CN105400708A - 一种香蕉枯萎病复合病原菌及其制备方法和应用 - Google Patents

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CN105400708A CN201510964537.4A CN201510964537A CN105400708A CN 105400708 A CN105400708 A CN 105400708A CN 201510964537 A CN201510964537 A CN 201510964537A CN 105400708 A CN105400708 A CN 105400708A
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李洪波
吕顺
刘文清
高芳云
庄华才
曾莉莎
郑汉文
王芳
陶金
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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    • A01G7/00—Botany in general
    • A01G7/06—Treatment of growing trees or plants, e.g. for preventing decay of wood, for tingeing flowers or wood, for prolonging the life of plants

Abstract

本发明属于农业植物保护技术领域，具体涉及一种香蕉枯萎病复合病原菌及其制备方法和应用；本发明将香蕉枯萎病病原菌4号和1号生理小种菌块分别接种于马铃薯-乳糖培养液中得到病原菌母液；将香蕉枯萎病4号和1号病原菌母液分别在马铃薯-乳糖培养液中培养后稀释混合，得到液体病原菌菌液；将香蕉枯萎病4号和1号病原菌母液分别在麦粒培养基中培养出生理小种固体菌块，再将两者按比例混合得到固体病原菌菌块；最后，在液体病原菌菌液中添加固体病原菌菌块，混合均匀即得接种专用复合病原菌。本发明的复合病原菌可以准确的鉴定不同香蕉品种的抗病性，缩短香蕉品种抗病性鉴定的时间。

Description

一种香蕉枯萎病复合病原菌及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于农业植物保护技术领域，具体涉及一种香蕉枯萎病复合病原菌及其制备方法和应用。
背景技术
香蕉枯萎病是一种毁灭性病害，其病原菌为古巴尖孢镰刀菌，其中以4号和1号生理小种对香蕉的危害最严重。该病为土传病害，病原菌从香蕉根部侵入后，通过维管组织从下部向上部传导，并在根、球茎和假茎中定殖，因而药剂防治的效果较差，选育抗病品种被认为是防治该病最有效的措施。
抗病品种的大田鉴定和筛选是香蕉枯萎病抗病品种选育的关键。目前，抗病品种大田鉴定和筛选的方法主要有两种，一种是直接种植在发病的田块进行抗病性鉴定，另一种是种植后大田接种单一的病原菌，这两种方法都存在病原菌单一、分布不均匀、发病慢、鉴定周期长、筛选结果不准确等缺点。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种香蕉枯萎病复合病原菌。
本发明的目的之二是提供了所述香蕉枯萎病复合病原菌的制备方法。
本发明的目的之三是提供了所述香蕉枯萎病复合病原菌的应用。
本发明是通过以下技术方案来实现的：
一种香蕉枯萎病复合病原菌，由液体病原菌菌液和固体病原菌菌块组成，每1L所述液体病原菌菌液中混合80～120g所述固体病原菌菌块。
其中，所述液体病原菌菌液由香蕉枯萎病菌块接种于马铃薯-乳糖培养液中制得；所述固体病原菌菌块由香蕉枯萎病病原菌母液接种至麦粒培养基中制得。
其中，所述液体病原菌菌液为浓度为106cfu/mL的香蕉枯萎病4号生理小种病原菌菌液和1号生理小种病原菌菌液混合物，所述香蕉枯萎病4号生理小种病原菌菌液和1号生理小种病原菌菌液之间的体积比3～5︰1。
其中，所述固体病原菌菌块为香蕉枯萎病4号生理小种固体病原菌菌块和1号生理小种固体病原菌菌块的混合物，所述香蕉枯萎病4号生理小种固体病原菌菌块和1号生理小种固体病原菌菌块之间的重量比3～5︰1。
所述香蕉枯萎病复合病原菌的制备方法，具体为：
(1)病原菌母液的培养：将香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种菌块分别接种于马铃薯-乳糖培养液中，22℃～28℃下培养5～7天后，分别制得香蕉枯萎病4号生理小种的病原菌母液和香蕉枯萎病1号生理小种的病原菌母液；
(2)液体病原菌菌液制备：
A.将香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种的病原菌母液分别接种到初级马铃薯-乳糖培养液中，22℃～28℃下培养6～8天，得到香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种的初级培养物；
B.接着将初级培养物接种到次级马铃薯-乳糖培养液中，22℃～28℃下培养7～9天至菌液浓度为108cfu/mL，分别得到香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种病原菌菌液；
C.分别将所述香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种病原菌菌液，稀释至106cfu/mL，再将稀释后的两者菌液按体积比3～5︰1的比例混合均匀，得到所述液体病原菌菌液；
(3)固体病原菌菌块制备：香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种的病原菌母液分别接种至麦粒培养基中，22℃～28℃下培养8～12天，分别香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种的固体菌块，将香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种的固体菌块按重量比3～5︰1的比例混合均匀，得到所述固体病原菌菌块；
(4)复合病原菌的制备：按1L液体病原菌菌液加入80～120g固体病原菌菌块的量，将所述固体病原菌菌块捣碎在所述液体病原菌菌液中，混合均匀即得所述香蕉枯萎病复合病原菌。
较佳地，所述的马铃薯乳糖培养液通过以下方法制得：称取去皮马铃薯块100～300g，加水800～1200ml煮沸15～25min至马铃薯块能被玻璃棒捣碎为止，用双层纱布过滤取汁，加水至1000ml，称取15～25g乳糖加入马铃薯过滤夜中，搅拌均匀，装入三角瓶中，放入高压灭菌锅内在121℃±2℃和98kpa±0.2kpa下高温灭菌15～25min；制得所述马铃薯-乳糖培养液。
较佳地，所述的麦粒培养基通过以下方法制得：将麦粒用水浸泡4～6h，沥干，取70～80g麦粒，装入体积为100～150ml的培养瓶中，盖好瓶盖，放入高压灭菌锅内在121℃±2℃和98kpa±0.2kpa下高温灭菌15～25min；制得所述麦粒培养基。
一种香蕉枯萎病抗病品种选育中的应用，使用了所述的香蕉枯萎病复合病原菌。
一种香蕉种苗和植株接种方法，具体为：
首先，在香蕉枯萎病病区选择田块作为试验基地；
其次，选择7～8片生长健壮的二级试管苗作为试验种苗，用锋利小刀在育苗杯内插2～3刀，深度约8cm左右，进行伤根处理，
再将试管苗浸泡到装有所述的香蕉枯萎病复合病原菌的盆中，浸泡时间约5min；再次，将伤根浸泡接种后的香蕉种苗种植于试验基地，种植后24h左右再淋足定根水；
另外，在香蕉种苗种植后15天、45天、90天分别挖穴淋菌接种一次所述的香蕉枯萎病复合病原菌。
本发明通过配制香蕉枯萎病复合病原菌、种植前种苗伤根浸泡接种、种植后植株挖穴淋菌接种等措施，缩短了香蕉枯萎病抗(耐)病品种鉴定周期，提高了大田鉴定筛选的准确性，为香蕉枯萎病抗(耐)病品种的选育提供技术参考。通过配制香蕉枯萎病复合病原菌接种液并对香蕉种苗和植株进行接种，可以比较准确的鉴定不同香蕉品种的抗病性，同时缩短香蕉品种抗病性鉴定的时间，从而筛选出抗(耐)香蕉枯萎病品种。
具体的实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细说明，以助于本领域技术人员理解本发明。
实施例1
香蕉枯萎病复合病原菌的制备:
1)培养基配制
马铃薯-乳糖培养液：称取去皮马铃薯块200g，加水1000ml煮沸20min左右至马铃薯块能被玻璃棒捣碎为止，用双层纱布过滤取汁，加水至1000ml，称取20g乳糖加入马铃薯过滤夜中，搅拌均匀，装入三角瓶中，放入高压灭菌锅内在121℃和98kpa下高温灭菌20min。
麦粒培养基：将适量麦粒用水浸泡5h，捞起后将水沥干，然后取约75g麦粒，装入体积为120ml的培养瓶中，盖好瓶盖，放入高压灭菌锅内在121℃和98kpa下高温灭菌20min。
2)病原菌母液的培养
将香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种菌块分别接种于灭菌后的马铃薯-乳糖培养液中，每300ml培养液接入3块直径约1.5cm的菌饼，在温度为25℃、转速为150r/min摇床上振荡培养6天后，备用。
3)液体病原菌菌液制备
首先，培养病原菌菌液。配制7L和70L马铃薯—乳糖培养液，分别装入10L-100L微生物发酵设备的10L和100L发酵罐中，然后在121℃下高温灭菌30min。待培养液冷却后，向10L小发酵罐中接种500ml病原菌母液，25℃培养7天后，将小发酵罐中的菌液抽到100L大发酵罐中进行接种，25℃培养8天，当菌液的浓度达到108cfu/mL后，将菌液从发酵罐抽出放到25L塑料壶中备用。按照以上培养方法，分别培养香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种病原菌菌液。
其次，制备液体病原菌菌液。将经10L-100L微生物发酵设备培养的香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种菌液分别稀释到106cfu/mL浓度，然后将稀释后的两者菌液按体积比4︰1的比例混合均匀，得到液体病原菌菌液。
4)固体病原菌菌块制备
首先，培养病原菌菌块。用消毒过的移液抢取3ml香蕉枯萎病病原菌母液，接种至消毒后的麦粒培养基中，然后放入25℃培养室中培养10天，待病原菌菌丝布满整个培养基后，备用。按照以上培养方法，分别培养4号生理小种和1号生理小种固体菌块。
其次，制备固体病原菌菌块。将培养的4号生理小种和1号生理小种固体菌块按重量比4︰1的比例混合均匀，得到固体病原菌菌块。
5)复合病原菌的制备
在1L液体病原菌菌液中添加100g捣碎的固体病原菌菌块，混合均匀即得接种专用复合病原菌。配制的接种专用复合病原菌最好在两天内使用，效果比较好。
实施例2
香蕉枯萎病复合病原菌的制备:
1)培养基配制
马铃薯-乳糖培养液：称取去皮马铃薯块100g，加水1200ml煮沸15min左右至马铃薯块能被玻璃棒捣碎为止，用双层纱布过滤取汁，加水至1000ml，称取15g乳糖加入马铃薯过滤夜中，搅拌均匀，装入三角瓶中，放入高压灭菌锅内在121℃和98kpa下高温灭菌15min。
麦粒培养基：将适量麦粒用水浸泡4h，捞起后将水沥干，然后取约70g麦粒，装入体积为150ml的培养瓶中，盖好瓶盖，放入高压灭菌锅内在121℃和98kpa下高温灭菌15min。
2)病原菌母液的培养
将香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种菌块分别接种于灭菌后的马铃薯-乳糖培养液中，每300ml培养液接入3块直径约1.5cm的菌饼，在温度为22℃、转速为150r/min摇床上振荡培养5天后，备用。
3)液体病原菌菌液制备
首先，培养病原菌菌液。配制7L和70L马铃薯—乳糖培养液，分别装入10L-100L微生物发酵设备的10L和100L发酵罐中，然后在121℃下高温灭菌30min。待培养液冷却后，向10L小发酵罐中接种500ml病原菌母液，25℃培养7天后，将小发酵罐中的菌液抽到100L大发酵罐中进行接种，25℃培养8天，当菌液的浓度达到108cfu/mL后，将菌液从发酵罐抽出放到25L塑料壶中备用。按照以上培养方法，分别培养香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种病原菌菌液。
其次，制备液体病原菌菌液。将经10L-100L微生物发酵设备培养的香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种菌液分别稀释到106cfu/mL浓度，然后将稀释后的两者菌液按体积比3︰1的比例混合均匀，得到液体病原菌菌液。
4)固体病原菌菌块制备
首先，培养病原菌菌块。用消毒过的移液抢取3ml香蕉枯萎病病原菌母液，接种至消毒后的麦粒培养基中，然后放入22℃培养室中培养8天，待病原菌菌丝布满整个培养基后，备用。按照以上培养方法，分别培养4号生理小种和1号生理小种固体菌块。
其次，制备固体病原菌菌块。将培养的4号生理小种和1号生理小种固体菌块按重量比3︰1的比例混合均匀，得到固体病原菌菌块。
5)复合病原菌的制备
在1L液体病原菌菌液中添加80g捣碎的固体病原菌菌块，混合均匀即得接种专用复合病原菌。配制的接种专用复合病原菌最好在两天内使用，效果比较好。
实施例3
香蕉枯萎病复合病原菌的制备:
1)培养基配制
马铃薯-乳糖培养液：称取去皮马铃薯块300g，加水800ml煮沸25min左右至马铃薯块能被玻璃棒捣碎为止，用双层纱布过滤取汁，加水至1000ml，称取25g乳糖加入马铃薯过滤夜中，搅拌均匀，装入三角瓶中，放入高压灭菌锅内在121℃和98kpa下高温灭菌25min。
麦粒培养基：将适量麦粒用水浸泡6h，捞起后将水沥干，然后取约80g麦粒，装入体积为100ml的培养瓶中，盖好瓶盖，放入高压灭菌锅内在121℃和98kpa下高温灭菌25min。
2)病原菌母液的培养
将香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种菌块分别接种于灭菌后的马铃薯-乳糖培养液中，每300ml培养液接入3块直径约1.5cm的菌饼，在温度为28℃、转速为150r/min摇床上振荡培养7天后，备用。
3)液体病原菌菌液制备
首先，培养病原菌菌液。配制7L和70L马铃薯—乳糖培养液，分别装入10L-100L微生物发酵设备的10L和100L发酵罐中，然后在121℃下高温灭菌30min。待培养液冷却后，向10L小发酵罐中接种500ml病原菌母液，25℃培养7天后，将小发酵罐中的菌液抽到100L大发酵罐中进行接种，25℃培养8天左右，当菌液的浓度达到108cfu/mL后，将菌液从发酵罐抽出放到25L塑料壶中备用。按照以上培养方法，分别培养香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种病原菌菌液。
其次，制备液体病原菌菌液。将经10L-100L微生物发酵设备培养的香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种菌液分别稀释到106cfu/mL浓度，然后将稀释后的两者菌液按体积比5︰1的比例混合均匀，得到液体病原菌菌液。
4)固体病原菌菌块制备
首先，培养病原菌菌块。用消毒过的移液抢取3ml香蕉枯萎病病原菌母液，接种至消毒后的麦粒培养基中，然后放入28℃培养室中培养12天，待病原菌菌丝布满整个培养基后，备用。按照以上培养方法，分别培养4号生理小种和1号生理小种固体菌块。
其次，制备固体病原菌菌块。将培养的4号生理小种和1号生理小种固体菌块按重量比5︰1的比例混合均匀，得到固体病原菌菌块。
5)复合病原菌的制备
在1L液体病原菌菌液中添加120g捣碎的固体病原菌菌块，混合均匀即得接种专用复合病原菌。配制的接种专用复合病原菌最好在两天内使用，效果比较好。
上述实施例，只是本发明的较佳实施例，并非用来限制本发明实施范围，故凡以本发明权利要求所述的特征及原理所做的等效变化或修饰，均应包括在本发明权利要求范围之内。
复合病原菌致病性鉴定试验：
1)香蕉品种：
包括巴西蕉(AAA)、东蕉1号(AAA)、抗枯5号(AAA)、海贡(AA)、东莞中把大蕉(ABB)、广粉1号(ABB)、粉杂1号(ABB)共7个品种，材料来源于东莞市香蕉蔬菜研究所建立的香蕉种质资源圃。
2)试验基地的选择：
在香蕉枯萎病病区选择田块作为试验基地。试验基地要求地势较高，地面比较平整，排灌方便，雨期不会水浸，交通便利。经过调查走访，选择在东莞市洪梅镇农科站内建立试验基地，试验基地占地面积约16668平方米，交通方便，排灌通畅，前作为巴西蕉，发病率在50％左右。
3)试验方法：
试验设置两个处理，即对照和复合病原菌处理。对照是将香蕉品种直接种植在试验基地进行抗病性鉴定；复合病原菌处理是将香蕉种苗接种复合病原菌后种植在试验基地，再接种复合病原菌进行抗病性鉴定。
4)调查方法：
种植后，经常到田间观察和调查植株生长情况和发病情况，做好相关记录。发病率指采收时发病株数与种植总株数的比值，发病时间指从种植到开始发病的天数。参照资料，以发病率作为抗病水平评价依据，将香蕉品种分为高抗、抗病、中抗、耐病、感病等五个类型。发病率≤10.0％，高抗；发病率10.0％～30.0％，抗病；发病率30.0％～50.0％，中抗；发病率50.0％～70.0％，耐病；发病率≥70.0％，感病。
5)致病性鉴定：
香蕉种苗的选择。选择7～8片叶、生长健壮的二级试管苗作为试验种苗。试验品种包括巴西蕉、抗枯5号、海贡、东莞中把大蕉、广粉1号、粉杂1号，东蕉1号等不同品种。
香蕉种苗的伤根浸泡接种。种苗接种前先控水1～2天，使育苗杯里的土壤比较干爽；然后用锋利小刀在育苗杯内插2～3刀，深度约8cm左右；再将试管苗浸泡到装有接种专用复合病原菌的盆中，液面要淹过育苗杯杯口2cm左右，浸泡时间约5min。
香蕉种苗伤根接种后，即刻脱掉育苗杯，种植到试验小区内，每个小区种植约15株，株距2m。种植后24h左右再淋足定根水。
香蕉种苗种植后15天、45天、90天分别接种一次。接种方法是：用小锄头在离香蕉球茎约20-30cm处打3个小穴，每个小穴淋150ml接种专用复合病原菌，再覆盖泥土。接种后24h内禁止淋水，以便病原菌定殖。
6)结果与分析：
表1不同品种田间发病率调查表
据查资料，巴西蕉、广粉1号为香蕉枯萎病感病品种，东蕉1号为中抗品种，抗枯5号、海贡、东莞中把大蕉、粉杂1号为高抗品种。
从表1中对照来看，巴西蕉发病率为68.3％，抗病水平表现为耐病，与品种本身的抗病性(感病品种)有所不同；东蕉1号发病率为26.8％，抗病水平表现为抗病，与品种本身的抗病性(中抗品种)有所不同。抗枯5号、海贡、东莞中把大蕉、广粉1号、粉杂1号5个品种的发病率分别为3.5％、2.6％、2.2％、91.7％、3.4％，抗病水平分别表现为高抗、高抗、高抗、感病、高抗，与品种本身的抗病性表现一致。说明对照与大田生产比较一致，但与品种本身的抗病性略有差异。
从香蕉枯萎病复合病原菌处理来看，巴西蕉、广粉1号的发病率分别为95.4％和98.6％，抗病水平表现为感病，与品种本身的抗病性(感病品种)表现一致。东蕉1号的发病率分别为45.1％，抗病水平表现为中抗，与品种本身的抗病性(中抗品种)表现一致。抗枯5号、海贡、东莞中把大蕉、粉杂1号4个品种的发病率分别为6.4％、7.8％、6.5％、8.6％，抗病水平表现为高抗，与品种本身的抗病性(高抗品种)表现一致。说明通过香蕉枯萎病复合病原菌处理，可以比较准确的鉴定品种的抗病性，从而筛选出抗(耐)香蕉枯萎病品种。
表2不同品种田间发病时间调查表
从表2可以看出，对于感病品种巴西蕉和广粉1号、中抗品种东蕉1号而言，通过接种香蕉枯萎病复合病原菌处理后，发病时间分别缩短75.8天、32.3天、44.5天，缩短时间比较明显。对于抗病品种抗枯5号、海贡、东莞中把大蕉、粉杂1号而言，通过接种香蕉枯萎病复合病原菌处理后，发病时间分别缩短20.4天、17.2天、11.9天、24.9天，有所缩短。说明通过香蕉枯萎病复合病原菌处理，缩短了香蕉品种抗病性鉴定的时间，对感病和中抗品种效果更明显。

Claims (10)

1.一种香蕉枯萎病复合病原菌，其特征在于，由液体病原菌菌液和固体病原菌菌块组成，每1L所述液体病原菌菌液中混合80～120g所述固体病原菌菌块。
2.如权利要求1中所述香蕉枯萎病复合病原菌，其特征在于，所述液体病原菌菌液由香蕉枯萎病菌块接种于马铃薯-乳糖培养液中制得；所述固体病原菌菌块由香蕉枯萎病病原菌母液接种至麦粒培养基中制得。
3.如权利要求2中所述香蕉枯萎病复合病原菌，其特征在于，所述液体病原菌菌液为浓度为106cfu/mL的香蕉枯萎病4号生理小种病原菌菌液和1号生理小种病原菌菌液混合物，所述香蕉枯萎病4号生理小种病原菌菌液和1号生理小种病原菌菌液之间的体积比3～5︰1。
4.如权利要求2中所述香蕉枯萎病复合病原菌，其特征在于，所述固体病原菌菌块为香蕉枯萎病4号生理小种固体病原菌菌块和1号生理小种固体病原菌菌块的混合物，所述香蕉枯萎病4号生理小种固体病原菌菌块和1号生理小种固体病原菌菌块之间的重量比3～5︰1。
5.如权利要求1-4中任意一项所述香蕉枯萎病复合病原菌的制备方法，其特征在于，具体为：
(1)病原菌母液的培养：将香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种菌块分别接种于马铃薯-乳糖培养液中，22℃～28℃下培养5～7天后，分别制得香蕉枯萎病4号生理小种的病原菌母液和香蕉枯萎病1号生理小种的病原菌母液；
(2)液体病原菌菌液制备：
A.将香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种的病原菌母液分别接种到初级马铃薯-乳糖培养液中，22℃～28℃下培养6～8天，得到香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种的初级培养物；
B.接着将初级培养物接种到次级马铃薯-乳糖培养液中，22℃～28℃下培养7-9天至菌液浓度为108cfu/mL，分别得到香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种病原菌菌液；
C.分别将所述香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种病原菌菌液，稀释至106cfu/mL，再将稀释后的两者菌液按体积比3～5︰1的比例混合均匀，得到所述液体病原菌菌液；
(3)固体病原菌菌块制备：香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种的病原菌母液分别接种至麦粒培养基中，22℃～28℃下培养8～12天，分别得到香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种的固体菌块，将香蕉枯萎病4号生理小种和1号生理小种的固体菌块按重量比3～5︰1的比例混合均匀，得到所述固体病原菌菌块；
(4)复合病原菌的制备：按1L液体病原菌菌液加入80～120g固体病原菌菌块的量，将所述固体病原菌菌块捣碎在所述液体病原菌菌液中，混合均匀即得所述香蕉枯萎病复合病原菌。
6.如权利要求5中所述香蕉枯萎病复合病原菌的制备方法，其特征在于，所述初级马铃薯-乳糖培养液和次级马铃薯-乳糖培养液为配方相同的马铃薯-乳糖培养液培养液。
7.如权利要求6中所述香蕉枯萎病复合病原菌的制备方法，其特征在于，所述的马铃薯-乳糖培养液通过以下方法制得：称取去皮马铃薯块100～300g，加水800～1200ml煮沸15～25min至马铃薯块能被玻璃棒捣碎为止，用双层纱布过滤取汁，加水至1000ml，称取15～25g乳糖加入马铃薯过滤夜中，搅拌均匀，装入三角瓶中，放入高压灭菌锅内在121℃±2℃和98kpa±0.2kpa下高温灭菌15～25min；制得所述马铃薯-乳糖培养液。
8.如权利要求5中所述香蕉枯萎病复合病原菌的制备方法，其特征在于，所述的麦粒培养基通过以下方法制得：将麦粒用水浸泡4～6h，沥干，取70～80g麦粒，装入体积为100～150ml的培养瓶中，盖好瓶盖，放入高压灭菌锅内在121℃±2℃和98kpa±0.2kpa下高温灭菌15～25min；制得所述麦粒培养基。
9.一种香蕉枯萎病复合病原菌在抗病品种选育中的应用，其特征在于：使用了权利要求1-8中任意一项所述的香蕉枯萎病复合病原菌。
10.一种香蕉种苗和植株接种方法，其特征在于，具体为：
首先，在香蕉枯萎病病区选择田块作为试验基地；
其次，选择7～8片生长健壮的二级试管苗作为试验种苗，用锋利小刀在育苗杯内插2～3刀，深度约8cm左右，进行伤根处理，
再将试管苗浸泡到装有权利要求1-8中任意一项所述的香蕉枯萎病复合病原菌的盆中，浸泡时间约5min；再次，将伤根浸泡接种后的香蕉种苗种植于试验基地，种植后24h左右再淋足定根水；
另外，在香蕉种苗种植后15天、45天、90天分别挖穴淋菌接种一次权利要求1-8中任意一项所述的香蕉枯萎病复合病原菌。
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