CN105368659A - 一种富含白藜芦醇的房县黄酒及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种富含白藜芦醇房县黄酒，每100mL房县黄酒种含有50-200mg的白藜芦醇；本发明还公开了富含白藜芦醇房县黄酒的制备方法和用途，将来源于传统中药材虎杖中的98-99%纯度的白藜芦醇，直接溶解在一定量的房县黄酒中，制得含有50-200mg白藜芦醇/100mL的房县黄酒，本发明公开所提供的富含白藜芦醇房县黄酒有效性、安全性好，价格低廉，制备方法简单，生产成本低。药效学试验结果表明：富含白藜芦醇房县黄酒具有良好抗氧化、抗衰老的作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种富含白藜芦醇的房县黄酒，本发明还涉及一种富含白藜芦醇的房县黄酒的制备方法和用途。
背景技术
黄酒是我国的民族特产，与啤酒、红酒并称为世界三大古酒。黄酒里含有丰富的碳水化合物、氨基酸、维生素、微量元素以及多种植物活性成分，同时独特的酿造工艺使得黄酒具有酒精浓度低、酒性醇厚、营养丰富、风味独特、品种繁多等特性。因此，黄酒不仅成为中国传统的保健养生佳品，而且还被用于中药服药的引子，被视为“百药之长”。《本草纲目》详细记载了69种可以治疗疾病的药酒，均以黄酒制成。在长期的实践过程中，黄酒被认为对肿瘤、心血管疾病以及衰老等具有不错的疗效。
房县，古时又称“房陵”，“房陵黄酒”源远流长，古称“封疆御酒”、“帝封皇酒”。据史料记载，绍兴黄酒最早产于公元前492年越王勾践时期，而“房陵黄酒”早在公元前827年西周时期已成为“封疆御酒”。因此，房县黄酒可谓是中国黄酒的代表之一。
近年来，科学的研究表明适量的黄酒能够在多种疾病的预防方面起到重要作用。黄酒提取物能够减缓衰老，抗氧化，改善记忆力，增强缺氧耐受力，从而提高机体功能，并对老年痴呆等疾病具有治疗效果。
白藜芦醇作为葡萄、虎杖等植物的天然产物，具有良好抗氧化、抗衰老作用，可预防动脉粥样硬化、防止冠心病、降低血清和肝脏的脂质、抑制肝脏癌细胞组织变异。白藜芦醇的抗氧化、抗衰老作用与丁基羟基甲苯、槲皮素和生育酚相比，白藜芦醇的抗氧化作用最强。白藜芦醇具有抑制脂质氧化酶过氧化作用的活性。近年来以白藜芦醇为活性成分的保健食品层出不穷。将白藜芦醇添加到黄酒中，配制出抗衰老新型保健佐餐酒将具有巨大的市场前景。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种富含白藜芦醇房县黄酒。
本发明的第二个目的是提供一种富含白藜芦醇房县黄酒的制备方法。
本发明的第三个目的是提供富含白藜芦醇的房县黄酒作为抗氧化、抗衰老功能食品的用途。
上述目的是通过以下技术方案实现的：
一种富含白藜芦醇房县黄酒，含有50-200mg白藜芦醇/100mL房县黄酒。
一种富含白藜芦醇房县黄酒的制备方法，将来源于传统中药材虎杖中的98-99%纯度的白藜芦醇，直接溶解在一定量的房县黄酒中，制得含有50-200mg白藜芦醇/100mL房县黄酒。
一种富含白藜芦醇房县黄酒作为抗氧化、抗衰老功能食品的用途。
本发明的有益效果是：所提供的富含白藜芦醇房县黄酒有效性、安全性好，价格低廉，制备方法简单，生产成本低。药效学试验结果表明：富含白藜芦醇房县黄酒具有良好抗氧化、抗衰老的作用。
附图说明
图1是白藜芦醇黄酒复配与单独白藜芦醇、黄酒还原力的比较。
图2是白藜芦醇黄酒复合配方与黄酒自身的羟基自由基清除作用对比。
图3是白藜芦醇黄酒复合配方与白藜芦醇自身的羟基自由基清除作用对比。
图4是白藜芦醇黄酒复合配方与黄酒自身的超氧自由基清除作用对比。
图5是白藜芦醇黄酒复合配方与黄酒自身的超氧自由基清除作用对比。
图6是白藜芦醇黄酒复合配方与黄酒自身的DPPH·自由基清除作用对比。
图7是白藜芦醇黄酒复合配方与白藜芦醇自身的DPPH·自由基清除作用对比。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步说明。
实施例1富含白藜芦醇房县黄酒的制备
1、制备：将来源于传统中药材虎杖中的98-99%纯度的白藜芦醇，直接溶解在一定量的房县黄酒中，制得含有50-200mg白藜芦醇/100mL房县黄酒。具体步骤如下：用分析天平精确称取50-200mg无菌白藜芦醇粉末，纯度经高效液相色谱仪测定达98-99%；另取100ml房县黄酒，将上述一定质量的白藜芦醇粉末加入房县黄酒中，经搅拌完全溶解为止，制得富含白藜芦醇房县黄酒，其特征在于每100mL房县黄酒种含有50-200mg白藜芦醇。
实施例2富含白藜芦醇的房县黄酒的体外抗氧化活性研究
一、试验方法
1、溶液的配制
a、白藜芦醇甲醇溶液分别取白藜芦醇干粉若干，以甲醇为溶剂，配制浓度分别为10,20,50,100,200,400,800μg/ml的系列溶液；
b、白藜芦醇黄酒溶液（1mg:1ml）分别取1mg的白藜芦醇和1mg的黄酒，以甲醇为溶剂，配制成浓度为1mgRes/ml、1mg黄酒/ml的溶液，再经稀释得到白藜芦醇浓度分别为10,20,50,100,200,400,800μg/ml,对应的黄酒浓度分别为10,20,50,100,200,400,800μg/ml的系列溶液；
c、白藜芦醇黄酒溶液（1.6mg:1ml）分别取1.6mg的白藜芦醇和1mg黄酒，以甲醇为溶剂，以甲醇为溶剂，配制成浓度为1.6mgRes/ml、1mg黄酒/ml的溶液，再经稀释得到白藜芦醇浓度分别为50,100,200,400,800μg/ml，对应的黄酒浓度分别为31.25,62.51,125,250,500μg/ml的系列溶液；
d、白藜芦醇黄酒溶液（2mg:1ml）分别取2mg的白藜芦醇和1mg黄酒，以甲醇为溶剂，以甲醇为溶剂，配制成浓度为1.6mgRes/ml、1mg黄酒/ml的溶液，再经稀释得到白藜芦醇浓度分别为50,100,200,400μg/ml，对应的黄酒浓度分别为25,50,100,200μg/ml的系列溶液。
2、总还原力测定方法
移取1ml上述不同浓度样品溶液于5个不同的离心管中，依次加入2.5ml0.2mol/L磷酸缓冲溶液(pH=6.6)、2.5ml质量分数1%的K3Fe(CN)6溶液，50℃水浴保温20min，迅速冷却，再加入2.5ml质量分数10%的三氯乙酸溶液，以3000r/min离心10min。取2.5ml上清液，加入2.5ml蒸馏水和0.5ml质量分数0.1%的FeCl3溶液，以水调零于700nm处测定吸光度，每一次吸光值平行测定三次，取平均值；以吸光度的大小来表示其还原力的大小。
3、·OH自由基的清除作用测定方法
A1为样品组：反应体系中含20mmol/LH2O20.5ml，8mmol/LFeSO40.6ml，3mmol/L水杨酸-乙醇溶液2ml，不同浓度的样品溶液2ml，其中H2O2是最后加入并启动整个反应。37℃反应30min后流水冷却，加0.9ml蒸馏水，使得体系总体积为6ml，3000r/min离心10min，在510nm下测定吸光度。每一次吸光值平行测定三次，取平均值。
A0为空白组：以1ml蒸馏水代替不同浓度的样品溶液。
A2为对照组：以1ml蒸馏水代替水杨酸-乙醇溶液。
清除率=[A0-(A1-A2)]/A0×100%。
4、O2-·自由基的清除作用测定方法
采用邻苯三酚自氧化法测定取pH=8.2的0.05mol/LTris-HCl缓冲溶液4.5ml,不同浓度的样品溶液各4.2ml,混匀后，在25℃水浴中保温20min，取出后立即加入25℃水浴预热的3mmol/L的邻苯三酚0.3ml（3mmol/L的邻苯三酚以10mmol/L的HCL溶液配制），迅速摇匀后，325nm处每隔30s测定一次吸光度。计算线性范围内每分钟吸光度的增加。空白组以4.2ml蒸馏水代替样品溶液。每一次吸光值平行测定三次，取平均值。
ΔA0为空白组的吸光度增长率，ΔA为样品组的吸光度增长率。
O2-·自由基抑制率（%）=（ΔA0-ΔA）/ΔA0×100%。
5、DPPH·自由基的清除作用测定方法
取0.15mmol/L的DPPH乙醇（95%）溶液2ml，不同浓度的样品溶液2ml，混合震荡后，室温放置30min，在波长517nm处测的吸光值Ai；以蒸馏水代替样品溶液，测得吸光值A0；乙醇代替DPPH溶液，测得吸光值Aj。每一次吸光值平行测定三次，取平均值。
DPPH·自由基清除率（%）={1-(Ai-Aj/A0）}×100。
二、试验结果
1、总还原力测定实验数据与结论分析
由图1可见，黄酒自身的总还原力非常低，白藜芦醇黄酒复合配方、白藜芦醇自身都有一定的总还原力，并且与浓度成呈正相关。当白藜芦醇浓度相同时，白藜芦醇复配的总还原力比单独白藜芦醇总还原力有所提高。说明在总还原力方面，白藜芦醇与黄酒具有协同作用。
2、·OH自由基的清除作用
由图2可见，黄酒自身对·OH自由基具有一定的清除作用，保持黄酒浓度不变，测得白藜芦醇黄酒复合配方比单独黄酒的清除作用略强，但是两者的·OH自由基清除作用相差很小。可见白藜芦醇对复合配方的·OH自由基清除作用贡献不大。
由图3可见，白藜芦醇自身对·OH自由基具有一定的清除作用，在白藜芦醇浓度相同时，白藜芦醇黄酒复合配方的·OH自由基清除作用强于单独白藜芦醇的·OH自由基清除作用，并且当黄酒比例增大时，·OH自由基清除作用也随之增强。说明，在·OH自由基清除方面，黄酒的作用大于白藜芦醇，两者具有协同作用。
3、O2·自由基清除作用
由图4可见，黄酒的O2·自由基清除率与白藜芦醇黄酒复合配方的O2·自由基清除率比较可见，白藜芦醇对复合配方的O2·自由基清除作用贡献不大。
由图5可见，随着白藜芦醇浓度的增大，3种配方的O2·自由基清除率均有不同程度的增大，当白藜芦醇浓度增大到100μg/ml时，2种白藜芦醇黄酒复配的O2·自由基清除率均超过了白藜芦醇自身的O2·自由基清除率，并且随着黄酒比例的增大，O2·自由基清除率也增大。可见，黄酒对两者复配的O2·自由基清除作用有很大的贡献，两者具有协同效应。
4、DPPH·自由基清除作用
由图6可见，当黄酒浓度相同时，白藜芦醇黄酒复配的DPPH·自由基清除率明显高于黄酒自身的DPPH·自由基清除率。可见，白藜芦醇的添加有利于提高白藜芦醇黄酒复合配方的DPPH·自由基清除作用，两者具有协同效应。
由图7可见，两种白藜芦醇黄酒复合配方的DPPH·自由基清除率与白藜芦醇自身的清除率在趋势和数值上都没有明显差异，可见黄酒没有增强或减弱白藜芦醇的DPPH·自由基清除率的作用。
综述，富含白藜芦醇的房县黄酒能作为抗衰老功能食品。
实施例3富含白藜芦醇的房县黄酒的体内抗衰老活性研究
一、试验方法
1、抗衰老活性动物实验
选用12月龄雄性昆明小鼠，按血中MDA水平分组，随机分为1个老龄对照组和4个受试样品剂量组以及一个模型对照组，每组10只。另增设1个少龄对照组，选用8周龄雄性昆明小鼠，每组10只。试验前动物在试验环境下进行一周的环境适应，然后按照设定好的剂量，连续给各组小鼠灌胃给药30d。30d后饥饿过夜，给小鼠称重，眼底取血，并取脏器进行称重。
实验设白藜芦醇对照组（2个剂量组）、白藜芦醇黄酒复配组（2个剂量组）和一个少龄空白对照组及一个老龄空白对照组，并且设置一个阳性对照组。少龄空白对照组、老龄空白对照组每只小鼠按10mg生理盐水/kg的剂量灌胃。白藜芦醇高、低剂量组分别按每只小鼠20mgRes/kg、10mgRes/kg的剂量灌胃给药。白藜芦醇黄酒复配高、低剂量组每只小鼠分别按20mgRes/kg和10mg黄酒/kg、10mgReskg和10mg黄酒/kg的剂量灌胃给药。阳性对照组按10μg硒代半胱氨酸/kg的剂量灌胃给药。
2、富含白藜芦醇的房县黄酒对老龄小鼠体内生化指标影响的检测
总抗氧化能力（T-AOC）测定、超氧化物歧化酶（SOD）测定、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）测定、丙二醛（MDA）测定按照试剂盒说明书操作进行。
二、试验结果
体内抗氧化活性动物实验数据及结论分析
由表1可见，与老龄对照组相比，少龄组小鼠的胸腺指数明显要高出很多，其他给药组的小鼠胸腺指数均有不同程度提高。白藜芦醇高剂量组与黄酒白藜芦醇复配高剂量组小鼠胸腺指数均大于对应的低剂量组小鼠的胸腺指数，可以推测出小鼠胸腺指数的增长与白藜芦醇剂量呈正相关。白藜芦醇黄酒复配高、低剂量组小鼠的胸腺指数小于对应的白藜芦醇组小鼠胸腺指数，由此推测黄酒对白藜芦醇有一定的抑制作用。但总体上说，白藜芦醇黄酒复配有利于提高老龄小鼠胸腺指数的提高，由此可以推测白藜芦醇黄酒复配有利于提高老龄小鼠的免疫力。各组小鼠的脾脏指数规律不明显，与老龄组小鼠相比，阳性对照组以及白藜芦醇低剂量组、黄酒白藜芦醇复配低剂量的脾脏指数均有提高，少龄组、白藜芦醇高剂量组、与黄酒白藜芦醇复配高剂量组小鼠的脾脏指数均低于老龄对照组。其中白藜芦醇高剂量组、黄酒白藜芦醇复配高剂量组的脾脏指数分别低于对应的低剂量组，由此推断高剂量的白藜芦醇降低脾脏指数的作用更强，有利于提高老龄小鼠的脾脏免疫功能。
由表2可见，除黄酒白藜芦醇复配高剂量组小鼠的心脏指数稍有降低外，其他各组小鼠的心脏指数值没有大幅度变化。由此推断白藜芦醇与黄酒对老龄小鼠的心脏指数并没有太大影响。除少龄对照组的肝脏指数高于其他各组，各个给药组与老龄组的肝脏指数没有明显差别。由此推断，白藜芦醇与黄酒对老龄小鼠的肝脏指数无明显影响。少龄对照组的肾脏指数明显低于老龄组小鼠，白藜芦醇高剂量组肾脏指数高于老龄组，其他给药组小鼠的肾脏指数与老龄组无明显差异。白藜芦醇黄酒复配高、低剂量组的肾脏指数均低于对应的白藜芦醇高、低剂量组。由此推断白藜芦醇黄酒复配对老龄小鼠肾脏指数的提高作用强于单独白藜芦醇作用，两者具有协同效应。
与老龄对照组相比，白藜芦醇低剂量组、高剂量组小鼠血清中MDA含量明显降低，并且随着白藜芦醇浓度增大，MDA含量降低。白藜芦醇黄酒复配高、低剂量组小鼠血清中MDA含量高于老龄对照组小鼠血清中MDA含量。由此推断，白藜芦醇有利于降低老龄小鼠内MDA含量，但黄酒却起到了反作用，因此白藜芦醇黄酒复合配方不利于降低老龄小鼠血清中的MDA含量。
老龄组小鼠的GSH-PX活性最低，少龄对照组、全部给药组GSH-PX活性均明显高于老龄组。白藜芦醇黄酒复配高、低剂量组GSH-PX活性略高于白藜芦醇高、低剂量组。由此推断白藜芦醇黄酒复配提高GSH-PX活性效果强于单独白藜芦醇，黄酒与白藜芦醇存在协同效应。
各给药组小鼠血清的T-AOC值明显高于少龄对照组与老龄组小鼠的T-AOC值。由此可以推断白藜芦醇有利于提高T-AOC值，但是白藜芦醇黄酒复配组小鼠的T-AOC值明显低于白藜芦醇组。我们推测虽然黄酒白藜芦醇黄酒复合配方有利于提高小鼠T-AOC值的效果。
与老龄组相比，少龄组与给药组小鼠血清的SOD活性都有很明显的提高。白藜芦醇黄酒复配高、低剂量组SOD活性略低于白藜芦醇高、低剂量组。由此可以推断白藜芦醇黄酒复配有利于提高小鼠血清的SOD活性。
综述，富含白藜芦醇的房县黄酒能作为抗氧化功能食品。
本发明中，“mL”及“ml”是毫升的单位符号。
Claims (4)
1.一种富含白藜芦醇的房县黄酒，其特征在于：含有50-200mg白藜芦醇/100mL房县黄酒。
2.一种富含白藜芦醇的房县黄酒的制备方法，其特征在于：将来源于传统中药材虎杖中的98-99%纯度的白藜芦醇，直接溶解在一定量的房县黄酒中，制得含有50-200mg白藜芦醇/100mL房县黄酒。
3.一种富含白藜芦醇的房县黄酒作为抗衰老功能食品的用途。
4.一种富含白藜芦醇的房县黄酒作为抗氧化功能食品的用途。
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