CN108753900A - 一种人参内生菌发酵制备稀有人参皂苷的方法 - Google Patents
一种人参内生菌发酵制备稀有人参皂苷的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108753900A CN108753900A CN201810607745.2A CN201810607745A CN108753900A CN 108753900 A CN108753900 A CN 108753900A CN 201810607745 A CN201810607745 A CN 201810607745A CN 108753900 A CN108753900 A CN 108753900A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ginseng
- endophyte
- rare ginsenoside
- fermentation
- ginsenoside
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
- C12P33/20—Preparation of steroids containing heterocyclic rings
Abstract
本发明公开了一种人参内生菌发酵制备稀有人参皂苷的方法,包括以下步骤:1)、将人参表面清洗除菌后去除表皮或根须,切片后在平板培养基上获得纯培养;2)、将单个或多个菌落接种至液体发酵培养基中进行培养4~14天;3)、向发酵液中加入1~1.5体积的正丁醇,充分混匀,离心取上清液,真空浓缩干燥即得稀有人参皂苷。本发明采用人参内生菌发酵生产人参皂苷,内生菌生长周期短、生长迅速,易于培养而不受环境因素影响,培养基相对较简单,次级人参皂苷含量丰富,适宜工业化生产,通过加入丙酮酸、乙酰辅酶A、乙酸钠等前体物质和洛伐他汀、丁香酚等酶抑制剂可诱导产生稀有人参皂苷Rg3。
Description
技术领域
本发明涉及人参内生菌及其用途,具体为一种人参内生菌发酵制备稀有人参皂苷的方法。
背景技术
人参皂苷(Ginsenosides)是一种固醇类化合物,属三萜类皂苷,是人参药材当中的主要药理活性成分。人参皂苷的结构分两个部分,其中一部分是疏水的苷元,另一个部分是亲水的糖基。根据其皂苷元的不同,人参皂苷可以分为三大类:齐墩果酸型皂苷(如Ro)、人参二醇型皂苷(如Rb1、Rb2、Rg3、Rd、Rh2、PPD)、人参三醇型皂苷(如Re、Rg1、Rh1、PPT),其中Rg3、Rh2等存在于野山参和红参中并且含量极低,称为稀有人参皂苷(Rareginsenosides)。稀有人参皂苷对促进肿瘤细胞凋亡、促使肿瘤细胞的分化、提高机体免疫力等方面有重要的作用。
目前,制备稀有人参皂苷的方法有化学法和生物转化法,主要采用在人参中含量较高的Rb1、Rb2、Rc、Rd等主皂苷(Majorginsenosides)分子的糖基选择性地水解制备稀有皂苷的方法。化学法如酸水解、碱水解和Smith降解法等,虽然操作简单,但专一性差,难以得到某种特定结构的单体皂苷,并且收率很低,同时造成环境污染。此外,还有用化学催化剂合成稀有人参皂苷的研究报道,但是以上化学合成人参皂苷的方法存在许多缺陷,一般需要多步的保护和去保护步骤,产率较低。生物转化法是利用生物体内产生的酶的降解作用来,选择性地水解皂苷分子的侧链糖基,以达到结构修饰的目的,与化学法相比,具有高专一性、反应条件温和、无污染等特点,但是以人参或三七中得到的人参皂苷为原料,因此成本较高,并且大量获取稀有皂苷比较困难。
研究表明,生长于植物体内的内生菌产生与其宿主相同的化学成分,内生菌是获取植物活性成分的重要来源。通过内生菌发酵直接生产抗肿瘤稀有人参皂苷,其优越性是显而易见的,内生菌生长周期短、生长迅速,易于培养而不受环境因素影响,培养基相对较简单;微生物发酵法容易扩大化,利于工业化生产,成本低廉,具有十分重要的经济及生态效益等。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利用人参内生菌制备稀有人参皂苷(F2、Rg3、Rh2等)的方法。
一种人参内生菌发酵制备稀有人参皂苷的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)、首先利用流水冲洗人参,将人参表面清洗后,依次用75%乙醇、无菌水、1%次氯酸钠溶液漂洗,用滤纸擦干表面,用无菌刀去除根、茎或叶的表皮或根须,切成0.8~1.2mm×4~6mm×4~6mm的小片后分别放在PDA、LB和R2A平板培养基上培养2-7d,经过划线分离和培养得到单个菌落,从而获得纯培养;
2)、将单个或多个菌落接种至液体发酵培养基中进行培养4~14天;
3)、向发酵液中加入1~1.5体积的正丁醇,充分混匀,离心取上清液,真空浓缩干燥即得稀有人参皂苷。
液体培养基的配方为0.5g NH4Cl,1.0g K2HPO4,0.5g KH2PO4,0.25g MgSO4和1.0g酵母粉和水1000ml。培养的温度为30℃~40℃,pH 5-7。
进一步的,在培养基中加入丙酮酸、乙酰辅酶A、乙酸钠等前体物质和洛伐他汀、丁香酚等酶抑制剂可诱导产生稀有人参皂苷Rg3。
在液体培养基中加入多个菌落,以混合菌群的内生菌发酵可得到稀有人参皂苷(F2、Rg3、Rh2等)。
有益效果:本发明采用人参内生菌发酵生产人参皂苷,内生菌生长周期短、生长迅速,易于培养而不受环境因素影响,培养基相对较简单,次级人参皂苷含量丰富,适宜工业化生产,通过加入丙酮酸、乙酰辅酶A、乙酸钠等前体物质和洛伐他汀、丁香酚等酶抑制剂可诱导产生稀有人参皂苷Rg3。
具体实施方式
为了更清楚地理解本发明,下面通过具体的实施例进一步做详细描述。这些实施例仅用于对本发明进一步说明,而不用于限制本发明的范围。
实施例1
内生菌的分离:
首先利用流水冲洗6年生人参根,去除人参表面的泥土等杂质,然后依次用75%乙醇漂洗1分钟,无菌水冲洗4次,1%次氯酸钠溶液浸泡10分钟,再用无菌水冲洗4次,用滤纸擦干表面,用无菌刀切除人参表皮及根须,并切成1mm×5mm×5mm小片,然后分别放在PDA平板培养基上培养2d,经过划线分离和培养得到单个菌落,从而获得纯培养。
菌种发酵培养:
150mL的LL液体培养基,利用高压蒸汽灭菌器,在121℃条件下灭菌40分钟,放置生物安全净化操作台冷却至室温后,接种混合内生菌PDA-M,放置空气浴振荡器在30℃、150rpm条件下发酵4d后,得到发酵产物;利用移液枪取600μL的样品,加入1:1比例的正丁醇,充分混匀,离心,取上清液,提取发酵产物并用HPLC分析。经HPLC测试,得到稀有人参皂苷F2(14.5mg)、Rg3(15.5mg)和Rh2(4.65mg)。
实施例2
内生菌的分离:
首先利用流水冲洗6年生人参根,去除人参表面的泥土等杂质,然后依次用75%乙醇漂洗1分钟,无菌水冲洗4次,1%次氯酸钠溶液浸泡10分钟,再用无菌水冲洗4次,用滤纸擦干表面,用无菌刀切除人参表皮及根须,并切成1mm×5mm×5mm小片,然后分别放在R2A平板培养基上培养2d,经过划线分离和培养得到单个菌落,从而获得纯培养。
菌种发酵培养:
向150mL的LL液体培养基中添加0.01mol丙酮酸,利用高压蒸汽灭菌器,在121℃条件下灭菌40分钟,放置生物安全净化操作台冷却至室温后,接种混合内生菌R2A-M,放置空气浴振荡器在30℃、150rpm条件下发酵4d后,得到发酵产物;利用移液枪取600μL的样品,加入1:1比例的正丁醇,充分混匀,离心,取上清液,提取发酵产物并用HPLC分析。经HPLC测试,得到稀有人参皂苷Rg3(14.8mg)。
人参皂苷检测
用移液枪取600μL的发酵液样品,按照实施例1-2提供的方法进行发酵,提取人参皂苷,利用高效液相色谱(HPLC)测定人参皂苷的含量。
高效液相色谱法测定人参皂苷的具体步骤为:
a、精密准确称取人参皂苷标准品,色谱级甲醇溶解,利用峰面积绘制标准曲线。
b、色谱条件为:流动相:水(A)-乙腈(B),洗脱梯度如表1所示;流速:1mL/min;检测波长:203nm;柱温:30℃;进样体积:10μL。
表1高效液相色谱流动相梯度表
Claims (5)
1.一种人参内生菌发酵制备稀有人参皂苷的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)、首先利用流水冲洗人参,将人参表面清洗后,依次用75%乙醇、无菌水、1%次氯酸钠溶液漂洗,用滤纸擦干表面,用无菌刀去除根、茎或叶的表皮或根须,切片后分别放在PDA、LB和R2A平板培养基上培养2-7d,经过划线分离和培养得到单个菌落,从而获得纯培养;
2)、将单个或多个菌落接种至液体发酵培养基中进行培养4~14天;
3)、向发酵液中加入1~1.5体积的正丁醇,充分混匀,离心取上清液,真空浓缩干燥即得稀有人参皂苷。
2.如权利要求1所述的人参内生菌发酵制备稀有人参皂苷的方法,其特征在于,所述步骤2)中的液体培养基的配方为0.5g NH4Cl,1.0g K2HPO4,0.5g KH2PO4,0.25g MgSO4和1.0g酵母粉和水1000ml。
3.如权利要求1所述的人参内生菌发酵制备稀有人参皂苷的方法,其特征在于,所述步骤2)中培养的温度为30℃~40℃,pH 5-7。
4.如权利要求2所述的人参内生菌发酵制备稀有人参皂苷的方法,其特征在于,所述步骤2)中在培养基中加入丙酮酸、乙酰辅酶A、乙酸钠、洛伐他汀和丁香酚中的一种或多种,可诱导产生稀有人参皂苷Rg3。
5.如权利要求1所述的人参内生菌发酵制备稀有人参皂苷的方法,其特征在于,所述步骤1)中将用无菌刀去除根、茎或叶的表皮或根须,切成0.8~1.2mm×4~6mm×4~6mm小片。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810607745.2A CN108753900A (zh) | 2018-06-13 | 2018-06-13 | 一种人参内生菌发酵制备稀有人参皂苷的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810607745.2A CN108753900A (zh) | 2018-06-13 | 2018-06-13 | 一种人参内生菌发酵制备稀有人参皂苷的方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN108753900A true CN108753900A (zh) | 2018-11-06 |
Family
ID=64021548
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201810607745.2A Pending CN108753900A (zh) | 2018-06-13 | 2018-06-13 | 一种人参内生菌发酵制备稀有人参皂苷的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN108753900A (zh) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109536561A (zh) * | 2018-11-28 | 2019-03-29 | 吉林农业大学 | 一种利用人参内生菌转化人参皂苷Rb1为稀有人参皂苷的方法 |
CN112391437A (zh) * | 2020-11-17 | 2021-02-23 | 江南大学 | 粗毛硬革菌与纤维素酶固态发酵制备稀有人参皂苷的方法 |
CN113502230A (zh) * | 2021-07-13 | 2021-10-15 | 长春中医药大学 | 猴头菇菌株及其培养方法、猴头菌-人参双向固体发酵方法和高效转化稀有人参皂苷的方法 |
CN115554327A (zh) * | 2022-10-18 | 2023-01-03 | 赣州禾绿康健生物技术有限公司 | 一种高含量稀有皂苷混合物的制备方法 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101928671A (zh) * | 2009-12-03 | 2010-12-29 | 延边大学 | 一种链格孢属菌及其发酵人参茎叶总皂苷制备人参皂苷Rg3的方法 |
CN103255193A (zh) * | 2013-03-05 | 2013-08-21 | 吉林农业大学 | 一种人参内生多粘类芽孢杆菌转化人参皂苷的方法 |
CN104232671A (zh) * | 2013-06-20 | 2014-12-24 | 中国科学院微生物研究所 | 筛选具有将大量存在的人参皂苷转化为稀有人参皂苷的能力的菌株的方法 |
CN105343143A (zh) * | 2015-11-06 | 2016-02-24 | 延边大学 | 一种人参皂苷提取物及其制备方法 |
CN105755090A (zh) * | 2016-03-18 | 2016-07-13 | 郭志刚 | 利用竹节参细胞大规模培养和生物转化技术获得竹节参皂苷等次生代谢产物的方法 |
-
2018
- 2018-06-13 CN CN201810607745.2A patent/CN108753900A/zh active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101928671A (zh) * | 2009-12-03 | 2010-12-29 | 延边大学 | 一种链格孢属菌及其发酵人参茎叶总皂苷制备人参皂苷Rg3的方法 |
CN103255193A (zh) * | 2013-03-05 | 2013-08-21 | 吉林农业大学 | 一种人参内生多粘类芽孢杆菌转化人参皂苷的方法 |
CN104232671A (zh) * | 2013-06-20 | 2014-12-24 | 中国科学院微生物研究所 | 筛选具有将大量存在的人参皂苷转化为稀有人参皂苷的能力的菌株的方法 |
CN105343143A (zh) * | 2015-11-06 | 2016-02-24 | 延边大学 | 一种人参皂苷提取物及其制备方法 |
CN105755090A (zh) * | 2016-03-18 | 2016-07-13 | 郭志刚 | 利用竹节参细胞大规模培养和生物转化技术获得竹节参皂苷等次生代谢产物的方法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
CUI L等: "Microbial conversion of major ginsenosides in ginseng total saponins by Platycodon grandiflorum endophytes", 《JOURNAL OF GINSENG RESEARCH》 * |
崔磊等: "党参内生菌转化人参根总皂苷为稀有人参皂苷F2和C-K的研究", 《延边大学学报(自然科学版)》 * |
毛自朝: "《植物生理学》", 30 August 2017, 武汉:华中科技大学出版社 * |
金护定等: "前体物质对内生菌产人参皂苷的影响研究", 《中国化学会第30届学术年会摘要集-第九分会:有机化学》 * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109536561A (zh) * | 2018-11-28 | 2019-03-29 | 吉林农业大学 | 一种利用人参内生菌转化人参皂苷Rb1为稀有人参皂苷的方法 |
CN112391437A (zh) * | 2020-11-17 | 2021-02-23 | 江南大学 | 粗毛硬革菌与纤维素酶固态发酵制备稀有人参皂苷的方法 |
CN113502230A (zh) * | 2021-07-13 | 2021-10-15 | 长春中医药大学 | 猴头菇菌株及其培养方法、猴头菌-人参双向固体发酵方法和高效转化稀有人参皂苷的方法 |
CN113502230B (zh) * | 2021-07-13 | 2023-07-04 | 长春中医药大学 | 猴头菇菌株及其培养方法、猴头菌-人参双向固体发酵方法和高效转化稀有人参皂苷的方法 |
CN115554327A (zh) * | 2022-10-18 | 2023-01-03 | 赣州禾绿康健生物技术有限公司 | 一种高含量稀有皂苷混合物的制备方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN108753900A (zh) | 一种人参内生菌发酵制备稀有人参皂苷的方法 | |
CN103352062B (zh) | 一种制备单葡萄糖醛酸基甘草次酸的方法 | |
CN105255984A (zh) | 一种利用植物复合酶转化人参皂苷的方法 | |
CN104232498B (zh) | 一种纤维化纤维微细菌菌株及其应用 | |
CN1982438A (zh) | 一株芽孢杆菌及用其制备单糖链人参皂苷及苷元的方法 | |
CN111617120B (zh) | 一种人参虫草发酵提取物的制备方法 | |
CN116426391B (zh) | 一株出芽短梗霉Aureobasidium pullulans P1及其应用 | |
CN103255194B (zh) | 一种提高16α,17α-环氧黄体酮转化率的方法 | |
CN111218406B (zh) | 卷枝毛霉mf-8及其提高土茯苓中花旗松素含量的应用 | |
CN106011213A (zh) | 一种生物转化降解黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法 | |
CN103937691B (zh) | 一株产β‑果糖苷酶的米曲霉菌株及其培养方法与应用 | |
WO2020134688A1 (zh) | 一种发酵猴头菌制备高纯度猴头菌多糖的方法和发酵培养基 | |
CN102226152B (zh) | 双胞柱孢菌及利用其制备人参皂苷Rh2的方法 | |
CN101638639B (zh) | 一种利用竹黄菌发酵生产超氧化物歧化酶的方法 | |
KR20210058416A (ko) | 진세노사이드 컴파운드 케이 전환 효소를 생산하는 신규 누룩균 아스퍼질러스 나이거 c2-2 균주 및 이의 이용 | |
CN113881602B (zh) | 一种高产c21甾体化合物的蜡样芽孢杆菌x-32及其应用 | |
CN112094762B (zh) | 一株葡萄牙棒孢酵母菌株及其应用 | |
CN101671714A (zh) | 稀有人参皂甙ih-901的制备方法 | |
CN104862238B (zh) | 一株酿酒酵母及其应用 | |
Chen et al. | Biotransformation of saponins to astragaloside IV from Radix Astragali by immobilized Aspergillus niger | |
KR102084980B1 (ko) | 신규한 아스퍼질러스 오리재 gbe174 균주 및 이를 이용한 인삼 열매 발효 추출물 제조 방법 | |
CN111485012A (zh) | 一种甘草发酵制备单葡萄糖醛酸甘草次酸的方法 | |
CN105199966B (zh) | 一种转化人参皂苷Rb1生产Rd的曲霉及应用 | |
CN111235186B (zh) | 微生物转化六叶茜用来提取植物染料的方法 | |
CN117089465B (zh) | 一种疣梗曲霉及应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20181106 |