CN101259166A - 粉防己提取物在制备抗肿瘤药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了粉防己提取物的一种新用途。该新用途是粉防己提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。所述提取物是按照如下方法制备的：以粉防己的根为原料，用水和/或有机溶剂提取得到。本发明所提供的粉防己提取物的新用途，对制备抗肿瘤药物，尤其是抗肝癌、结肠癌或肺癌药物具有重要的意义。

Description

粉防己提取物在制备抗肿瘤药物中的应用

技术领域

本发明涉及粉防己提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，是我国位居第二的癌症“杀手”，常见于中年男性。因其恶性度高、病情进展快，病人早期一般没有什么不适，但一旦出现症状就诊，就已经属于中晚期。故肝癌的治疗难度大，一般患者发病后生存时间仅为6个月，人称“癌中之王”。根据调查结果表明，目前男性前三位的新发癌症分别是肺癌、结肠癌和鼻咽癌，女性则是乳癌、结肠癌及肺癌，充分说明了肺癌和结肠癌在新发癌症群中的危害性。

从植物中寻找高效低毒的抗癌药物，成为国内外抗癌药物研究的重点。有效的抗癌化合物和中草药有效部位的抗癌复方制剂都具有重要的临床价值。

粉防己(Stephania terandra S.Moore)在我国分布于浙江、安徽、福建、台湾、湖南、江西、广西、广东和海南。据《中国植物志》记载，本种(粉防己)以肉质主根入药，称防己，味苦辛，性寒，功能祛风除湿、利尿通淋；含多种生物碱，其中粉防己碱(特船君)(tetrandrine)治风湿关节炎和高血压症均有效。

发明内容

本发明的目的是提供粉防己提取物的一种新用途。

本发明所提供的粉防己提取物的用途是粉防己提取物在制备抗肿瘤药物中的应用；所述粉防己提取物按照如下方法制备：用水和/或有机溶剂作为提取剂，从粉防己的根中提取得到粉防己提取物。

其中，所述有机溶剂具体可为甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯。所述提取剂具体可为体积百分含量为95％的乙醇水溶液。

所述提取可为回流提取。

在所述提取中，提取温度可为60-100℃。所述提取中，至少提取一次，每次提取的时间可为1-4小时。

在如上任一所述中，所述肿瘤具体可为肝癌、结肠癌或肺癌。

根据如上应用方法所制备的预防和/或治疗肿瘤药物可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其他物质混合或包裹后导入机体。

需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。

如上制备的预防和/或治疗肿瘤药物可以制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。

上述预防和/或治疗肿瘤药物的用量一般为400-1000mg粉防己提取物/kg体重/天，疗程为10至15天。

本发明通过实验证明，粉防己提取物能够有效的抑制人肝癌细胞的生长，并且随着粉防己提取物浓度的增大，抑制率逐渐增大，当粉防己提取物浓度为200ug/mL时，对肝癌细胞的抑制率可达到98.4％。另外通过实验证明，粉防己提取物对结肠癌、肺癌也具有一定程度的抑制作用。因此本发明所提供的粉防己提取物对制备抗肿瘤药物，尤其是抗肝癌、结肠癌、肺癌药物具有重要的意义，

具体实施方式

实施例1、粉防己Stephania terandra S.Moore提取物的制备及应用

一、粉防己Stephania terandra S.Moore提取物的制备

取粉防己根(北京利君堂药店，货号070611)200g，将其以1∶3(粉防己根∶95％乙醇)的重量份数比与95％乙醇(乙醇∶水＝95∶5，体积比)混合，60℃回流提取3h，抽滤，收集提取液；将滤渣中加入与第一次等量的95％乙醇，60℃再回流提取3h，收集提取液，与第一次合并；滤渣加入与第一次等量95％乙醇，60℃再一次回流提取3h，抽滤，收集第三次回流提取液，与前两次回流提取液合并，将所得的提取液进行真空减压浓缩、真空干燥(去除乙醇和水)至恒重，得到1.9g粉防己提取物。

二、粉防己提取物在抑制肝癌细胞生长中的应用

将对数生长的肝癌细胞HepG-2用0.25％的胰蛋白酶消化，然后用含10％(体积百分含量)胎牛血清的DMEM完全培养液制成细胞悬液，将肝癌细胞稀释至1.0×10⁵个/mL，再将其接种至96孔培养板中，每孔200uL，于37℃，5％CO₂的培养箱内培养24h；然后倾去各孔培养液。

将粉防己提取物溶解于DMSO中，用DMEM完全培养液稀释成需要浓度，粉防己提取物浓度分别为12.5、25、50、100、200ug/mL，其中，DMSO含量为10％(体积百分含量)；将不同浓度的粉防己提取物溶液依次加入上述肝癌细胞的培养孔内，各自接种5个孔，每孔加入200ul；对照组为向上述肝癌细胞的培养孔内加入含10％(体积百分含量)DMSO的DMEM完全培养液至孔内体积200ul，也接种5个孔；空白组为向不含肝癌细胞的空培养孔内加入200ul的DMEM完全培养液；将其置于37℃，5％CO₂的培养箱内培养2天。

2天后每孔加入20ul新鲜配制的5mg/ml四甲基偶氮唑盐(MTT)溶液，37℃，5％CO₂继续培养4h。

小心弃上清，每孔加入200uL DMSO，室温放置15-20min，每5min振荡一次。

在酶标仪上测定波长490nm处的光密度值(OD值)，按公式计算肝癌细胞生长抑制率。抑制率(％)＝1-(OD_实验-OD_空白)/(OD_对照-OD_空白)×100％。

实验设三次重复。

不同浓度粉防己提取物对人肝癌细胞HepG-2的抑制作用的结果见表1。

表1、不同浓度粉防己提取物对人肝癌细胞HepG-2的作用

粉防己提取物的实验结果表明(表1)，粉防己提取物在浓度为25ug/mL时开始对人肝癌细胞HepG-2有抑制作用，浓度达到100ug/mL时对肝癌细胞HepG-2有明显的抑制作用，且在浓度高达200ug/mL时，对肝癌细胞HepG-2的抑制率达到98.4％。总之，粉防己提取物对肝癌细胞HepG-2的抑制作用与其浓度呈正相关，在浓度高于100ug/mL时粉防己提取物对肝癌细胞HepG-2具有明显的抑制作用。

另外，同法做了粉防己提取对多种肿瘤细胞的抑制活性实验，结果见表2。

表2、粉防己提取物对多种肿瘤细胞的抑制作用

粉防己提取物(浓度50ug/mL)	BEL-7402肝癌	HCT-8结肠癌	A-549肺癌
				对各种肿瘤细胞的抑制率(％)	55.24	63.61	41.97

粉防己提取物对多种肿瘤细胞的抑制作用实验结果表明，粉防己提取物在浓度为50ug/mL时，对人肝癌细胞BEL-7402、结肠癌细胞HCT-8、肺癌细胞A-549均有一定程度的抑制作用，这一结果表明，粉防己提取物不仅对肝癌、对其它肿瘤细胞也存在不同程度的抑制作用，且抑制活性很高。

综合以上实验结果，粉防己提取物用作抗肝癌、结肠癌、肺癌的药物均会有很好的应用前景。

Claims (10)

1、粉防己提取物在制备抗肿瘤药物中的应用；所述粉防己提取物按照如下方法制备：用水和/或有机溶剂作为提取剂，从粉防己的根中提取得到粉防己提取物。

2、根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述有机溶剂为甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯。

3、根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述提取剂为体积百分含量为95％的乙醇水溶液。

4、根据权利要求1-3中任一所述的应用，其特征在于：所述提取为回流提取。

5、根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述提取的温度为60-100℃。

6、根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于：所述提取中，至少提取一次，每次提取的时间为1-4小时。

7、根据权利要求1至6中任一所述的应用，其特征在于：所述肿瘤为肝癌、结肠癌或肺癌。

8、一种粉防己提取物，所述粉防己提取物是以体积百分含量为95％的乙醇水溶液作为提取剂，从粉防己的根中提取得到的。

9、根据权利要求8所述的粉防己提取物，其特征在于：所述提取为回流提取；所述提取的温度为60-100℃。

10、根据权利要求9所述的粉防己提取物，其特征在于：所述提取中，至少提取一次，每次提取的时间为1-4小时。