CN102552243A - 杨梅醇和/或杨梅酮在制备抗肿瘤药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种杨梅醇和/或杨梅酮在制备抗肿瘤药物中的应用，所述的抗肿瘤药物包括用于预防和/或治疗肝癌的药物、用于预防和/或治疗肺癌的药物、用于预防和/或治疗白血病的药物、用于预防和/或治疗胃癌的药物或用于预防和/或治疗其他肿瘤的药物。本发明证实杨梅醇及杨梅酮具有较好的抗肿瘤作用，且杨梅醇及杨梅酮对正常细胞毒性低，应用于制备抗肿瘤药物，高效低毒，符合药物发展的要求。

Description

杨梅醇和/或杨梅酮在制备抗肿瘤药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及杨梅醇和/或杨梅酮在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

癌症是严重威胁人类健康的疾病之一，是仅次于心血管疾病的人类第二大杀手，也是世界各国面临的重要社会问题之一。据统计2008全球新发病癌症病人约1270多万，死亡病人约760多万。而到2030，全球估计新发病癌症病人约2100多万，死亡病人约1320多万，其中60％以上在发展中国家。近年来，我国肿瘤每年新发病例约为220万，死亡人数约为160万。由于药物是治疗肿瘤的主要手段之一，所以抗肿瘤药物的研究与开发不仅是生命科学领域中富有挑战性的课题，而且具有重大社会意义和经济价值。

目前已有手术、化疗、放疗及新兴的生物疗法等多种手段来控制肿瘤的生长和转移，从而延长癌症患者生命，改善其生活质量。癌症的发病机理复杂，同时药物固有的不良反应、疗效的局限性和不断出现的耐药性等，促使科研人员不断地寻找疗效更好、毒性更小、作用机理新颖的新型抗癌药物和方法。中药抗肿瘤作用具有多靶点、多环节、多效应的特点，可作用于肿瘤发生、发展的多个环节，同时其毒副作用低，能提高机体免疫力，不易产生耐药性，因此中药及其有效成分预防和治疗肿瘤的作用具有一定的优势，从天然成分中寻找毒副作用小，作用独特的抗肿瘤药物，为近年来研究的热点。而我国有丰富的中药材资源以及数千年的中医药理论与实践经验，因此从传统的中草药中筛选抗癌作用强、毒副作用小的药物成为目前开发新的抗癌药物的方向之一。

杨梅[Myrica ruba(Lour.)Sieb.et Zucc.]系杨梅科(Myricae)杨梅属(Myrica)植物，常绿乔本，为我国特产水果，栽培面积占全球的99％以上，地理位置大致分布在北纬18°～33°之间，但经济栽培主要集中在东南沿海的浙江、江苏、福建、广东、江西等省，其中浙江省的栽培面积、产量、品种、品质均为全国之首，目前已超过6万多公顷(hm²)，约占全国总面积的40％。

杨梅树皮味苦、性温，具有散瘀止血、止痛之功效，民间用于治疗跌打损伤、骨折、痢疾、胃和十二指肠溃疡、牙痛等。杨梅树皮的水溶性乙醇提取液在体外表现出睾丸激素5α还原酶抑制活性，在体内具有抗雄性激素活性的作用，杨梅酮(myricanone)、杨梅醇(myricanol)和杨梅素(myricetin)3种成分是主要活性物质。杨梅树皮提取物中杨梅醇、杨梅酮抗肿瘤作用未见报道。

中国专利200710027454.8本发明公开了一种新型天然抗肿瘤活性化合物，是一种具有全新分子骨架的化合物，结构新颖、抗肿瘤活性强，可来源于杨梅植物资源，安全性高；同时公开了其制备方法，浸提杨梅植株粗粉，减压浓缩，用水分散后，用适宜的有机溶剂萃取，分离提纯得到所述的化合物，所述化合物在制备抗肿瘤药物领域应用前景广阔，为医学上开发攻克肿瘤的天然药物打下了基础。

发明内容

本发明的目的是提供杨梅醇和/或杨梅酮的一种新用途，具体为杨梅醇和/或杨梅酮在制备抗肿瘤药物中的应用。

所述的杨梅醇的分子式为C₂₁H₂₆O₅，结构式如下：

所述的杨梅酮的分子式为C₂₁H₂₄O₅，结构式如下：

所述的杨梅醇或杨梅酮可采用市售的药用级杨梅醇或杨梅酮，也可按照如下方法制备：

用体积百分浓度为50％～95％的乙醇水溶液作为提取剂，从杨梅树皮中提取得到杨梅树皮醇提取物，浓缩挥干乙醇后加水混匀，用萃取剂氯仿或者二氯甲烷萃取，得到萃取物，再用硅胶柱或制备液相分离，分别得到杨梅醇和杨梅酮。

为了达到更好的提取效果，优选：

所述的提取的条件为：在50℃～100℃至少提取二次，每次提取时间为1小时～4小时，进一步优选回流提取。

每次提取所述的杨梅树皮与乙醇水溶液的重量比为1∶1.0～6.0。

所述的杨梅树皮醇提取物一般浓缩至浓度为0.2g～3.0g生药/ml。

每次萃取浓缩后杨梅树皮醇提取物与萃取剂的重量比为1∶0.5～4.0。

所述的萃取的次数为至少二次，每次萃取的时间为1小时～4小时。

所述的萃取物一般回收萃取剂后再经硅胶柱或制备液相分离，回收萃取剂的温度为50℃～100℃。

所述的硅胶柱的条件为：硅胶为200目～300目，硅胶填料体积为上样量体积的30倍～70倍，洗脱剂为石油醚∶乙酸乙酯＝10∶4(体积比)。

所述的抗肿瘤药物包括用于预防和/或治疗肝癌的药物、用于预防和/或治疗肺癌的药物、用于预防和/或治疗白血病的药物、用于预防和/或治疗胃癌的药物或用于预防和/或治疗其他肿瘤的药物。可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体，如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其他物质混合或包裹后导入机体。

需要的时候，所述的抗肿瘤药物中还可以包含一种或多种药学上可以接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体等。

所述的抗肿瘤药物可制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种剂型。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。

所述的杨梅醇和/或杨梅酮的用量一般为5mg～200mg/kg体重/天，疗程为10至15天。

本发明制备杨梅树皮提取物(杨梅醇和/或杨梅酮)方法简单、成本低廉。实验证明，本发明的杨梅醇和/或杨梅酮能够有效的抑制人肿瘤细胞的生长，如人肝癌、肺癌、白血病或胃癌等。因此本发明所提供的杨梅树皮提取物对制备抗肿瘤药物，尤其是抗肝癌、肺癌、白血病药物具有重要意义。

附图说明

图1为实施例1中氯仿萃取物的HPLC谱图，横坐标为：分钟(Minutes)；

图2为杨梅酮的HPLC谱图，横坐标为：分钟(Minutes)；

图3为杨梅醇的HPLC谱图，横坐标为：分钟(Minutes)；

图4为杨梅酮样品液质联用分析图谱，其中，a和c为质谱图，b为液相谱图；

图5为杨梅醇样品液质联用分析图谱，其中，d和f为质谱图，e为液相谱图；

图6为RPMI1640培养液对照对HepG-2细胞体外增殖的影响的显微镜下图片；

图7为12.5μg/ml杨梅酮对HepG-2细胞体外增殖的影响的显微镜下图片；

图8为12.5μg/ml杨梅醇对HepG-2细胞体外增殖的影响的显微镜下图片。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

实施例1、杨梅醇及杨梅酮的制备

取干燥清洁的杨梅树皮药材1000g，剪碎，置于蒸馏烧瓶中，加3000ml(2496g)体积百分浓度为80％的乙醇水溶液，80℃水浴回流提取2次，每次2小时，合并2次提取液，过滤，滤液减压浓缩至浓度为0.2g生药/ml，回收乙醇，干燥，得杨梅树皮醇提物300g。杨梅树皮醇提物加水热溶后，每次萃取用杨梅树皮醇提物重量1.6倍量氯仿，萃取二次，合并各萃取液，分别于旋转蒸发仪上80℃回收溶剂，真空减压干燥至恒重，得氯仿萃取物26.6g。氯仿萃取物用200～300目硅胶柱层析分离，硅胶填料体积为上样量体积的50倍，洗脱剂为石油醚∶乙酸乙酯＝10∶4(体积比)，每30ml收集一次，结合薄层色谱(TLC)分别收集与杨梅醇标准品TLC一致的洗脱液以及与杨梅酮标准品TLC一致的洗脱液，纯化分别得到杨梅醇、杨梅酮。

所得的氯仿萃取物、杨梅酮、杨梅醇在HPLC上进行分析，谱图分别如图1-图3：杨梅醇、杨梅酮样品在HPLC上的峰值均与氯仿萃取物上的峰值相对应，可见特征性峰值。

HPLC的条件为：检测波长250nm，流动相为体积百分浓度为55％的甲醇水溶液，YMC-pack ODS-A(C18柱)色谱柱(250×46mm，5μm)，柱温：25℃，进样量：1μl。

所得的杨梅酮、杨梅醇在液质联用(LS/MS)上进行分析，谱图分别如图4-图5：杨梅醇、杨梅酮样品在LS/MS测得分子量分别为358与356。

LS/MS的条件为：检测波长为DAD 190～400nm，流动相为体积百分浓度为45％的乙腈-水溶液，ACQUITY UPLC BEH C18柱(100mm×2.1mm，1.7μm)，柱温：35℃，进样量：1μl。

杨梅醇鉴别如下：C₂₁H₂₆O₅，为白色粉末，(CHCl₃)mp193.5℃～194.8℃，[a]²⁰ _D：-65.5°(c 0.37，MeOH)；UV(MeOH)λ_max nm(logε)：256(3.24)，354(2.38)；IRγ_max(KBr)cm^-1：3391，2943，2867，1637，1468，1386，1362，1179，1134，1054，1080，1028，1003，865，813，691；ESIMS(positive)m/z：358.9[M+H]⁺；¹H-NMR(600MHz，CDCl₃)：δ7.69(1H，s，17-OH)，7.18(1H，s，H-19)，7.10(1H，dd，J＝8.2，1.5Hz，H-15)，6.91(1H，d，J＝8.2Hz，H-16)，6.90(1H，d，J＝1.9Hz，H-18)，4.10(1H，d，J＝9.8Hz，H-11)，4.00(3H，s，3-OCH3)，3.88(3H，s，4-OCH₃)，2.91(2H，m，11-OH，H-13)，2.88(1H，d，J＝18.4Hz，H-7a)，2.55(1H，m，H-7b)，2.34(1H，m，H-12b)，1.93(3H，m，H-8，10b)，1.6(3H，m，H-9，10a，12a)；¹³C-NMR(150MHz，CDCl₃)：δ151.4(C-17)，147.7(C-5)，145.9(C-3)，138.7(C-4)，133.1(C-18)，130.7(C-14)，129.9(C-15)，129.4(C-19)，124.7(C-1)，123.4(C-2)，122.6(C-6)，116.9(C-16)，68.6(C-11)，61.4(3-OCH₃，4-OCH₃)，39.4(C-10)，34.8(C-12)，26.9(C-13)，25.8(C-8)，25.4(C-7)，22.9(C-9)。与杨梅醇Myricanol(C₂₁H₂₆O₅)标准品的物化性质、光谱数据一致，为杨梅醇。

杨梅酮鉴别如下：C₂₁H₂₄O₅，为白色粉末，(CHCl₃)mp181.2℃～182.1℃，UV(MeOH)λ_max nm(logε)：259(3.62)，298(2.89)；IRγ_max(KBr)cm^-1：3382，3028，2938，2915，1735，1702，1610，1508，1492，1455，1438，1436，1427，1405，1347，1263，1244，1223，1192，1142，1113，1092，1069，1043，984，950，819，615；ESIMS(positive)m/z：357.1[M+H]⁺；¹H-NMR(600MHz，CDCl₃)：δ7.67(1H，s，5-OH)，7.10(1H，dd，J＝8.0，2.0Hz，H-15)，6.88(1H，d，J＝8.0Hz，H-16)，6.90(1H，d，J＝2.0Hz，H-18)，6.61(1H，s，H-19)，5.88(1H，s，17-OH)，3.99(3H，s，4-OCH₃)，3.81(3H，s，3-OCH3)，3.02(2H，m，H-13)，2.81(3H，m，H-12)，2.78(2H，m，H-10)，2.72(2H，m，H-7)，1.93(1H，q，J＝6.7Hz，H-8)，1.85(1H，q，J＝7.3Hz，H-9)，1.6(1H，s，11-OH)；¹³C-NMR(150MHz，CDCl₃)：δ213.6(C-11)，151.7(C-17)，147.8(C-3)，146.0(C-5)，138.7(C-4)，132.4(C-14)，132.3(C-18)，128.9(C-15，19)，125.5(C-1)，123.2(C-2)，123.1(C-6)，116.9(C-16)，61.5(3-OCH₃)，61.3(4-OCH₃)，46.2(C-10)，42.6(C-12)，28.8(C-13)，26.8(C-8)，24.5(C-7)，21.9(C-9)。与杨梅酮Myricanone(C₂₁H₂₄O₅)标准品的物化性质、光谱数据一致，为杨梅酮。

实施例2、杨梅醇及杨梅酮的体外抗肿瘤作用

1、实验材料

(1)RPMI1640培养液：250ml/瓶，吉诺生物医药技术有限公司生产，批号20110720。

(2)0.25％(质量百分比)Trypsin(胰蛋白酶)：含0.02％(质量百分比)乙二胺四乙酸(EDTA)，100ml/瓶，吉诺生物医药技术有限公司生产，批号11090901。

(3)超级新生牛血清：200ml/瓶，杭州四季青生物工程材料有限公司生产，批号080304。

(4)氚-胸腺嘧啶核苷(³H-TdR)：中国科学院上海应用物理研究所生产，浓度1mci/ml，比度4ci/mM，批号100430，使用前用Hank′s液配成20μci/ml。

(5)96孔平底培养板：上海圣纳堡生物科技开发有限公司生产；

(6)HepG-2(人肝癌细胞)、HL-60细胞株(人白血病细胞)：中国科学院上海药物研究所引进，液氮保存。A549细胞株(人肺腺癌细胞)：浙江省肿瘤医院肿瘤所提供，液氮保存。

2、实验仪器

(1)二氧化碳培养箱：型号3165型，美国Forma公司生产。

(2)液闪仪：型号2050型，PACKARD公司生产。

(3)XS-24细胞收集仪：浙江绍兴坡圹医疗器械厂生产。

(4)GS-6R离心机：Beckman公司生产。

(5)HR40-II-A2医用净化工作台：A2型，30％外排，70循环，青岛海尔特种电器有限公司生产。

(6)BS210S电子天平：Sartorius公司生产。

(7)CK40-F200倒置显微镜：日本OLYMPUS公司生产。

(8)YXQ-208SD电热蒸汽灭菌器：嘉兴市中新医疗仪器有限公司生产。

3、实验方法及结果

取3种对数生长期肿瘤细胞株(HL-60、A549及HepG-2等)，按肿瘤药敏试验方法制成5×10⁴个细胞/ml浓度单细胞悬液(贴壁细胞株用质量百分比0.1％胰蛋白酶消化后配置)，取100ul分别加至96孔平底培养板中，37℃、5％CO₂培养箱培养24h后分别加入不同浓度(1.56～50μg/ml)的实施例1中的氯仿萃取物、杨梅醇及杨梅酮100μl(溶剂为含10％FCS的RPMI1640培养液)，每一药物浓度做3个复孔，同时作含10％(质量百分比)FCS(胎牛血清)的培养液对照，37℃、5％CO₂培养箱培养48h后分别加入含0.3μci³H-TdR的培养液50μl，继续培养16h，常规收集细胞，测定每个样品脉冲数(cpm)，用三孔的平均cpm计算出不同浓度氯仿萃取物、杨梅醇及杨梅酮对3种肿瘤细胞株的抑制率。结果见表1～表3和图6～图8。

表1：杨梅醇及杨梅酮对HL-60细胞的抑制作用SI(％)

表2：杨梅醇及杨梅酮对A549细胞的抑制作用SI(％)

表3：杨梅醇及杨梅酮对HepG-2细胞的抑制作用SI(％)

由表1～表3及图6～图8可见杨梅醇和杨梅酮对HL-60、A549及HepG-2细胞株均有较好的抑制作用，而且具有较好的量效关系；相同剂量下杨梅醇对A549及HepG-2细胞株的抑制作用明显优于杨梅酮，尤其是低剂量下；剂量低于12.5μg/ml的情况下，杨梅醇对HL-60细胞株的抑制作用也明显优于杨梅酮；相同剂量下杨梅醇对A549细胞株的抑制作用也明显优于中国专利200710027454.8中的新型天然抗肿瘤活性化合物。

实施例3、杨梅醇及杨梅酮对小鼠S₁₈₀抑制作用的应用

1、实验材料

实验动物：ICR种小鼠，体重18-22g，全为雌性，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，许可证：SCXK(沪2008-0016)，动物合格证号：0055905。饲养于浙江省中医药研究院实验动物室内，实验动物使用许可证：SYXK(浙2009-0122)。

瘤株：S₁₈₀肉瘤，中科院上海药物所提供，浙江省中医药研究院基础所液氮保存。

2、实验方法与结果：

取ICR小鼠2只，右腋皮下接种液氮复苏的S₁₈₀细胞悬液(1×10⁷个细胞/ml)0.2ml/只，常规饲养10天后，脱颈椎处死，75％(质量百分比)乙醇水溶液浸泡消毒，纱布吸干乙醇，剥离皮下肿瘤块剪碎，制成1×10⁷个细胞/ml细胞悬液。取ICR种小鼠，均皮下注射上述S₁₈₀细胞悬液0.2ml/只，次日分组、称重，实验同时设水阴性对照组，各组动物给不同剂量实施例1中的氯仿萃取物、杨梅醇及杨梅酮(连续灌胃10天)，停药次日，称体重，处死小鼠、剥离实体瘤、称瘤重，计算抑瘤率(％)，结果见表4：

表4杨梅醇及杨梅酮对小鼠S₁₈₀生长的影响

注：***表示与模型组比较P＜0.001。

由表4可见，杨梅醇及杨梅酮对小鼠S₁₈₀抑瘤率(％)分别为44.4％及39.6％，说明杨梅醇及杨梅酮对小鼠S₁₈₀实体瘤有较好的抑制作用，且杨梅醇明显优于杨梅酮。

实施例4、杨梅树皮提取物对小鼠lewis肺癌抑制作用的应用

1、实验材料

实验动物：C57BL/6J种小鼠，体重18-22g，全为雌性，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，许可证：SCXK(沪2008-0016)，动物合格证号：0055924。饲养于浙江省中医药研究院实验动物室内，实验动物使用许可证：SYXK(浙2009-0122)。

瘤株：Lewis肺癌瘤株，中科院上海药物所提供，浙江省中医药研究院基础所液氮保存。

2、实验方法与结果：

取C₅₇BL/6J种雌性小鼠2只，右腋皮下接种液氮复苏的Lewis肺癌细胞悬液(1×10⁷个细胞/ml)0.2ml/只，常规饲养10天后，脱颈椎处死，75％(质量百分比)乙醇水溶液浸泡消毒，纱布吸干乙醇，剥离皮下肿瘤块剪碎，加无菌生理盐水制成1×10⁷个细胞/ml细胞悬液。取C₅₇BL/6J种小鼠，均皮下注射上述Lewis肺癌细胞悬液0.2ml/只，次日分组、称重，实验同时设水阴性对照组，各组动物每日给实施例1中杨梅树皮提取物(连续12天)，停药次日，称体重，处死小鼠、剥离实体瘤、称瘤重，计算抑瘤率(％)，结果见表5：

表5杨梅树皮提取物对小鼠Lewis肺癌生长的影响

注：**、***表示与模型组比较P＜0.01、0.001。

由表5可见，杨梅醇及杨梅酮对小鼠Lewis肺癌抑瘤率(％)分别为41.1％及34.6％，说明杨梅醇及杨梅酮对小鼠Lewis肺癌有较好的抑制作用，且杨梅醇明显优于杨梅酮。

实施例5、杨梅醇及杨梅酮的制备

取干燥清洁的杨梅树皮药材1000g，剪碎，置于蒸馏烧瓶中，加1250ml(1000g)体积百分浓度为95％的乙醇水溶液，80℃水浴回流提取2次，每次1小时，合并2次提取液，过滤，滤液减压浓缩至浓度为3.0g生药/ml，回收乙醇，干燥，得杨梅树皮醇提物295g。杨梅树皮醇提物加水热溶后，每次萃取用杨梅树皮醇提物重量0.5倍量氯仿，萃取二次，合并各萃取液，分别于旋转蒸发仪上50℃回收溶剂，真空减压干燥至恒重，得氯仿萃取物25.2g。氯仿萃取物用200～300目硅胶柱层析分离，硅胶填料体积为上样量体积的30倍，洗脱剂为石油醚∶乙酸乙酯＝10∶4(体积比)，每30ml收集一次，结合薄层色谱(TLC)分别收集与杨梅醇标准品TLC一致的洗脱液以及与杨梅酮标准品TLC一致的洗脱液，纯化分别得到杨梅醇、杨梅酮。

所得的氯仿萃取物、杨梅酮、杨梅醇在HPLC上进行分析，HPLC的条件同实施例1：杨梅醇及杨梅酮样品在HPLC上的峰值均与氯仿萃取物上的峰值相对应，可见特征性峰值。

杨梅醇、杨梅酮的鉴别结果同实施例1。

实施例6、杨梅醇及杨梅酮的制备

取干燥清洁的杨梅树皮药材1000g，剪碎，置于蒸馏烧瓶中，加6704ml(6000g)体积百分浓度为50％的乙醇水溶液，100℃水浴回流提取2次，每次4小时，合并2次提取液，过滤，滤液减压浓缩至浓度为1.8g生药/ml，回收乙醇，干燥，得杨梅树皮醇提物290g。杨梅树皮醇提物加水热溶后，每次萃取用杨梅树皮醇提物重量4倍量氯仿，萃取二次，合并各萃取液，分别于旋转蒸发仪上100℃回收溶剂，真空减压干燥至恒重，得氯仿萃取物25g。氯仿萃取物用200～300目硅胶柱层析分离，硅胶填料体积为上样量体积的70倍，洗脱剂为石油醚∶乙酸乙酯＝10∶4(体积比)，每30ml收集一次，结合薄层色谱(TLC)分别收集与杨梅醇标准品TLC一致的洗脱液以及与杨梅酮标准品TLC一致的洗脱液，纯化分别得到杨梅醇、杨梅酮。

所得的氯仿萃取物、杨梅酮、杨梅醇在HPLC上进行分析，HPLC的条件同实施例1：杨梅醇、杨梅酮样品在HPLC上的峰值均与氯仿萃取物上的峰值相对应，可见特征性峰值。

杨梅醇、杨梅酮的鉴别结果同实施例1。

Claims (9)

1.一种杨梅醇和/或杨梅酮在制备抗肿瘤药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物包括用于预防和/或治疗肝癌的药物、用于预防和/或治疗肺癌的药物、用于预防和/或治疗白血病的药物、用于预防和/或治疗胃癌的药物或用于预防和/或治疗其他肿瘤的药物。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的杨梅醇或杨梅酮的制备方法包括：

用体积百分浓度为50％～95％的乙醇水溶液作为提取剂，从杨梅树皮中提取得到杨梅树皮醇提取物，浓缩挥干乙醇后加水混匀，用萃取剂氯仿或者二氯甲烷萃取，得到萃取物，再用硅胶柱或制备液相分离，分别得到杨梅醇和杨梅酮。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的提取的条件为：在50℃～100℃至少提取二次，每次提取时间为1小时～4小时。

5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，所述的提取为回流提取。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，每次提取所述的杨梅树皮与乙醇水溶液的重量比为1∶1.0～6.0。

7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，浓缩至浓度为0.2g～3.0g生药/ml。

8.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，每次萃取浓缩后杨梅树皮醇提取物与萃取剂的重量比为1∶0.5～4.0。

9.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的萃取的次数为至少二次，每次萃取的时间为1小时～4小时。

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