧甲基纤维素钠3g，混匀，喷洒95％食用乙醇20mL制成软材，置制粒机内制成颗粒(一号筛大小)，于60℃下烘干至水分含量3-5％，经上述干燥整粒后，加入润滑剂硬脂酸镁，充分混合均匀，上压片机压制成0.25g/片，瓶装，经检验合格后，包装即得成品。

实施例3普罗托品盐酸盐水针剂的制备

普罗托品盐酸盐 10.0g

氯化钠 20.0g

甘露醇 50.0g

取普罗托品盐酸盐10.0g，在100级以下车间内，加入氯化钠20.0g、甘露醇50.0g、注射用水9000mL，充分搅匀后，加入1％的盐酸水溶液，调节pH值3.0-5.0，搅匀，加注射用水调整总体积至10000mL，加入0.1％的活性炭80℃保温15min，过滤，滤液经0.2μm微孔滤膜超滤，得澄明溶液，溶液无菌分装于安瓿中，每安瓿5mL，熔封，灭菌，经检验合格后，包装即得成品。

实施例4普罗托品盐酸盐滴眼液的制备

取普罗托品盐酸盐5.0g，在100级以下车间内，加入氯化钠90.0g、尼泊金甲酯0.23g、尼泊金丙酯0.11g、蒸馏水100mL，充分搅匀后，加入1％的盐酸水溶液适量，调节pH值3.0-5.0，搅匀，加蒸馏水调整总体积至1000mL，加入0.1％的活性炭80℃保温15min，过滤，滤液经0.2μm微孔滤膜超滤，得澄明溶液，溶液无菌灌装于滴眼瓶中，每瓶2mL，100℃灭菌30min，经检验合格后，包装即得成品。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims

1.普罗托品或其盐在制备防治脑血管疾病药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述普罗托品盐为普罗托品盐酸盐。

3.根据权利要求1、2所述的应用，其特征在于，所述脑血管疾病为脑缺血。

4.根据权利要求1、2所述的应用，其特征在于，所述脑血管疾病为脑水肿。

5.根据权利要求1、2所述的应用，其特征在于，所述脑血管疾病为脑缺氧。

6.根据权利要求1、2所述的应用，其特征在于，所述脑血管疾病为脑血栓。

7.根据权利要求1、2所述的应用，其特征在于，所述脑血管疾病为脑神经功能损伤、血管性痴呆。

8.一种防治脑血管疾病的药物，其特征在于，所述药物的活性成分包括普罗托品盐酸盐。

9.根据权利要求8所述的药物，其特征在于，所述药物的制剂剂型为口服制剂、注射剂、局部给药制剂。

10.根据权利要求9所述的药物，其特征在于，所述药物的制剂剂型为丸剂、颗粒剂、口服液、胶囊剂、片剂、滴丸剂、注射剂、注射用冻干粉针剂、滴眼液、霜剂、软膏剂、贴剂、喷雾剂。