CN106520908A - 高山萝卜苗期抗根肿病鉴定方法 - Google Patents

高山萝卜苗期抗根肿病鉴定方法 Download PDF

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甘彩霞
邱正明
邓晓辉
崔磊
袁伟玲
焦忠久
矫振彪
吴金平
朱凤娟
周黎
张兴中
於校青
幸晶晶
杨义
纪亦雄
李源君
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Abstract

本发明公开了一种高山萝卜苗期抗根肿病鉴定方法，其特征在于，鉴定步骤如下：S1、种植地土壤过筛，加入肥料和草木灰，无菌土兑入有机肥和过磷酸钙，另外加入草木灰制成培养土；S2、用穴盘作为培养器，将S1中的培养土加入穴盘中，再将待鉴定品种的种子播于穴盘内；S3、将含根肿菌的菌根磨碎，纱布过滤制成病菌孢子溶液，用血球计数板计数将孢子溶液制成1×107个孢子/毫升浓度的接种菌液备用；S4、将培养土加入穴盘中，备用；S5、将穴盘中培养土浇水浇透，水分沉降略干适宜播种时，在每穴中心点播覆土，搭小拱棚，田间正常管理，接种后第7周调查发病情况；本发明通过灌根鉴定方法能够提高相关实验群体的抗根肿病性，对于抗病育种实践及其理论研究上都很有价值。

Description

高山萝卜苗期抗根肿病鉴定方法
技术领域
本发明涉及一种鉴定方法，特别是一种高山萝卜苗期抗根肿病的鉴定方法。
背景技术
根肿病是由鞭毛菌亚门根肿菌属芸苔根肿菌侵染引起的一种传染性非常强的土壤病害。根肿病菌专性寄生于芸薹属、萝卜属以及拟南芥等十字花科植物的根部。当根系受到病菌刺激，其薄壁细胞大量分裂和增大而形成肿瘤。由于根的生理机能受阻抑，病株地上部则表现出叶片失绿、无光泽、叶边变黄、生长缓慢、植株矮小以及萎蔫等症状。发病严重时可导致作物绝收。目前根肿病对全世界油菜产量造成10-15％的损失。
根肿病的化学控制没有效果，因而通过遗传转育的方式提高油菜抗病性是被认为最有效的防治根肿病的措施。不同品种对根肿菌抗性存在差异，萝卜对根肿病的抗性相对于其它作物较好，仍然会有发生，品种间的差异很大，其中芜菁中含有的抗病位点最多，在抗病育种中应用也最为广泛。
根肿病病原菌在土壤或种子上越冬，可在土壤中存活6年以上，土壤含水量70％-90％最易发病，该病传播速度快，发病面积在短短的几年间呈几十倍，甚至上百倍增加，危害十分严重。另外，该病原菌侵入植物根毛、皮层、形成层后产生含有植物生长激素的病菌分泌物，刺激薄壁细胞的异常分裂增大，在增生部位膨大形成瘤状的肿根，肿根的出现一方面降低了根系吸收和供给水分及养分的能力，造成地上部分失水、枯黄和死亡；另一方面使植物根系失去了外层的保护作用，易被其它杂菌入侵而引起腐烂。
发明内容
本发明针对根肿病抗性需要提供一个能够快速、准确的鉴定高山萝卜苗期抗根肿病的方法，并对其相关材料的筛选提供技术支撑。
一种高山萝卜苗期抗根肿病鉴定方法，鉴定步骤如下：
S1、种植地土壤过筛，加入肥料和草木灰，无菌土兑入有机肥和过磷酸钙，另外加入草木灰制成培养土；
S2、用穴盘作为培养器，将S1中的培养土加入穴盘中，再将待鉴定品种的种子播于穴盘内；
S3、将含根肿菌的菌根磨碎，纱布过滤制成病菌孢子溶液，用血球计数板计数将孢子溶液制成1×107个孢子/毫升浓度的接种菌液备用；
S4、将培养土加入穴盘中，备用；
S5、将穴盘中培养土浇水浇透，水分沉降略干适宜播种时，在每穴中心点播覆土；将穴盘置于苗床上，搭小拱棚，覆地膜于小拱棚上，膜四周用土压实，保温保湿，田间正常管理，接种后调查发病情况；
1)病情指数的调查统计
对照材料在培养基质以上的叶片枯萎和根部肿大时，按单株病症分级标准进行调查统计，计算病情指数，根据调查的病情指数，按群体抗性分级标准鉴定出待鉴定品种对根肿病的抗性；
2)病情指数分级参数如下：
病情调查划分为0～9级：
0级：无侵染疤痕或根瘤；
1级：主根上有1～2个侵染疤痕，或者主须根上有1～2个小的根瘤；
3级：主根上有3～4个侵染疤痕，或者主须根上有3～4个小的根瘤；
5级：主根上有5～6个侵染疤痕，或者主须根上有5～6个小的根瘤或1个直径同于主根的大根瘤；
7级：主根上有多个侵染疤痕连成片，或者主须根上有多个小的根瘤或1个及多个直径大于主根的根瘤；
9级：主根上侵染疤痕形成大的凹陷变黑，或者主须根上根瘤聚集烂根；
3)病情指数计算：用以下公式进行病情指数计算
4)抗病性评价标准
所述供试根肿病菌种为火烧坪根肿菌；步骤2)中所述比例以100个穴盘的用土为例。所述供试根肿病菌种为火烧坪根肿菌；步骤S1中所述比例以100个穴盘的用土为例；步骤S4中根肿菌瘤与接种土的比例为1:20；步骤S3中病菌孢子含量为1.107个孢子/毫升以上；步骤S3中用血球计数板计数将病菌孢子浓度为1.107个孢子/毫升以上；步骤S4中将培养土加入穴盘中，备用；步骤S3中接种前取大白菜根部肿瘤，采集大白菜根部根瘤冲洗干净，用塑料膜包裹沤烂并捣碎制成根肿菌孢子，用水冲洗根肿菌孢子并用纱布过滤制成接种菌液。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
1、本发明通过灌根接种法，将配制的根肿病悬浮液进行灌根处理后，抗病的植株根部正常，而感病的植株根部组织异常增生、膨大形成瘤状的肿根或形成受侵染后的凹陷黑疤，从而将抗病和感病植株区分开来，达到获得抗根肿病植株材料的目的；
2、筛选出的抗病植株具有更强的抗病性；
3、通过灌根鉴定方法能够提高相关实验群体对根肿病的抗性，对于抗病育种实践及其理论研究都很有价值。
具体实施方式
以下通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细阐述。
待测菌株的鉴定方法，鉴定步骤如下：S1、种植地土壤过筛，加入肥料和草木灰，无菌土兑入有机肥和过磷酸钙，另外加入草木灰制成培养土；S2、用穴盘作为培养器，将S1中的培养土加入穴盘中，再将待鉴定品种的种子播于穴盘内；S3、将含根肿菌的菌根磨碎，纱布过滤制成病菌孢子溶液，用血球计数板计数将孢子溶液制成1×107个孢子/毫升浓度的接种菌液备用；S4、将培养土加入穴盘中，备用；S5、将穴盘中培养土浇水浇透，水分沉降略干适宜播种时，在每穴中心点播覆土；将穴盘置于苗床上，搭小拱棚，覆地膜于小拱棚上，膜四周用土压实，保温保湿，田间正常管理，隔一天浇一次水，防病防治地下害虫的为害，午间温度超过20℃的晴天于早上10点至下午4点揭棚膜两头通风散热，避免苗床内高温烧苗，出苗后子叶期灌根接种，接种后第7周调查发病情况。
供试根肿病菌种为湖北省宜昌市长阳火烧坪根肿菌。供试接菌土取未受侵染的种植地土壤，过筛，加入肥料和草木灰，比例以100个穴盘的用土为例，500公斤无菌土兑入15公斤菌种发酵的有机肥和7公斤过磷酸钙，另外加入50公斤草木灰。2016年6月29日在长阳火烧坪黍子岭播种，将种子播于50穴穴盘中，搭小拱棚，田间正常管理，出苗后子叶期接种。将根肿菌研磨，纱布过滤，血球计数板计数，配制成1×106个/孢子菌液，喷洒于穴盘上，接种后第7周调查发病情况。
1)病情指数的调查统计
按单株病症分级标准进行调查统计，计算病情指数，根据调查的病情指数，按群体抗性分级标准鉴定出待鉴定品种对根肿病的抗性；
2)病情指数分级参数如下：
病情调查划分为0～9级：
0级：无侵染疤痕或根瘤；
1级：主根上有1～2个侵染疤痕，或者主须根上有1～2个小的根瘤；
3级：主根上有3～4个侵染疤痕，或者主须根上有3～4个小的根瘤；
5级：主根上有5～6个侵染疤痕，或者主须根上有5～6个小的根瘤或1个直径同于主根的大根瘤；
7级：主根上有多个侵染疤痕连成片，或者主须根上有多个小的根瘤或1个及多个直径大于主根的根瘤；
9级：主根上侵染疤痕形成大的凹陷变黑，或者主须根上根瘤聚集烂根。
3)病情指数计算：用以下公式进行病情指数计算
4)抗病性评价标准
接种方法
根肿菌接种在子叶期～1叶期以1×107个孢子/ml的浓度灌根接种幼苗，每株苗接种1ml，或者以1×106个孢子/ml的浓度灌根接种幼苗，每株苗接种10ml。每份材料播种30粒，接种后第6周调查发病情况。
调查结果
待鉴定品种为13份高代自交系接种根肿菌发病调查结果。
实验结果表明，喜诺青和圆白叶萝卜发病株数占总株数的比例高，其次是嫩头青和露头青；根据抗性单株选留后重新定植时的结果观察，喜诺青未发病单株长势极弱易死亡，疑似有继续发病症状，嫩头青长势也较弱，露头青次之，圆白叶无明显继续发病症状，据此选择喜诺青作为感病备选材料。完全未发病的材料有四份：白将军、217早太郎、石庄白、美侬，作为抗病备选材料；取杂交结籽率高的材料做后续实验。
实施例1高山白皮萝卜类型
白皮萝卜参试材料49份，其中抗病材料20份，耐病材料18份，感病材料12份，高感材料3份。
实施例2高山红皮萝卜类型
红皮萝卜参试材料8份，其中抗病材料4份，耐病材料1份，感病材料3份，高感材料0份。
实施例3高山绿皮萝卜类型
绿皮萝卜参试材料15份，其中抗病材料4份，耐病材料5份，感病材料5份，高感材料1份。
编号 产品名称 发病株 总株数 病情指数
1 胶州大青 15 15 37.78
2 高糖青 16 16 11.11
3 灌糖青 14 14 11.11
4 改良黄州 15 15 11.11
5 白银大青 15 15 55.56
6 青脆50 16 16 30.56
7 春秋多糖脆 13 13 33.33
8 玉丰大青 16 16 44.44
9 南乡 18 18 35.80
10 太原60早 15 15 15.56
11 招福青 16 16 33.33
12 德日二号 14 14 11.11
13 露头青 15 15 46.67
14 喜诺青 30 30 37.78
15 嫩头青-5系 12 16 16.67
通过对种质资源72份，包括高山白皮萝卜类型、高山红皮萝卜类型、高山绿皮萝卜类型进行相关鉴定，其中病情指数为0完全不发病的材料4份，抗病材料24份，耐病材料24份，感病材料24份，高感材料4份，显示其具有良好的抗病性能。

Claims (7)

1.高山萝卜苗期抗根肿病鉴定方法，其特征在于，鉴定步骤如下：
S1、种植地土壤过筛，加入肥料和草木灰，无菌土兑入有机肥和过磷酸钙，另外加入草木灰制成培养土；
S2、用穴盘作为培养器，将S1中的培养土加入穴盘中，再将待鉴定品种的种子播于穴盘内；
S3、将含根肿菌的菌根磨碎，纱布过滤制成病菌孢子溶液，用血球计数板计数将孢子溶液制成1×107个孢子/毫升浓度的接种菌液备用；
S4、将培养土加入穴盘中，备用；
S5、将穴盘中培养土浇水浇透，水分沉降略干适宜播种时，在每穴中心点播覆土；将穴盘置于苗床上，搭小拱棚，覆地膜于小拱棚上，膜四周用土压实，保温保湿，田间正常管理，接种后调查发病情况；
所述发病情况包括如下参数：
1)病情指数的调查统计
按单株病症分级标准进行调查统计，计算病情指数，根据调查的病情指数，按群体抗性分级标准鉴定出待鉴定品种对根肿病的抗性；
2)病情指数分级参数如下：
病情调查划分为0～9级：
0级：无侵染疤痕或根瘤；
1级：主根上有1～2个侵染疤痕，或者主须根上有1～2个小的根瘤；
3级：主根上有3～4个侵染疤痕，或者主须根上有3～4个小的根瘤；
5级：主根上有5～6个侵染疤痕，或者主须根上有5～6个小的根瘤或1个直径同于主根的大根瘤；
7级：主根上有多个侵染疤痕连成片，或者主须根上有多个小的根瘤或1个及多个直径大于主根的根瘤；
9级：主根上侵染疤痕形成大的凹陷变黑，或者主须根上根瘤聚集烂根；
3)病情指数计算：用以下公式进行病情指数计算
4)抗病性评价标准
2.根据权利要求1所述的高山萝卜苗期抗根肿病鉴定方法，其特征在于：所述供试根肿病菌种为火烧坪根肿菌。
3.根据权利要求1所述的高山萝卜苗期抗根肿病鉴定方法，其特征在于：步骤S1中所述比例以100个穴盘的用土为例。
4.根据权利要求1所述的高山萝卜苗期抗根肿病鉴定方法，其特征在于：步骤S4中根肿菌瘤与接种土的比例为1:20。
5.根据权利要求1所述的一种高山萝卜苗期抗根肿病鉴定方法，其特征在于：步骤S3中用血球计数板计数将病菌孢子浓度为1.107个孢子/毫升以上。
6.根据权利要求1所述的一种高山萝卜苗期抗根肿病鉴定方法，其特征在于：步骤S4中将培养土加入穴盘中，备用。
7.根据权利要求1所述的一种高山萝卜苗期抗根肿病鉴定方法，其特征在于：步骤S3中接种前取大白菜根部肿瘤，采集大白菜根部根瘤冲洗干净，用塑料膜包裹沤烂并捣碎制成根肿菌孢子，用水冲洗根肿菌孢子并用纱布过滤制成接种菌液。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107494119A (zh) * 2017-08-25 2017-12-22 四川省农业科学院园艺研究所 一种猕猴桃溃疡病感病植株分级处理方法
CN110178579A (zh) * 2019-07-02 2019-08-30 沈阳农业大学 一种十字花科根肿病鉴定方法
CN113016510A (zh) * 2021-03-12 2021-06-25 上海应用技术大学 一种花菜类蔬菜抗根肿病的鉴定方法
CN113186332A (zh) * 2021-05-09 2021-07-30 湖北省农业科学院经济作物研究所 一种用于构建萝卜分子身份证的sv分子标记及其应用
CN113234846A (zh) * 2021-05-09 2021-08-10 湖北省农业科学院经济作物研究所 一种萝卜抗根肿病的分子标记及其应用
CN114303516A (zh) * 2022-01-04 2022-04-12 沈阳农业大学 一种芸薹根肿菌的接菌方法及其在筛选抗根肿病育种材料中的应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104404124A (zh) * 2014-11-20 2015-03-11 上海市农业科学院 一种不结球白菜抗根肿病的鉴定方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104404124A (zh) * 2014-11-20 2015-03-11 上海市农业科学院 一种不结球白菜抗根肿病的鉴定方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
汪维红 等: "湖北省长阳县十字花科蔬菜根肿病菌生理小种鉴定及抗源筛选", 《中国蔬菜》 *
甘彩霞 等: "萝卜抗黑腐病、黑斑病和根肿病育种相关基础研究", 《长江蔬菜》 *

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107494119A (zh) * 2017-08-25 2017-12-22 四川省农业科学院园艺研究所 一种猕猴桃溃疡病感病植株分级处理方法
CN110178579A (zh) * 2019-07-02 2019-08-30 沈阳农业大学 一种十字花科根肿病鉴定方法
CN110178579B (zh) * 2019-07-02 2021-09-24 沈阳农业大学 一种十字花科根肿病鉴定方法
CN113016510A (zh) * 2021-03-12 2021-06-25 上海应用技术大学 一种花菜类蔬菜抗根肿病的鉴定方法
CN113186332A (zh) * 2021-05-09 2021-07-30 湖北省农业科学院经济作物研究所 一种用于构建萝卜分子身份证的sv分子标记及其应用
CN113234846A (zh) * 2021-05-09 2021-08-10 湖北省农业科学院经济作物研究所 一种萝卜抗根肿病的分子标记及其应用
CN113234846B (zh) * 2021-05-09 2022-02-01 湖北省农业科学院经济作物研究所 一种萝卜抗根肿病的分子标记及其应用
CN113186332B (zh) * 2021-05-09 2022-02-15 湖北省农业科学院经济作物研究所 一种用于构建萝卜分子身份证的sv分子标记及其应用
CN114303516A (zh) * 2022-01-04 2022-04-12 沈阳农业大学 一种芸薹根肿菌的接菌方法及其在筛选抗根肿病育种材料中的应用
CN114303516B (zh) * 2022-01-04 2022-12-13 沈阳农业大学 一种芸薹根肿菌的接菌方法及其在筛选抗根肿病育种材料中的应用

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