CN105348357A - 一种玛咖皂素、其制备方法及应用 - Google Patents
一种玛咖皂素、其制备方法及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105348357A CN105348357A CN201510882525.7A CN201510882525A CN105348357A CN 105348357 A CN105348357 A CN 105348357A CN 201510882525 A CN201510882525 A CN 201510882525A CN 105348357 A CN105348357 A CN 105348357A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- agate coffee
- saponin
- preparation
- extraction
- lepidium meyenii
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
本发明涉及天然产物有效成分的分离纯化技术领域，具体涉及一种玛咖皂素、其制备方法及应用，所述制备方法包括以下步骤：(1)将玛咖粉碎、浸泡、酸解，得到玛咖酸解混合物；(2)将步骤(1)得到的玛咖酸解混合物分离，得到上清液和玛咖残渣I；(3)将步骤(2)得到的玛咖残渣I干燥，提取后固液分离，得到残渣II和玛咖提取液；(4)将步骤(3)得到的玛咖提取液浓缩、萃取、结晶，得到高纯度的玛咖皂素。本发明所制备的玛咖皂素纯度高，无需昂贵仪器、设备和专门的色谱分离设备，可在短时间内制备大批量样品，极大地提高了玛咖皂素的制备效率，便于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及天然产物有效成分的分离纯化技术领域，具体涉及一种玛咖皂素、其制备方法及应用，特别涉及一种弱极性有机溶剂提取、强极性有机溶剂萃取、结晶、制备高纯度玛咖皂素的方法及其应用。
背景技术
皂素是一种性能优良的天然非离子表面活性剂，不仅具有良好的乳化、发泡、分散、渗透、润滑等活性作用。许多含皂素类成分的生药，如远志、桔梗、沙参等有祛痰止咳的功效；三萜皂素多具抑菌消炎作用，如齐墩果酸；有的皂素的生物活性是多方面的，如柴胡皂素有镇静、止痛、解热、镇咳和消炎等作用；茶皂素有明显抗炎、镇痛、抗渗透、抗菌、化痰、止咳等作用,而且有防止高血压、高血糖及抗癌作用。剑麻皂素具有抗炎、镇痛、增强免疫、降低血糖作用。个别皂素具有特殊的生物活性，如甘草次酸具有促肾上腺皮质激素(ACTH)样作用；而薯蓣皂素元等是是合成甾体激素类药物的医药中间体和重要原料，广泛应用于肾上腺皮质激素、性激素及蛋白同化激素三大类200多种药物的制造。
玛咖(LepidiummeyeniiWalp.)是十字花科独行菜属草本植物，原产于秘鲁海拔3500m-4450m的安第斯山区，高营养价值、合理的营养结构以及多种活性次级代谢产物使玛咖具有多种营养保健作用和药理功效。目前，玛咖中已经发现的次级代谢产物主要有生物碱、芥子油苷、甾醇等，而具有较高活性的玛咖皂素的研究较少。文献报道，玛咖具有促进生长，缓解更年期综合症的作用，喂食玛咖后，大银板鱼的体重、比生长速率、蛋白质功效比值、表观蛋白质净利用度和瞬间摄食量明显高于对照组；食物中添加5％以上的玛咖可以提高刚孵化虹鳟鱼的生长速率；玛咖还可以调节卵巢切除后大鼠的血脂和骨质代谢。玛咖皂素可以作为多种激素(如甾体激素)的合成前体，调节体内代谢，因此具有一定的激素样作用。
目前生产的皂素产品纯度相对较低，工艺复杂，严重限制了皂素的应用范围。CN102351938B公开了一种先后采用陶瓷膜除杂、超滤膜纯化、纳滤膜浓缩两次大孔树脂吸附，最终经喷雾干燥得到茶皂素，且皂素纯度仅为95％；该专利过程复杂，且得到的皂素的纯度较低。CN103242418A公开了将黄姜进行发酵、液化和糖化得到糖化醪；糖化醪通过压榨和筛分得到纤维渣和滤液，滤液进行膜分离得到膜浓缩液和糖液，将纤维渣烘干后进行超声萃取，得萃取浓缩液，将膜浓缩液和萃取浓缩液再进行酸解，得到的皂素水解物再用汽油提取皂素。该工艺虽然提高了皂素收率，但制备工艺复杂，所得皂素纯度低，难于工业化生产。
发明内容
为了克服现有技术的上述缺点，本发明提供一种玛咖皂素、其制备方法及应用，所述制备方法工艺简单、生产成本低、生产过程中皂素损失小、回收率高，能够一步实现皂素与色素物质的分离，得到高纯度玛咖皂素。
为达上述目的，本发明采用如下技术方案：
一方面，本发明提供了一种玛咖皂素的制备方法，包括以下步骤：
(1)将玛咖粉碎、浸泡、酸解，得到玛咖酸解混合物；
(2)将步骤(1)得到的玛咖酸解混合物分离，得到上清液和玛咖残渣I；
(3)将步骤(2)得到的玛咖残渣I干燥，提取后固液分离，得到残渣II和玛咖提取液；
(4)将步骤(3)得到的玛咖提取液浓缩、萃取、结晶，得到高纯度的玛咖皂素。
优选地，步骤(1)所述的玛咖包括玛咖果、玛咖片、玛咖粉、玛咖水提残渣、玛咖醇水溶液提取残渣或玛咖醇提残渣中的任意一种或至少两种的混合。
优选地，步骤(1)所述玛咖粉碎的粒度为10～120目，例如可以是10目、11目、12目、15目、20目、30目、40目、50目、60目、70目、80目、90目、100目、110目或120目，优选为10～80目，进一步优选为20～70目。
优选地，步骤(1)所述浸泡的时间为1～60h，例如可以是1h、2h、3h、4h、5h、10h、15h、18h、20h、25h、28h、30h、33h、35h、38h、40h、42h、45h、48h、50h、55h或60h，优选为1～48h，进一步优选为5～30h。
优选地，步骤(1)所述浸泡的温度为20～40℃，例如可以是20℃、21℃、22℃、23℃、25℃、26℃、28℃、30℃、31℃、32℃、35℃、36℃、38℃或40℃，优选为25～35℃。
优选地，步骤(1)所述酸解的溶液为甲酸、乙酸或盐酸中的任意一种或至少两种的混合。
优选地，步骤(1)所述酸解溶液的摩尔浓度为1～10mol/L，例如可以是1mol/L、2mol/L、3mol/L、4mol/L、5mol/L、6mol/L、7mol/L、8mol/L、9mol/L或10mol/L，优选为1～8mol/L，进一步优选为1～5mol/L。
优选地，步骤(1)所述酸解的时间为1～15h，例如可以是1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h、11h、12h、13h、14h或15h，优选为3～12h，进一步优选为5～10h。
优选地，步骤(2)所述的分离为过滤和/或离心。
优选地，步骤(3)所述的干燥为鼓风干燥、真空干燥、冷冻干燥、沸腾干燥或微波干燥中的任意一种或至少两种的组合，优选为冷冻干燥。
优选地，步骤(3)所述提取的方式为索氏提取、超声提取、微波提取或搅拌提取中的任意一种或至少两种的组合，优选为超声提取。
优选地，步骤(3)所述的提取采用弱极性溶剂提取。
优选地，所述弱极性溶剂为石油醚、氯仿、正己烷、苯、乙酸乙酯或三氯甲烷中的任意一种或至少两种的混合，优选为氯仿。
优选地，步骤(3)所述的固液分离为过滤和/或离心。
优选地，步骤(4)所述萃取采取强极性有机溶剂萃取。
优选地，所述强极性有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、丙酮中的任意一种或至少两种的混合。
优选地，步骤(4)所述结晶的温度为-20～10℃，例如可以是-20℃、-19℃、-18℃、-17℃、-15℃、-13℃、-10℃、-8℃、-6℃、-5℃、-3℃、-1℃、0℃、1℃、5℃、6℃、8℃或10℃，优选为-15～5℃。
优选地，所述方法还包括将步骤(3)得到的残渣II制备成膳食纤维。
优选地，所述制备成膳食纤维包括以下步骤：将步骤(3)得到的残渣II酶解、醇沉，得到膳食纤维。
优选地，所述酶解的具体步骤为将残渣II依次加入α-淀粉酶酶解，蛋白酶酶解，淀粉葡萄糖苷酶酶解。
优选地，所述α-淀粉酶酶解的温度为70～95℃，例如可以是70℃、71℃、72℃、75℃、76℃、78℃、80℃、82℃、85℃、88℃、90℃、91℃、93℃或95℃，时间为30～40min，例如可以是30min、31min、32min、33min、34min、35min、36min、37min、38min、39min或40min。
优选地，所述蛋白酶酶解的温度为55～65℃，例如可以是55℃、56℃、57℃、58℃、59℃、60℃、61℃、62℃、63℃、64℃或65℃，时间为30～40min，例如可以是30min、31min、32min、33min、34min、35min、36min、37min、38min、39min或40min。
优选地，所述淀粉葡萄糖苷酶酶解的温度为60～65℃，例如可以是60℃、61℃、62℃、63℃、64℃或65℃，时间为30～40min，例如可以是30min、31min、32min、33min、34min、35min、36min、37min、38min、39min或40min。
优选地，所述酶解后得到酶解液，所述醇沉加入的溶剂为乙醇溶液，加入的乙醇溶液：酶解液为(3～4.5)：1，例如可以是3：1、3.5：1、4：1或4.5：1，优选为4：1。
第二方面，本发明提供一种如第一方面所述制备方法制备得到的玛咖皂素。
第三方面，本发明提供一种组合物，所述组合物包括第二方面所述的玛咖皂素。
第四方面，本发明提供一种如第二方所述的玛咖皂素和/或第三方面所述的组合物在制备药物中的应用。
优选地，所述药物用于抗菌消炎、调节血糖、保肝护肝或调节生物激素中的任意一种或至少两种的组合。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
(1)本发明先使用弱极性有机溶剂直接从皂素水解液中分离出皂素，可以在室温下进行分离操作，能耗少，并可以一步实现皂素与色素、杂质的分离，减少后续皂素的分离纯化步骤，便于规模化的工业生产和应用；
(2)本发明所制备的玛咖皂素纯度高，可达到97％以上，仅需用强极性有机溶剂进行萃取，结晶，无需昂贵仪器、设备和专门的色谱分离设备，可在短时间内制备大批量样品，极大地提高了玛咖皂素的制备效率；
(3)本发明制备方法实现了玛咖中皂素、可溶性膳食纤维和不溶性膳食纤维的综合开发利用。
具体实施方式
为更进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合本发明的优选实施例来进一步说明本发明的技术方案，但本发明并非局限在实施例范围内。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中玛咖皂素纯度的检测采用香草醛-高氯酸法，检测步骤如下：采用香草醛-高氯酸法进行皂苷标准曲线的绘制：用甲醇将菝葜皂苷元配制成0.1-1.0mg/mL的溶液。吸取400μL不同浓度的菝葜皂苷元标准品，加入5％的香草醛-冰醋酸0.2mL，高氯酸0.8mL，70℃水浴15min后，取出，冰浴，加冰醋酸5mL，于535nm测定，然后以菝葜皂苷元的浓度为横坐标，以A535为纵坐标，进行标准曲线的绘制。
实施例1玛咖果中皂素的制备
所述方法包括以下步骤：
(1)将玛咖果粉碎，过20目筛，精确称取200g，加入300mL蒸馏水，30℃浸泡20h，然后加入乙酸，乙酸溶液的终浓度为2mol/L，酸解8h；
(2)将玛咖酸解混合物离心，得上清液和玛咖残渣I；
(3)将玛咖残渣I采用鼓风干燥进行干燥，然后加入750mL氯仿进行微波提取，得到残渣II和玛咖提取液；
(4)将玛咖提取液浓缩，加入乙醇进行萃取，过滤，-20℃结晶，得到玛咖皂素；
(5)将残渣II依次加入α-淀粉酶95℃30min，蛋白酶60℃30min，淀粉葡萄糖苷酶60℃30min，进行酶解，然后加入4倍体积的无水乙醇，醇沉，得到膳食纤维34g。
取玛咖皂素结晶用甲醇溶解后，取50μL，采用香草醛-高氯酸法，于535nm处测定，经计算，玛咖皂素的纯度为97.2％。
实施例2玛咖片中皂素的制备
所述方法包括以下步骤：
(1)将玛咖片粉碎，过40目筛，精确称取500g，加入100mL蒸馏水，室温浸泡1h，然后加入盐酸，盐酸溶液的终浓度为4mol/L，酸解5h；
(2)将玛咖酸解混合物离心，得上清液和玛咖残渣I；
(3)将玛咖残渣I采用真空干燥进行干燥，然后加入2000mL石油醚(沸程60-90℃)进行超声提取，得到残渣II和玛咖提取液；
(3)将玛咖提取液浓缩，加入甲醇进行萃取，过滤，-10℃结晶，得到玛咖皂素；
(4)将残渣II依次加入α-淀粉酶90℃30min，蛋白酶60℃30min，淀粉葡萄糖苷酶60℃30min，进行酶解，然后加入3倍体积的无水乙醇，醇沉，得到膳食纤维100g。
取玛咖皂素结晶用甲醇溶解后，取50μL，采用香草醛-高氯酸法，于535nm处测定，经计算，玛咖皂素的纯度为98.0％。
实施例3玛咖粉中皂素的制备
所述方法包括以下步骤：
(1)将玛咖粉过10目筛，精确称取100g，加入300mL蒸馏水，37℃浸泡60h，然后加入甲酸，甲酸溶液的终浓度为5mol/L，酸解7h；
(2)将玛咖酸解混合物离心，得上清液和玛咖残渣I；
(3)将玛咖残渣I采用冷冻干燥进行干燥，然后加入500mL乙酸乙酯进行搅拌提取，得到残渣II和玛咖提取液；
(3)将玛咖提取液浓缩，加入乙腈进行萃取，过滤，0℃结晶，得到玛咖皂素；
(4)将残渣II依次加入α-淀粉酶90℃30min，蛋白酶60℃35min，淀粉葡萄糖苷酶60℃30min，进行酶解，然后加入4倍体积的无水乙醇，醇沉，得到膳食纤维18g。
取玛咖皂素结晶用甲醇溶解后，取50μL，采用香草醛-高氯酸法，于535nm处测定，经计算，玛咖皂素的纯度为98.5％。
实施例4玛咖水提残渣中皂素的制备
所述方法包括以下步骤：
(1)将玛咖水提残渣粉碎，过80目筛，精确称取500g，加入120mL蒸馏水，30℃浸泡10h，然后加入甲酸，甲酸溶液的终浓度为1mol/L，酸解10h；
(2)将玛咖酸解混合物离心，得上清液和玛咖残渣I；
(3)将玛咖残渣I采用沸腾干燥进行干燥，然后加入125mL苯进行索氏提取，得到残渣II和玛咖提取液；
(3)将玛咖提取液浓缩，加入丙酮进行萃取，过滤，5℃结晶，得到玛咖皂素；
(4)将残渣II依次加入α-淀粉酶90℃30min，蛋白酶60℃35min，淀粉葡萄糖苷酶60℃35min，进行酶解，然后加入3倍体积的无水乙醇，醇沉，得到膳食纤维206g。
取玛咖皂素结晶用甲醇溶解后，取50μL，采用香草醛-高氯酸法，于535nm处测定，经计算，玛咖皂素的纯度为99.1％。
实施例5玛咖醇提残渣中皂素的制备
所述方法包括以下步骤：
(1)将玛咖醇提残渣粉碎，过60目筛，精确称取150g，加入600mL蒸馏水，40℃浸泡5h，然后加入乙酸，乙酸溶液的终浓度为3mol/L，酸解15h；
(2)将玛咖酸解混合物离心，得上清液和玛咖残渣I；
(3)将玛咖残渣I采用微波干燥进行干燥，然后加入450mL正己烷进行微波提取，得到残渣II和玛咖提取液；
(3)将玛咖提取液浓缩，加入甲醇进行萃取，过滤，10℃结晶，得到玛咖皂素；
(4)将残渣II依次加入α-淀粉酶90℃35min，蛋白酶55℃35min，淀粉葡萄糖苷酶60℃35min，进行酶解，然后加入4.5倍体积的无水乙醇，醇沉，得到膳食纤维70g。
取玛咖皂素结晶用甲醇溶解后，取50μL，采用香草醛-高氯酸法，于535nm处测定，经计算，玛咖皂素的纯度为98.2％。
实施例6玛咖醇提残渣中皂素的制备
所述方法包括以下步骤：
(1)将玛咖醇提残渣粉碎，过60目筛，精确称取150g，加入600mL蒸馏水，40℃浸泡5h，然后加入乙酸，乙酸溶液的终浓度为8mol/L，酸解12h；
(2)将玛咖酸解混合物离心，得上清液和玛咖残渣I；
(3)将玛咖残渣I采用微波干燥进行干燥，然后加入450mL正己烷进行微波提取，得到残渣II和玛咖提取液；
(3)将玛咖提取液浓缩，加入甲醇进行萃取，过滤，10℃结晶，得到玛咖皂素；
(4)将残渣II依次加入α-淀粉酶90℃35min，蛋白酶55℃35min，淀粉葡萄糖苷酶60℃35min，进行酶解，然后加入4.5倍体积的无水乙醇，醇沉，得到膳食纤维70g。
取玛咖皂素结晶用甲醇溶解后，取50μL，采用香草醛-高氯酸法，于535nm处测定，经计算，玛咖皂素的纯度为98.2％。
实施例7玛咖醇水溶液提残渣中皂素的制备
所述方法包括以下步骤：
(1)将玛咖醇水溶液提残渣粉碎，过40目筛，精确称取80g，加入200mL蒸馏水，室温浸泡15h，然后加入乙酸，乙酸溶液的终浓度为10mol/L，酸解5h；
(2)将玛咖酸解混合物离心，得上清液和玛咖残渣I；
(3)将玛咖残渣I采用沸腾干燥进行干燥，然后加入160mL乙酸乙酯进行索氏提取，得到残渣II和玛咖提取液；
(3)将玛咖提取液浓缩，加入乙醇进行萃取，过滤，5℃结晶，得到玛咖皂素；
(4)将残渣II依次加入α-淀粉酶95℃30min，蛋白酶65℃35min，淀粉葡萄糖苷酶65℃35min，进行酶解，然后加入3.5倍体积的无水乙醇，醇沉，得到膳食纤维12g。
取玛咖皂素结晶用甲醇溶解后，取50μL，采用香草醛-高氯酸法，于535nm处测定，经计算，玛咖皂素的纯度为97.5％。
实施例8玛咖果中皂素的制备
所述方法包括以下步骤：
(1)将玛咖果粉碎，过80目筛，精确称取2000g，加入6000mL蒸馏水，28℃浸泡40h，然后加入甲酸，甲酸溶液的终浓度为2.5mol/L，酸解8h；
(2)将玛咖酸解混合物离心，得上清液和玛咖残渣I；
(3)将玛咖残渣I采用微波干燥进行干燥，然后加入9000mL苯进行微波提取，得到残渣II和玛咖提取液；
(3)将玛咖提取液浓缩，加入乙腈进行萃取，过滤，0℃结晶，得到玛咖皂素；
(4)将残渣II依次加入α-淀粉酶95℃30min，蛋白酶62℃30min，淀粉葡萄糖苷酶60℃30min，进行酶解，然后加入3.5倍体积的无水乙醇，醇沉，得到膳食纤维440g。
取玛咖皂素结晶用甲醇溶解后，取50μL，采用香草醛-高氯酸法，于535nm处测定，经计算，玛咖皂素的纯度为98.8％。
实施例9玛咖水提残渣中皂素的制备
所述方法包括以下步骤：
(1)将玛咖水提残渣粉碎，过20目筛，精确称取1000g，加入5000mL蒸馏水，35℃浸泡25h，然后加入盐酸，盐酸溶液的终浓度为4.5mol/L，酸解10h；
(2)将玛咖酸解混合物离心，得上清液和玛咖残渣I；
(3)将玛咖残渣I采用鼓风干燥进行干燥，然后加入2500mL石油醚(沸程60-90℃)进行微波提取，得到残渣II和玛咖提取液；
(3)将玛咖提取液浓缩，加入丙酮进行萃取，过滤，10℃结晶，得到玛咖皂素；
(4)将残渣II依次加入α-淀粉酶70℃30min，蛋白酶60℃30min，淀粉葡萄糖苷酶60℃30min，进行酶解，然后加入3倍体积的无水乙醇，醇沉，得到膳食纤维240g。
取玛咖皂素结晶用甲醇溶解后，取50μL，采用香草醛-高氯酸法，于535nm处测定，经计算，玛咖皂素的纯度为99.0％。
实施例10玛咖粉中皂素的制备
所述方法包括以下步骤：
(1)将玛咖粉过60目筛，精确称取5000g，加入11250mL蒸馏水，32℃浸泡35h，然后加入乙酸，乙酸溶液的终浓度为1mol/L，酸解6h；
(2)将玛咖酸解混合物离心，得上清液和玛咖残渣I；
(3)将玛咖残渣I采用微波干燥进行干燥，然后加入16250mL正己烷进行超声提取，得到残渣II和玛咖提取液；
(3)将玛咖提取液浓缩，加入乙醇进行萃取，过滤，4℃结晶，得到玛咖皂素；
(4)将残渣II依次加入α-淀粉酶80℃30min，蛋白酶60℃30min，淀粉葡萄糖苷酶60℃30min，进行酶解，然后加入4倍体积的无水乙醇，醇沉，得到膳食纤维1000g。
取玛咖皂素结晶用甲醇溶解后，取50μL，采用香草醛-高氯酸法，于535nm处测定，经计算，玛咖皂素的纯度为98.0％。
实施例11玛咖皂素的体外抗菌作用
取实施例6制备的玛咖皂素配成50mg/mL，100mg/mL和200mg/mL的皂素溶液，采用KB法进行体外抗菌实验。
取生长24h的实验菌单个菌落接种于M-H液体培养基中，培养6h后稀释，计数，金黄色葡萄球菌浓度为5.4×105个细胞/mL，大肠杆菌浓度为1.3×105个细胞/mL，用棉拭子沾取菌液涂于M-H琼脂平板，待菌液浸入培养基后，将浸泡于不同浓度玛咖皂素溶液的标准纸片贴于平板中间，置37℃培养18-24h，观察纸片周围有无抑菌圈。
结果显示，质量浓度100mg/mL的石榴皮总多酚对金葡菌抑菌圈直径为9.6mm，对大肠杆菌抑菌圈直径为7.1mm。
实施例12玛咖皂素对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
取实施例8制备的玛咖皂素分别配成15mg/mL和30mg/mL的皂素溶液。
取昆明种小鼠40只，雌雄各半，体重18-22g，随机均分4组：模型组、阳性药物组、玛咖皂素低剂量组和玛咖皂素高剂量组。
各组小鼠右耳涂药1d1次，模型组给等体积蒸馏水，阳性药物为京万红，连续5d，于末次给药后1.5h，将20μL二甲苯均匀涂抹于各组小鼠右耳廓两面致炎，以左耳作对照。30min后脱颈椎处死小鼠，用直径6mm打孔器分别在左右耳对称部位打下圆形耳片，精密称质量，计算肿胀度和肿胀抑制率。
小鼠耳廓肿胀度以每鼠左右耳片质量之差的均值表示，实验结果如表1所示。
表1玛咖皂素对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
| 组别 | 剂量 | 动物数(只) | 肿胀度(mg) | 抑制率(％) |
| 模型组 | 水 | 10 | 7.6±1.8 | |
| 阳性药物组 | 京万红 | 10 | 2.6±1.0 | 65.79* |
| 玛咖皂素低剂量组 | 15mg/ml | 10 | 4.7±1.4 | 38.16* |
| 玛咖皂素高剂量组 | 30mg/ml | 10 | 3.5±1.9 | 53.95* |
注：与模型组比较，P＜0.05
可见，玛咖皂素对二甲苯致小鼠耳肿胀有明显的抑制作用，且随着玛咖皂素浓度的增大抑制的作用也增强。
实施例13玛咖皂素的调节血糖作用
取实施例10制备的玛咖皂素配制2mg/mL，4mg/mL，6mg/mL，8mg/mL和10mg/mL的皂素溶液。
在75cm2细胞培养瓶中，培养Caco-2细胞至贴壁率80-90％，然后将细胞接种到96孔板中，接种浓度104/孔，培养过夜。
将50μL不同浓度的皂素溶液加入到96孔板中，同时加入底物麦芽糖，培养24h后，用葡萄糖氧化酶试剂盒检测每个孔中的葡萄糖含量，实验结果如表2所示。
表2玛咖皂素对α-葡萄糖苷酶的抑制效果
| 皂素浓度(mg/mL) | 抑制率(％) |
| 2 | 28.4 |
| 4 | 36.5 |
| 6 | 43.1 |
| 8 | 48.7 |
| 10 | 52.6 |
可见，玛咖皂素对α-葡萄糖苷酶具有抑制效果，且随着玛咖皂素浓度的增大，抑制效果增强。
实施例14玛咖皂素的保肝护肝作用
取实施例4制备的玛咖皂素配制50μg/mL，100μg/mL，200μg/mL和400μg/mL的皂素溶液。
在96孔板中加入100μL(约1×104)HepG2细胞悬液，然后放在培养箱预培养(37℃，5％CO2)，向培养板中加入培养基或含有不同浓度皂素样品的培养基，再继续培养16h。
用0.8mol/L酒精损伤6h后，向每孔加入10uL的CCK-8溶液，将培养板在培养箱内孵育1h后，用酶标仪测定在450nm处的吸光度，实验结果如表3所示。
细胞存活率(％)＝(加药细胞OD值/对照细胞OD值)×100％
表3玛咖皂素对HepG2的保护效果
| 皂素浓度(μg/mL) | 细胞存活率(％) |
| 50 | 102.80 |
| 100 | 110.15 |
| 200 | 118.46 |
| 400 | 132.58 |
可见，玛咖皂素对HepG2的具有保护作用，且随着玛咖皂素浓度的增加，细胞存活率增大，保护效果增强。
综上所述，本发明所制备的玛咖皂素纯度高，可达到97％以上，且制备的玛咖皂素具有体外抗菌、抑制二甲苯致小鼠耳肿胀的效果、抑制α-葡萄糖苷酶的效果和提高HepG2存活率的效果。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
Claims (10)
1.一种玛咖皂素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将玛咖粉碎、浸泡、酸解，得到玛咖酸解混合物；
(2)将步骤(1)得到的玛咖酸解混合物分离，得到上清液和玛咖残渣I；
(3)将步骤(2)得到的玛咖残渣I干燥，提取后固液分离，得到残渣II和玛咖提取液；
(4)将步骤(3)得到的玛咖提取液浓缩、萃取、结晶，得到高纯度的玛咖皂素。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的玛咖包括玛咖果、玛咖片、玛咖粉、玛咖水提残渣、玛咖醇水溶液提取残渣或玛咖醇提残渣中的任意一种或至少两种的混合；
优选地，步骤(1)所述玛咖粉碎的粒度为10～120目，优选为10～80目，进一步优选为20～70目；
优选地，步骤(1)所述浸泡的时间为1～60h，优选为1～48h，进一步优选为5-30h；
优选地，步骤(1)所述浸泡的温度为20～40℃，优选为25～35℃。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述酸解的溶液为甲酸、乙酸或盐酸中的任意一种或至少两种的混合；
优选地，步骤(1)所述酸解溶液的摩尔浓度为1～10mol/L，优选为1～8mol/L，进一步优选为1～5mol/L；
优选地，步骤(1)所述酸解的时间为1～15h，优选为3～12h，进一步优选为5～10h；
优选地，步骤(2)所述的分离为过滤和/或离心。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的干燥为鼓风干燥、真空干燥、冷冻干燥、沸腾干燥或微波干燥中的任意一种或至少两种的组合，优选为冷冻干燥；
优选地，步骤(3)所述提取的方式为索氏提取、超声提取、微波提取或搅拌提取中的任意一种或至少两种的组合，优选为超声提取；
优选地，步骤(3)所述的提取采用弱极性溶剂提取；
优选地，所述弱极性溶剂为石油醚、氯仿、正己烷、苯、乙酸乙酯或三氯甲烷中的任意一种或至少两种的混合，优选为氯仿；
优选地，步骤(3)所述的固液分离为过滤和/或离心。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述萃取采取强极性有机溶剂萃取；
优选地，所述强极性有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、丙酮中的任意一种或至少两种的混合；
优选地，步骤(4)所述结晶的温度为-20～10℃，优选为-15～5℃。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述方法还包括将步骤(3)得到的残渣II制备成膳食纤维；
优选地，所述制备成膳食纤维包括以下步骤：将步骤(3)得到的残渣II酶解、醇沉，得到膳食纤维；
优选地，所述酶解的具体步骤为将残渣II依次加入α-淀粉酶酶解，蛋白酶酶解，淀粉葡萄糖苷酶酶解；
优选地，所述α-淀粉酶酶解的温度为70～95℃，时间为30～40min；
优选地，所述蛋白酶酶解的温度为55～65℃，时间为30～40min；
优选地，所述淀粉葡萄糖苷酶酶解的温度为60～65℃，时间为30～40min。
7.一种如权利要求1-6中任一项所述的制备方法制备得到的玛咖皂素。
8.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括权利要求7所述的玛咖皂素。
9.如权利要求7所述的玛咖皂素和/或权利要求8所述的组合物在制备药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述药物用于抗菌消炎、调节血糖、保肝护肝或调节生物激素中的任意一种或至少两种的组合。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510882525.7A CN105348357B (zh) | 2015-12-03 | 2015-12-03 | 一种玛咖皂素、其制备方法及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510882525.7A CN105348357B (zh) | 2015-12-03 | 2015-12-03 | 一种玛咖皂素、其制备方法及应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105348357A true CN105348357A (zh) | 2016-02-24 |
| CN105348357B CN105348357B (zh) | 2017-06-09 |
Family
ID=55324438
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510882525.7A Active CN105348357B (zh) | 2015-12-03 | 2015-12-03 | 一种玛咖皂素、其制备方法及应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105348357B (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6267995B1 (en) * | 1999-03-03 | 2001-07-31 | Pure World Botanicals, Inc. | Extract of Lepidium meyenii roots for pharmaceutical applications |
| CN1357370A (zh) * | 2001-12-20 | 2002-07-10 | 华中科技大学 | 玛咖有效成分提取方法 |
| CN1858045A (zh) * | 2005-05-06 | 2006-11-08 | 天津科技大学 | 香椿老叶黄酮与皂甙的提取方法 |
| CN101837004A (zh) * | 2010-05-28 | 2010-09-22 | 大连医科大学 | 薯蓣皂苷在制备肝保护药物制剂中的应用 |
| CN103242418A (zh) * | 2013-04-24 | 2013-08-14 | 竹溪创艺皂素有限公司 | 一种黄姜皂素的清洁生产工艺方法 |
-
2015
- 2015-12-03 CN CN201510882525.7A patent/CN105348357B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6267995B1 (en) * | 1999-03-03 | 2001-07-31 | Pure World Botanicals, Inc. | Extract of Lepidium meyenii roots for pharmaceutical applications |
| CN1357370A (zh) * | 2001-12-20 | 2002-07-10 | 华中科技大学 | 玛咖有效成分提取方法 |
| CN1858045A (zh) * | 2005-05-06 | 2006-11-08 | 天津科技大学 | 香椿老叶黄酮与皂甙的提取方法 |
| CN101837004A (zh) * | 2010-05-28 | 2010-09-22 | 大连医科大学 | 薯蓣皂苷在制备肝保护药物制剂中的应用 |
| CN103242418A (zh) * | 2013-04-24 | 2013-08-14 | 竹溪创艺皂素有限公司 | 一种黄姜皂素的清洁生产工艺方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 尹子娟: "《玛咖的营养成分及功效研究进展》", 《云南农业科技》 * |
| 王丽卫: "《丽江产玛咖指纹图谱分析及其活性组分提取分离研究》", 《万方博士学位论文数据库》 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105348357B (zh) | 2017-06-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101747400A (zh) | 具抗肿瘤活性的羊毛甾烷型三萜化合物及制备方法和应用 | |
| CN111700270A (zh) | 一种富含稀有人参皂苷Rg3、Rh2、Rg5保健饮品的制备工艺 | |
| Chawla et al. | A review of chemistry and biological activities of the genus Aerva--a desert plant | |
| CN101185671B (zh) | 从核桃树皮中提取的抗肿瘤药物及其制备方法 | |
| Bioltif et al. | A chemical overview of Azanza garckeana | |
| CN107714794B (zh) | 俄色提取物片剂及其制备方法 | |
| CN101113430A (zh) | 利用竹节参细胞培养和生物转化技术获得竹节参次生代谢产物的方法 | |
| CN103961534A (zh) | 一种含虫草多糖生物制剂的制备方法 | |
| CN109287665A (zh) | 一种银杏酚酸-阿维菌素复合杀虫剂及其制备方法 | |
| CN102764294B (zh) | 一种祛痰止咳组合物及其制备方法 | |
| CN103360452A (zh) | 甜瓜蒂四环三萜葫芦素类化合物的制备和应用 | |
| CN103932179B (zh) | 一种缓解压力及护肝的保健食品及其二步发酵制备方法 | |
| CN103232518B (zh) | 一种新海蓬子降三萜类皂苷化合物及其制备方法和用途 | |
| CN105901738A (zh) | 一种发酵葡萄提取物及其制备方法与含其制剂 | |
| CN102030809B (zh) | 一种具有抗菌功效的茶皂苷元衍生物及其制备方法与应用 | |
| CN105348357A (zh) | 一种玛咖皂素、其制备方法及应用 | |
| CN107982292A (zh) | 锡叶藤及其提取物在制备治疗和/或预防肝癌药物方面的应用 | |
| CN105192820A (zh) | 一种降血脂蛹虫草多糖饮料及其制备方法 | |
| CN111297847B (zh) | 九翅豆蔻提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂药物中的应用 | |
| CN103494291A (zh) | 一种抗疲劳饮料及其制备方法 | |
| CN103285082B (zh) | 一种用于治疗妇科炎症的药物组合物 | |
| CN110101075A (zh) | 一种富含茶藨子叶状层菌的保健口服液 | |
| CN102295677A (zh) | 北美盐角草中一种新的降三萜皂苷及其制备方法和用途 | |
| CN101390979B (zh) | 枳椇子提取物及其制备方法与在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN108143754A (zh) | 锡叶藤及其提取物在制备治疗和/或预防肿瘤药物方面的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |