CN105343143B - 一种人参皂苷提取物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种人参皂苷提取物及其制备方法。提取物中含有Rb1、Rb2、Rc、Rd人参主皂苷和转化得到的抗肿瘤活性物质原人参二醇(PPD)。其制备方法采用冻融法提取人参皂苷,该方法包括以下步骤:a、取鲜人参,去除异物后切成片;b、放入超低温冰箱中冷冻,然后解冻,反复冻融;c、粉碎后加入80%甲醇水溶液超声提取,过滤,滤液减压浓缩;d、加入去离子水溶解后,用乙醚、饱和正丁醇溶液萃取,减压浓缩,得到人参皂苷提取物。本发明方法操作简单,与传统的有机溶剂法相比提取收率高、成本低,并且能够得到抗肿瘤活性物质原人参二醇(PPD)。
Description
技术领域
本发明属于天然产物分离提取领域,具体涉及一种人参皂苷提取物及其制备方法。
背景技术
人参(Panax ginseng C.A Meyer)为五加科人参属多年生宿根草本植物,主产于吉林、辽宁、黑龙江、河北、山西等地,是我国名贵的中药材,具有主补五脏、安精神、定魂魄、止惊悸、除邪气、生津止渴、安神益智、益寿延年之功效,是滋补的佳品,有“百草之王”的美誉。人参皂苷是人参的主要成分之一,约占人参总质量的4%。人参皂苷是一种固醇类化合物,属三萜类皂苷,由苷元和糖连接而成,具有相似的基本结构,根据糖苷基结构的不同分为3类:齐墩果酸型(如Ro)、人参二醇型(如Rb1、Rb2、Rg3、Rd、Rh2、PPD)、人参三醇型(Re、Rg1、Rh1、PPT),其中F2、Rg3、Rh2等存在于野山参和红参中并且含量极低,称为稀有人参皂苷。目前从人参中分离得到150余种人参皂苷单体,其具有改善微循环、保护心功能、提高组织抗缺氧能力、抗癌、抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、抗辐射、抗疲劳等多种生物活性。
目前,提取人参皂苷的方法有以下几种,煎煮法、温浸法、乙醇回流提取法、微波提取法、超声波提取法、索氏提取法、柱层析法、超临界萃取法、酶提取法等。其中,乙醇回流提取法提取效率高,但是醇对于叶绿素的溶解性较大,不易去除,从而影响提取物质量;超声波提取法应用于许多植物的有效成分的提取,操作简单,提取时间短,得率高,但是提取效果受人参含水量的影响,同时存在噪音大,影响人体健康,难以实现规模化生产的不足。
发明内容
本发明的目的是提供一种人参皂苷提取物,以及通过冻融法提取人参皂苷的制备方法,该方法操作简单、提取率高、成本低,最重要的是在冻融过程中实现人参皂苷的转化,使得人参皂苷提取物中含有抗肿瘤活性物质原人参二醇(PPD)。
本发明的目的通过采用以下技术方案实现:
一种人参皂苷提取物,由以下冻融法提取制备:
a、取鲜人参,去除异物后切成小片;
b、放入超低温冰箱中冷冻,然后解冻,反复冻融;
c、粉碎后加入80%甲醇水溶液超声提取,过滤,滤液减压浓缩;
d、加入去离子水溶解后,用乙醚、饱和正丁醇溶液萃取,减压浓缩,得到人参皂苷提取物,所得到的人参皂苷提取物中含有Rb1、Rb2、Rc、Rd人参主皂苷和转化得到的抗肿瘤活性物质原人参二醇(PPD)。
一种人参皂苷提取物的制备方法,包括以下步骤:
a、取鲜人参,去除异物后切成片;
b、放入超低温冰箱中冷冻,然后解冻;
c、粉碎后加入80%甲醇水溶液超声提取,过滤,滤液减压浓缩;
d、加入去离子水溶解后,用乙醚、饱和正丁醇溶液萃取,减压浓缩,得到人参皂苷提取物。
进一步地,所述的b步骤中冷冻温度为-30℃至-80℃,冷冻时间为5-25h;在18℃至25℃下自然解冻5-25h;重复冻融b步骤1-6次。
进一步地,所述的c步骤加入80%甲醇水溶液50-200mL,在50℃超声提取10-50min。
进一步地,所述的d步骤中,将c步骤得到的粗提物用40-60mL去离子水溶解,用等体积的乙醚萃取三次,保留下层,用40-60mL饱和正丁醇溶液提取,减压浓缩,得到人参皂苷提取物。
进一步地,所述的d步骤所得到的人参皂苷提取物中含有Rb1,Rb2,Rc,Rd人参主皂苷和转化得到的抗肿瘤活性物质原人参二醇(PPD)。
冻融法是一种广泛用于动植物、微生物和病理医学实验的方法,是指反复冷冻与融化时由于细胞中形成了冰晶,使剩余液体中盐浓度增高,导致膜组织结构不同的程度改变的一种方法。表现为细胞器膜脂质双分子层变化,横向的脂质分离成单个结构域,以及膜通透性的变化,从而有利于胞内物质流出。有报道冻融法被用于农杆菌、根瘤菌的转化研究,以及被用于植物血清素、叶绿素糖、动物血纤维蛋白原的提取和基因工程受体细胞破碎等诸多领域。
本发明的有益效果在于:
(1) 采用冻融技术提取人参有效成分人参皂苷,该方法中人参经过反复冻融导致细胞膜和组织结构的机械损伤,增强膜的通透性,促进植物细胞代谢产物的释放,从而提高有效成分的提取率。
(2) 冻融法提取人参皂苷过程中,实现人参皂苷的转化,即多糖链人参皂苷(如Rb1等)转化为生物活性更强的低糖链人参皂苷(F2等)或无糖链的原人参二醇(PPD);提取物中生成有抗肿瘤活性物质原人参二醇(PPD),这是在冻融法应用于人参皂苷提取中从未有报道的。
附图说明
图1 为本发明实验人参皂苷提取物中稀有人参皂苷PPD标准曲线。
具体实施方式
为了更清楚地理解本发明,下面通过具体的实施例进一步做详细描述。这些实施例仅用于对本发明进一步说明,而不用于限制本发明的范围。
实施例1
准确称取一定量人参(鲜参),去除异物后切成小片;-30℃冷冻12h,室温20℃下解冻5h,反复冻融3次;粉碎后加入80%甲醇水溶液,50℃超声提取20min,过滤,滤液减压浓缩;加入去离子水溶解后,用饱和正丁醇溶液萃取,减压浓缩,得到人参皂苷提取物。经HPLC测试,得到人参皂苷Rb1含量为8.06mg/g、Rc含量为4.79mg/g、Rb2含量为5.30mg/g、Rd含量为1.95mg/g。
实施例2
准确称取一定量人参(鲜参),去除异物后切成小片;-70℃冷冻12h,室温18℃至25℃下解冻10h,反复冻融4次;粉碎后加入80%甲醇水溶液50-200mL,50℃超声10-50mi,过滤,滤液减压浓缩,得粗提物;为粗提物中加入40-60mL去离子水溶解后,用等体积的乙醚萃取三次,保留下层,用40-60mL饱和正丁醇溶液提取,减压浓缩,得到人参皂苷提取物。经HPLC测试,得到人参皂苷Rb1含量为7.53mg/g,Rc含量为4.84mg/g,Rb2含量为5.40mg/g,Rd含量为1.64mg/g。
实施例3
准确称取一定量人参(鲜参),去除异物后切成小片;-80℃冷冻10h,室温18℃至25℃下解冻5-25h,反复冻融5次;粉碎后加入80%甲醇水溶液,50℃超声提取30 min,过滤,滤液减压浓缩,得粗提物;在粗提物中加入去离子水溶解后,,用等体积的乙醚萃取三次,保留下层,用40-60mL饱和正丁醇溶液提取,减压浓缩,得到人参皂苷提取物。经HPLC测试,得到人参皂苷Rb1含量为6.35mg/g,Rc含量为3.22mg/g,Rb2含量为4.07mg/g,Rd含量为1.09mg/g。
在实施例1、2、3的实施过程中,调节冻融条件可得到不同比例的人参皂苷提取物,并且在冻融过程中实现人参皂苷的转化,得到抗肿瘤活性物质原人参二醇(PPD),其含量达到0.11mg/g。人参皂苷提取物中稀有人参皂苷PPD标准曲线如图1 。
测试实施例
准确称取一定量人参,分别按照实施例1-3提供的方法提取人参皂苷,同时将未经冻融的人参作为对照组提取人参皂苷,利用高效液相色谱(HPLC)测定人参皂苷含量。
高效液相色谱法测定人参皂苷的具体步骤为:
a、精密准确称取人参皂苷标准品,色谱级甲醇溶解,利用峰面积绘制标准曲线,如图1所示,x:峰面积;y:浓度 (mg/mL);
b、色谱条件为:流动相:水(A)-乙腈(B),洗脱梯度如表1所示;流速:1mL/min;检测波长:203nm;柱温:30℃;进样体积:10μL。
表1 为高效液相色谱流动相梯度表
Claims (2)
1.一种人参皂苷提取物的制备方法,包括以下步骤:
a、取鲜人参,去除异物后切成小片;
b、放入超低温冰箱中冷冻,然后解冻,反复冻融1-6次;其中冷冻温度为-30℃至-80℃,冷冻时间为5-25h;在18℃至25℃下自然解冻5-25h;
c、粉碎后加入80%甲醇水溶液50-200mL,在50℃超声提取10-50min,过滤,滤液减压浓缩;
d、加入去离子水溶解后,用乙醚、饱和正丁醇溶液萃取,减压浓缩,得到人参皂苷提取物,所得到的人参皂苷提取物中含有Rb1、Rb2、Rc、Rd人参主皂苷和转化得到的抗肿瘤活性物质原人参二醇;
所述人参皂苷Rb1在反复冻融过程中转化为原人参二醇。
2.根据权利要求1所述的一种人参皂苷提取物的制备方法,其特征在于所述的d步骤中,将c步骤得到的粗提物用40-60mL去离子水溶解,用等体积的乙醚萃取三次,保留下层,用40-60mL饱和正丁醇溶液提取,减压浓缩,得到人参皂苷提取物。
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基于冻融辅助超声波法的小球藻多糖提取工艺优化;魏文志等;《农业工程学报》;20120831;第28卷(第16期);第270页左栏"引言"第2段、第272页右栏第2段 * |
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