CN110361497A - 一种南极磷虾中氨基酸的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种南极磷虾中氨基酸的检测方法，包括如下步骤：将南极磷虾充分研磨，向南极磷虾粉末中加入无水乙醇和水，对南极磷虾中的三种氨基酸进行超声提取，超声提取设定时间，取上清液，即得提取液，无水乙醇与水的体积比为3‑5:1，三种氨基酸为精氨酸、赖氨酸和组氨酸。该方法可以对南极磷虾中的三种带有正电荷的氨基酸含量进行准确检测，为分析各种氨基酸可能存在的作用，各种氨基酸之间存在的关系以及各带正电荷的氨基酸与阴离子之间的相关性研究提供保证。
Description
技术领域
本发明属于南极磷虾检测技术领域，具体涉及一种南极磷虾中氨基酸的检测方法。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
南极磷虾是一种在南极水域中以群居方式生存的甲壳类动物，属节肢动物门，甲壳纲，磷虾目，现有文献记载，当动物从低浓度培养环境转移至高浓度环境时游离氨基酸含量有所升高，因此猜测离子与游离氨基酸之间存在着一定的相关性。
精氨酸是甲壳动物体内一种必需氨基酸，参与构成机体蛋白质，在一氧化氮酶的作用下生成信号分子一氧化氮，一氧化氮参与调解神经系统。精氨酸同样是南极磷虾体内调解生殖功能的一种重要氨基酸，对雌雄生殖过程都有着重要的作用。精氨酸在甲壳动物体内也是一种与储能有关的重要物质，在较多能量产生的情况下，在精氨酸激酶的作用下，精氨酸与ATP结合生成磷酸精氨酸储存能量。在能量供应不足情况下，磷酸精氨酸分解生成ATP支持细胞正常生理活动。赖氨酸为一种甲壳类动物必需氨基酸，与南极磷虾的生长过程密切相关。赖氨酸是组成神经内分泌复合物质肽激素的重要前体物质，参与调解甲壳动物体内的多种生理过程，包括有葡萄糖代谢及生殖代谢等过程。组氨酸同为南极磷虾的必需氨基酸，可通过收放质子调节pH值，组氨酸进过脱羧后可生成组胺，Mendoza发现适量的组胺添加对罗氏沼虾生长有促进作用，Tapia发现组胺和尸胺的适量添加对蓝对虾的生长有利。对南极磷虾中的氨基酸等成分主要的研究方向是南极磷虾资源的开发利用，探讨南极磷虾风味因素的研究较多，分析三种氨基酸对南极磷虾生长发育影响的较少。
现在对南极磷虾中氨基酸的测评主要集中在对其整虾、虾肉、虾头及虾壳的测定，氨基酸的测定方法共四大类，包括有化学法、分光光度法、色谱法及电化学法。化学法包括有甲醛滴定法及凯氏定氮法。其中，甲醛滴定法操作较为简单，但是滴定终点不容易确定，受此影响，准确度不高。与之对应的凯氏定氮法精确度较高但是操作复杂，测量周期比较长。凯氏定氮法主要是对氮元素进行测定，不能对测定多种氨基酸。分光光度法根据不同物质吸光度不同的特性来进行测量，这种方法操作简单，但是误差大。色谱法包括有气相色谱法、液相色谱法和毛细管电泳色谱法四种。电化学法根据不同物质的电化学性质不同的特性进行测量，在测定时需要根据测量氨基酸的种类，对应不同的电极，这种方法简单，灵敏度高，但是重现性较差。
发明内容
针对上述现有技术中存在的技术问题，本发明的目的是提供一种南极磷虾中氨基酸的检测方法。
为了解决以上技术问题，本发明的技术方案为：
一种南极磷虾中氨基酸的检测方法，包括如下步骤：
将南极磷虾充分研磨，向南极磷虾粉末中加入无水乙醇和水，对南极磷虾中的三种氨基酸进行超声提取，超声提取设定时间，取上清液，即得提取液，无水乙醇与水的体积比为3-5:1，三种氨基酸为精氨酸、赖氨酸和组氨酸。
试验发现，与单纯采用无水乙醇(采用加热回流方法或超声提取方法)对南极磷虾中的氨基酸进行提取相比，用无水乙醇和水的混合液进行提取时，更容易提高三种氨基酸的提取纯度和提取量。
在一些实施例中，还包括将冷冻的南极磷虾解冻后，根据其体长不同，将其分为1期、2期、3期、4期和5期五个不同生长时期的南极磷虾，分别对五个不同生长时期的南极磷虾进行三种氨基酸的检测。
进一步的，还包括将不同生长时期的南极磷虾按雌性和雄性分开的过程。
在一些实施例中，无水乙醇与水的体积比为4:1。
在一些实施例中，超声提取的条件为：提取温度15-35℃，提取功率为280-320W，超声频率为38-42kHz，提取时间为25-35min。
在该种提取条件下，有利于提高三种氨基酸的提取纯度和提取质量。
在一些实施例中，在超声提取过程中，还包括振荡的步骤，每隔5-15min振荡一次。
振荡可以将沉积的南极磷虾粉末重新分散开，增大南极磷虾粉末与提取液的接触面积，提高氨基酸的提取效果。
在一些实施例中，还包括将提取液蒸干的步骤，蒸干温度为40-50℃，采用旋转蒸发仪蒸干。
进一步的，还包括将蒸干后的提取物溶于去离子水中，进行薄层色谱分离的步骤。
更进一步的，采用去离子水对蒸干后的提取物进行复溶。
更进一步的，精氨酸的展开剂为正丁醇：甲酸：水＝15:3:2，V:V:V；
赖氨酸的展开剂为冰醋酸：水＝8:2，V:V；
组氨酸的展开剂为正丁醇：无水乙醇：浓氨水：水＝8:8:1:3，V:V:V:V。
采用该种展开剂对样品的展开，各种氨基酸的斑点界限较为清晰。展开的标准品的斑点清晰，边缘完整。
在一些实施例中，薄层色谱分离中的显色剂为0.1％-0.3％茚三酮溶液。
进一步的，薄层扫描仪的照射灯为钨灯，扫描速度为20mm/s。
本发明的有益效果为：
该方法可以对南极磷虾中的三种带有正电荷的氨基酸含量进行准确检测，为分析各种氨基酸可能存在的作用，各种氨基酸之间存在的关系以及各带正电荷的氨基酸与阴离子之间的相关性研究提供保证。
通过对南极磷虾不同时期、不同性别的三种氨基酸的测定，分析其走向趋势，以分析三种氨基酸在南极磷虾生命活动中的作用。
附图说明
构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本申请的进一步理解，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。
图1为实施例中精氨酸标准品及样品的薄层色谱分离图；
图2为实施例中精氨酸标准品的薄层扫描峰图；
图3为实施例样品中精氨酸的薄层扫描峰图；
图4为实施例中赖氨酸标准品及样品的薄层色谱分离图；
图5为实施例中赖氨酸标准品的薄层扫描峰图；
图6为实施例样品中赖氨酸的薄层扫描峰图；
图7为实施例组氨酸标准品及样品的薄层色谱分离图；
图8为实施例组氨酸标准品的薄层扫描峰图；
图9为实施例样品中组氨酸的薄层扫描峰图；
图10为实施例精氨酸在不同时期、不同性别南极磷虾中含量趋势图；
图11为实施例赖氨酸在不同时期、不同性别南极磷虾中含量趋势图；
图12为实施例组氨酸在不同时期、不同性别南极磷虾中含量趋势图；
图13为实施例精氨酸的标准曲线；
图14为实施例赖氨酸的标准曲线；
图15为实施例组氨酸的标准曲线。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
实验材料
冷冻南极磷虾(辽渔集团购入)，于2017年第一季度购入，捕捞于中国南极长城站附近。
主要仪器
主要试剂、标准品和材料
实验方法
样品前处理
将储藏于-80℃下的南极磷虾在室温环境下进行解冻。将解冻后的南极磷虾通过其体长不同，将其区分为六个时期，包括0、1、2、3、4、5六个时期。因为0期的南极磷虾体长过小，不容易打捞造成0期样品缺失，因此样品从1期开始进行分期，分为1期至5期五个不同时期样品的南极磷虾。分好时期后对3、4、5期的南极磷虾进行分雌雄，通过测量南极磷虾甲壳长及宽的比值来确定雌雄，公式为D＝-1.04-0.146RCL+0.256RCW,最终计算结果为负值的为雄性，平均-0.187，计算结果为正值则是雌性，平均0.270[34]。将分好时期和雌雄的南极磷虾放在-80℃的冰箱中冷藏备用。
提取方法的确定
(1)加乙醇50mL加热回流提取
取10g南极磷虾进行充分的研磨，加入50ml无水乙醇加热回流提取3h。将提取后的溶液过滤，旋转蒸干，作为待测样品。
(2)50mL乙醇超声提取
取10g南极磷虾进行充分的研磨，加入50ml无水乙醇超声提取30min，超声后离心得到上清液，过滤，旋转蒸干，作为待测样品。
(3)40mL乙醇和10mL去离子水超声提取
取10g南极磷虾进行充分的研磨，加入40ml无水乙醇和10ml去离子水超声提取30min，超声后离心得到上清液，过滤，旋转蒸干，作为待测样品。
南极磷虾中三种氨基酸的提取
分别取各时期各性别的南极磷虾进行充分的研磨，一共分为八个样品，每个样品取10g进行研磨，将研磨好的样品放入烧杯中，加入40ml无水乙醇和10ml去离子水，放入超声清洗仪，在室温、300W、40kHz的条件下提取30min，每隔10min振荡一次。超声后对样品进行离心，在室温、4000r/min的条件下离心10min，离心后取上清液，同一样品反复提取三次，收集上清液。在温度为45℃的条件下，通过旋转蒸发仪将滤液蒸干，得到粗提物。放于-20℃的条件下冷藏备用。
标准品的配制
用天平准确称取精氨酸、赖氨酸和组氨酸三种氨基酸标准品0.1g，分别溶解于200ml的去离子水中，配制成0.5g/L的标准品溶液。将配置好的标准品进行分装，密封，放于-4℃下储存备用。
展开剂溶液的确定
精氨酸
(1)正丁醇：冰醋酸：水＝19:5:5(V:V:V)
取一块5×10cm的薄层板，依次取1μl、2μl、3μl的精氨酸标准品溶液和1μl的样品溶液点在板上，晾干后放入上述均匀溶液的展开系统中展开，展开后晾干，茚三酮染色，观察效果。
(2)正丁醇：甲酸：水＝15:3:2(V:V:V)
取一块5×10cm的薄层板，依次取1μl、2μl、3μl的精氨酸标准品溶液和1μl的样品溶液点在板上，晾干后放入上述均匀溶液的展开系统中展开，展开后晾干、茚三酮染色，观察效果。
赖氨酸
(1)冰醋酸：水＝8:2(V:V)
取一块5×10cm的薄层板，依次取1μl、2μl、3μl的赖氨酸标准品溶液和1μl的样品溶液点在板上，晾干后放入上述均匀溶液的展开系统中展开，展开后晾干、茚三酮染色，观察效果。
组氨酸
(1)冰醋酸：水＝50:50(重量比)
取一块5×10cm的薄层板，依次取1μl、2μl、3μl的组氨酸标准品溶液和1μl的样品溶液点在板上，晾干后放入上述均匀溶液的展开系统中展开，展开后晾干、茚三酮染色，观察效果。
(2)冰醋酸：水＝70:40(重量比)
取一块5×10cm的薄层板，依次取1μl、2μl、3μl的组氨酸标准品溶液和1μl的样品溶液点在板上，晾干后放入上述均匀溶液的展开系统中展开，晾干、染色，观察效果。
(3)正丁醇：无水乙醇：浓氨水：水＝8:8:1:3(V:V:V:V)
取一块5×10cm的薄层板，依次取1μl、2μl、3μl的组氨酸标准品溶液和1μl的样品溶液点在板上，晾干后放入上述均匀溶液的展开系统中展开，晾干、染色，观察效果。
显色剂的确定
待测物质为三种氨基酸，氨基酸遇茚三酮有显色反应，显色剂采用茚三酮溶液。称取0.2g无水茚三酮溶于100ml的无水乙醇中配制成0.2％的茚三酮溶液。在晾干后的薄板上均匀喷洒显色剂，然后在110℃的条件下烘至显色。
样品浓度及扫描波长的确定
通过万分天平准确称取0.05g的旋转蒸发后的提取物，将其溶于1ml的去离子水中。取10cm×10cm硅胶板，分别量取三种氨基酸标准品0.5μl，1μl，1.5μl，2μl，2.5μl，3μl，3.5μl，4μl，4.5μl的标准品和2μl的样品溶液点在距硅胶板底约1.0cm的地方。向层析缸中倒入15-20ml上述展开剂，溶液展开至离薄板顶部10cm的位置，将板子取出晾干，晾干后喷上适量的显色剂，放在温度110℃条件下烘至显色，在薄层色谱仪下扫描确定样品浓度所在的范围。
精氨酸的扫描波长为560mn，组氨酸的扫描波长为480nm，赖氨酸的扫描波长为520nm。样品的测定
经过浓度梯度确定后，对不同浓度梯度的各个样品选择不同的标准品浓度区间。分别在距离硅胶板底约1.0cm的位置分别点上标准品和样品的溶液。在层析缸内倒入15-20ml的氨基酸相应展开剂，待点完标准品和样品溶液的板子晾干后，将其放置在层析缸中，待其展开至离薄板顶部10cm的位置后取出，将板子晾干，喷上适量的显色剂，放于110℃下烘至显色。通过薄层色谱仪在各自相应波长的条件下对各个薄板进行扫描，扫描速度为20mm/s，数据分辨率为50μm/step，照射灯为钨灯。采用薄层扫描仪对南极磷虾中三种氨基酸含量进行测定，横坐标定为三种氨基酸标准品的质量，纵坐标设为峰面积，通过扫描后得到的横纵坐标之间数值确定回归方程，根据每个样品的峰面积大小来确定样品中三种不同氨基酸含量。得到不同时期、性别的南极磷虾中的各氨基酸含量。
实验结果
实验方法的确定
就三种不同的提取方法相对比，采用40ml乙醇和10ml去离子水超声提取的方式提取效果最佳。
展开系统的确定
精氨酸
(1)正丁醇：冰醋酸：水＝19:5:5(V:V:V)；
该种展开剂展开后虽然标准品和样品的Rf值相近，但是样品和标准品的斑点界限不够清晰，不容易辨认，因此该种展开剂不予考虑。
(2)正丁醇：甲酸：水＝15:3:2(V:V:V)；
如图1所示，经过该种展开系统展开后的标准品斑点边缘界限清晰，容易确认。对样品的展开较为良好，能够区分出精氨酸和其他氨基酸，各氨基酸斑点界限较为清晰，且标准品和样品的Rf值都为0.22数值一致，如图2和图3所示，选用该种展开剂作为测定精氨酸的最终展开剂。
赖氨酸
(1)冰醋酸：水＝8:2(V:V)；
如图4所示，经过该种展开系统展开后的标准品斑点边缘界限清晰，容易辨认。对样品的展开较为良好，可以将组氨酸与样品中其他氨基酸区分开来。样品Rf值与赖氨酸标准品的数值都为0.67，如图5和图6所示，数值一致，因此采用该种展开剂作为测定赖氨酸的展开系统。组氨酸
(1)冰醋酸：水＝50:50(m:m)；
经过该种展开系统展开后的标准品斑点不清晰，边缘不明显，不容易辨认，且对样品的展开不理想，标准品和样品的Rf值相差较大。因此该种展开剂不予考虑。
(2)冰醋酸：水＝70:40(m:m)；
经过该种展开系统展开的标准品斑点比上述展开剂要清晰，但是仍然存在边缘不清晰，对样品展开不理想的问题，且标准品和样品的Rf值相差较大，所以该种展开剂也不予考虑。
(3)正丁醇：无水乙醇：浓氨水：水＝8:8:1:3(V:V:V:V)；
如图7所示，经过该种展开系统展开的标准品斑点清晰，边缘完整。对样品的展开来讲，各种氨基酸的斑点界限较为清晰，且标准品与样品的Rf值都为0.23数值一致，如图8和图9所示，因此这种展开剂的展开较为理想，采用该种展开系统。
三种氨基酸含量，见表1
表1不同时期、各性别的南极磷虾中三种氨基酸含量
不同时期、不同性别南极磷虾中三种氨基酸含量的折线图
精氨酸：
如图10所示，精氨酸在一、二、三期含量基本保持上升趋势，其中在三期时含量有跳跃式上升且在三期时含量达到最高值，在四期、五期时含量逐渐下降。就不同性别而言，三期、四期、五期表现出同样的特征，即雄性的精氨酸含量要远高于雌性的精氨酸含量。
赖氨酸：
如图11所示，赖氨酸的含量趋势大致在二期时较一期有所下降，三期、四期含量有所上升，五期含量有所减少，其中在四期时赖氨酸的含量达到最高值，在五期时含量为最低值。对于不同性别的赖氨酸含量来讲，三期、四期雄性的含量比雌性略高，而五期雄的含量较雌性略低。
组氨酸：
如图12所示，组氨酸在一期时含量较高，二期时含量较一期有所下降，且二期的含量为五个时期中数值最低。三期、四期的组氨酸含量有所上升，五期时组氨酸的含量有略微的下降。就不同性别的南极磷虾中组氨酸的含量而言，三期雄的组氨酸含量要较高与三期雌，四期、五期的雌性所含组氨酸要比雄性高。
实验方法考察
线性度考察
分别取上述三种标准品溶液1μL、2μL、4μL、4.5μL、5μL，分别将其点在三块高效薄层硅胶板上，放置于有相应展开剂的层析缸中展开，展开至距薄层板顶10cm的位置取出并晾干。晾干后均匀喷洒0.2％茚三酮溶液染色，用CAMAG薄层扫描仪-III进行扫描，通过薄层扫描软件Wincats 1.4.1统计数据，得出线性方程。
精氨酸：建立标准品质量与峰面积积分回归方程Y＝-5.883+0.09593×X，r2＝0.9995，如图13所示；
赖氨酸：建立标准品质量与峰面积积分回归方程Y＝87.62+0.1792×X，r2＝0.9994，如图14所示；
组氨酸：建立标准品质量与峰面积积分回归方程Y＝900.7+5.745×X，r2＝0.9990，如图15所示。
精密度考察
分别取上述三种标准品溶液，用进样针分别取标准品溶液2.5μL，分别在三块薄层板上进行点样，每个薄层板点五个标准品,在相应的展开剂中进行展开，展开后晾干，晾干后均匀喷洒茚三酮溶液进行染色，在相应的波长下用CAMAG薄层扫描仪-III扫描峰面积。
三种氨基酸的RSD值分别为0.81％、1.24％和1.76％。精密度较好。
重复性考察
对于每种标准品溶液，依次取五块硅胶板，在每块硅胶板上准确点2.5μl标准品溶液，在相应的展开剂中展开，对其进行晾干，茚三酮溶液染色后在相应的扫描波长下用CAMAG薄层扫描仪-III扫描峰面积。
三种氨基酸的板间差异RSD值分别为0.94％、1.43％、1.59％，重复性较好。
回收率考察
分别吸取5μl样品液三次，分别向其中加入50％、100％及150％的氨基酸标准品，点样，展开，晾干，晾干后染色经扫描仪进行扫描，得到平均回收率。
三种氨基酸的回收率分别为101.7％、100.4％和103.2％，回收效果良好。
结论
主要是采用薄层色谱的方式对南极磷虾中三种带有正电荷氨基酸的检测，包括有精氨酸、赖氨酸和组氨酸。对南极磷虾不同时期、不同性别中的三种氨基酸进行了测定，分析走向趋势。
由上述结果可以看出，精氨酸的含量在五个时期中先是从含量最低的一期逐渐升高到三期时达到顶峰，并且性别分化后的三期较二期含量有明显的上升，从四期后含量逐渐降低，同时对比相同时期的雌雄虾内的精氨酸的含量可以得出雄性中的精氨酸含量要高于雌性中含量。Hong等人发现罗氏沼虾盐度环境发生变化时，其体内精氨酸含量会相应增加，说明精氨酸在甲壳动物体内参与渗透压的调节，精氨酸也是一种与生殖相关的重要氨基酸，同时精氨酸还是甲壳类动物的重要储能物质磷酸精氨酸的前体物。南极磷虾中的精氨酸在一期、二期、三期含量呈明显上升趋势可能是因为在二期后南极磷虾进行性别分化，这个阶段对精氨酸的需求含量较大。赖氨酸作为南极磷虾的必需氨基酸，在一期含量较高，可能与南极磷虾的生长过程有关。组氨酸同为南极磷虾的必需氨基酸，一期、二期含量较低，且二期的含量为最低值，在三期后含量逐渐升高，在四期时含量最高，五期时含量有所下降。Wantanee K等人发现组氨酸的供应量与蛋白周转有着明显的线性关系，猜测在三期、四期过程中南极磷虾的蛋白周转较快。Andrade等人发现在细胞内pH的稳定主要依靠组氨酸咪唑基团及组氨酸相关物质维持，南极磷虾中组氨酸在三期时含量升高，可能与其主要承担了细胞内PH调节的作用有关。组氨酸是构成肌肽的前体物质之一，肌肽可以激活机体非酶和酶的抗氧化系统，南极磷虾体内组氨酸含量的升高有可能与对肌肽需求量上升有关。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种南极磷虾中氨基酸的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：
将南极磷虾充分研磨，向南极磷虾粉末中加入无水乙醇和水，对南极磷虾中的三种氨基酸进行超声提取，超声提取设定时间，取上清液，即得提取液，无水乙醇与水的体积比为3-5:1，三种氨基酸为精氨酸、赖氨酸和组氨酸。
2.根据权利要求1所述的南极磷虾中氨基酸的检测方法，其特征在于：还包括将冷冻的南极磷虾解冻后，根据其体长不同，将其分为1期、2期、3期、4期和5期五个不同生长时期的南极磷虾，分别对五个不同生长时期的南极磷虾进行三种氨基酸的检测；
进一步的，还包括将不同生长时期的南极磷虾按雌性和雄性分开的过程。
3.根据权利要求1所述的南极磷虾中氨基酸的检测方法，其特征在于：无水乙醇与水的体积比为4:1。
4.根据权利要求1所述的南极磷虾中氨基酸的检测方法，其特征在于：超声提取的条件为：提取温度15-35℃，提取功率为280-320W，超声频率为38-42kHz，提取时间为25-35min。
5.根据权利要求4所述的南极磷虾中氨基酸的检测方法，其特征在于：在超声提取过程中，还包括振荡的步骤，每隔5-15min振荡一次。
6.根据权利要求1所述的南极磷虾中氨基酸的检测方法，其特征在于：还包括将提取液蒸干的步骤，蒸干温度为40-50℃，采用旋转蒸发仪蒸干。
7.根据权利要求6所述的南极磷虾中氨基酸的检测方法，其特征在于：还包括将蒸干后的提取物溶于去离子水中，进行薄层色谱分离的步骤；
更进一步的，采用去离子水对蒸干后的提取物进行复溶。
8.根据权利要求7所述的南极磷虾中氨基酸的检测方法，其特征在于：精氨酸的展开剂为正丁醇：甲酸：水＝15:3:2，V:V:V；
赖氨酸的展开剂为冰醋酸：水＝8:2，V:V；
组氨酸的展开剂为正丁醇：无水乙醇：浓氨水：水＝8:8:1:3，V:V:V:V。
9.根据权利要求7所述的南极磷虾中氨基酸的检测方法，其特征在于：薄层色谱分离中的显色剂为0.1％-0.3％茚三酮溶液。
10.根据权利要求7所述的南极磷虾中氨基酸的检测方法，其特征在于：薄层扫描仪的照射灯为钨灯，扫描速度为20mm/s。
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