CN105388231A - 一种检测榄香素纯度的方法 - Google Patents

一种检测榄香素纯度的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105388231A
CN105388231A CN201511005966.5A CN201511005966A CN105388231A CN 105388231 A CN105388231 A CN 105388231A CN 201511005966 A CN201511005966 A CN 201511005966A CN 105388231 A CN105388231 A CN 105388231A
Authority
CN
China
Prior art keywords
elemicin
purity
detection
normal hexane
sample
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201511005966.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105388231B (zh
Inventor
郑皓元
徐仕银
江洪兵
严熏
吴涛
刘丁
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
CHENGDU PUSH BIO-TECHNOLOGY Co Ltd
Original Assignee
CHENGDU PUSH BIO-TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by CHENGDU PUSH BIO-TECHNOLOGY Co Ltd filed Critical CHENGDU PUSH BIO-TECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN201511005966.5A priority Critical patent/CN105388231B/zh
Publication of CN105388231A publication Critical patent/CN105388231A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105388231B publication Critical patent/CN105388231B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
    • G01N2030/027—Liquid chromatography

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)

Abstract

本发明提供一种检测榄香素纯度的方法，包括采用HPLC法检测，所述HPLC法检测的条件为：色谱柱为：正相硅胶柱；流动相：正己烷或正己烷和异丙醇的混合；色谱柱柱温:20℃～50℃；流速:0.5～2.0ml/min；检测器：紫外检测器，检测波长200～270nm；榄香素样品溶液进样量为：2ul～20ul。该方法首次采取最常用的HPLC法检测榄香素纯度，填补了用HPLC法检测榄香素的空白，且采用该方法检测榄香素稳定性良好，检测结果可靠，为控制榄香素单体物质的纯度提供新的检测手段，也为用HPLC法在药材中检测榄香素提供了可能性。

Description

一种检测榄香素纯度的方法
技术领域
本发明涉及一种榄香素的检测技术领域，更具体来说涉及一种检测榄香素纯度的方法。
背景技术
榄香素，英文名：Elemicin,化学名为：1,2,3-trimethoxy-5-(2-propenyl)-Benzene，结构式如下：
榄香素为挥发油类，为无色油状液体，存在于紫苏，石菖蒲，细辛，桔草等植物中，建立榄香素的检测方法，对单体物质研究和紫苏等药材的质量控制有重要价值。目前，有关榄香素的检测方法均为气相色谱法，如：李晶，GC-MS法对石菖蒲挥发油的质量分析及β-细辛醚、α-细辛醚的药动学研究[D].黑龙江中医药大学，2014；孙凌峰，桔草挥发成分的提取与分析研究[J].江西师范大学学报，1994；赵晖，紫苏精油的化学成分[J].国外医学，2000。由此可见，已报道研究中，榄香素的检测均为GC检测或者GC-MS检测，检测方法单一，因此需要建立多元化的榄香素检测方法，为榄香素单体的质量控制、药材中榄香素的检测提供可靠依据。
发明内容
本发明旨在解决现有技术榄香素检测方法单一的问题，建立了一种除GC或GC-MS检测以外的检测方法，该方法基于榄香素具有较强紫外吸收，首次采取最常用的HPLC法检测榄香素纯度，填补了用HPLC法检测榄香素的空白，且采用该方法检测榄香素稳定性良好，检测结果可靠，为控制榄香素单体物质的纯度提供新的检测手段，也为用HPLC法在药材中检测榄香素提供了可能性。
一种检测榄香素纯度的方法，包括采用HPLC法检测，所述HPLC法检测的条件为：
色谱柱为：正相硅胶柱；
流动相：正己烷或正己烷和异丙醇的混合；
色谱柱柱温:20℃～50℃；
流速:0.5～2.0ml/min；
检测器：紫外检测器，检测波长200～270nm；
榄香素样品溶液进样量为：2ul～20ul。
所述色谱为正相硅胶柱，柱长为150～250mm,内径为4.6mm，硅胶粒径为5～10um。
所述正己烷与异丙醇的混合中，所述正己烷体积量为90～99%，所述异丙醇体积量为1～10%。
紫外检测器的检测波长为208nm。
所述正己烷、异丙醇为色谱纯或分析纯。
所述榄香素样品为分析级或试剂级，所述榄香素样品溶液按下述方法配制：精密称定榄香素样品1.0～20.0mg,置于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，过0.45um微孔滤膜或离心取上清液即得。
有益效果
本发明首次采取HPLC法检测榄香素纯度，填补了用HPLC法检测榄香素的空白，且采用该方法检测榄香素稳定性良好，检测结果可靠，为控制榄香素单体物质的纯度提供新的检测手段，也为用HPLC法在药材中检测榄香素提供了可能性。
本发明通过大量的实践研究，进一步得到了采用HPLC法检测榄香素纯度的检测条件，将正相硅胶柱与流动相等检测条件有效、严格的控制，使得HPLC法检测榄香素纯度得以实施；同时采用本发明方法检测，定量限和检测限低，检测时间短，仪器设置和操作简单。
附图说明
图1为仪器精密度考查色谱图；
图2为稳定性考查色谱图；
图3为实施例1色谱图；
图4为实施例3色谱图。
图1、2、3、4中，横坐标表示时间（min），纵坐标表示吸光度（AU）。
具体实施方式
下面结合具体实施方式说明本发明。
本发明中，所用分析级榄香素GC纯度98%，所用试剂级榄香素GC纯度为95%。
采用本发明方法检测榄香素纯度的仪器精密度、稳定性考查、检测限和定量限考查。
检测条件：
高效液相色谱仪：可采用WatersHPLC(2695)；
色谱柱：正相硅胶柱；
流动相是：正己烷：异丙醇=99:1；
色谱柱柱温:35℃；
流速1.0ml/min；
检测器：紫外检测器（UV=218nm）；
进样量为：5ul。
（1）仪器精密度考查
榄香素样品溶液配制：精密称定榄香素样品17.5mg,置于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，过0.45um微孔滤膜。
将上述配制的榄香素样品溶液连续进样6次，按照上述检测条件检测分析，得色谱图如图2所示，将6次检测的保留时间及峰面积统计在下表1中，并计算平均值及RSD值。
表1
由表1结果可知，所得到的6个色谱图中，各共有峰保留时间、峰面积的RSD值均小于2.0%，说明仪器精密度良好，符合检测要求的要求。
（2）稳定性考查
榄香素样品溶液配制：精密称定榄香素样品17.5mg,置于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，过0.45um微孔滤膜。
将配制的榄香素样品溶液分别放置1h，2h，4h，8h，24h后，按照上述检测条件进行检测分析，得色谱图如图2所示，并将各个检测的留时间及峰面积统计在下表2中，并计算平均值及RSD值。
表2
由上表2可知，所得到的6个色谱图中，各共有峰保留时间、峰面积的RSD值均小于2.0%，说明样品在常温下24h内对样品进行检测都是合理有效的，样品稳定性良好，符合检测的要求。
（3）检测限和定量限考察
将0.65ug/ml的标准液进样一次，得到样品的信噪比S/N=48.7，再将标准液稀5倍进样，得到其信噪比为S/N=9.7（≈10:1），即确定榄香素为定量限为0.13ug/ml，最低检测限约为0.04ug/ml。
实施例1
一种检测榄香素纯度的方法，包括采用HPLC法检测，所述HPLC法检测的条件为：
色谱条件：
仪器：WatersHPLC(2695)；
色谱柱：UniSil-5-100ULTRA，5um，4.6*250mm；
流动相是采用正己烷与异丙醇混合，均采用色谱纯；其中0～20min为洗脱，洗脱后对色谱柱进行柱冲洗和柱平衡以便于后续使用，本实施例在第25～35分钟进行柱冲洗、36-48分钟进行柱平衡洗脱、柱冲洗，具体洗脱、冲洗、平衡时采用的洗脱溶剂、冲洗溶剂、平衡溶剂按下表3操作；
色谱柱柱温:35℃；
流速1.0ml/min；
检测器：紫外检测器，检测波长230nm；
进样量为：4ul。
表3
本实施例采用的榄香素样品为分析级的，具体配置：精密称取样品15.4mg，放入10ml容量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀后，离心取上清液。
按该实施例操作，得色谱图如图3所示，检测结果：96.96%（归一化法计算）
实施例2
一种检测榄香素纯度的方法，包括采用HPLC法检测，所述HPLC法检测的条件为：
色谱柱为：正相硅胶柱；UniSil-5-100ULTRA，5um，4.6*150mm；
流动相：正己烷，正己烷采用分析纯；
色谱柱柱温:40℃；
流速:1.5ml/min；
检测器：紫外检测器，检测波长200nm；
榄香素样品溶液进样量为：10ul。
本实施例采用的榄香素样品为试剂级的，具体配置：精密称取样品1.0mg,放入10ml容量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀后，过0.45um微孔滤膜。
检测结果96.24%。（归一化法计算）。
实施例3
一种检测榄香素纯度的方法，包括采用HPLC法检测，所述HPLC法检测的条件为：
色谱柱为：正相硅胶柱；UniSil-5-100ULTRA，10um，4.6*250mm；
流动相：正己烷与异丙醇的混合，其中正己烷为95%，异丙醇为5%，均采用分析纯；洗脱采用等度洗脱，本实施例在第25～35分钟进行柱冲洗、36-48分钟进行柱平衡洗脱、柱冲洗，具体洗脱、冲洗、平衡时采用的洗脱溶剂、冲洗溶剂、平衡溶剂按下表4操作；
表4
色谱柱柱温:20℃；
流速:0.5ml/min；
检测器：紫外检测器，检测波长270nm；
榄香素样品溶液进样量为：20ul。
本实施例采用的榄香素样品为试剂级的，具体配置：精密称取样品8.9mg,放入10ml容量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀后，离心取上清液。
按该实施例操作，得色谱图如图4所示，检测结果：90.29%。
实施例4
本实施例与实施例与实施例1的区别在于，洗脱流动相是正己烷与异丙醇的混合，其中正己烷占90%，异丙醇占10%，检测波长为208nm，本实施例的进样量为2ul，样品采用分析级的。
检测结果：98.9%（归一化法计算）。

Claims (6)

1.一种检测榄香素纯度的方法，其特征在于：包括采用HPLC法检测，所述HPLC法检测的条件为：
色谱柱为：正相硅胶柱；
流动相：正己烷和异丙醇的混合或正己烷；
色谱柱柱温:20℃～50℃；
流速:0.5～2.0ml/min；
检测器：紫外检测器，检测波长200～270nm；
榄香素样品溶液进样量为：2ul～20ul。
2.如权利要求1所述的检测榄香素纯度的方法，其特征在于：所述色谱为正相硅胶柱，柱长为150～250mm,内径为4.6mm，硅胶粒径为5～10um。
3.如权利要求1或2所述的检测榄香素纯度的方法，其特征在于：所述正己烷与异丙醇的混合中，所述正己烷体积量为90～99%，所述异丙醇体积量为1～10%。
4.如权利要求1所述的检测榄香素纯度的方法，其特征在于：紫外检测器的检测波长为208nm。
5.如权利要求1所述所述的检测榄香素纯度的方法，其特征在于：所述正己烷、异丙醇为色谱纯或分析纯。
6.如权利要求1所述所述的检测榄香素纯度的方法，其特征在于：所述榄香素样品为分析级或试剂级，所述榄香素样品溶液按下述方法配制：精密称定榄香素样品1.0～20.0mg，置于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，过0.45um微孔滤膜或离心取上清液即得。
CN201511005966.5A 2015-12-29 2015-12-29 一种检测榄香素纯度的方法 Active CN105388231B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201511005966.5A CN105388231B (zh) 2015-12-29 2015-12-29 一种检测榄香素纯度的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201511005966.5A CN105388231B (zh) 2015-12-29 2015-12-29 一种检测榄香素纯度的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105388231A true CN105388231A (zh) 2016-03-09
CN105388231B CN105388231B (zh) 2018-04-20

Family

ID=55420752

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201511005966.5A Active CN105388231B (zh) 2015-12-29 2015-12-29 一种检测榄香素纯度的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105388231B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1570625A (zh) * 2004-04-27 2005-01-26 沈阳药科大学 无毒害中药材辽细辛的检测方法
KR20070032867A (ko) * 2005-09-20 2007-03-23 강원도 족도리로부터 분리한 신규 제초활성물질 엘레미신 및 그의분리방법

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1570625A (zh) * 2004-04-27 2005-01-26 沈阳药科大学 无毒害中药材辽细辛的检测方法
KR20070032867A (ko) * 2005-09-20 2007-03-23 강원도 족도리로부터 분리한 신규 제초활성물질 엘레미신 및 그의분리방법

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AMY L. LANE等: "Structure–activity relationship of chemical defenses from the freshwater plant Micranthemum umbrosum", 《PHYTOCHEMISTRY》 *
HUN JAI LIM等: "Inhibition of Proinflammatory Cytokine Generation in Lung Inflammation by the Leaves of Perilla frutescens and Its Constituents", 《BIOMOL THER》 *
I. DARREN GRICE等: "Isolation of Bioactive Compounds That Relate to the Anti-Platelet Activity of Cymbopogon ambiguus", 《EVIDENCE-BASED COMPLEMENTARY AND ALTERNATIVE MEDICINE》 *
PAUL-GEORGES ROSSI等: "(E)-Methylisoeugenol and Elemicin: Antibacterial Components of Daucus carota L. Essential Oil against Campylobacter jejuni", 《J. AGRIC. FOOD CHEM.》 *
袁子民等: "肉豆蔻挥发油的研究进展", 《时珍国医国药》 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN105388231B (zh) 2018-04-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Cazes Encyclopedia of Chromatography 2004 Update Supplement
CN104777249B (zh) 测定止咳枇杷糖浆中有效成分苦杏仁苷含量的方法
CN107688067A (zh) 通窍鼻炎片的含量测定方法
CN114504842B (zh) 一种棉纤维支撑液相萃取装置及在药物浓度检测中的应用
CN103760278A (zh) 一种同时定量检测水辣蓼中六种黄酮类成分的高效液相色谱方法
CN103913538B (zh) 一种茶鲜叶中有机磷类农药的定量检测方法
CN105021723A (zh) 一种同时测定清火栀麦片中栀子苷、穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的检测方法
CN107167535B (zh) 一种反相液相色谱法检测雷替曲塞对映异构体的方法
Basavaiah et al. Simple high-performance liquid chromatographic method for the determination of acyclovir in pharmaceuticals
CN105699510B (zh) 一种绵马贯众药材中山柰苷的含量测定方法
CN105388231A (zh) 一种检测榄香素纯度的方法
CN105158348A (zh) 利用气相色谱法对莪术油中五种有效成分测定的方法
CN104407088A (zh) 一种中药复方制剂中薯蓣皂苷的定量分析方法
Xu et al. Capillary liquid chromatographic analysis of fat-soluble vitamins and β-carotene in combination with in-tube solid-phase microextraction
CN112129860B (zh) 一种测定独活香豆素类成分含量的方法
CN101308123A (zh) 液相色谱法测定独一味中8-o-乙酰基山栀子苷甲酯含量的方法
CN103792301A (zh) 一种抗病毒颗粒中告依春的含量测量方法
CN101169395A (zh) 化妆品中氢化可的松的高效液相色谱检测方法
CN107064329A (zh) 一种血栓心脉宁片中五种人参皂苷类成分的含量测定方法
CN102478551B (zh) 一种测定土荆芥挥发油中有效成分含量的方法
de Oliveira et al. High-performance liquid chromatographic determination of roxithromycin in tablets
CN104965037A (zh) 一种百两金皂苷b原料或其制剂的检测方法
CN110231418A (zh) 一种hplc法分离测定藿香正气口服液中多种成分含量的方法
CN104965028B (zh) 玉叶金花药材中玉叶金花苷g的含量测定方法
Shaheed et al. Extraction and Determination of Oxymatrine Pesticide in Environmental Sample and in its Formulation using High-Performance Liquid Chromatography

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant