CN101390979B - 枳椇子提取物及其制备方法与在制备抗肿瘤药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种枳椇子提取物及其制备方法与在制备抗肿瘤药物中的应用。该方法是用水和/或有机溶剂作为提取剂,从枳椇子中提取得到。所用有机溶剂为甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯。回流提取时的温度为60-100℃;提取次数至少为1次,每次提取时间为1-4小时。该方法工艺简单、成本低廉,所得提取物可有效抑制人肿瘤细胞的生长,如人肝癌、结肠癌或肺癌细胞。本发明提供的枳椇子提取物对制备抗肿瘤药物,尤其是抗肝癌、结肠癌药物具有重要的意义。
Description
技术领域
本发明涉及枳椇子提取物及其制备方法与在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术
肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一,是我国位居第二的癌症“杀手”,常见于中年男性。因其恶性度高、病情进展快,病人早期一般没有什么不适,但一旦出现症状就诊,就已经属于中晚期。故肝癌的治疗难度大,一般患者发病后生存时间仅为6个月,人称“癌中之王”。根据调查结果表明,目前男性前三位的新发癌症分别是肺癌、结肠癌和鼻咽癌,女性则是乳癌、结肠癌及肺癌,充分说明了肺癌和结肠癌在新发癌症群中的危害性。
从植物中寻找高效低毒的抗癌药物,成为国内外抗癌药物研究的重点。有效的抗癌化合物和中草药有效部位的抗癌复方制剂都具有重要的临床价值。
枳椇子为鼠李科拐枣属植物枳椇(Hovenia duleis Thunb.)的干燥成熟带肉质花序轴的种子。《中国药物植物志》中又称为北枳椇,又称为鸡爪梨、拐枣、甜半夜。产于河北、山东、山西、河南、陕西、甘肃、四川北部、湖北西部、安徽、江苏、江西(庐山)。生于海拔200-1400米的次生林中或庭园栽培。中医认为枳椇子有清热利尿,解酒毒之功效,主治酒病、烦热、口渴、呕吐、二便不利等症等。
发明内容
本发明的目的是提供枳椇子提取物及其制备方法与在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明提供的制备枳椇子提取物方法,是用水和/或有机溶剂作为提取剂,从枳椇子中提取得到的。
其中,所用有机溶剂具体可为甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯中的任意一种或其任意比例的混合物,优选体积百分含量为95%的乙醇水溶液。各种常用的提取方法均适用于该方法,优选回流提取;提取的温度为60-100℃;提取次数至少为1次,优选2-3次,每次提取时间为1-4小时。
利用上述方法得到的枳椇子提取物,以该枳椇子提取物为活性成分的抗肿瘤药物,及该提取物在制备抗肿瘤药物中的应用,也属于本发明的保护范围。
本发明提供的枳椇子提取物对肝癌、结肠癌或肺癌,尤其是肝癌,均具有较强的抑制作用。以该提取物为活性成分的抗肿瘤药物,可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法,导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织;或是被其他物质混合或包裹后导入机体。
需要的时候,在上述药物中还可加入一种或多种药学上可接受的载体;载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂等。
上述预防和/或治疗抗肿瘤的药物可制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种形式。其制备方法均可按照药学领域的常规方法制备。
上述预防和/或治疗抗肿瘤药物的用量一般为200-800mg枳椇子提取物/kg体重/天,疗程为10至15天。
本发明提供的制备枳椇子提取物的方法简单、成本低廉。实验证明,本发明提供的枳椇子提取物能够有效抑制人肿瘤细胞的生长,如人肝癌、结肠癌细胞。因此本发明所提供的枳椇子提取物对制备抗肿瘤药物,尤其是抗肝癌、结肠癌药物,具有重要的意义。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。
实施例1、制备枳椇子提取物
取枳椇子(宁波德康生物制品有限公司)200g,将其以1:3(枳椇子:95%乙醇)的重量份数比与95%乙醇(乙醇:水=95:5,体积比)混合,在60℃条件下回流提取3h,抽滤,收集第一次回流提取液1和滤渣1;将得到的所有滤渣1与95%乙醇混合,95%乙醇的量与第一次相同,在60℃条件下提取3h,收集第二次回流提取液2和滤渣2,并将提取液2与提取液1合并;将得到的所有滤渣2与95%乙醇混合,95%乙醇的量与第一次相同,60℃回流提取3h,抽滤,收集第三次回流提取液3;将提取液1、提取液2和提取液3合并,将所得的提取液进行真空减压浓缩、真空干燥(去除乙醇和水)至恒重,得到2.54g枳椇子提取物。
实施例2、枳椇子提取物在抑制肿瘤细胞生长中的应用
将对数生长的肿瘤细胞(人肝癌细胞BEL-7402、人结肠癌细胞HCT-8、人肺癌细胞A-549)用0.25%的胰蛋白酶消化,然后用含10%(体积百分含量)胎牛血清的DMEM完全培养基悬浮细胞,制成细胞悬液,并分别将各肿瘤细胞稀释至1.0×105个/mL,再将其接种至96孔培养板中,每孔200uL,各肿瘤细胞分别接种3个孔,于37℃,5%CO2的培养箱内培养24h;然后倾去各孔培养液。
将实施例1制得的枳椇子提取物溶解于DMSO中,然后用DMEM完全培养基进行稀释,得到枳椇子提取物溶液,使枳椇子提取物的终浓度为50ug/mL,使DMSO的浓度为10%(体积百分含量)。
同时设实验组、对照组进行实验:
实验组:将枳椇子提取物溶液依次分别加入上述肿瘤细胞BEL-7402、HCT-8、A-549的培养孔内,各自接种3个孔,每孔加入200ul;
对照组:向上述各肿瘤细胞的培养孔内加入含10%(体积百分含量)DMSO的DMEM完全培养基,各自接种3个孔,每孔加入200ul;
将以上各组的培养板同时置于37℃、5%CO2的培养箱内培养2天。
2天后向每孔加入20ul新鲜配制的5mg/ml四甲基偶氮唑盐(MTT)溶液,并在37℃、5%CO2的条件下继续培养4h;小心弃上清,每孔加入200uL DMSO,室温放置15-20min,每5min振荡一次;在酶标仪上测定各孔在波长490nm处的光密度值(OD值),按公式计算肿瘤细胞生长抑制率。抑制率(%)=1-(OD实验)/(OD对照)×100%。
实验设三次重复,结果取平均数。枳椇子提取物对人不同肿瘤细胞BEL-7402、HCT-8、A-549的抑制作用的结果如表1所示。
表1 枳椇子提取物对人不同肿瘤细胞的抑制作用
枳椇子提取物的对多种肿瘤细胞的抑制作用实验结果表明,枳椇子提取物在浓度为50ug/mL时对人肝癌细胞BEL-7402、结肠癌细胞HCT-8和肺癌细胞A-549均有一定程度的抑制作用,对肺癌细胞的抑制作用相对较小,对肝癌、结肠癌抑制作用较强,均达到50%以上。文献中报道的提取物在浓度为25mg/mL时对人肝癌细胞BEL-7402的抑制率为56%,本发明在浓度仅为其1/500的条件下,对同样的人肝癌细胞BEL-7402的抑制率达到52.56%,起到了近似同样的效果,充分说明了本发明提供的提取物比文献中提供的提取物的高效性。因此,枳椇子提取物可以用于制备抗肝癌、结肠癌的药物。
Claims (1)
1.枳椇子提取物在制备抗结肠癌药物中的应用;所述枳椇子提取物是用体积百分含量为95%的乙醇水溶液作为提取剂,从枳椇子中提取得到的;所述提取为回流提取;所述提取温度为60-100℃;所述提取次数至少为1次;所述每次提取时间为1-4小时。
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稽扬等.枳椇细胞毒作用和抑瘤作用的实验研究.《中国中医药科技》.2003,第10卷(第2期),98-99. * |
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