CN105395616A - 用于清热化痰解毒的注射液 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于清热化痰解毒的注射液。该注射液包括活性物质、丙二醇、和注射用水。所述活性物质是由以下物料制备得到的：熊胆粉或熊去氧胆酸、山羊角、黄芩、金银花、连翘。本发明还涉及该注射液的制备方法以及其制药用途。本发明注射液可用于清热、化痰、解毒，可用于风温肺热病痰热阻肺证，可用于发热、咳嗽、咯痰不爽、咽喉肿痛、口渴、舌红、苔黄；肺炎早期、急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作以及上呼吸道感染属上述证候者。

Description

用于清热化痰解毒的注射液
技术领域
本发明属中药技术领域，涉及一种可用于清热化痰解毒的中药注射液。
背景技术
中医治疗热性疾病的历史悠久，长期以来主要有伤寒学派与温病学派，他们各自均积累了丰富的经验，亦有共同的理论基础，对于急性热病发病快，病情变化亦快的特点，他们建立了合伤寒和温病为一体的辩证的治疗方法，尽快控制病情，进而达到医治的目的，现在治疗本病的中成药虽然品种繁多，但是确有高效速效的品种还很奇缺，现有的双黄连注射剂含有金银花、黄苓和连翘，适用于风温肺热表证期，对急性热病虽然有一定的疗效，但对重症急性热病，即对表里证期和里证期，则因病重药轻，故疗效难奏。
肺病主要之一有风温肺热病，是由风热病邪经口鼻侵犯肺系，以身热、咳喘、口渴等为主要表现的一种急性外感热病。该病冬春两季多发，常以邪袭肺系为首发症侯，易进入里症期而出现气症侯，例如痰炎阻肺症，也有起初即为邪蕴肺胃里热症侯者。《中药临床指导原则》明确指出：风温肺热病是感受风热病毒所引起的，四季皆有，而冬春二季多发急性外感热病。本病发作时，常常因发热恶寒、咳嗽、胸痛、气急气喘影响进食、睡眠，还会急转上呼吸道或肺系淤肿及发炎感染。
现有专利文献中曹春林在ZL94103391.0中公开了一种加味双黄连药剂及其制备方法，该药剂有黄芩苷、熊总胆酸、山羊角水解物、金银花提取物、连翘提取物五种成份组成。该药剂制剂有清热、解毒、化痰的功效，临床上能控制风温肺热病的症状。目前临床上通常以黄芩、熊胆粉、山羊角、金银花、连翘五味药材制成注射液使用。由于中药注射液质量要求的复杂性，开发具有临床疗效并且质量要求高的注射液是具有重大现实意义的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种优良的注射液，特别是提供一种用于清热化痰解毒的注射液。
本发明的目的是这样实现的：
一种注射液，其包括活性物质、丙二醇、和注射用水。
根据本发明的注射液，其是用于清热化痰解毒的中药或中药组合物。
根据本发明的注射液，其中所述活性物质是由以下物料制备得到的：熊胆粉或熊去氧胆酸、山羊角、黄芩、金银花、连翘。
根据本发明的注射液，其中所述熊胆粉是以熊胆粉经皂化、提纯得到的熊总胆酸(本发明亦可称为熊胆粉提取物)的形式加入到所述注射液中的。在一个实施方案中，所述熊总胆酸中包含熊去氧胆酸。在一个实施方案中，所述熊总胆酸中包含熊去氧胆酸(其分子式为C24H40O4)和鹅去氧胆酸(其分子式为C24H40O4)。在一个实施方案中，所述中药组合物中熊去氧胆酸的量是鹅去氧胆酸的量的2～30倍，优选3-25倍，优选4-20倍，优选5-18倍，优选5-16倍。
根据本发明的注射液，其中所述山羊角是以山羊角经水解、纯化得到的山羊角水解物(本发明亦可称为山羊角提取物)的形式加入到所述注射液中的。在一个实施方案中，所述山羊角水解物中含有选自下列的氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丙氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸。该11种氨基酸称为总氨基酸。在计算总氨基酸的量时是这些氨基酸各自量加和即得。
根据本发明的注射液，其中所述黄芩是以黄芩提取物的形式加入到所述注射液中的。在一个实施方案中，所述黄芩提取物中包含黄芩苷(其分子式为C21H18O11)。在一个实施方案中，所述黄芩提取物中还包含野黄芩苷(C21H18O12)。在一个实施方案中，所述黄芩苷的量是野黄芩苷的量的20～200倍，优选30-180倍，优选40-160倍，优选50-150倍。
根据本发明的注射液，其中所述金银花是以金银花提取物的形式加入到所述注射液中的。在一个实施方案中，所述金银花提取物中包含选自下列的有机酸：绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酸酰奎尼酸、3,5-二咖啡酸酰奎尼酸、4,5-二咖啡酸酰奎尼酸。在本发明中，该七种有机酸称为总有机酸，或者在描述它们的量时，有机酸总量表示这些有机酸的量之和。
根据本发明的注射液，其中所述连翘是以连翘提取物的形式加入到所述注射液中的。在一个实施方案中，所述连翘提取物中包含连翘酯苷A(其分子式为C29H36O15)和连翘苷(其分子式为C27H35O11)。连翘酯苷A和连翘苷二者可称为连翘总苷，在计算连翘提取物的量时，可以以二者的总和计，并且可称为连翘总苷量，即连翘总苷量＝连翘酯苷A量+连翘苷量。
根据本发明的注射液，其中包含：熊去氧胆酸(直接以熊去氧胆酸形式添加的或者来自熊胆粉)、总氨基酸(来自山羊角)、黄芩苷(来自黄芩)、总有机酸(来自金银花)、和连翘总苷(来自连翘)。
根据本发明的注射液，其每1ml中包含：
熊去氧胆酸 1-10mg，
总氨基酸 0.5-7mg，
黄芩苷 2-12mg，
总有机酸 0.1-3mg，
连翘总苷 0.25-10mg。
根据本发明的注射液，其每1ml中包含：
熊去氧胆酸 2-9mg，
总氨基酸 1-6mg，
黄芩苷 3-10mg，
总有机酸 0.15-2.0mg，
连翘总苷 0.5-9mg。
根据本发明的注射液，其每1ml中包含：
熊去氧胆酸 2.5-8mg，
总氨基酸 1.2-5mg，
黄芩苷 4-9mg，
总有机酸 0.2-1.8mg，
连翘总苷 1-8mg。
根据本发明的注射液，其每1ml中包含丙二醇的量为50～250mg，例如60～225mg，例如70～200mg，例如80～180mg。在本发明中，所述丙二醇是指1,2-丙二醇，即如2010年版中国药典二部1190页所载的品种“丙二醇”。
根据本发明的注射液，其中包含的注射用水是作为注射液溶媒或载体加入的。因此，注射用水中本发明注射液中的量通常是不需要明确规定的，并能在配制时通常是以适量加入以便使注射液体积达到全量的程度，这是液体制剂领域技术人员公知的操作。
根据本发明的注射液，其中还可以任选地包括其它药用辅料，例如但不限于酸碱调节剂、渗透压调节剂、缓冲剂、防腐剂等。
根据本发明的注射液，其中还包括酸碱调节剂。
根据本发明的注射液，其中所述酸碱调节剂选自盐酸、磷酸、硫酸、硝酸、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾等及其组合。根据本发明的注射液，其中所述酸碱调节剂是盐酸和/或氢氧化钠。
根据本发明的注射液，其pH值为6.5～8.5，例如其pH值为7.0～8.0。根据本发明的注射液，其pH值是通过使用酸碱调节剂调节到其规定pH范围的。通常而言，酸碱调节剂的用量是足以使溶液调节至其规定pH范围的量，其具体用量通常不作限定而以pH值为准；特别是在生产实际操作时，可能使用酸(或碱)调节时调节过度，此时可以用碱(或酸)回调。因此本领域技术人员在描述溶液制剂例如注射液的pH值和酸碱调节剂用量时，均以类似于“酸碱调节剂，适量，调节溶液pH至…”等类似的表述。
根据本发明的注射液，其中所述熊总胆酸是以熊胆粉经皂化、提纯得到的。其可参考现有技术制备得到，例如参照CN1947746B(穆来安，2005)说明书第[0024]段的方法来制备。还可以参考CN1110150A(曹春林，1994)说明书第2页21-31行记载的方法来制备。此外，还可参照CN101890048A(薛东升，2009)中的方法例如其中实施例1、2、3的方法得到熊总胆酸，这些方法获得的熊总胆酸中熊去氧胆酸的量是鹅去氧胆酸的量的同样可达2～30倍，优选3-25倍，优选4-20倍，优选5-18倍，优选5-16倍。还可以通过常规的纯化方法将这些现有技术制备得到的提取物进行进一步纯化。本发明人已经发现，不论何种方法获得的熊总胆酸投料到本发明注射液中，也不论是直接以熊去氧胆酸投料到本发明注射液中，只要本发明注射液中熊去氧胆酸含量在本发明注射液的配比范围内即显示具有相同的药学效果。上述各方法得到的熊总胆酸中熊去氧胆酸的量通常可达70％以上，特别是例如可达80％以上。
根据本发明的注射液，其中所述山羊角水解物是照如下方法制备得到的：将山羊角加硫酸(例如8-12倍量，如8倍量4mol/L的硫酸)加热回流16小时左右，滤过，沉淀物用4倍量的水洗涤二次，合并滤液、洗液，用16％的石灰乳调PH值至5.5-7.0(如6.0)，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.04～1.1(60℃)，加1％活性炭脱色，滤过，滤液搅拌下缓缓加入乙醇，使含醇量达70％，冷藏12小时，超微过滤，回收乙醇，放凉，搅拌下加乙醇使含醇量达80％，冷藏12小时，粗滤，超微过滤，回收乙醇，并浓缩至稠膏，60℃以下真空干燥成粉末，得山羊角水解物。本发明所得山羊角水解物中含有选自下列的氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丙氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸。此外，还可照其它现有方法来制备山羊角水解物，例如参照CN101084924B(薛东升，2006)说明书[0026]—[0033]段实施例1-4的方法来制备。此外，还可照CN1947746B(穆来安，2005)说明书第[0025]段的方法来制备山羊角水解物。还可以参考CN1110150A(曹春林，1994)说明书第3页2-18行记载的方法来制备山羊角水解物。还可以通过常规的纯化方法将这些现有技术制备得到的提取物进行进一步纯化。进一步地，上述各方法得到的山羊角水解物中这些总氨基酸的量占山羊角水解物的70％以上，例如可达80％以上。
根据本发明的注射液，其中所述黄芩提取物是现有技术已知的，其可以从市场购得，例如其可参照中华人民共和国2010年版一部391页所记载的“黄芩提取物”项下的方法制备得到，并且其可以符合该质量标准规定。其它示例性的方法例如记载于CN1947746B说明书第[0026]段的方法。还可以通过常规的纯化方法将这些现有技术制备得到的提取物进行进一步纯化。这些公知的方法获得的黄芩提取物中，黄芩苷的含量均可达到80％以上，特别是均可达到85％以上。已经发现使用不同方法获得的黄芩提取物制备的本发明注射液均具有相同的性质，例如生物学效果相同、药物理化性质相同；因此本发明注射液中所用黄芩提取物的获得方法可以不作特别限制。
根据本发明的注射液，其中所述金银花提取物可以照现有技术制备。例如可以参考CN1110150A(曹春林，1994)说明书第4页10-17行记载的方法来制备；还可以参照CN1947746B(穆来安，2005)说明书第[0027]段的方法来制备；还可以参照CN101084976A(薛东升，2006)说明书4页实施例的方法来制备。还可以通过常规的纯化方法将这些现有技术制备得到的提取物进行进一步纯化。这些公知的方法获得的金银花提取物中，总有机酸的含量均可达到70％以上，特别是均可达到80％以上。在本发明的一个具体实例中，所述金银花提取物是照如下方法制备得到的：取金银花，加水煎煮二次，第一次加12倍量水煎煮1小时，第二次加10倍量水，煎煮30分钟，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20(70℃)，加20％石灰乳调PH值至11，搅拌，滤过，沉淀加5倍量乙醇搅拌混悬后，用50％的硫酸调PH值至2.0，滤过，滤液再用40％的氢氧化钠调PH值至6.8，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至100ml，用正丁醇提取4次(60ml、60ml、40ml、40ml)，分取正丁醇提取液，回收正丁醇，加水溶解，5～10℃静置48小时，粗滤，超微过滤，取滤液浓缩至稠膏，60℃真空干燥，得金银花提取物干粉。
根据本发明的注射液，其中所述连翘提取物可以照现有技术制备。例如可以参考CN1110150A(曹春林，1994)说明书第4页2-9行记载的方法来制备，还可以参照CN1947746B(穆来安，2005)说明书第[0028]段的方法来制备，还可以参照CN101085043B(薛东升，2006)说明书第[0026]段的方法来制备，还可以参考中华人民共和国2010年版一部381页所记载的“连翘提取物”项下的方法制备得到。还可以通过常规的纯化方法将这些现有技术制备得到的提取物进行进一步纯化。这些公知的方法获得的连翘提取物中，连翘总苷的含量均可达到30％以上，特别是均可达到40％以上。
根据本发明的注射液，其中所述黄芩提取物、熊胆粉提取物以及相关提取物以及本发明注射液等物料中，所含有的化学成分，可照以下HPLC含量测定法1描述的方法进行测定：
【HPLC含量测定法1】(其可用于测定各种物料中的黄芩苷、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸的含量)：照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VID)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.05％三氟乙酸溶液为流动相A，乙腈为流动相B，按下表进行梯度洗脱；用蒸发光散射检测器；漂移管温度95℃。理论板数按黄芩苷峰计算，应不低于10000；
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％) 流速(ml/min)
0～24 90→58 10→42 1.0
24～30 58→26 42→74 1.0
30～40 26→10 74→90 1.0
对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品、熊去氧胆酸对照品和鹅去氧胆酸对照品(这些对照品以及本发明使用的其它对照品均可以容易地从市场购得，例如从中国药品食品检定研究院购得)适量，加丙二醇和甲醇适量，超声使完全溶解，放冷，加甲醇稀释制成每1ml含黄芩苷0.5mg、熊去氧胆酸0.6mg、鹅去氧胆酸0.1mg的混合溶液，即得；
供试品溶液的制备：精密量取或称取供试品适量(根据预试验确定其中分别含有与上述对照品溶液制备过程中的相应成分相当数量级的量)，置10ml量瓶中，加甲醇溶解/稀释至刻度，摇匀，必要时过滤，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液4μl、8μl及供试品溶液5μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算含量，即得，可以算得供试品中黄芩苷、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸的含量。该含量通常可以以每mg物料中所含黄芩苷的mg数表示，表示其它物质的含量时具有类同含义。
根据本发明的注射液，其中所述黄芩提取物以及相关提取物以及本发明注射液等物料中所含有的化学成分特别是野黄芩苷，可照以下HPLC含量测定法2描述的方法进行测定：
【HPLC含量测定法2】(其可用于测定各种物料中的野黄芩苷)：照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VID)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1％甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为280nm。理论板数按野黄芩苷峰计算，应不低于3000；
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％) 流速(ml/min)
0～30 15→30 85→70 1.0
30～60 30 70 1.0
对照品溶液的制备：精密称取野黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解并制成每1ml含25μg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：精密量取或称取供试品适量(根据预试验确定其中分别含有与上述对照品溶液制备过程中的相应成分相当数量级的量)，置量瓶中，加水溶解/稀释至刻度，摇匀，必要时过滤，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，可以算得供试品中野黄芩苷(C21H18O12)的含量。
根据本发明的注射液，其中所述山羊角提取物以及相关提取物以及本发明注射液等物料中所含有的化学成分特别是总氨基酸，可照以下HPLC含量测定法3描述的方法进行测定：
【HPLC含量测定法3】(其可用于测定各种物料中的单一氨基酸量，特别是可用于测定总氨基酸值)：照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VID)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Hypersil-ODS色谱柱，柱长为20cm，内径为4.6mm，粒径5μm)；流动相A：取醋酸钠(三个结晶水)7.00g，加水4000ml使溶解，加三乙胺0.8ml，四氢呋喃24ml，混匀，用2％冰醋酸溶液调节pH值至7.2；流动相B：取醋酸钠(三个结晶水)10.88g，加水800ml使溶解，用2％冰醋酸溶液调节pH值至7.2，加乙腈1400ml，甲醇1800ml，混匀，按下表进行梯度洗脱；0～37.5分钟，检测波长为338nm，37.5分钟之后，检测波长为262nm；柱温：35℃；理论板数按丙氨酸峰计算应不低于40000；
时间(min) 流动相A(％) 流动相B(％) 流速(ml/min)
0～20 100→85 0→15 1.0
20～45 85→36 15→64 1.0
45～55 0 100 1.5
对照品溶液的制备：精密称取天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸对照品适量，置10ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液(每1ml各含天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸1mg，苯丙氨酸0.5mg)；精密吸取上述对照品储备溶液2ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(每1ml各含天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸0.2mg，苯丙氨酸0.1mg)；
供试品溶液的制备：精密量取或称取供试品适量(根据预试验确定其中分别含有与上述对照品溶液制备过程中的相应成分相当数量级的量)，置量瓶中，加水溶解/稀释至刻度，摇匀，必要时过滤，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1μL，注入液相色谱仪，采用1％邻苯二甲醛(OPA)溶液与0.5％一氯甲酸芴甲酯溶液(FMOC)计算机模拟柱前衍生化，测定并计算上述各氨基酸的量，以及它们的总量(为总氨基酸量)。
在以上“HPLC含量测定法3”中涉及到的试液和操作法可照如下方法配制或执行：
0.4mol/L硼酸缓冲液(pH10.2)：取硼酸，配制成0.4mol/L的溶液，用40％氢氧化钠溶液调节pH值至10.2，即得(本液需冷藏)；
1％邻苯二甲醛(OPA)溶液：称取邻苯二甲醛(OPA)80mg，加硼酸缓冲液(pH10.2)7ml，乙腈1ml，巯基丙酸125μl，混匀，即得(本液需冷藏)；
0.5％一氯甲酸芴甲酯(FMOC)溶液：称取一氯甲酸芴甲酯(FMOC)50mg，用乙腈适量使溶解，并稀释至10ml(本液需冷藏)；
柱前衍生化反应：供试品溶液和对照品溶液在pH10.2的硼酸缓冲液中首先和OPA反应，再用FMOC进行衍生；
柱前衍生化进样程序(瓶1～5分别为OPA、FMOC、水、硼酸盐缓冲液、水)：从瓶3吸取0μl(水，清洗针头)；从瓶4吸取5μl(硼酸盐缓冲液)；从瓶3吸取0μl(水，清洗针头)；从瓶1吸取1μl(OPA)；从瓶3吸取0μl(水，清洗针头)；吸取样品1μl；从瓶3吸取0μl(水，清洗针头)；“在空气中”混合7μl，10次；从瓶2吸取1μl(FMOC)；从瓶3吸取0μl(水，清洗针头)；“在空气中”混合8μl，30次；从瓶5中吸取32μl(水)；“在空气中”混合20μl，最大速度，2次；进样。
根据本发明的注射液，其中所述金银花提取物或总有机酸以及本发明注射液等物料中所含有的化学成分特别是总有机酸及其各具体的有机酸，可照以下HPLC含量测定法4描述的方法进行测定：
【HPLC含量测定法4】(其可用于测定各种物料中的单一有机酸量，特别是可用于测定总有机酸值)：照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VID)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为25cm，内径为4.6mm，粒径为5μm)；以乙腈为流动相A，以0.1％甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱(出峰完毕后用高比例的乙腈冲洗色谱柱)；柱温为30℃；检测波长为325nm；理论板数按咖啡酸峰计算应不低于50000；
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％) 流速(ml/min)
0～20 5→10 95→90 0.8
20～30 10 90 0.8
30～35 10→18 90→82 0.8→1.0
35～60 18 82 1.0
对照品溶液的制备：取咖啡酸和绿原酸对照品适量，精密称定，分别加50％甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：精密量取或称取供试品适量(根据预试验确定其中分别含有与上述对照品溶液制备过程中的相应成分相当数量级的量)，置量瓶中，加甲醇溶解/稀释至刻度，摇匀，必要时过滤，即得供试品溶液；
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱峰，可以算得咖啡酸和绿原酸在测试物中的含量。
进一步，可以分别使用以下各公式计算测试物中新绿原酸、隐绿原酸、3,4-二咖啡酸酰奎尼酸、3,5-二咖啡酸酰奎尼酸、4,5-二咖啡酸酰奎尼酸的含量：
进一步地，可以使用以下公式计算测定物中的有机酸总量(即总有机酸的量)：
有机酸总量＝新绿原酸含量+
绿原酸含量+
隐绿原酸含量+
咖啡酸含量+
3,4-二咖啡酸酰奎尼酸含量+
3,5-二咖啡酸酰奎尼酸含量+
4,5-二咖啡酸酰奎尼酸含量。
在本发明中，如未另外说明，测定各种物料例如连翘提取物或者本发明注射液中的具体化学成分例如连翘酯苷A和连翘苷或者是它们的总和即连翘总苷时，是参照中国药典2010年版一部第381页所载“连翘提取物”项目的【含量测定】项下的方法进行，在试样配制以及其它具体操作时可根据本领域技术人员的常规经验作适当调整。需要说明的是，测定各种物料例如连翘提取物或者本发明注射液中的具体化学成分例如连翘酯苷A和连翘苷或者是它们的总和即连翘总苷的方法还可使用其它文献报道的方法，例如可以采用蔡颖报道的方法(蔡颖，HPLC法测定小儿肺热咳喘品服液中连翘苷和连翘酯苷A的含量，齐鲁药事，2012,31(6):333)。
此外，本发明注射液或者相关提取物特别山羊角提取物或者总氨基酸可照本发明所述HPLC含量测定法3进行测定，其具有如本发明图1所示的典型液相色谱图，即本发明注射液或者相关提取物特别是山羊角提取物或者总氨基酸具有图1所示的指纹图谱(在本发明中可称为指纹图谱1)。在测定指纹图谱1时，使用的参照物溶液的制备方法为：取丙氨酸对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。在本发明的一个实施方案中，本发明注射液照本发明所述HPLC含量测定法3进行测定所得指纹图谱与图1指纹图谱相比，脯氨酸出峰以后的色谱峰除外，经计算机模拟相似度软件(在本发明中使用本领域技术人员常规的中药指纹图谱计算机辅助相似度评价软件(版本2004A))计算，相似度大于0.90。
此外，本发明注射液或者相关提取物特别金银花提取物或者总有机酸可照本发明所述HPLC含量测定法4进行测定，检测波长为280nm，其具有类似于本发明图2所示的典型液相色谱图，即本发明注射液或者相关提取物特别是金银花提取物或者总有机酸具有图2所示的指纹图谱(在本发明中可称为指纹图谱2)的特征。在测定指纹图谱2时，使用的参照物溶液的制备方法为：取咖啡酸对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。在本发明的一个实施方案中，本发明注射液照本发明所述HPLC含量测定法4进行测定(检测波长为280nm)所得指纹图谱与指纹图谱2相比，经计算机模拟相似度软件(在本发明中使用本领域技术人员常规的中药指纹图谱计算机辅助相似度评价软件(版本2004A))计算，相似度大于0.90。
本发明注射液可使用一般的注射液的制备方法获得，一般而言，包括以下步骤：
(i)提供以下五种物料：熊总胆酸或熊去氧胆酸、山羊角水解物、黄芩提取物、金银花提取物、连翘提取物，并确定各物料中的目标物的含量；
(ii)根据所述目标物在配方中的比例，分别称取步骤(i)的五种物料；
(iii)将步骤(ii)称取的五种物料与丙二醇和适量注射用水混合溶解，用酸碱调节剂调节溶液的pH值，用水添加至全量；或者将步骤(ii)称取的五种物料混合，接着再与丙二醇和适量注射用水混合溶解，用酸碱调节剂调节溶液的pH值，用水添加至全量；
(iv)将步骤(iii)所得药液经无菌过滤，分装到玻璃瓶中，密封，热压灭菌，即得本发明注射液。
上述术语“目标物”，对于熊总胆酸而言是指熊去氧胆酸，对于山羊角水解物而言是指总氨基酸，对于黄芩提取物而言是指黄芩苷，对于金银花提取物而言是指总有机酸，对于连翘提取物而言是指连翘总苷。
根据上述方法，由于五种提取物中的目标物的含量可通过HPLC等方法来测定获知，因此确定本发明注射液中的配料比例时，可以直接以熊去氧胆酸、总氨基酸、黄芩苷、总有机酸、连翘总苷五种(类)物质的重量比例关系来准确地确定，而不需要考虑熊总胆酸、山羊角水解物、黄芩提取物、金银花提取物、连翘提取物这些提取物的投料比，亦不需要考虑熊胆粉、山羊角、黄芩、金银花、连翘这些药材的投料比。特别是，例如对于金银花或者金银花提取物而言，药材或提取物的批与批之间所含的总有机酸的量可能会有变化，因此在实际生产过程中投料时不同批次的药材或提取物可能会有变化，而每批之间如果以投料物料金银花提取物中所含总有机酸计时，以这一参数为配比计算通常可以保持恒定。
由此，本发明一个实施方案提供了制备本发明注射液的方法，其包括上述步骤(i)至步骤(iv)。
另外，本发明还提供了本发明注射液在制备清热、化痰、解毒的药物中的用途。本发明还提供了本发明注射液在制备用于风温肺热病痰热阻肺证的药物中的用途。本发明还提供了本发明注射液在制备发热、咳嗽、咯痰不爽、咽喉肿痛、口渴、舌红、苔黄；肺炎早期、急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作以及上呼吸道感染属上述证候者的药物中的用途。
本发明各个实施方案的各技术特征可以组合到其它实施方案中，本发明某个实施方案亦可以与其它实施方案组合，只要这些组合不出现矛盾。
以本发明含熊去氧胆酸计1～10mg/ml浓度的注射液提供于临床时，其常用量为：成人一般一次20ml，重症患者一次可用40ml，加入5％葡萄糖注射液或0.9％氯化钠注射液250～500ml，静脉滴注，控制滴数每分钟不超过60滴，一日1次；儿童按体重0.3～0.5ml/kg，最高剂量不超过20ml，加入5％葡萄糖注射液或0.9％氯化钠注射液100～200ml，静脉滴注，控制滴数每分钟30～60滴，一日1次；或遵医嘱。
以本发明含熊去氧胆酸1～10mg/ml浓度的注射液提供于临床时，其常以玻璃瓶(例如西林瓶、安瓿瓶)包装，每支装量通常可以为5～25ml，例如每支装量为5ml、10ml、或20ml。通常而言，以注射液形式提供的本发明组合物可以在密封状态下避光保存。本发明注射液应用于临床时，通常成年患者的用量以熊去氧胆酸计可以为10～500mg/天，例如20～500mg/天，例如50～500mg/天，当然临床应用时还需要考虑患者体积、年龄、性别、疾病严重程度。鉴于与本发明注射液具有类似组方的药物已应用于临床，因此本发明注射液的剂量的确定是本领域技术人员容易实现的。
本发明的注射液由五种中药材(熊胆粉、山羊角、黄芩、金银花、连翘)制成，或者由四种中药材(山羊角、黄芩、金银花、连翘)并直接添加可从化学合成或生物学合成途径得到的熊去氧胆酸制成。各中药材以分别提取得到提取物的方式加入到所述注射液中，熊胆粉、山羊角、黄芩、金银花、连翘五种提取物的总和可以称为本发明的活性物质；或者山羊角、黄芩、金银花、连翘四种提取物以及熊去氧胆酸的总和可以称为本发明的活性物质。鉴于各种提取物中的可用于定量的目标物可通过本发明上述各种HPLC方法测定，例如山羊角提取物中的总氨基酸的量可以通过HPLC法测定得到，连翘提取物中的连翘总苷可以通过HPLC法测定。因此在配制本发明注射液时，可以根据上文所述注射液中关于熊去氧胆酸、总氨基酸、黄芩苷、总有机酸、连翘总苷五种(类)物质的重量比例关系，以及各种提取物中这五种(类)物质的含量，向所述注射液中添加包含该五种(类)物质的提取物(即熊总胆酸、山羊角水解物、黄芩提取物、金银花提取物、连翘提取物)，对于熊总胆酸可以直接以熊去氧胆酸的形式添加。
另外，在配制本发明注射液时，可以先将熊总胆酸(或者直接以熊去氧胆酸添加)、山羊角水解物、黄芩提取物、金银花提取物、连翘提取物五者按比例混合，形成一种在本发明中可称为活性物质的物料，接着再将该物料与本发明所述丙二醇、注射用水和任选的其它药用辅料混合，得到本发明的注射液，这种配制方式的过程中临时性地形成了一种称之为“活性物质”的中间物料。
或者，在配制本发明注射液时，可以直接将熊总胆酸(或者直接以熊去氧胆酸添加)、山羊角水解物、黄芩提取物、金银花提取物、连翘提取物五者以及本发明所述丙二醇、注射用水和任选的其它药用辅料混合按比例混合均匀，直接得到可作为本发明注射液的物料，这种配制方式不会单独形成仅由五种活性物组配的物料，即不会单独形成如上所述的“活性物质”。
鉴于如本发明上文所述的，本发明注射液包括活性物质、丙二醇、注射用水和任选的其它药用辅料。因此，在本发明中，术语“活性物质”，是指具有特定比例的熊总胆酸(或者直接以熊去氧胆酸添加)、山羊角水解物、黄芩提取物、金银花提取物、连翘提取物五种组分总和，该“活性物质”可以是如上所述在制备过程中具体形成了的中间物料，也可以是未具体形成而是已经将构成它的五种组分直接与药用辅料混合。即，术语“活性物质”，是指具有特定比例的熊总胆酸(或者直接以熊去氧胆酸添加)、山羊角水解物、黄芩提取物、金银花提取物、连翘提取物五种组分的总称。
在本发明注射液中，含有特定量的丙二醇。特别是，本发明注射液其每1ml中包含丙二醇的量为50～250mg，例如60～225mg，例如70～200mg，例如80～180mg。丙二醇在注射液中的含量是可以通过现有技术的方法容易确定的，例如可以照2010年版中国药典二部1190页所载的品种“丙二醇”的【含量测定】项下的方法测定，即该药典1190页右栏第12-19行所载的气相色谱法测定。在本发明下面的具体实验中，均采用该GC法测定本发明得到的注射液中的丙二醇含量，结果显示该含量与制备过程中丙二醇的理论投料量接近，均在理论投料量的99～101％的范围内。
此外，本发明中药组合物特别是以注射液的形式提供本发明组合物具有清热、化痰、解毒的功效，在临床上可用于风温肺热病痰热阻肺证，症见：发热、咳嗽、咯痰不爽、咽喉肿痛、口渴、舌红、苔黄；肺炎早期、急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作以及上呼吸道感染属上述证候者。
附图说明
图1是本发明注射液的总氨基酸的典型指纹图谱。图中各峰号对应的成分如下：1、天冬氨酸，2、谷氨酸，3、丝氨酸，4、甘氨酸，5、苏氨酸，6、丙氨酸，7、缬氨酸，8、苯丙氨酸，9、异亮氨酸，10、亮氨酸，11、脯氨酸。
图2是本发明注射液的总有机酸的典型指纹图谱。图中各峰号对应的成分如下：1、新绿原酸，2、连翘酯苷D，3、绿原酸，4、隐绿原酸，5、咖啡酸，6、野黄芩苷，7、3,4-二咖啡酸酰奎尼酸，8、3,5-二咖啡酸酰奎尼酸，9、4,5-二咖啡酸酰奎尼酸。
具体实施方式
下面以具体的示例进一步描述本发明。在下面提取物制备例部分，如未另外特别说明，制备提取物时药材的每批投料量至少1kg并且满足后面试验用试药的需要。在下面的制备注射液组合物的实例中，如未另外说明，每一批次投料量是至少配制10000ml注射液体积的量，但描述配方时均以每1ml注射液的量进行描述。下面试验中，当以熊去氧胆酸直接投料时，熊去氧胆酸是直接从市场上购得并且由国家食品药品监督管理总局批准上市的药用级的原料药。
一、提取物制备例部分
制备例1a：熊总胆酸的制备
照CN101890048A说明书第[0097]-[0098]段即实施例3的方法得到熊总胆酸，经测定，其中含83.3％的熊去氧胆酸以及11.4％的鹅去氧胆酸(熊/鹅＝7.3；下面各例子中，制得的熊总胆酸中，熊去氧胆酸含量：鹅去氧胆酸含量的比值均在5-16范围内)。
制备例1b：熊总胆酸的制备
照CN1947746B说明书第[0024]段实例方法制备熊总胆酸；接着再次重新纯化：用乙酸乙酯溶解后向其中添加适量水以获取沉淀，真空干燥，得到熊总胆酸，其中含84.3％的熊去氧胆酸。
制备例1c：熊总胆酸的制备
照CN1110150A说明书第2页21-31行记载的方法来制备熊总胆酸接着再次重新纯化：用乙酸乙酯溶解后向其中添加适量水以获取沉淀，真空干燥，得到熊总胆酸，其中含80.8％的熊去氧胆酸。
制备例2a：山羊角水解物的制备
将山羊角加硫酸(8倍量，4mol/L硫酸)加热回流16小时左右，滤过，沉淀物用4倍量的水洗涤二次，合并滤液、洗液，用16％的石灰乳调PH值至6.0，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.04～1.1(60℃)，加1％活性炭脱色，滤过，滤液搅拌下缓缓加入乙醇，使含醇量达70％，冷藏12小时，超微过滤，回收乙醇，放凉，搅拌下加乙醇使含醇量达80％，冷藏12小时，粗滤，超微过滤，回收乙醇，并浓缩至稠膏，60℃以下真空干燥成粉末，得山羊角水解物。
经【HPLC含量测定法3】测定，该山羊角水解物中含有下列的氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丙氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸，并且这些氨基酸的总量(亦可称为总氨基酸量)占山羊角水解物的84.5％，该山羊角水解物具有如同图1所示的指纹图谱。
补充试验发现，使用上述山羊角水解物配制含有下列组分的可作为本发明注射液的水溶液：熊总胆酸(制备例1a)6.5mg，山羊角水解物(制备例2a)4mg，黄芩提取物(制备例3b)8.9mg，金银花提取物(制备例4c)1.4mg，连翘提取物(制备例5a)9.3mg，丙二醇100mg，氢氧化钠/盐酸适量调节使最终溶液的pH值7.5，水适量加至1ml。
所得水溶液经【HPLC含量测定法3】测定，具有图1的色谱图，色谱图中含有下列的氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丙氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸，并且所得图谱(脯氨酸出峰以后的色谱峰除外)与上述山羊角水解物的指纹图谱，经计算机模拟相似度软件计算，相似度不低于0.90，相似度达0.95。此结果表明，其它4种/类组分的加入不会影响混合物中总氨基酸的HPLC指纹特征。
制备例2b：山羊角水解物的制备
照CN101084924B(薛东升，2006)说明书[0027]段即实施例3的方法来制备，经【HPLC含量测定法3】测定，该山羊角水解物中含有下列的氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丙氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸，并且这些氨基酸的总量(亦可称为总氨基酸量)占山羊角水解物的85.7％。
制备例2c：山羊角水解物的制备
照CN1947746B(穆来安，2005)说明书第[0025]段的方法来制备山羊角水解物；接着再次进行纯化：使该水解物溶解于70％乙醇中，添加活性炭至溶液浓度的0.5％，搅拌0.5小时，接着在4℃冷藏12小时，粗滤，超微过滤，浓缩除溶剂，直接干燥，得到用于本发明的山羊角水解物。经【HPLC含量测定法3】测定，该山羊角水解物中含有下列的氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丙氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸，并且这些氨基酸的总量(亦可称为总氨基酸量)占山羊角水解物的81.4％。
制备例3a：黄芩提取物的制备
照中华人民共和国2010年版一部391页所记载的“黄芩提取物”项下的方法制备得到黄芩提取物，经测定，其中含85.2％的黄芩苷。
制备例3b：黄芩提取物的制备
照CN1947746B说明书第[0026]段的方法制备得到黄芩提取物；接着溶解于热乙醚中，过滤，降温以进行重结晶，除去溶剂，干燥，得到可用于本发明注射液的黄芩提取物。经测定，其中含92.2％的黄芩苷。
制备例3c：黄芩提取物的制备
照中华人民共和国2010年版一部391页所记载的“黄芩提取物”项下的方法制备得到提取物，接着溶解于热乙醚中，过滤，降温以进行重结晶，除去溶剂，干燥，得到黄芩提取物，经测定，其中含91.8％的黄芩苷。
另外，还测定了上述制备例3a至制备例3c制得的黄芩提取物中的野黄芩苷，结果三个提取物中黄芩苷：野黄芩苷的比值均在50-150范围内，例如制备例3a黄芩提取物中黄芩苷：野黄芩苷＝93：1。
制备例4a：金银花提取物的制备
取金银花，加水煎煮二次，第一次加12倍量水煎煮1小时，第二次加10倍量水，煎煮30分钟，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20(70℃)，加20％石灰乳调PH值至11，搅拌，滤过，沉淀加5倍量乙醇搅拌混悬后，用50％的硫酸调PH值至2.0，滤过，滤液再用40％的氢氧化钠调PH值至6.8，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至100ml，用正丁醇提取4次(60ml、60ml、40ml、40ml)，分取正丁醇提取液，回收正丁醇，加水溶解，5～10℃静置48小时，粗滤，超微过滤，取滤液浓缩至稠膏；再次用70％乙醇溶解，用0.5倍体积的正丁醇提取3次，分取正丁醇提取液，回收正丁醇，加水溶解，5～10℃静置48小时，粗滤，超微过滤，取滤液浓缩至稠膏；60℃真空干燥，得用于本发明注射液的金银花提取物干粉。
该金银花提取物照【HPLC含量测定法4】测定，色谱图中含有下列的有机酸：绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酸酰奎尼酸、3,5-二咖啡酸酰奎尼酸、4,5-二咖啡酸酰奎尼酸，并且这些有机酸的总量(亦可称为总有机酸量)占金银花提取物的87.3％，该金银花提取物的色谱图中包括图2所述的七种上述有机酸的色谱峰。
补充试验发现，使用上述山金银花提取物配制含有下列组分的水溶液：熊总胆酸(制备例1a)6.5mg，山羊角水解物(制备例2b)4mg，黄芩提取物(制备例3b)8.9mg，金银花提取物(制备例4a)1.4mg，连翘提取物(制备例5a)9.3mg，丙二醇100mg，氢氧化钠/盐酸适量调节使最终溶液的pH值7.5，水适量加至1ml。
所得水溶液经【HPLC含量测定法4】测定，见图2，色谱图中含有下列的有机酸：绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酸酰奎尼酸、3,5-二咖啡酸酰奎尼酸、4,5-二咖啡酸酰奎尼酸，并且所得图谱与上述金银花提取物的指纹图谱，经计算机模拟相似度软件计算，相似度不低于0.90，相似度达0.97。此结果表明，其它4种/类组分的加入不会影响混合物中总有机酸的HPLC指纹特征。
制备例4b：金银花提取物的制备
照CN1110150A(曹春林，1994)说明书第4页10-17行记载的方法来制备；将所得提取物再次用70％乙醇溶解，用0.5倍体积的正丁醇提取3次，分取正丁醇提取液，回收正丁醇，加水溶解，5～10℃静置48小时，粗滤，超微过滤，取滤液浓缩至稠膏；60℃真空干燥，得用于本发明注射液的金银花提取物干粉。经测定，有机酸的总量(亦可称为总有机酸量)占金银花提取物的81.6％。
制备例4c：金银花提取物的制备
照CN1947746B(穆来安，2005)说明书第[0027]段的方法来制备；将所得提取物再次用70％乙醇溶解，用0.5倍体积的正丁醇提取3次，分取正丁醇提取液，回收正丁醇，加水溶解，5～10℃静置48小时，粗滤，超微过滤，取滤液浓缩至稠膏；60℃真空干燥，得用于本发明注射液的金银花提取物干粉。经测定，有机酸的总量(亦可称为总有机酸量)占金银花提取物的88.4％。
制备例5a：连翘提取物的制备
参考中华人民共和国2010年版一部381页所记载的“连翘提取物”项下的方法制备，将经喷雾干燥得到的干粉用5倍量的水溶解，加1％活性炭脱色，滤过，滤液用正丁醇提取4次(每次正丁醇用量为水相体积的50％)，分取正丁醇提取液，回收正丁醇，加60％乙醇溶解，5～10℃放置3～5天，粗滤，超微过滤，取滤液浓缩至稠膏，60℃真空干燥，得粉末为连翘提取物。经测定，该连翘提取物中含有44.6％的连翘总苷。
制备例5b：连翘提取物的制备
参照CN101085043B(薛东升，2006)说明书第[0026]段记载的方法来制备，得连翘提取物。经测定，该连翘提取物中含有57.3％的连翘总苷。
制备例5c：连翘提取物的制备
将以上制备例5a所得连翘提取物再继续纯化：用5倍量的水溶解，加1％活性炭脱色，滤过，滤液用正丁醇提取4次(每次正丁醇用量为水相体积的50％)，分取正丁醇提取液，回收正丁醇，加60％乙醇溶解，5～10℃放置3天，粗滤，超微过滤，取滤液浓缩至稠膏，60℃真空干燥，得粉末为连翘提取物。经测定，该连翘提取物中含有71.2％的连翘总苷。
二、制备注射液实例部分
在下面制备注射液的实例中，使用的酸碱调节剂，在必要时使用1M盐酸溶液或1M氢氧化钠溶液，并调节注射液最终的pH值至处方规定的值或范围。
注射液例1：制备注射液
组分配比：
组分 量
熊去氧胆酸 5mg(以制备例1a投料)，
总氨基酸 3mg(以制备例2b投料)，
黄芩苷 6.5mg(以制备例3b投料)，
总有机酸 0.8mg(以制备例4c投料)，
连翘总苷 5mg(以制备例5a投料)，
丙二醇 100mg，
酸碱调节剂 适量，调节注射液最终pH值7.5，
注射用水 适量，加至1ml。
以上配料表中，“以制备例1a投料”是指以制备例1a所得产物熊总胆酸投料，投料量为6mg；该投料的6mg熊总胆酸所含可用于定量的目标物熊去氧胆酸的量为5mg；其它物料类似表述时亦具有类似含义。
制法：按上述配比称取熊总胆酸、山羊角水解物、黄芩提取物、金银花提取物、连翘提取物以及丙二醇，加至配液罐中，加水至约全量的80％，搅拌溶解，用酸碱调节剂调节溶液pH值至7.5，加活性炭至药液的0.5％，煮沸30分钟，粗滤，三级过滤，滤液加注射用水，调整总量至全量，必要时用酸碱调节剂再次调pH值为7.5，超微过滤，用0.2u微孔滤膜过滤，灌封(5ml/瓶；下面其它实例在制备中均分装成5ml/瓶，除非另有说明)，115℃热压灭菌30min，得呈注射液的本发明中药组合物。上面灌封成5ml/支是出于本发明后续试验操作例如进行化学试验或生物学试验时方便，在生产上可以灵活调节每瓶的灌封量，例如每支通常可以灌封成1ml、2ml、5ml、10ml、15ml、20ml、25ml。
照本发明所述HPLC含量测定法3进行测定，该注射液具有类似于本发明图1所示的典型液相色谱图，并且该色谱图与图1所示指纹图谱相比，脯氨酸出峰以后的色谱峰除外，经计算机模拟相似度软件(在本发明中使用本领域技术人员常规的中药指纹图谱计算机辅助相似度评价软件(版本2004A))计算，相似度为0.97。
照本发明所述HPLC含量测定法4进行测定，该注射液具有类似于本发明图2所示的典型液相色谱图，具体地是，该注射液照本发明所述HPLC含量测定法4进行测定(检测波长为280nm)所得指纹图谱与指纹图谱2相比，经计算机模拟相似度软件(在本发明中使用本领域技术人员常规的中药指纹图谱计算机辅助相似度评价软件(版本2004A))计算，相似度为0.99。
注射液例2：制备注射液
组分配比：
组分 量
熊去氧胆酸 3.2mg(以制备例1b投料)，
总氨基酸 4mg(以制备例2a投料)，
黄芩苷 8mg(以制备例3c投料)，
总有机酸 1.2mg(以制备例4a投料)，
连翘总苷 7mg(以制备例5c投料)，
丙二醇 120mg，
酸碱调节剂 适量，调节注射液最终pH值7.3，
注射用水 适量，加至1ml。
制法：按上述配比称取熊总胆酸、山羊角水解物、黄芩提取物、金银花提取物、连翘提取物，混合均匀，作为制备本发明注射液的活性物质；接着将该活性物质以及处方量的丙二醇，加至配液罐中，参照注射液例1的方法进行后续的制备工序，得注射液。
注射液例3：制备注射液
组分配比：
组分 量
熊去氧胆酸 6.4mg(以制备例1c投料)，
总氨基酸 1.8mg(以制备例2c投料)，
黄芩苷 5mg(以制备例3a投料)，
总有机酸 0.3mg(以制备例4b投料)，
连翘总苷 3mg(以制备例5b投料)，
丙二醇 90mg，
酸碱调节剂 适量，调节注射液最终pH值7.7，
注射用水 适量，加至1ml。
制法：照注射液例1的方法制备，得注射液。
注射液例4：制备注射液
组分配比：
组分 量
熊去氧胆酸 8mg(以制备例1a投料)，
总氨基酸 1.2mg(以制备例2c投料)，
黄芩苷 4mg(以制备例3b投料)，
总有机酸 1.8mg(以制备例4b投料)，
连翘总苷 1mg(以制备例5a投料)，
丙二醇 80mg，
酸碱调节剂 适量，调节注射液最终pH值7.5，
注射用水 适量，加至1ml。
制法：照注射液例1的方法制备，得注射液。
注射液例5：制备注射液
组分配比：
组分 量
熊去氧胆酸 2.5mg(以制备例1c投料)，
总氨基酸 5mg(以制备例2a投料)，
黄芩苷 9mg(以制备例3a投料)，
总有机酸 0.2mg(以制备例4c投料)，
连翘总苷 8mg(以制备例5b投料)，
丙二醇 180mg，
酸碱调节剂 适量，调节注射液最终pH值7.5，
注射用水 适量，加至1ml。
制法：照注射液例1的方法制备，得注射液。
注射液例6：制备注射液
组分配比：
组分 量
熊去氧胆酸 2mg(直接以熊去氧胆酸投料)，
总氨基酸 6mg(以制备例2c投料)，
黄芩苷 10mg(以制备例3a投料)，
总有机酸 0.15mg(以制备例4a投料)，
连翘总苷 0.5mg(以制备例5b投料)，
丙二醇 120mg，
酸碱调节剂 适量，调节注射液最终pH值7.5，
注射用水 适量，加至1ml。
制法：照注射液例1的方法制备，得注射液。
注射液例7：制备注射液
组分配比：
组分 量
熊去氧胆酸 9mg(以制备例1a投料)，
总氨基酸 1mg(以制备例2b投料)，
黄芩苷 3mg(以制备例3c投料)，
总有机酸 2mg(以制备例4b投料)，
连翘总苷 9mg(以制备例5a投料)，
丙二醇 100mg，
酸碱调节剂 适量，调节注射液最终pH值7.0，
注射用水 适量，加至1ml。
制法：照注射液例1的方法制备，得注射液。
注射液例8：制备注射液
组分配比：
组分 量
熊去氧胆酸 10mg(直接以熊去氧胆酸投料)，
总氨基酸 0.5mg(以制备例2a投料)，
黄芩苷 2mg(以制备例3b投料)，
总有机酸 0.1mg(以制备例4c投料)，
连翘总苷 10mg(以制备例5c投料)，
丙二醇 100mg，
酸碱调节剂 适量，调节注射液最终pH值8.0，
注射用水 适量，加至1ml。
制法：照注射液例1的方法制备，得注射液。
注射液例9：制备注射液
组分配比：
组分 量
熊去氧胆酸 1mg(以制备例1a投料)，
总氨基酸 7mg(以制备例2c投料)，
黄芩苷 12mg(以制备例3a投料)，
总有机酸 3mg(以制备例4a投料)，
连翘总苷 0.25mg(以制备例5b投料)，
丙二醇 100mg，
酸碱调节剂 适量，调节注射液最终pH值7.5，
注射用水 适量，加至1ml。
制法：照注射液例1的方法制备，得注射液。
三、注射液的质量检查
1、异常毒性、过敏反应、溶血与凝聚试验、热原、无菌检查
以上注射液例1至注射液例9制备得到的9批注射液，经测定，它们的异常毒性、过敏反应、溶血与凝聚试验、热原、无菌检查均符合药典对于注射液的一般规定。
2、检测本发明注射液中某些化学成分的含量
本发明的注射液其每1ml中通常包含：熊去氧胆酸1-10mg，总氨基酸0.5-7mg，黄芩苷2-12mg，总有机酸0.1-3mg，连翘总苷0.25-10mg；特别是每1ml中通常包含：熊去氧胆酸2-9mg，总氨基酸1-6mg，黄芩苷3-10mg，总有机酸0.15-2.0mg，连翘总苷0.5-9mg；特别是每1ml中通常包含：熊去氧胆酸2.5-8mg，总氨基酸1.2-5mg，黄芩苷4-9mg，总有机酸0.2-1.8mg，连翘总苷1-8mg。
可使用本发明上文提及的HPLC法测定注射液中的熊去氧胆酸、总氨基酸、黄芩苷、总有机酸、连翘总苷的含量。经测定，结果显示，此五个参数测定结果均与相应注射液的投料结果吻合，结果均在相应注射液相应目标物理论投料浓度的98～102％范围内。
3、不溶性微粒检查
不溶性微粒检查：照2010年版中华人民共和国药典一部附录IXR不溶性微粒检查法中的第一法(光阻法)(简称为“光阻法”)进行。以上注射液例1至注射液例9制备得到的9批注射液经检查，结果以每1ml中含10μm及10μm以上的微粒数表示，结果显示这9批注射液每1ml中含10μm及10μm以上的微粒数均小于8个，完全符合药典最严格的标准规定。另外还经检测，发现这9批注射液中含25μm及25μm以上的微粒均未检测到[药典规定：每1ml中含10μm及10μm以上的微粒不得过25粒，含25μm及25μm以上的微粒不得过3粒]。下面的稳定性试验中以每1ml中含10μm及10μm以上的微粒数来评价。
四、注射液的稳定性考察
稳定性考察方法：在避光条件下将注射液置于40℃恒温箱中放置6个月，对于每一批次的注射液，测定其在此高温处置前(即0月)以及经此高温处置后(即6月)的相关性质，例如熊去氧胆酸、总氨基酸、黄芩苷、总有机酸、连翘总苷的含量，不溶性微粒检查等，比较并评价该批注射液试样在经此高温处置后的相关性质的变化情况。
对于熊去氧胆酸、总氨基酸、黄芩苷、总有机酸、或连翘总苷的含量变化，可用含量变化百分数(％)来评价，例如对于熊去氧胆酸，其含量变化百分数(％)计算式如下：
熊去氧胆酸含量变化百分数(％)＝
[(6月熊去氧胆酸含量—0月熊去氧胆酸含量)÷0月熊去氧胆酸含量]×100％
其它物质的含量变化百分数亦可类似计算。该参数越接近于0则注射液中该成分越稳定，否则呈现不稳定的现象。
对于不溶性微粒的变化情况，可以用不溶性微粒变化倍数来评价，即评价每1ml中含10μm及10μm以上的微粒数的变化情况，该不溶性微粒变化倍数计算式如下：
不溶性微粒变化倍数＝6月不溶性微粒数÷0月不溶性微粒数
上式表示对于某批注射液，其在经高温处置6月后每1ml注射液中含10μm及10μm以上的微粒数除以0月时每1ml注射液中含10μm及10μm以上的微粒数。该参数不溶性微粒变化倍数越接近于1或者低于1则注射液中以不溶性微粒数表征的稳定性越稳定，否则呈现不稳定的现象。
注射液例1至注射液例9制备得到的9批注射液经6个月高温处置，6月时的不溶性微粒变化倍数和含量变化百分数(％)的检测结果见表1。
表1：
从以上结果可见，本发明注射液不但在物理稳定性方面，而且在化学稳定性方面均显示有良好的稳定性。
补充试验1：分别参照注射液例1至注射液例9的配方和方法，不同的是将其中丙二醇替换为乙醇，得到9批注射液，分别标记为Co11至Co19；照上述表1所得结果的方法测定这些注射液的性能，结果显示：
这9批注射液6月时不溶性微粒变化倍数均<2.0，显示这些注射液在以不溶性微粒表征的物理稳定性方面是令人满意的；6月时总氨基酸、总有机酸、连翘总苷的含量变化百分数均小于8％，显示这些注射液在以总氨基酸、总有机酸、连翘总苷表征的化学稳定性方面是令人满意的；6月时，熊去氧胆酸含量变化百分数均在63～127％范围内，黄芩苷含量变化百分数均在56～148％范围内，显示这些注射液在以熊去氧胆酸、黄芩苷表征的化学稳定性方面是明显不可取的。可见，在维持熊去氧胆酸、黄芩苷化学稳定性方面，乙醇的效果远不及本发明使用丙二醇的效果。
补充试验2：分别参照注射液例1至注射液例9的配方和方法，不同的是将其中1,3-丙二醇替换为甘油，得到9批注射液，分别标记为Co21至Co29；照上述表1所得结果的方法测定这些注射液的性能，结果显示：6月时不溶性微粒变化倍数均<1.8；6月时总氨基酸、总有机酸、连翘总苷的含量变化百分数均小于9％；6月时熊去氧胆酸含量变化百分数均在73～133％范围内，黄芩苷含量变化百分数均在62～141％范围内。
补充试验3：分别参照注射液例1至注射液例9的配方和方法，不同的是将其中丙二醇替换为甘油，得到9批注射液，分别标记为Co31至Co39；照上述表1所得结果的方法测定这些注射液的性能，结果显示：6月时不溶性微粒变化倍数均<2.1；6月时总氨基酸、总有机酸、连翘总苷的含量变化百分数均小于13％；6月时熊去氧胆酸含量变化百分数均在78～193％范围内，黄芩苷含量变化百分数均在67～174％范围内。
补充试验4：分别参照注射液例1至注射液例9的配方和方法，不同的是将其中丙二醇用量均改为0，得到9批注射液，分别标记为Co41至Co49；照上述表1所得结果的方法测定这些注射液的性能，结果显示：6月时不溶性微粒变化倍数均<1.6；6月时总氨基酸、总有机酸、连翘总苷的含量变化百分数均小于5％；6月时熊去氧胆酸含量变化百分数均在54～157％范围内，黄芩苷含量变化百分数均在61～144％范围内。
补充试验5：分别参照注射液例1至注射液例9的配方和方法，不同的是将其中丙二醇用量均改为25mg，得到9批注射液，分别标记为Co51至Co59；照上述表1所得结果的方法测定这些注射液的性能，结果显示：6月时不溶性微粒变化倍数均<1.9；6月时总氨基酸、总有机酸、连翘总苷的含量变化百分数均小于7％；6月时熊去氧胆酸含量变化百分数均在62～184％范围内，黄芩苷含量变化百分数均在57～166％范围内。
补充试验6：分别参照注射液例1至注射液例9的配方和方法，不同的是将其中丙二醇用量均改为55mg，得到9批注射液，分别标记为Co61至Co69；照上述表1所得结果的方法测定这些注射液的性能，结果显示：6月时不溶性微粒变化倍数均<2.0；6月时总氨基酸、总有机酸、连翘总苷的含量变化百分数均小于8％；6月时熊去氧胆酸含量变化百分数均在65～193％范围内，黄芩苷含量变化百分数均在55～173％范围内。
补充试验7：分别参照注射液例1至注射液例9的配方和方法，不同的是将其中丙二醇用量均改为85mg，得到9批注射液，分别标记为Co71至Co79；照上述表1所得结果的方法测定这些注射液的性能，结果显示：6月时不溶性微粒变化倍数均<1.8；6月时总氨基酸、总有机酸、连翘总苷、熊去氧胆酸和黄芩苷含量的含量变化百分数均小于6％。
补充试验8：分别参照注射液例1至注射液例9的配方和方法，不同的是将其中丙二醇用量均改为130mg，得到9批注射液，分别标记为Co81至Co89；照上述表1所得结果的方法测定这些注射液的性能，结果显示：6月时不溶性微粒变化倍数均<1.9；6月时总氨基酸、总有机酸、连翘总苷、熊去氧胆酸和黄芩苷含量的含量变化百分数均小于7％。
补充试验9：分别参照注射液例1至注射液例9的配方和方法，不同的是将其中丙二醇用量均改为175mg，得到9批注射液，分别标记为Co91至Co99；照上述表1所得结果的方法测定这些注射液的性能，结果显示：6月时不溶性微粒变化倍数均<2.2；6月时总氨基酸、总有机酸、连翘总苷、熊去氧胆酸和黄芩苷含量的含量变化百分数均小于5％。
补充试验10：分别参照注射液例1至注射液例9的配方和方法，不同的是将其中丙二醇用量均改为225mg，得到9批注射液，分别标记为Co101至Co109；照上述表1所得结果的方法测定这些注射液的性能，结果显示：6月时总氨基酸、总有机酸、连翘总苷、熊去氧胆酸和黄芩苷含量的含量变化百分数均小于5％；6月时不溶性微粒变化倍数均在8.6～21.4范围内，显示这些具有较高丙二醇含量的注射液在以可见异物检出率表征的物理稳定性方面是不能令人接受的。
补充试验11：分别参照注射液例1至注射液例9的配方和方法，不同的是将其中丙二醇用量均改为275mg，得到9批注射液，分别标记为Co111至Co119；照上述表1所得结果的方法测定这些注射液的性能，结果显示：6月时总氨基酸、总有机酸、连翘总苷、熊去氧胆酸和黄芩苷含量的含量变化百分数均小于7％；6月时不溶性微粒变化倍数均在11.2～23.7范围内。
补充试验12：参照CN1947746B说明书[0018]至[0029]段所记载的方法，不同的是在其中[0029]段操作中，使用1,2-丙二醇并控制其用量占最终注射液量的5％、10％、15％，即使得最终的注射液中丙二醇的浓度为50mg/ml、100mg/ml、150mg/ml，得到三批注射液分别标记为Co121至Co123；照上述表1所得结果的方法测定这些注射液的性能，结果显示：三个试样6月时不溶性微粒变化倍数均在9.5～17.5范围内，显示这些注射液具有不能令人接受的物理稳定性；Co121批试样6月时总氨基酸、总有机酸、连翘总苷的含量变化百分数均小于8％，但熊去氧胆酸和黄芩苷的含量变化百分数分别为143％和127％；Co122和Co123两批试样6月时总氨基酸、总有机酸、连翘总苷、熊去氧胆酸和黄芩苷含量的含量变化百分数均小于9％。《CN1947746B即D1》
以上补充试验1至补充试验12所制备得到的全部注射液，0月时检测不溶性微粒的结果，每1ml中含10μm及10μm以上的微粒数均小于13个，含25μm及25μm以上的微粒数均小于1个，表明这些试样在初始状态下不溶性微粒是符合一般药品标准规定的。
根据以上补充试验可见：使用与丙二醇类似的小分子量醇后，无法获得具有良好化学稳定性的注射液；使用丙二醇的量过低(低于70mg/ml)时，虽然注射液的物理稳定性是可以让人接受的，但是化学稳定性无法令人接受；使用丙二醇的量过高(高于200mg/ml)时，虽然注射液的化学稳定性是可以让人接受的，但是物理稳定性无法令人接受。
七、生物学试验例部分
生物学试验例1：本发明注射液的解热作用研究
取体重2～3kg健康家兔若干只，实验室温度控制在25℃左右。于试验前3d，每日测正常肛温2次，选取体温变动不高于0.3℃的家兔50只，随机分为5组。给药前测定3次肛温(每30min1次)，以体温平均值为基础体温。
供试品及分组：本发明上文注射液例1至注射液例3三种注射液及市售品痰热清注射液(国药准字Z20030054，其是由黄苓、熊胆粉、山羊角、金银花、连翘制成的用于清热、化痰、解毒的注射液)，各供试品剂量均折算成熊去氧胆酸计5mg/kg体重，用适量水溶解/混悬后口服灌胃给药；
正常对照组(简称为CONL)同法给等容积生理盐水；
各组给药后在动物耳缘静脉注射(iv)内毒素5EU/kg。于内毒素攻击后l、2、3、4、5h测定家兔肛温。结果见表2，各体温值仅给出均值，SD值均在±0.2℃以内。
表2：
经统计学检验，在1-5小时各测定时间点，阳性对照组和本发明各组合物组与相对时间点的阴性对照组相比均具有显著性差异(P<0.05)。由表中结果可见，本发明注射液与具有解热作用的常用药品均具有良好的解热作用。
生物学试验例2：本发明注射液的止咳作用研究
参考CN101890048A说明书[0063]至[0066]段所述方法，动物随机分为5组，分别为制备本发明注射液例1～注射液例3三个给药组(各供试品剂量均折算成熊去氧胆酸计5mg/kg体重/天，注射给药，每天1次，共5天)、磷酸可待因注射液组、正常对照组。依法进行试验。众所周知，在该试验模型中，R值大于130％表示有止咳作用，而R值大于150时则有显著止咳作用。
结果，磷酸可待因注射液组R值＝179.3％，注射液例1～注射液例3三个注射液的R值均在165～185％范围内，表明本发明注射液具有显著的止咳作用。

Claims (10)

1.一种注射液，其包括活性物质、丙二醇、和注射用水；进一步地，其是用于清热化痰解毒的中药或中药组合物；进一步地，其中所述活性物质是由以下物料制备得到的：熊胆粉或熊去氧胆酸、山羊角、黄芩、金银花、连翘。
2.根据权利要求1的注射液，其特征在于：
所述熊胆粉是以熊胆粉经皂化、提纯得到的熊总胆酸的形式加入到所述注射液中的；例如，所述熊总胆酸中包含熊去氧胆酸；例如，所述熊总胆酸中包含熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸；例如，所述中药组合物中熊去氧胆酸的量是鹅去氧胆酸的量的5-18倍，优选5-16倍；
所述山羊角是以山羊角经水解、纯化得到的山羊角水解物(本发明亦可称为山羊角提取物)的形式加入到所述注射液中的；例如，所述山羊角水解物中含有选自下列的氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丙氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸，该11种氨基酸称为总氨基酸；
所述黄芩是以黄芩提取物的形式加入到所述注射液中的；例如，所述黄芩提取物中包含黄芩苷；例如，所述黄芩提取物中还包含野黄芩苷；例如，所述黄芩苷的量是野黄芩苷的量的20～200倍，优选30-180倍，优选40-160倍，优选50-150倍；
所述金银花是以金银花提取物的形式加入到所述注射液中的；例如，所述金银花提取物中包含选自下列的有机酸：绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酸酰奎尼酸、3,5-二咖啡酸酰奎尼酸、4,5-二咖啡酸酰奎尼酸，该七种有机酸称为总有机酸；
所述连翘是以连翘提取物的形式加入到所述注射液中的；例如，所述连翘提取物中包含连翘酯苷A和连翘苷；例如，连翘酯苷A和连翘苷二者可称为连翘总苷。
3.根据权利要求1-2的注射液，其特征在于：
其中包含：熊去氧胆酸(直接以熊去氧胆酸形式添加的或者来自熊胆粉)、总氨基酸(来自山羊角)、黄芩苷(来自黄芩)、总有机酸(来自金银花)、和连翘总苷(来自连翘)；
或者，其每1ml中包含：
熊去氧胆酸 1-10mg， 总氨基酸 0.5-7mg， 黄芩苷 2-12mg， 总有机酸 0.1-3mg， 连翘总苷 0.25-10mg；
或者，其每1ml中包含：
熊去氧胆酸 2-9mg， 总氨基酸 1-6mg， 黄芩苷 3-10mg， 总有机酸 0.15-2.0mg，
连翘总苷 0.5-9mg；
或者，其每1ml中包含：
熊去氧胆酸 2.5-8mg， 总氨基酸 1.2-5mg， 黄芩苷 4-9mg， 总有机酸 0.2-1.8mg， 连翘总苷 1-8mg；
或者，其每1ml中包含丙二醇的量为50～250mg，例如60～225mg，例如70～200mg，例如80～180mg。
4.根据权利要求1-3的注射液，其特征在于：
其中还可以任选地包括其它药用辅料，例如但不限于酸碱调节剂、渗透压调节剂、缓冲剂、防腐剂等；
其中还包括酸碱调节剂；
其中所述酸碱调节剂选自盐酸、磷酸、硫酸、硝酸、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾等及其组合；
其中所述酸碱调节剂是盐酸和/或氢氧化钠；
其pH值为6.5～8.5，例如其pH值为7.0～8.0；
其pH值是通过使用酸碱调节剂调节到其规定pH范围的；或者
所述注射液是通过包括以下步骤的方法制备得到的：
(i)提供以下五种物料：熊总胆酸或熊去氧胆酸、山羊角水解物、黄芩提取物、金银花提取物、连翘提取物，并确定各物料中的目标物的含量；
(ii)根据所述目标物在配方中的比例，分别称取步骤(i)的五种物料；
(iii)将步骤(ii)称取的五种物料与丙二醇和适量注射用水混合溶解，用酸碱调节剂调节溶液的pH值，用水添加至全量；或者将步骤(ii)称取的五种物料混合，接着再与丙二醇和适量注射用水混合溶解，用酸碱调节剂调节溶液的pH值，用水添加至全量；
(iv)将步骤(iii)所得药液经无菌过滤，分装到玻璃瓶中，密封，热压灭菌，即得注射液。
5.根据权利要求1-4的注射液，其特征在于：
其中所述黄芩提取物、熊胆粉提取物以及相关提取物以及所述注射液等物料中，所含有的化学成分，可照以下HPLC含量测定法1描述的方法进行测定：
【HPLC含量测定法1】(其可用于测定各种物料中的黄芩苷、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸的含量)：照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VID)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.05％三氟乙酸溶液为流动相A，乙腈为流动相B，按下表进行梯度洗脱；用蒸发光散射检测器；漂移管温度95℃；理论板数按黄芩苷峰计算，应不低于10000；
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％) 流速(ml/min) 0～24 90→58 10→42 1.0
24～30 58→26 42→74 1.0 30～40 26→10 74→90 1.0
对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品、熊去氧胆酸对照品和鹅去氧胆酸对照品(这些对照品以及本发明使用的其它对照品均可以容易地从市场购得，例如从中国药品食品检定研究院购得)适量，加丙二醇和甲醇适量，超声使完全溶解，放冷，加甲醇稀释制成每1ml含黄芩苷0.5mg、熊去氧胆酸0.6mg、鹅去氧胆酸0.1mg的混合溶液，即得；
供试品溶液的制备：精密量取或称取供试品适量(根据预试验确定其中分别含有与上述对照品溶液制备过程中的相应成分相当数量级的量)，置10ml量瓶中，加甲醇溶解/稀释至刻度，摇匀，必要时过滤，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液4μl、8μl及供试品溶液5μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算含量，即得，可以算得供试品中黄芩苷、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸的含量；该含量通常可以以每mg物料中所含黄芩苷的mg数表示，表示其它物质的含量时具有类同含义；
根据本发明的注射液，其中所述黄芩提取物以及相关提取物以及本发明注射液等物料中所含有的化学成分特别是野黄芩苷，可照以下HPLC含量测定法2描述的方法进行测定：
【HPLC含量测定法2】(其可用于测定各种物料中的野黄芩苷)：照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VID)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1％甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为280nm；理论板数按野黄芩苷峰计算，应不低于3000；
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％) 流速(ml/min) 0～30 15→30 85→70 1.0 30～60 30 70 1.0
对照品溶液的制备：精密称取野黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解并制成每1ml含25μg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：精密量取或称取供试品适量(根据预试验确定其中分别含有与上述对照品溶液制备过程中的相应成分相当数量级的量)，置量瓶中，加水溶解/稀释至刻度，摇匀，必要时过滤，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，可以算得供试品中野黄芩苷(C21H18O12)的含量；
根据本发明的注射液，其中所述山羊角提取物以及相关提取物以及本发明注射液等物料中所含有的化学成分特别是总氨基酸，可照以下HPLC含量测定法3描述的方法进行测定：
【HPLC含量测定法3】(其可用于测定各种物料中的单一氨基酸量，特别是可用于测定总氨基酸值)：照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VID)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Hypersil-ODS色谱柱，柱长为20cm，内径为4.6mm，粒径5μm)；流动相A：取醋酸钠(三个结晶水)7.00g，加水4000ml使溶解，加三乙胺0.8ml，四氢呋喃24ml，混匀，用2％冰醋酸溶液调节pH值至7.2；流动相B：取醋酸钠(三个结晶水)10.88g，加水800ml使溶解，用2％冰醋酸溶液调节pH值至7.2，加乙腈1400ml，甲醇1800ml，混匀，按下表进行梯度洗脱；0～37.5分钟，检测波长为338nm，37.5分钟之后，检测波长为262nm；柱温：35℃；理论板数按丙氨酸峰计算应不低于40000；
时间(min) 流动相A(％) 流动相B(％) 流速(ml/min) 0～20 100→85 0→15 1.0 20～45 85→36 15→64 1.0 45～55 0 100 1.5
对照品溶液的制备：精密称取天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸对照品适量，置10ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液(每1ml各含天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸1mg，苯丙氨酸0.5mg)；精密吸取上述对照品储备溶液2ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(每1ml各含天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸0.2mg，苯丙氨酸0.1mg)；
供试品溶液的制备：精密量取或称取供试品适量(根据预试验确定其中分别含有与上述对照品溶液制备过程中的相应成分相当数量级的量)，置量瓶中，加水溶解/稀释至刻度，摇匀，必要时过滤，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1μL，注入液相色谱仪，采用1％邻苯二甲醛(OPA)溶液与0.5％一氯甲酸芴甲酯溶液(FMOC)计算机模拟柱前衍生化，测定并计算上述各氨基酸的量，以及它们的总量(为总氨基酸量)；
在以上“HPLC含量测定法3”中涉及到的试液和操作法可照如下方法配制或执行：
0.4mol/L硼酸缓冲液(pH10.2)：取硼酸，配制成0.4mol/L的溶液，用40％氢氧化钠溶液调节pH值至10.2，即得(本液需冷藏)；
1％邻苯二甲醛(OPA)溶液：称取邻苯二甲醛(OPA)80mg，加硼酸缓冲液(pH10.2)7ml，乙腈1ml，巯基丙酸125μl，混匀，即得(本液需冷藏)；
0.5％一氯甲酸芴甲酯(FMOC)溶液：称取一氯甲酸芴甲酯(FMOC)50mg，用乙腈适量使溶解，并稀释至10ml(本液需冷藏)；
柱前衍生化反应：供试品溶液和对照品溶液在pH10.2的硼酸缓冲液中首先和OPA反应，再用FMOC进行衍生；
柱前衍生化进样程序(瓶1～5分别为OPA、FMOC、水、硼酸盐缓冲液、水)：从瓶3吸取0μl(水，清洗针头)；从瓶4吸取5μl(硼酸盐缓冲液)；从瓶3吸取0μl(水，清洗针头)；从瓶1吸取1μl(OPA)；从瓶3吸取0μl(水，清洗针头)；吸取样品1μl；从瓶3吸取0μl(水，清洗针头)；“在空气中”混合7μl，10次；从瓶2吸取1μl(FMOC)；从瓶3吸取0μl(水，清洗针头)；“在空气中”混合8μl，30次；从瓶5中吸取32μl(水)；“在空气中”混合20μl，最大速度，2次；进样；
其中所述金银花提取物或总有机酸以及本发明注射液等物料中所含有的化学成分特别是总有机酸及其各具体的有机酸，可照以下HPLC含量测定法4描述的方法进行测定：
【HPLC含量测定法4】(其可用于测定各种物料中的单一有机酸量，特别是可用于测定总有机酸值)：照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VID)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为25cm，内径为4.6mm，粒径为5μm)；以乙腈为流动相A，以0.1％甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱(出峰完毕后用高比例的乙腈冲洗色谱柱)；柱温为30℃；检测波长为325nm；理论板数按咖啡酸峰计算应不低于50000；
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％) 流速(ml/min) 0～20 5→10 95→90 0.8 20～30 10 90 0.8 30～35 10→18 90→82 0.8→1.0 35～60 18 82 1.0
对照品溶液的制备：取咖啡酸和绿原酸对照品适量，精密称定，分别加50％甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：精密量取或称取供试品适量(根据预试验确定其中分别含有与上述对照品溶液制备过程中的相应成分相当数量级的量)，置量瓶中，加甲醇溶解/稀释至刻度，摇匀，必要时过滤，即得供试品溶液；
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱峰，可以算得咖啡酸和绿原酸在测试物中的含量；
进一步，可以分别使用以下各公式计算测试物中新绿原酸、隐绿原酸、3,4-二咖啡酸酰奎尼酸、3,5-二咖啡酸酰奎尼酸、4,5-二咖啡酸酰奎尼酸的含量：
进一步地，可以使用以下公式计算测定物中的有机酸总量(即总有机酸的量)：
有机酸总量＝新绿原酸含量+
绿原酸含量+
隐绿原酸含量+
咖啡酸含量+
3,4-二咖啡酸酰奎尼酸含量+
3,5-二咖啡酸酰奎尼酸含量+
4,5-二咖啡酸酰奎尼酸含量。
6.根据权利要求1-5的注射液，其特征在于：
所述注射液或者相关提取物特别山羊角提取物或者总氨基酸照所述HPLC含量测定法3进行测定，其具有如本发明图1所示的典型液相色谱图；换言之，所述注射液或者相关提取物特别是山羊角提取物或者总氨基酸具有图1所示的指纹图谱；进一步的，在测定指纹图谱1时，使用的参照物溶液的制备方法为：取丙氨酸对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；进一步的，所述注射液照所述HPLC含量测定法3进行测定所得指纹图谱与图1指纹图谱相比，脯氨酸出峰以后的色谱峰除外，经计算机模拟相似度软件计算，相似度大于0.90；
所述注射液或者相关提取物特别金银花提取物或者总有机酸可照本发明所述HPLC含量测定法4进行测定，检测波长为280nm，其具有类似于本发明图2所示的典型液相色谱图；换言之，所述注射液或者相关提取物特别是金银花提取物或者总有机酸具有图2所示的指纹图谱的特征；进一步的，在测定指纹图谱2时，使用的参照物溶液的制备方法为：取咖啡酸对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；进一步的，本发明注射液照本发明所述HPLC含量测定法4进行测定(检测波长为280nm)所得指纹图谱与指纹图谱2相比，经计算机模拟相似度软件计算，相似度大于0.90。
7.制备权利要求1-6的方法，其包括以下步骤：
(i)提供以下五种物料：熊总胆酸或熊去氧胆酸、山羊角水解物、黄芩提取物、金银花提取物、连翘提取物，并确定各物料中的目标物的含量；
(ii)根据所述目标物在配方中的比例，分别称取步骤(i)的五种物料；
(iii)将步骤(ii)称取的五种物料与丙二醇和适量注射用水混合溶解，用酸碱调节剂调节溶液的pH值，用水添加至全量；或者将步骤(ii)称取的五种物料混合，接着再与丙二醇和适量注射用水混合溶解，用酸碱调节剂调节溶液的pH值，用水添加至全量；
(iv)将步骤(iii)所得药液经无菌过滤，分装到玻璃瓶中，密封，热压灭菌，即得注射液。
8.测定权利要求1至6任一项的注射液或制备其的各物料的方法，其特征在于：
(1)测定各种物料中的黄芩苷、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸的含量：
照中国药典2010年版一部附录VID所载高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.05％三氟乙酸溶液为流动相A，乙腈为流动相B，按下表进行梯度洗脱；用蒸发光散射检测器；漂移管温度95℃；理论板数按黄芩苷峰计算，应不低于10000；
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％) 流速(ml/min) 0～24 90→58 10→42 1.0 24～30 58→26 42→74 1.0
30～40 26→10 74→90 1.0
对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品、熊去氧胆酸对照品和鹅去氧胆酸对照品(这些对照品以及本发明使用的其它对照品均可以容易地从市场购得，例如从中国药品食品检定研究院购得)适量，加丙二醇和甲醇适量，超声使完全溶解，放冷，加甲醇稀释制成每1ml含黄芩苷0.5mg、熊去氧胆酸0.6mg、鹅去氧胆酸0.1mg的混合溶液，即得；
供试品溶液的制备：精密量取或称取供试品适量(根据预试验确定其中分别含有与上述对照品溶液制备过程中的相应成分相当数量级的量)，置10ml量瓶中，加甲醇溶解/稀释至刻度，摇匀，必要时过滤，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液4μl、8μl及供试品溶液5μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算含量，即得，可以算得供试品中黄芩苷、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸的含量；该含量通常可以以每mg物料中所含黄芩苷的mg数表示，表示其它物质的含量时具有类同含义；
(2)测定各种物料中的野黄芩苷：
照中国药典2010年版一部附录VID所载高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1％甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为280nm；理论板数按野黄芩苷峰计算，应不低于3000；
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％) 流速(ml/min) 0～30 15→30 85→70 1.0 30～60 30 70 1.0
对照品溶液的制备：精密称取野黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解并制成每1ml含25μg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：精密量取或称取供试品适量(根据预试验确定其中分别含有与上述对照品溶液制备过程中的相应成分相当数量级的量)，置量瓶中，加水溶解/稀释至刻度，摇匀，必要时过滤，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，可以算得供试品中野黄芩苷(C21H18O12)的含量；
(3)测定各种物料中的单一氨基酸量，特别是测定总氨基酸值：
照中国药典2010年版一部附录VID所载高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Hypersil-ODS色谱柱，柱长为20cm，内径为4.6mm，粒径5μm)；流动相A：取醋酸钠(三个结晶水)7.00g，加水4000ml使溶解，加三乙胺0.8ml，四氢呋喃24ml，混匀，用2％冰醋酸溶液调节pH值至7.2；流动相B：取醋酸钠(三个结晶水)10.88g，加水800ml使溶解，用2％冰醋酸溶液调节pH值至7.2，加乙腈1400ml，甲醇1800ml，混匀，按下表进行梯度洗脱；0～37.5分钟，检测波长为338nm，37.5分钟之后，检测波长为262nm；柱温：35℃；理论板数按丙氨酸峰计算应不低于40000；
时间(min) 流动相A(％) 流动相B(％) 流速(ml/min)
0～20 100→85 0→15 1.0 20～45 85→36 15→64 1.0 45～55 0 100 1.5
对照品溶液的制备：精密称取天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸对照品适量，置10ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液(每1ml各含天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸1mg，苯丙氨酸0.5mg)；精密吸取上述对照品储备溶液2ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(每1ml各含天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸0.2mg，苯丙氨酸0.1mg)；
供试品溶液的制备：精密量取或称取供试品适量(根据预试验确定其中分别含有与上述对照品溶液制备过程中的相应成分相当数量级的量)，置量瓶中，加水溶解/稀释至刻度，摇匀，必要时过滤，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1μL，注入液相色谱仪，采用1％邻苯二甲醛(OPA)溶液与0.5％一氯甲酸芴甲酯溶液(FMOC)计算机模拟柱前衍生化，测定并计算上述各氨基酸的量，以及它们的总量(为总氨基酸量)；
在以上HPLC含量测定法中涉及到的试液和操作法可照如下方法配制或执行：
0.4mol/L硼酸缓冲液(pH10.2)：取硼酸，配制成0.4mol/L的溶液，用40％氢氧化钠溶液调节pH值至10.2，即得(本液需冷藏)；
1％邻苯二甲醛(OPA)溶液：称取邻苯二甲醛(OPA)80mg，加硼酸缓冲液(pH10.2)7ml，乙腈1ml，巯基丙酸125μl，混匀，即得(本液需冷藏)；
0.5％一氯甲酸芴甲酯(FMOC)溶液：称取一氯甲酸芴甲酯(FMOC)50mg，用乙腈适量使溶解，并稀释至10ml(本液需冷藏)；
柱前衍生化反应：供试品溶液和对照品溶液在pH10.2的硼酸缓冲液中首先和OPA反应，再用FMOC进行衍生；
柱前衍生化进样程序(瓶1～5分别为OPA、FMOC、水、硼酸盐缓冲液、水)：从瓶3吸取0μl(水，清洗针头)；从瓶4吸取5μl(硼酸盐缓冲液)；从瓶3吸取0μl(水，清洗针头)；从瓶1吸取1μl(OPA)；从瓶3吸取0μl(水，清洗针头)；吸取样品1μl；从瓶3吸取0μl(水，清洗针头)；“在空气中”混合7μl，10次；从瓶2吸取1μl(FMOC)；从瓶3吸取0μl(水，清洗针头)；“在空气中”混合8μl，30次；从瓶5中吸取32μl(水)；“在空气中”混合20μl，最大速度，2次；进样；
(4)测定各种物料中的单一有机酸量，特别是测定总有机酸值：
照中国药典2010年版一部附录VID所载高效液相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为25cm，内径为4.6mm，粒径为5μm)；以乙腈为流动相A，以0.1％甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱(出峰完毕后用高比例的乙腈冲洗色谱柱)；柱温为30℃；检测波长为325nm；理论板数按咖啡酸峰计算应不低于50000；
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％) 流速(ml/min) 0～20 5→10 95→90 0.8 20～30 10 90 0.8 30～35 10→18 90→82 0.8→1.0 35～60 18 82 1.0
对照品溶液的制备：取咖啡酸和绿原酸对照品适量，精密称定，分别加50％甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：精密量取或称取供试品适量(根据预试验确定其中分别含有与上述对照品溶液制备过程中的相应成分相当数量级的量)，置量瓶中，加甲醇溶解/稀释至刻度，摇匀，必要时过滤，即得供试品溶液；
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱峰，可以算得咖啡酸和绿原酸在测试物中的含量；
进一步，可以分别使用以下各公式计算测试物中新绿原酸、隐绿原酸、3,4-二咖啡酸酰奎尼酸、3,5-二咖啡酸酰奎尼酸、4,5-二咖啡酸酰奎尼酸的含量：
进一步地，可以使用以下公式计算测定物中的有机酸总量(即总有机酸的量)：
有机酸总量＝新绿原酸含量+
绿原酸含量+
隐绿原酸含量+
咖啡酸含量+
3,4-二咖啡酸酰奎尼酸含量+
3,5-二咖啡酸酰奎尼酸含量+
4,5-二咖啡酸酰奎尼酸含量。
9.根据权利要求8的方法，其特征在于：
所述注射液或者相关提取物特别山羊角提取物或者总氨基酸照所述HPLC含量测定法3进行测定，其具有如本发明图1所示的典型液相色谱图；换言之，所述注射液或者相关提取物特别是山羊角提取物或者总氨基酸具有图1所示的指纹图谱；进一步的，在测定指纹图谱1时，使用的参照物溶液的制备方法为：取丙氨酸对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；进一步的，所述注射液照所述HPLC含量测定法3进行测定所得指纹图谱与图1指纹图谱相比，脯氨酸出峰以后的色谱峰除外，经计算机模拟相似度软件计算，相似度大于0.90；
所述注射液或者相关提取物特别金银花提取物或者总有机酸可照本发明所述HPLC含量测定法4进行测定，检测波长为280nm，其具有类似于本发明图2所示的典型液相色谱图；换言之，所述注射液或者相关提取物特别是金银花提取物或者总有机酸具有图2所示的指纹图谱的特征；进一步的，在测定指纹图谱2时，使用的参照物溶液的制备方法为：取咖啡酸对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；进一步的，本发明注射液照本发明所述HPLC含量测定法4进行测定(检测波长为280nm)所得指纹图谱与指纹图谱2相比，经计算机模拟相似度软件计算，相似度大于0.90。
10.权利要求1-6任一项所述注射液在制备清热、化痰、解毒的药物中的用途；或者，在制备用于风温肺热病痰热阻肺证的药物中的用途；或者，在制备发热、咳嗽、咯痰不爽、咽喉肿痛、口渴、舌红、苔黄；肺炎早期、急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作以及上呼吸道感染属上述证候者的药物中的用途。
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