CN105309856B - 一种银杏花粉发酵口服液及其制备方法 - Google Patents
一种银杏花粉发酵口服液及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于保健品技术领域，具体地说，本发明涉及一种银杏花粉发酵口服液：将银杏花粉粉碎得到破壁银杏花粉；将破壁银杏花粉、糖、纯净水混合，灭菌得发酵培养基；将活化好的鼠李糖杆菌和短乳杆菌液体菌种分别接入菌种培养基，发酵培养，分别得到两种种子液；将两种种子液接入发酵培养基中发酵，直至发酵液pH值3.5以下停止发酵；过滤发酵液即得。选择异型乳酸发酵菌—短乳杆菌代替之前的嗜酸乳杆菌，与鼠李糖乳杆菌组合来发酵银杏花粉，得到的产品对高血压和便秘均有治疗效果；相比原口服液，本发明制备的银杏花粉发酵口服液具有更好的气味、口感，而且经试验证明具有更强的增强免疫力的效果。
Description
技术领域
本发明属于保健品技术领域，具体地说，本发明涉及一种银杏花粉发酵口服液，本发明还涉及银杏花粉发酵口服液的制备方法。
背景技术
银杏（Gingko biloba L.）花粉富含人体必需的氨基酸、维生素、矿质元素、黄酮等成分，与赤松花粉、玉米花粉等常见花粉相比，营养更为丰富。其必需氨基酸、可利用的矿物质元素和维生素等均高于其他花粉，其中具有清除自由基，延缓衰老作用的功能因子维生素E的含量高达30 mg/kg。研究表明，银杏花粉有抗衰老作用，并能用于糖尿病、动脉粥样硬化和肿瘤等疾病的辅助治疗。但对于含银杏花粉的保健品，仍然少见报道。
乳酸菌属于兼性厌氧菌，能发酵一定的糖类，产生乳酸，分解蛋白质和脂肪的能力较弱。乳酸菌具有促进营养物质吸收、改善肠道菌群、降低血清胆固醇水平和血脂浓度、抗高血压等有益作用，被广泛用于食品、药品中。
为综合上述两种产品的保健功能，并在此基础上达到更多更好的效果，发明人已开发了多种银杏花粉益生菌发酵产品，如专利号为201010239721X，名称为“益生菌银杏花粉口服液的制备方法”的中国发明专利（以下简称原口服液）、专利号为2010102416723，名称为“一种益生菌银杏花粉冻干粉及其制备方法”的中国发明专利。
上述两项专利均记载了银杏花粉使用鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）和嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）两种益生菌进行发酵得到相应产品的技术方案。试验证明这些产品具有抗高血压，便秘等功效，并有一定的免疫增强效果。但一方面，这些产品的气味（有发酵产生的异味）、口感上存在较大不足，造成消费者接受困难，另一方面，小鼠试验表明，这些产品的增强免疫力的效果尚有待增强。
发明内容
为了解决以上现有银杏花粉保健品存在的口感上有发酵异味，保健功能仍有开发余地的问题，本发明提供了一种口感更佳、保健效果更好的银杏花粉发酵口服液。
本发明还提供了所述银杏花粉发酵口服液的制备方法。
本发明是通过以下措施实现的：
一种银杏花粉发酵口服液，是通过以下步骤得到的：
（1）使用振动磨粉碎干燥的银杏花粉25分钟，得到破壁银杏花粉；
（2）将破壁银杏花粉、糖、纯净水混合，高温灭菌得发酵培养基；
（3）以2-10%的接种量将活化好的鼠李糖杆菌和短乳杆菌液体菌种分别接入菌种培养基，发酵培养，分别得到两种种子液；优选接种量为5%；
（4）以各0.5-4%的接种量将两种种子液接入步骤（2）中得到的发酵培养基中发酵，直至发酵液pH值3.5以下，停止发酵；优选接种量为2%；
（5）过滤发酵液，即得。
所述的银杏花粉发酵口服液，所述鼠李糖杆菌和短乳杆菌的保藏编号分别为CGMCC 1.22和CGMCC 1.558。
所述的银杏花粉发酵口服液，破壁银杏花粉、糖、纯净水的重量比为1-10：4-9：81-95，优选重量比为5：7：88。
所述的银杏花粉发酵口服液，步骤（3）中发酵培养条件为37℃下静置培养12小时。
所述的银杏花粉发酵口服液，步骤（3）中菌种培养基为MRS培养基，组成为：蛋白胨10.0 g，牛肉膏 10.0 g，酵母膏 5.0 g，柠檬酸氢二铵 2.0 g，葡萄糖 20.0 g，吐温80 1.0mL，乙酸钠 5.0 g，磷酸氢二钾 2.0 g，硫酸镁 0.58 g，硫酸锰 0.25 g，蒸馏水1 000 mL。调pH 6.2~6.6。
所述的银杏花粉发酵口服液，步骤（4）中发酵条件为发酵培养基用塑料膜密封，厌氧条件下，37℃静置发酵培养。
所述的银杏花粉发酵口服液，步骤（5）中发酵液过滤后添加8%重量的蜂蜜调味，无菌灌装成口服液产品。
本发明的有益效果：
经过对多种菌种发酵性能的理论研究和试验对比，选择了高产酸和乳杆菌素的异型乳酸发酵菌—短乳杆菌代替之前的嗜酸乳杆菌，与鼠李糖乳杆菌组合来发酵银杏花粉，得到的产品对高血压和便秘均有治疗效果；相比原口服液，本发明制备的银杏花粉发酵口服液具有更好的气味、口感，而且经试验证明具有更强的增强免疫力的效果；本发明制备的银杏花粉发酵口服液为银杏花粉保健品的实际生产、销售奠定了良好的基础。
具体实施方式
为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步说明。
主要试验材料
银杏花粉采自山东郯城。鼠李糖杆菌和短乳杆菌购自中国普通微生物菌种保藏管理中心，菌种编号为CGMCC 1.22和CGMCC 1.558。
实施例1
（1）使用振动磨粉碎干燥的银杏花粉25分钟，得到破壁银杏花粉；
（2）将破壁银杏花粉、红糖、纯净水按5：7：88的重量比例混合，高温灭菌后得发酵培养基；
（3）以各5%的接种量将活化好的鼠李糖杆菌CGMCC 1.22和短乳杆菌CGMCC 1.558液体菌种分别接入MRS培养基，37℃下静置培养12小时，得到种子液；在此实施例中，菌种培养基不仅仅限于MRS培养基，只要能达到使两种菌种培养目的的培养基，都可以在此实施例中使用；
（4）以各2%的接种量将鼠李糖杆菌CGMCC 1.22和短乳杆菌CGMCC 1.558种子液接入步骤b中得到的发酵培养基，封口，塑料膜密封，厌氧条件下，37℃静置发酵培养，测定发酵液pH值3.5以下后，停止发酵；
（5）过滤发酵液，添加8%的蜂蜜调味。
实施例2
（1）使用振动磨粉碎干燥的银杏花粉25分钟，得到破壁银杏花粉；
（2）将破壁银杏花粉、红糖、纯净水按6：8：86的重量比例混合，高温灭菌后得发酵培养基；
（3）以各3%的接种量将活化好的鼠李糖杆菌CGMCC 1.22和短乳杆菌CGMCC 1.558液体菌种分别接入MRS培养基，37℃下静置培养12小时，得到种子液；
（4）以各4%的接种量将鼠李糖杆菌CGMCC 1.22和短乳杆菌CGMCC 1.558种子液接入步骤b中得到的发酵培养基，封口，塑料膜密封，厌氧条件下，37℃静置发酵培养，测定发酵液pH值3.5以下后，停止发酵；
（5）过滤发酵液，添加8%的蜂蜜调味。
实施例3
（1）使用振动磨粉碎干燥的银杏花粉25分钟，得到破壁银杏花粉；
（2）将破壁银杏花粉、红糖、纯净水按1：9：81的重量比例混合，高温灭菌后得发酵培养基；
（3）以各2%的接种量将活化好的鼠李糖杆菌CGMCC 1.22和短乳杆菌CGMCC 1.558液体菌种分别接入MRS培养基，37℃下静置培养12小时，得到种子液；
（4）以各0.5%的接种量将鼠李糖杆菌CGMCC 1.22和短乳杆菌CGMCC 1.558种子液接入步骤b中得到的发酵培养基，封口，塑料膜密封，厌氧条件下，37℃静置发酵培养，测定发酵液pH值3.5以下后，停止发酵；
（5）过滤发酵液，添加8%的蜂蜜调味。
实施例4
（1）使用振动磨粉碎干燥的银杏花粉25分钟，得到破壁银杏花粉；
（2）将破壁银杏花粉、红糖、纯净水按10：4：95的重量比例混合，高温灭菌后得发酵培养基；
（3）以各10%的接种量将活化好的鼠李糖杆菌CGMCC 1.22和短乳杆菌CGMCC 1.558液体菌种分别接入MRS培养基，37℃下静置培养12小时，得到种子液；
（4）以各3%的接种量将鼠李糖杆菌CGMCC 1.22和短乳杆菌CGMCC 1.558种子液接入步骤b中得到的发酵培养基，封口，塑料膜密封，厌氧条件下，37℃静置发酵培养，测定发酵液pH值3.5以下后，停止发酵；
（5）过滤发酵液，添加8%的蜂蜜调味。
对比实施例1
同实施例1相比，只是将实施例1中的鼠李糖杆菌CGMCC 1.22和短乳杆菌CGMCC1.558替换为原口服液中的鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳杆菌，其余操作同实施例1完全一致。
口服液指标检测结果
1、感官指标
外观：本发明制备的银杏花粉发酵口服液色泽呈均匀一致的淡黄色，入口细腻,酸甜适度，有乳酸菌特有的香味，无悬浮物。
稳定性：相比原口服液，本发明制备的银杏花粉发酵口服液经长时间（3个月）室温存放后产生的絮状沉淀明显较少。本发明制备的银杏花粉发酵口服液常温存放一个月，没有絮状沉淀，常温存放两个月，有少量絮状沉淀，常温存放三个月，絮状沉淀增加不明显。原口服液常温存放一个月，就出现少量絮状沉淀，常温存放两个月，絮状沉淀增加明显，常温存放三个月，容器底部出现一层絮状沉淀沉积。
品尝试验：50人品尝试验表明，相比原口服液，本发明制备的银杏花粉发酵口服液气味和口感更佳（50位品尝者中44位选择更喜欢本发明的口服液，6位选择了两种产品相似，无人选择更喜欢原口服液。本发明的银杏花粉发酵口服液有效克服了原口服液的气味异味和口感不佳问题。
2、理化指标：酸度55-70。
3、微生物指标：乳酸菌活菌数≥1×108CFU/ml；酵母菌和致病菌未检出。
4、安全性试验和免疫效果试验
试验方案：取小鼠60只（昆明种小鼠，雌雄各半，山东大学实验动物中心提供，SPF级动物，许可证号：SCXK（鲁）20090001，编号：0009280），随机分为给药组1（使用本发明实施例1制备的银杏花粉发酵口服液），给药组2（使用对比实施例1制备得到的口服液）和空白对照组。给药组均按0.4mL/10g给小鼠灌胃相应药液，一日两次：空白对照组给予小鼠同等体积的蒸馏水灌胃。连续观察14天。观察记录动物的饮食、活动、大小便及有无死亡等情况。观察期结束，将小鼠脱臼处死解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、小肠等脏器的改变情况；并取小鼠胸腺、脾脏，电子天平称重，计算胸腺系数和脾脏系数，进行统计分析。
结果：给药之后小鼠均活动自如，未发现明显异常反应。除给药组2的1只小鼠体重逐渐减轻，第5日死亡（解剖后发现小鼠肺部明显充血，其他脏器未见明显异常，可能因为银杏花粉组药液浓度过高，不溶于水，灌胃时易堵灌胃器，操作难度较大，反复操作引起的肺炎反应）外，其余小鼠14日后全部存活，活动自如，毛发光滑，饮食正常，呼吸道、眼及口腔等处无异常分泌物，未发现明显的中毒症状，体重均有增加。14天观察期结束，将小鼠脱臼处死解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、小肠等脏器均未见明显异常表现。
给药对小鼠胸腺系数、脾脏系数的影响
*相比空白对照组p<0.01；#相比给药组p<0.01。
可见本发明实施例1制备的银杏花粉发酵口服液能明显增加雄性小鼠胸腺系数和脾脏系数（特别是脾脏系数），其效果较原口服液明显更强（# p<0.01）。
5、保健效果试验
20例轻度高血压和20例轻度便秘患者选自山东大学附属齐鲁医院临床确证的患者。在不使用其他药物的情况下，患者每日服用50mL本发明实施例1制备的银杏花粉发酵口服液，持续1个月时间。
经20例高血压和20例便秘患者的初步验证，本发明制备的银杏花粉发酵口服液具有改善高血压和便秘的功效，随访中分别有12例（高血压）和15例（便秘）患者显示症状有改善。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受实施例的限制，其它任何未背离本发明的精神实质与原理下所做的改变、修饰、组合、替代、简化均应为等效替换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种银杏花粉发酵口服液，其特征是通过以下步骤得到的：
（1）将干燥的银杏花粉粉碎，得到破壁银杏花粉；
（2）将破壁银杏花粉、糖、纯净水混合，灭菌得发酵培养基，所述的破壁银杏花粉、糖、纯净水的重量比为1-10：4-9：81-95；
（3）以各2-10%的接种量将活化好的鼠李糖杆菌和短乳杆菌液体菌种分别接入菌种培养基，发酵培养，分别得到两种种子液；
（4）以各0.5-4%接种量将两种种子液接入步骤（2）中得到的发酵培养基中发酵，直至发酵液pH值3.5以下，停止发酵；
（5）过滤发酵液,添加8%的蜂蜜调味，无菌灌装成口服液产品；
其中，所述鼠李糖杆菌和短乳杆菌的保藏编号分别为CGMCC 1.22和CGMCC 1.558。
2.根据权利要求1中所述的银杏花粉发酵口服液，其特征在于步骤（3）中菌种接种量分别为5%。
3.根据权利要求2中所述的银杏花粉发酵口服液，其特征在于步骤（4）中种子液接种量分别为2%。
4.根据权利要求1中所述的银杏花粉发酵口服液，其特征在于破壁银杏花粉、糖、纯净水的重量比为5：7：88。
5.根据权利要求1中所述的银杏花粉发酵口服液，其特征在于步骤（3）中发酵培养条件为37℃下静置培养12小时。
6.根据权利要求1中所述的银杏花粉发酵口服液，其特征在于步骤（3）中菌种培养基为MRS培养基，组成为：蛋白胨 10.0 g，牛肉膏 10.0 g，酵母膏 5.0 g，柠檬酸氢二铵 2.0 g，葡萄糖 20.0 g，吐温80 1.0 mL，乙酸钠 5.0 g，磷酸氢二钾 2.0 g，硫酸镁 0.58 g，硫酸锰 0.25 g，蒸馏水1 000 mL，调pH 6.2~6.6。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的银杏花粉发酵口服液，其特征在于步骤（4）中发酵条件为发酵培养基用塑料膜密封，厌氧条件下，37℃静置发酵培养。
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