CN105301166A - 一种骨科敷药的质量标准及其检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于治疗骨折的中药制剂骨科敷药的质量标准及其检测方法，属于中药技术领域。本发明公开了骨科敷药的质量控制方法，该方法包括白及、红花、地龙等三味药的薄层鉴别方法和白芷中欧前胡素（C16H14O4）的含量测定，骨科敷药每1g含白芷以欧前胡素C16H14O4计，不得少于0.05mg。本发明所建立的质量检测方法能够有效的保障骨科敷药的质量，有利于工业化生产的质量控制。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别是涉及一种用于治疗骨折及骨伤疾病的中药制剂骨科敷药的质量标准及其检测方法。
背景技术
骨折及跌打损伤等骨伤疾病为外科的一种常见病、多发病，在不同年龄段的人群中均有较高的发生率。其中西医治疗骨折的常规方法是复位、固定、功能锻炼，最终使患者受伤的肢体最大限度的恢复功能。但这些方法相对来说治愈周期很长（少则3-6个月，多则1-2年）、费用高，而且使患者长期承受较大的痛苦。西医对于跌打损伤的治疗则采用口服消炎药、外用抗菌药进行治疗，而西药的副作用是人所共知的。
我国传统中医中药的发展有着悠久的历史，历代中医根据患者病情的不同需要，往往会在临床治疗时，灵活运用汤、膏、丸、散等不同剂型内、外兼治，有“药食同源”的理论作基础，来源于天然产物，毒副作用较小，可以长期使用，因此尤其适合于骨折及跌打损伤患者的治疗。如采用具有活血化瘀、舒筋止痛、生肌健骨等功效的中药，通过合理组方、内服外敷的方法加速骨折、骨伤的愈合。另外，在众多的骨折及跌打损伤患者当中，少年儿童占有很大一部分比例，少年儿童因其骨骼及各组织器官尚处于生长发育阶段，如采用西医疗法服用西药，对其生长发育必将产生更多的不良影响，因此，对少年儿童骨伤患者，更需要采用治疗效果好且无毒副作用的中药制剂进行治疗。
现有的中药制剂种类众多，亦各有所长。但多数的中药骨伤制剂缺乏科学合理的质量控制标准，无法保证制剂质量的稳定，进而存在一定的安全隐患。
本发明中的骨科敷药由蛤壳、白及、穿山甲、白芷、红花、续断、大黄、地龙、骨碎补等9味中药组成，具有行气散瘀、消肿止痛之功效，临床用于跌打损伤后局部红、肿、热、痛等症，也可用于损伤后期软组织僵硬或粘连等，具有疗效确切，治疗效果好的特点。但目前该制剂尚缺乏质量控制标准，无法有效的对该制剂进行科学合理的质量监控，因而也无法保证药品的疗效。
发明内容
基于此，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足，提供一种用于治疗骨伤疾病的中药制剂-骨科敷药的质量控制标准及检测方法。
为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：对制剂中的白及、红花、地龙进行薄层鉴别，对白芷中的欧前胡素（C16H14O4）进行含量测定。
本骨科敷药的质量控制方法包括如下鉴别和/或含量测定：
鉴别包括如下方法中的一种或几种：
A、白及薄层鉴别：取骨科敷药0.5-5g，加5-50mL的60-80%的甲醇或乙醇水溶液，超声或回流处理20-60min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL使溶解，用石油醚、乙醚或乙酸乙酯振摇提取2-4次，每次10-20mL，合并提取液，挥至1mL，作为供试品溶液；另取白及对照药材0.5-3g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各2-10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇（6:2.5:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃条件下加热数分钟，放置30-60min。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置紫外光灯（365nm）下检视，在相同位置上显相同的棕红色荧光斑点。
B、红花薄层鉴别：取骨科敷药0.5-5g，加5-15mL的70-90%丙酮溶液，密塞，振摇10-20min，静置，过滤，滤液浓缩至5mL，作为供试品溶液。另取红花对照药材0.2-2g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各2-10μl，点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7:2:3:0.4）作为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
C、地龙薄层鉴别：取骨科敷药1-5g，加10-50mL的蒸馏水，加热至沸，放冷，离心，取上清液浓缩至10mL，作为供试品溶液；另取赖氨酸对照品、亮氨酸对照品、缬氨酸对照品，分别加水制成每1mL含0.1-2mg的溶液，作为对照品溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述4种溶液1-10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以印三酮试液，于105℃条件下加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
取骨科敷药0.5-5g，加三氯甲烷5-50mL，超声或回流处理10-30min，滤过，滤液蒸干，残渣加1mL三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液；另取地龙对照药材0.5-2g，同法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各3-10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
白芷的含量测定
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-水（40-80:30-70）；柱温为25℃；检测波长为254nm；理论板数按欧前胡素峰计应不低于3000；
对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥24小时的欧前胡素对照品适量，精密称定后置于100mL容量瓶中，加甲醇、乙醇或氯仿溶解，定容，制成每1mL含1-20μg的溶液，摇匀，过0.22μm滤膜，续滤液即为标准品溶液；
供试品溶液的制备取骨科敷药1-10g，精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇、乙醇或氯仿45mL，超声处理0.5-1.5h，加甲醇、乙醇或氯仿定容；或置于圆底烧瓶中，精密加入甲醇、乙醇或氯仿50mL，称重，回流提取0.5-1.5h，放冷，加甲醇、乙醇或氯仿补足重量，摇匀，过0.22μm滤膜，续滤液即为供试品溶液；
测定方法于高效液相色谱仪中分别自动进样对照品溶液与供试品溶液各10μL，测定，即得；骨科敷药每1g含白芷以欧前胡素（C16H14O4）计，不得少于0.05mg。
本发明骨科敷药的质量控制方法优选如下鉴别和/或含量测定方法：
鉴别优选如下方法中的一种或几种：
A、白及薄层鉴别：取骨科敷药2g，加20mL的70%甲醇，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次15mL，合并乙醚提取液，挥至1mL，作为供试品溶液；另取白及对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法，分别吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各8μl，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇（6:2.5:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃条件下加热数分钟，放置30-60min。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置紫外光灯（365nm）下检视，在同一位置上显相同的棕红色荧光斑点。
B、红花薄层鉴别：取骨科敷药0.5g，加8mL的80%丙酮溶液，密塞，振摇15min，静置，取上清液作为供试品溶液。另取红花对照药材0.5g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液10μl和对照药材溶液各5μl，点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7:2:3:0.4）作为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
C、地龙薄层鉴别：取骨科敷药1g，加10mL的蒸馏水，加热至沸，放冷，离心，取上清液作为供试品溶液；另取赖氨酸对照品、亮氨酸对照品、缬氨酸对照品，加水制成每1mL各含1.0mg、1.0mg、0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液10μl、3种对照品溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以印三酮试液，于105℃条件下加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
取骨科敷药1g，加三氯甲烷20mL，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加1mL三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液；另取地龙对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液和对照药材溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
白芷的含量测定
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-水（62:38）；柱温为25℃；检测波长为254nm；理论板数按欧前胡素峰计应不低于于3000；
对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥24小时的欧前胡素对照品适量，精密称定后置于100mL容量瓶中，加甲醇溶解后定容，制成每1mL含13μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取骨科敷药1g，精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇45mL，超声处理1h(300W，50Hz)，放冷，加甲醇定容，摇匀，过0.22μm滤膜，续滤液即为供试品溶液；
测定方法于高效液相色谱仪中分别自动进样对照品溶液与供试品溶液各10μL，测定，即得；骨科敷药每1g含白芷以欧前胡素（C16H14O4）计，不得少于0.05mg。
本发明骨科敷药的质量控制方法优选如下鉴别和/或含量测定方法：
鉴别优选如下方法中的一种或几种：
A、白及薄层鉴别：取骨科敷药4g，加50mL的80%的乙醇水溶液，回流提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次10mL，合并乙酸乙酯液，挥至1mL，作为供试品溶液；另取白及对照药材2g，同供试品溶液制备法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各3μl，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇（6:2.5:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃条件下加热数分钟，放置30-60min。供试品色谱中，在与对照药材及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置紫外光灯（365nm）下检视，在相同位置上显相同的棕红色荧光斑点。
B、红花薄层鉴别：取骨科敷药3g，加15mL的85%丙酮溶液，密塞，振摇15min，静置，过滤，滤液浓缩至5mL，作为供试品溶液。另取红花对照药材2g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液8μl、对照药材溶液2μl，点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7:2:3:0.4）作为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
C、地龙薄层鉴别：取骨科敷药5g，加50mL的蒸馏水，加热至沸，放冷，离心，取上清液浓缩至10mL，作为供试品溶液；另取赖氨酸对照品、亮氨酸对照品、缬氨酸对照品，加水制成每1mL分别含2mg的溶液，作为对照品溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述4种溶液，供试品溶液5μl，对照品溶液各2μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以印三酮试液，于105℃条件下加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
取骨科敷药5g，加三氯甲烷50mL，回流处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加1mL三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液；另取地龙对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各3μl，点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
白芷的含量测定
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-水（55:45）；柱温为25℃；检测波长为254nm；理论板数按欧前胡素峰计应不低于3000；
对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥24小时的欧前胡素对照品适量，精密称定后置于100mL容量瓶中，加氯仿溶解，定容，制成每1mL含20μg的溶液，摇匀，过0.22μm滤膜，续滤液即为标准品溶液；
供试品溶液的制备取骨科敷药10g，精密称定，置50mL量瓶中，加氯仿定容，称重，回流提取1.0h，放冷，加氯仿补足重量，摇匀，过0.22μm滤膜，续滤液即为供试品溶液；
测定方法于高效液相色谱仪中分别自动进样对照品溶液与供试品溶液各10μL，测定，即得；骨科敷药每1g含白芷以欧前胡素（C16H14O4）计，不得少于0.05mg。
本发明骨科敷药的质量控制方法优选如下鉴别和/或含量测定方法：
鉴别优选如下方法中的一种或几种：
A、白及薄层鉴别：取骨科敷药1g，加10mL的65%的甲醇水溶液，超声处理40min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL使溶解，用石油醚振摇提取3次，每次10mL，合并提取液，挥至1mL，作为供试品溶液；另取白及对照药材0.5g，同供试品溶液制备法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液和对照药材溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇（6:2.5:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃条件下加热数分钟，放置30-60min。供试品色谱中，在与对照药材及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置紫外光灯（365nm）下检视，在相同位置上显相同的棕红色荧光斑点。
B、红花薄层鉴别：取骨科敷药1g，加10mL的85%丙酮溶液，密塞，振摇15min，静置，过滤，滤液浓缩至5mL，作为供试品溶液。另取红花对照药材0.2g，同供试品溶液制备法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液和对照药材溶液各10μl，点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7:2:3:0.4）作为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
C、地龙薄层鉴别：取骨科敷3g，加25mL的蒸馏水，加热至沸，放冷，离心，取上清液浓缩至10mL，作为供试品溶液；另取赖氨酸对照品、亮氨酸对照品、缬氨酸对照品，加水制成每1mL分别含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述4种溶液各6μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以印三酮试液，于105℃条件下加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
取骨科敷药2g，加三氯甲烷20mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加1mL三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液；另取地龙对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各6μl，点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
白芷的含量测定
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-水（50:50）；柱温为25℃；检测波长为254nm；理论板数按欧前胡素峰计算应不低于3000；
对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥24小时的欧前胡素对照品适量，精密称定后置于100mL容量瓶中，加乙醇溶解，定容，制成每1mL含15μg的溶液，摇匀，过0.22μm滤膜，续滤液即为标准品溶液；
供试品溶液的制备取骨科敷药5g，精密称定，置50mL量瓶中，加乙醇40mL，超声处理40min，加乙醇定容，摇匀，过0.22μm滤膜，续滤液即为供试品溶液；
测定方法于高效液相色谱仪中分别自动进样对照品溶液与供试品溶液各10μL，测定，即得；骨科敷药每1g含白芷以欧前胡素（C16H14O4）计，不得少于0.05mg。
本发明骨科敷药的质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定，所要解决的技术问题在于克服了骨科敷药原有检测指标少而且没有含量测定指标，无法有效的控制骨科敷药质量的不足之处，改进了原有的质量标准，确定药品质量可控。本发明包含了白及、红花、地龙的鉴别方法，并建立了白芷中欧前胡素的含量测定标准。
本发明的欧前胡素含量测定方法具有精密度高、稳定性及重现性好的特点，线性试验表明欧前胡素在0.000129～4.3μg/ml范围内线性关系良好，阴性对照试验表明其专属性强。
附图说明：
图1线性关系图；
图2对照品色谱图；
图3样品色谱图；
图4阴性样品色谱图。
下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1准确度试验
1.1仪器与试药
仪器：美国Agilent高效液相色谱仪，VWD检测器；
对照品：欧前胡素对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号：11826-200410；规格：20mg，供含量测定用），使用前经五氧化二磷减压干燥24小时；
试剂：乙腈、甲醇为色谱纯试剂，水为娃哈哈纯净水。
1.2色谱条件
实验条件的选择
（1）色谱柱：色谱柱为DiamonsilC18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（62:38）；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：254nm；理论板数按欧前胡素峰计为3000以上。在此条件下，欧前胡素与样品中其他组分可基线分离；
（2）流动相的选择：其中的流动相是通过考察了不同比例的甲醇-水、乙腈-水，对结果进行比较得出，以乙腈-水（40-80:30-70）为流动相时的色谱图，欧前胡素的保留时间较合适，且各峰之间的分离效果好，因此收入正文；
（3）检测波长：其中检测波长的确定是通过对欧前胡素对照品的甲醇溶液在200～400nm范围内进行扫描，结果表明欧前胡素在254nm处有最大吸收，因此确定254nm为检测波长。
1.3对照品溶液的制备
精密称取欧前胡素对照品1.29mg，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容，摇匀，即得每1mL含欧前胡素0.129mg的对照品溶液；精密吸取上述对照品溶液1mL，用甲醇稀释定容至100mL容量瓶中，摇匀，即得1mL含欧前胡素1.29μg的对照品溶液。
1.4供试品溶液的制备
取骨科敷药约1g，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇45mL，超声处理（300W，50kHz）1h，取出，放冷，加甲醇定容，摇匀，经滤膜滤过，续滤液即为供试品溶液。
1.5方法学验证
精密称取同一骨科敷药阴性对照样品约1g，分别精密加入已知浓度的对照品（1.29μg/mL）1mL、2mL、3mL，按“1.4”方法制备加样回收供试品溶液，测定其含量，并计算回收率。试验结果表明，其平均回收率为99.58%，RSD=3.30%（n=9），本发明所用方法具有良好的回收率。
实验例2线性关系试验
分别精密量取欧前胡素对照品溶液（0.129mg/mL）,分别稀释至至30、60、120、240、480倍，自动注入液相色谱仪10μL，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，以对照品浓度为横坐标作回归方程，得Y=90667x+0.844，R2=0.9996(N=5)。
表明欧前胡素浓度在1.29×10-4～4.3μg/mL范围内具有良好的线性关系（见图1）。
实验例3仪器精密度试验
取同一浓度的欧前胡素对照品溶液，连续进样6次，测定峰面积，以峰面积考察精密度，结果其峰面积平均值为148.56，RSD=0.69%（n=6），表明该仪器精密度良好。
实验例4专属性试验
按骨科敷药中药味比例称取不含白芷的药味，按制剂工艺制成阴性对照，再按供试品溶液制备方法制备缺白芷的阴性对照溶液。吸取对照品、供试品及阴性对照品溶液分别自动进样10μL，按上述色谱条件进行测定，结果表明，阴性对照品溶液的色谱图在与欧前胡素对照品及骨科敷药供试品色谱图相同保留时间处未显色谱峰，故认为本测定方法无干扰（见图2、3、4）。
实验例5耐用性试验
取同一骨科敷药供试品溶液，分别于0、2、4、6、10、8、12h注入液相色谱仪，测定峰面积值。测得供试品中欧前胡素峰面积平均值为111.91，RSD=1.52%，表明供试品溶液在12小时内基本稳定。
实验例6欧前胡素含量测定试验
骨科敷药依法制成供试品溶液，取10μL注入液相色谱仪，测定峰面，计算样品中欧前胡素的含量。12批骨科敷药中欧前胡素的含量测定结果均在0.0595-0.0614mg/g之间。根据上述结果，将骨科敷药中欧前胡素的含量限度确定为：本品每g含白芷以欧前胡素（C16H14O4）计，不得少于0.05mg。
下列实施例均能实现上述实验例所述的效果。
具体实施方式
实施例1：骨科敷药的质量控制方法
A、白及薄层鉴别：取骨科敷药4g，加40mL的80%甲醇，回流处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次10mL，合并乙酸乙酯提取液，挥至1mL，作为供试品溶液；另取白及对照药材1g，同供试品溶液制备法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各4μl，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇（6:2.5:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃条件下加热数分钟，放置30-60min。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置紫外灯（365nm）下检视，在同一位置上显相同的棕红色荧光斑点。
B、红花薄层鉴别：取骨科敷药4g，加10mL的80%丙酮溶液，密塞，振摇20min，静置，过滤，滤液浓缩至5mL，作为供试品溶液。另取红花对照药材1g，同供试品溶液制备法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液和对照药材溶液各3μl，点于同一硅胶H薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7:2:3:0.4）作为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
C、地龙薄层鉴别：取骨科敷药4g，加40mL的蒸馏水，加热至沸，放冷，离心，取上清液浓缩至10mL，作为供试品溶液；另取赖氨酸对照品、亮氨酸对照品、缬氨酸对照品，加水制成每1mL分别含1.5mg、1.5mg、1.0mg的溶液，作为对照品溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述4种溶液各3μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以印三酮试液，于105℃条件下加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
白芷的含量测定
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-水（40:60）；柱温为25℃；检测波长为254nm；理论板数按欧前胡素峰计应不低于3000；
对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥24小时的欧前胡素对照品适量，精密称定后置于100mL容量瓶中，加甲醇溶解后定容，制成每1mL含16μg的溶液，摇匀，过0.22μm滤膜，续滤液即为标准品溶液；
供试品溶液的制备取骨科敷药3g，精密称定，置于圆底烧瓶中，精密加入乙醇50mL，称重，回流提取1.0h，放冷，加乙醇补足重量，摇匀，过0.22μm滤膜，续滤液即为供试品溶液；
测定方法于高效液相色谱仪中分别自动进样对照品溶液与供试品溶液各10μL，测定，即得；骨科敷药每1g含白芷以欧前胡素（C16H14O4）计，不得少于0.05mg。
实施例2：骨科敷药的质量控制方法
A、白及薄层鉴别：取骨科敷药1.5g，加10mL的60%的甲醇水溶液，超声40min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL使溶解，用石油醚振摇提取3次，每次10mL，合并石油醚提取液，挥至1mL，作为供试品溶液；另取白及对照药材0.5g，同供试品溶液制备法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液及对照药材溶液10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇（6:2.5:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃条件下加热数分钟，放置30-60min。供试品色谱中，在与对照药材及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置紫外灯（365nm）下检视，在相同位置上显相同的棕红色荧光斑点。
B、红花薄层鉴别：取骨科敷药2.5g，加5mL的70%丙酮溶液，密塞，振摇20min，静置，过滤，滤液浓缩至5mL，作为供试品溶液。另取红花对照药材1.0g，同供试品溶液制备法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各8μl，点于同一硅胶H薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7:2:3:0.4）作为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
C、地龙薄层鉴别：取骨科敷药3g，加三氯甲烷20mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加1mL三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液；另取地龙对照药材1.0g，同法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各4μl，点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
白芷的含量测定
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-水（60:40）；柱温为25℃；检测波长为254nm；理论板数按欧前胡素峰计应不低于3000；
对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥24小时的欧前胡素对照品适量，精密称定后置于100mL容量瓶中，加甲醇溶解，定容，制成每1mL含15μg的溶液，摇匀，过0.22μm滤膜，续滤液即为标准品溶液；
供试品溶液的制备取骨科敷药2g，精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇45mL，超声处理1.0h，加甲醇定容，过0.22μm滤膜，续滤液即为供试品溶液；
测定方法于高效液相色谱仪中分别自动进样对照品溶液与供试品溶液各10μL，测定，即得；骨科敷药每1g含白芷以欧前胡素（C16H14O4）计，不得少于0.05mg。
实施例3：骨科敷药的质量控制方法
A、白及薄层鉴别：取骨科敷药2g，加25mL的70%的乙醇水溶液，回流处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL使溶解，用乙醚振摇提取3次，每次15mL，合并乙醚提取液，挥至1mL，作为供试品溶液；另取白及对照药材1g，同供试品溶液制备法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液及对照药材溶液6μl，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇（6:2.5:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃条件下加热数分钟，放置30-60min。供试品色谱中，在与对照药材及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置紫外灯（365nm）下检视，在相同位置上显相同的棕红色荧光斑点。
B、红花薄层鉴别：取骨科敷药1.5g，加10mL的70%丙酮溶液，密塞，振摇20min，静置，过滤，滤液浓缩至5mL，作为供试品溶液。另取红花对照药材0.5g，同供试品溶液制备法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各8μl，点于同一硅胶H薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7:2:3:0.4）作为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
白芷的含量测定
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-水（80:20）；柱温为25℃；检测波长为254nm；理论板数按欧前胡素峰计应不低于3000；
对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥24小时的欧前胡素对照品适量，精密称定后置于100mL容量瓶中，加甲醇、乙醇或氯仿溶解，定容，制成每1mL含11μg的溶液，摇匀，过0.22μm滤膜，续滤液即为标准品溶液；
供试品溶液的制备取骨科敷药6g，精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇45mL，超声处理0.5h，加甲醇定容，摇匀，过0.22μm滤膜，续滤液即为供试品溶液；
测定方法于高效液相色谱仪中分别自动进样对照品溶液与供试品溶液各10μL，测定，即得；骨科敷药每1g含白芷以欧前胡素（C16H14O4）计，不得少于0.05mg。
实施例4：骨科敷药的质量控制方法
B、红花薄层鉴别：取骨科敷药4g，加15mL的90%丙酮溶液，密塞，振摇10min，静置，过滤，滤液浓缩至5mL，作为供试品溶液。另取红花对照药材1.5g，同供试品溶液制备法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各2μl，点于同一硅胶H薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7:2:3:0.4）作为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
C、地龙薄层鉴别：取骨科敷药5g，加三氯甲烷50mL，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加1mL三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液；另取地龙对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各3μl，点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
白芷的含量测定
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-水（70:30）；柱温为25℃；检测波长为254nm；理论板数按欧前胡素峰计应不低于3000；
对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥24小时的欧前胡素对照品适量，精密称定后置于100mL容量瓶中，加甲醇、乙醇或氯仿溶解，定容，制成每1mL含19μg的溶液，摇匀，过0.22μm滤膜，续滤液即为标准品溶液；
供试品溶液的制备取骨科敷药10g，精密称定，置于圆底烧瓶中，精密加入氯仿50mL，称重，回流提取0.5h，放冷，加氯仿补足重量，摇匀，过0.22μm滤膜，续滤液即为供试品溶液；
测定方法于高效液相色谱仪中分别自动进样对照品溶液与供试品溶液各10μL，测定，即得；骨科敷药每1g含白芷以欧前胡素（C16H14O4）计，不得少于0.05mg。
Claims (1)
1.一种由蛤壳、白及、穿山甲、白芷、红花、续断、大黄、地龙、骨碎补等9味中药制成的骨科敷药的质量控制方法，其特征在于该方法包括如下鉴别和/或含量测定：
鉴别包括如下方法中的一种或几种：
A、白及薄层鉴别：取骨科敷药0.5-5g，加5-50mL的60-80%的甲醇或乙醇水溶液，超声或回流处理20-60min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL使溶解，用石油醚、乙醚或乙酸乙酯振摇提取2-4次，每次10-20mL，合并提取液，挥至1mL，作为供试品溶液；另取白及对照药材0.5-3g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各2-10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇（6：2.5：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃条件下加热数分钟，放置30-60min；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置紫外光灯（365nm）下检视，在相同位置上显相同的棕红色荧光斑点；
B、红花薄层鉴别：取骨科敷药0.5-5g，加5-15mL的70-90%丙酮溶液，密塞，振摇10-20min，静置，过滤，滤液浓缩至5mL，作为供试品溶液；另取红花对照药材0.2-2g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各2-10μl，点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7：2：3：0.4）作为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
C、地龙薄层鉴别：取骨科敷药1-5g，加10-50mL的蒸馏水，加热至沸，放冷，离心，取上清液浓缩至10mL，作为供试品溶液；另取赖氨酸对照品、亮氨酸对照品、缬氨酸对照品，分别加水制成每1mL含0.1-2mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述4种溶液1-10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以印三酮试液，于105℃条件下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
取骨科敷药0.5-5g，加三氯甲烷5-50mL，超声或回流处理10-30min，滤过，滤液蒸干，残渣加1mL三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液；另取地龙对照药材0.5-2g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各3-10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
白芷的含量测定:
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈∶水（40-80∶30-70）；柱温为25℃；检测波长为254nm；理论板数按欧前胡素峰计应不低于3000；
对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥24小时的欧前胡素对照品适量，精密称定后置于100mL容量瓶中，加甲醇、乙醇或氯仿溶解，定容，制成每1mL含1-20μg的溶液，摇匀，过0.22μm滤膜，续滤液即为标准品溶液；
供试品溶液的制备取骨科敷药1-10g，精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇、乙醇或氯仿45mL，超声处理0.5-1.5h，加甲醇、乙醇或氯仿定容；或置于圆底烧瓶中，精密加入甲醇、乙醇或氯仿50mL，称重，回流提取0.5-1.5h，放冷，加甲醇、乙醇或氯仿补足重量，摇匀，过0.22μm滤膜，续滤液即为供试品溶液；
测定方法于高效液相色谱仪中分别自动进样对照品溶液与供试品溶液各10μL，测定，即得；骨科敷药每1g含白芷以欧前胡素（C16H14O4）计，不得少于0.05mg。
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