CN101347493B - 三叶草提取物在制备抗肿瘤药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了三叶草提取物的新用途。该新用途是三叶草提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。所述提取物是按照如下方法制备的：以三叶草为原料，用水和/或有机溶剂提取得到的。本发明所提供的三叶草提取物对制备抗肿瘤药物，尤其是抗肝癌、肺癌、结肠癌药物具有重要的意义。

Description

三叶草提取物在制备抗肿瘤药物中的应用
技术领域
本发明涉及三叶草提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术
肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，是我国位居第二的癌症“杀手”，常见于中年男性。因其恶性度高、病情进展快，病人早期一般没有什么不适，但一旦出现症状就诊，就已经属于中晚期。故肝癌的治疗难度大，一般患者发病后生存时间仅为6个月，人称“癌中之王”。根据调查结果表明，目前男性前三位的新发癌症分别是肺癌、结肠癌和鼻咽癌，女性则是乳癌、结肠癌及肺癌，充分说明了肺癌和结肠癌在新发癌症群中的危害性。
从植物中寻找高效低毒的抗癌药物，成为国内外抗癌药物研究的重点。有效的抗癌化合物和中草药有效部位的抗癌复方制剂都具有重要的临床价值。
三叶草(Trifolium pratense L.)，《中国植物志》中又称为红车轴草、红三叶，为豆科植物车轴草属，原产于欧洲中部，引种到世界各国，我国南北各省区均有种植，并见逸生于林缘、路边、草地等湿润处。《中国药植图鉴》记载：镇痉，止咳，上喘。全草制成软膏，治局部溃疡。三叶草在制备抗肿瘤药物中的应用未见有报道。
发明内容
本发明的目的是提供三叶草提取物的一种新用途。
本发明所提供的三叶草提取物的用途是三叶草提取物在制备抗肿瘤药物中的应用；所述三叶草提取物按照如下方法制备：用水和/或有机溶剂作为提取剂，从三叶草中提取得到三叶草提取物。
其中，所述有机溶剂具体可为甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯。所述提取剂具体可为体积百分含量为95％的乙醇水溶液。
所述提取可为回流提取。
所述提取中，提取的温度可为60-100℃。所述提取至少提取一次，每次提取的时间为1-4小时。
在如上任一所述中，所述肿瘤具体可为肝癌、结肠癌或肺癌。
根据如上方法所制备的预防和/或治疗肿瘤药物可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其他物质混合或包裹后导入机体。
需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。
如上制备的预防和/或治疗肿瘤药物可以制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
上述预防和/或治疗肿瘤药物的用量一般为200-800mg三叶草提取物/kg体重/天，疗程为10至15天。
本发明制备三叶草提取物的方法简单、成本低廉。实验证明，本发明的三叶草提取物能够有效的抑制人肿瘤细胞的生长，如人肝癌、结肠癌或肺癌细胞。因此本发明所提供的三叶草提取物对制备抗肿瘤药物，尤其是抗肝癌、肺癌、结肠癌药物具有重要的意义。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
实施例1、三叶草提取物的制备
取三叶草(宁波德康生物制品有限公司)200g，将其以1∶3(三叶草∶95％乙醇)的重量份数比与95％乙醇(乙醇∶水＝95∶5，体积比)混合，在60℃条件下回流提取3h，抽滤，收集第一次回流提取液1和滤渣1；将得到的所有滤渣1与95％乙醇混合，95％乙醇的量与第一次相同，在60℃条件下提取3h，收集第二次回流提取液2和滤渣2，并将提取液2与提取液1合并；将得到的所有滤渣2与95％乙醇混合，95％乙醇的量与第一次相同，60℃回流提取3h，抽滤，收集第三次回流提取液3；将提取液1、提取液2和提取液3合并，将所得的提取液进行真空减压浓缩、真空干燥(去除乙醇和水)至恒重，得到1.15g三叶草提取物。
实施例2、三叶草提取物在抑制肿瘤细胞生长中的应用
将对数生长的肿瘤细胞(人肝癌细胞BEL-7402、人结肠癌细胞HCT-8、人肺癌细胞A-549)用0.25％的胰蛋白酶消化，然后用含10％(体积百分含量)胎牛血清的DMEM完全培养基悬浮细胞，制成细胞悬液，并分别将各肿瘤细胞稀释至1.0×105个/mL，再将其接种至96孔培养板中，每孔200uL，各肿瘤细胞分别接种6个孔(包括实验组3个和对照组3个)，于37℃，5％CO2的培养箱内培养24h；然后倾去各孔培养液。
将实施例1制得的三叶草提取物溶解于DMSO中，然后用DMEM完全培养基进行稀释，得到三叶草提取物的溶液，三叶草提取物的终浓度为50ug/mL，其中，DMSO的浓度为10％(体积百分含量)。
同时设实验组、对照组进行实验：
实验组：将三叶草提取物溶液依次分别加入上述肿瘤细胞BEL-7402、HCT-8、A-549的培养孔内，各自接种3个孔，每孔加入200ul；
对照组：向上述各肿瘤细胞的培养孔内加入含10％(体积百分含量)DMSO的DMEM完全培养基，各自接种3个孔，每孔加入200ul；
将以上各组的培养板同时置于37℃、5％CO2的培养箱内培养2天。
2天后向每孔加入20ul新鲜配制的5mg/ml四甲基偶氮唑盐(MTT)溶液，并在37℃、5％CO2的条件下继续培养4h；小心弃上清，每孔加入200uL DMSO，室温放置15-20min，每5min振荡一次；在酶标仪上测定各孔在波长490nm处的光密度值(OD值)，按公式计算肿瘤细胞生长抑制率。抑制率(％)＝(OD对照-OD实验)/OD对照×100％。
实验设三次重复，结果取平均数。三叶草提取物对人不同肿瘤细胞BEL-7402、HCT-8、A-549的抑制作用的结果如表1所示。
表1、三叶草提取物对人不同肿瘤细胞的抑制作用
三叶草提取物对肿瘤细胞的抑制作用实验结果表明(表1)，三叶草提取物在浓度为50ug/mL时对人肝癌细胞BEL-7402、结肠癌细胞HCT-8和肺癌细胞A-549均有一定程度的抑制作用。因此，三叶草提取物可以用于制备抗肝癌、结肠癌、肺癌的药物。

Claims (1)

1.三叶草提取物在制备抗肿瘤药物中的应用；所述三叶草提取物按照如下方法制备：用体积百分含量为95％的乙醇水溶液作为提取剂，从三叶草中提取得到三叶草提取物；
所述提取为回流提取；
所述提取的温度为60-100℃；
所述提取中，至少提取一次，每次提取的时间为1-4小时；
所述肿瘤为肝癌或肺癌。
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