CN105296587B - 一种转化人参皂苷Rb1制备稀有人参皂苷CK的方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种转化人参皂苷Rb1制备稀有人参皂苷CK的方法与应用。本发明利用双歧杆菌所产生的β‑葡萄糖苷酶将人参皂苷Rb1转化为稀有人参皂苷CK，转化率为62‑68％。所转化的稀有人参皂苷CK由于极性低，易被人体吸收，易于通过血液循环进入肝脏完成代谢而发挥独特的药理作用。双歧杆菌是可食用的益生菌，所产的糖苷酶有较高的催化活力、选择性和稳定性，利用双歧杆菌产生的β‑葡萄糖苷酶转化人参皂苷Rb1制备稀有人参皂苷CK具有得率高、副产物少、安全可靠、无污染和容易工业化生产等优点。本发明的成本较低，操作简单，转化周期短。本发明利用双歧杆菌产生的β‑葡萄糖苷酶在制备稀有人参皂苷CK方面有着重要的应用价值。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，涉及一种利用双歧杆菌所产生的β-葡萄糖苷酶转化人参皂苷Rb1制备稀有人参皂苷CK(Compound K)的方法，同时还涉及该双歧杆菌所产生的β-葡萄糖苷酶在以Rb1为底物制备稀有人参皂苷CK的应用。
背景技术
人参皂苷为三萜糖苷类化合物，是人参的主要药用活性成分。根据其苷元上C-3、C-6和C-20位置的糖苷键(Glycosidic bond)的种类和数量的不同，衍生出不同类型的人参皂苷。根据其在植物中的含量分为主要人参皂苷(Major ginsenoside，如Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re和Rg1等)和稀有人参皂苷(Rare ginsenoside，如Rg3、Rh1、Rh2、F1、F2、CK、C-O、CY和C-Mc)等。其中稀有人参皂苷是指在人参中含量极低或者不存在的皂苷。由于苷元和糖基的种类、糖基的数量和糖基连接的碳位不同，其活性差别很大。人参皂苷Rb1可以改善神经变性动物运动障碍，降低神经变性动物死亡率及减小纹状体损害体积；减少永久性大脑中动脉闭塞大鼠大脑梗塞体积，改善动物的位置导航残疾，促进烧伤创面愈合。人参皂苷Rd可以选择性地拮抗红藻氨酸引起的致死性兴奋性中毒，改善神经变性动物运动障碍，降低神经变性动物死亡率等功能。人参皂苷F2具有抗疲劳、安神补脑、抗肿瘤等功效。陈茜等发现人参皂苷F2对胃癌SGC-7901细胞和肺癌SPC-A-1细胞均具有抑制作用；成宗焕等发现人参皂苷F2具有抑制肿瘤细胞的增殖，倒转肿瘤细胞及细菌中所表现出来的多重耐药性等效果。在目前已知的人参皂苷中，稀有人参皂苷CK等在抗癌、抗衰老、预防和缓解老年痴呆等方面具有其它人参皂苷无法取代的独特优势。研究表明人参皂苷CK具有很好的抗细胞突变、抑制肿瘤细胞转移、诱导肿瘤细胞凋亡、逆转肿瘤细胞耐药性和抗肿瘤诱导的血管生成等活性。它与放疗和化疗结合试验，可以增强放疗和化疗的效果。除此之外，人参皂苷CK还有具有抗过敏和抗炎活性，并且可以起到神经保护作用，抗糖尿病作用和抗皮肤衰老作用。并且人参皂苷CK的药理活性具有多靶点、高活性和低毒性的特点。
研究表明，人参皂苷CK是人参二醇系皂苷在人肠道内的代谢产物。多数原人参二醇型皂苷只有被代谢为CK后才能被人体吸收，所以人参皂苷CK是直接被体内吸收和发挥药理作用的真正分子，而其它二醇型人参皂苷只是药物前体。虽然人参皂苷CK具有很高的药用价值，但由于它们在自然界中含量极其稀少，很难通过传统的方法从人参等植物中分离得到，这对稀有人参皂苷CK的生产造成很大限制。
目前，生产稀有人参皂苷的方法主要是化学水解法和糖苷酶生物转化法。化学水解法通常选择性较差、产率低、不易纯化、同时容易造成环境污染。糖苷酶转化法则具备区域选择性和立体选择性高、得率高、副产物少、无污染和容易工业化生产等优点，虽然转化途径复杂，但产物多样，可以获得化学法难以得到的稀有人参皂苷如C-Mc、C-O、F2、CY、CK等。被认为是生产稀有人参皂苷最具有潜力的方法。
利用糖苷酶转化法生产稀有人参皂苷，目前的一些研究主要是利用从土壤微生物、真菌和少数高等生物中筛选菌株或酶来转化稀有人参皂苷。Cheng等从土壤中筛选到Caulobacter leidyia GP45，可以通过β-葡萄糖苷酶将Rb1转化为CK。Liu等使用Aspergillusniger中人参皂苷酶(ginsenosidase)经不同的途径将PPD型主要人参皂苷Rb1、Rb2、Rc和Rd转化为C-O、F2、C-Mc、CY和CK等稀有人参皂苷。Hong等使用真菌Monascuspilosus KMU103转化红参中人参皂苷，得到了一系列稀有人参皂苷，如Rh1、Rh2、Rg3等。Luan等从中华白玉蜗牛中分离纯化出两种β-葡萄糖苷酶，用于人参皂苷Rb1的转化。其中，一种酶仅能将Rb1转化为Rd，而另外一种酶能将Rb1、Rb2、Rc分别转化为不同的稀有人参皂苷。尽管已有利用人参皂苷Rb1生物转化法制取人参皂苷CK的相关报道。但是，目前，利用糖苷酶体外生物转化生产稀有人参皂苷所使用的微生物大多不可食用，并且转化效率普遍偏低。为了使稀有人参皂苷的转化过程安全可控，转化产物无污染，发现并研究利用可食用微生物转化稀有人参皂苷将是人参皂苷生物转化研究的一个重要方向。
近年来，基于肠道益生菌的生物转化已得到广泛的关注。Hasegawa等从肠道菌群中分离的双歧杆菌属因产酶丰富，且酶具有较高的催化活力和稳定性，在体内生物转化方面发挥重要的作用，成为开发新型生物转化酶的热点。其中双歧杆菌是常见的益生菌，由于所产的酶有较高的催化活力、选择性和稳定性，利用其进行生物转化相对安全和可靠，在黄酮苷、人参皂苷等天然产物的体内转化中具有重要的应用潜力。Bae等采用肠道乳酸菌转化PPD型人参皂苷制备人参皂苷CK，结果发现运用双歧杆菌B.minimum KK-1和豚双歧杆菌B.choerinum KK-2共发酵转化Rb1时效果最好，转化率可达到41％左右。尽管部分双歧杆菌具有转化人参皂苷Rb1制备人参皂苷CK的能力，但是其转化效率较低，仍不能满足生产的要求。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的缺陷和不足，提供一种利用双歧杆菌所产生的β-葡萄糖苷酶转化人参皂苷Rb1制备稀有人参皂苷CK的方法与应用。
本发明的目的之一在于提供一种转化人参皂苷Rb1制备稀有人参皂苷CK的方法，通过β-葡萄糖苷酶实现转化，所述的β-葡萄糖苷酶来自双歧杆菌，所述的双歧杆菌为B.breve ATCC15700双歧杆菌。
一种转化人参皂苷Rb1制备稀有人参皂苷CK的方法，包括以下步骤：
(1)将双歧杆菌(B.breve ATCC 15700)菌株厌氧培养24-48h后；超声波破碎细胞后离心，20-30℃条件下，上清液中加入硫酸铵至饱和度为10％-50％，调pH为4.5-4.6，4-8℃静置6-8h；离心，弃去上清液，将蛋白沉淀加入醋酸－醋酸钠缓冲液中溶解，得到含β-葡萄糖苷酶的粗酶液；
(2)含β-葡萄糖苷酶的粗酶液用凝胶过滤柱层析纯化，重复2～10次，分离得到β-葡萄糖苷酶；
(3)将人参皂苷Rb1溶于甲醇中，再与醋酸-醋酸钠缓冲液混合，配制成浓度为10mg/mL的人参皂苷Rb1底物溶液，将步骤(2)所得β-葡萄糖苷酶配制成20U/mL的酶液，再将人参皂苷Rb1底物溶液与β-葡萄糖苷酶液按照体积比为(10-50):1的比例混合，pH4-5，35-55℃条件下反应24-48h，然后置于80-100℃水浴中灭活15-20min，室温条件下8000-10000rpm离心5-10min，取上清液在50-60℃下烘干，得到稀有人参皂苷CK。
进一步地，所述的厌氧培养，温度为30-40℃。
进一步地，所述步骤(1)的醋酸－醋酸钠缓冲液，pH为6。
进一步地，所述的凝胶过滤柱层析，凝胶为Sephadex G-200凝胶，洗脱液为pH6.8的磷酸盐缓冲液。
进一步地，所述步骤(3)的醋酸-醋酸钠缓冲液，浓度为0.02mol/L，pH为4.0-6.0。
本发明的另一目的在于提供一种上述的方法在转化人参皂苷Rb1制备稀有人参皂苷CK中的应用。
本发明的有益效果在于：
(1)本发明的方法，Rb1生成稀有人参皂苷CK的转化率高，能够达到62-68％左右，远高于现有技术的水平。
(2)本发明所用的双歧杆菌产酶丰富，且酶具有较高的催化活力和稳定性，利用双歧杆菌所产生的β-葡萄糖苷酶，特异性降解人参皂苷分子上的糖基，转化为对应的极性较小的苷元，可以提高转化后产物在人体中的吸收与利用率。
(3)本发明的方法能够将人参皂苷Rb1转化为人参皂苷CK，副产物少，且由于所采用的微生物为可食用微生物，安全性高，并且没有污染。
(4)本发明的成本较低，操作简单，转化周期短，能实现稀有人参皂苷CK的产业化制备，能够满足医药和食品行业的市场需要，具有很高的市场应用价值。
附图说明
图1是本发明实施例1从双歧杆菌中分离纯化后的双歧杆菌β-葡萄糖苷酶聚丙烯酰胺凝胶电泳结果；图中，1表示硫酸铵分级沉淀结合等电点沉淀后的获得的β-葡萄糖苷酶，2表示柱层析分离纯化后的β-葡萄糖苷酶；Marker为蛋白质分子量标准。
图2是实施例5条件下双歧杆菌β-葡萄糖苷酶转化人参皂苷Rb1的薄层色谱结果；图中，a表示β-葡萄糖苷酶与Rb1反应0h，b表示β-葡萄糖苷酶与Rb1反应12h，c表示β-葡萄糖苷酶与Rb1反应24h，s表示人参皂苷Rb1、Rd、F2和CK对照品。
图3是实施例5条件下双歧杆菌β-葡萄糖苷酶转化人参皂苷Rb1的HPLC结果；图中，a表示β-葡萄糖苷酶与Rb1反应0h，b表示β-葡萄糖苷酶与Rb1反应12h，c表示β-葡萄糖苷酶与Rb1反应24h，d表示人参皂苷Rb1、Rd、F2和CK对照品。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明，但本发明并不限于此。
实施例1
双歧杆菌培养及β-葡萄糖苷酶提取
1、以MRS液体培养基厌养培养双歧杆菌；其中MRS培养基成分为：酪蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖5.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸二铵2.0g，吐温801.0g，磷酸氢二钾2.0g，七水硫酸钠0.2g，一水硫酸锰0.05g，碳酸钙20.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH6.8。MRS培养基121℃灭菌20min。
2、双歧杆菌发酵培养的具体方法为：将双歧杆菌接种到固体MRS培养基上，在37℃条件下厌氧培养24-48h，然后挑取双歧杆菌单菌落接种于MRS液体培养基中，在37℃条件下，振荡厌氧培养24-48h，得到双歧杆菌发酵液。
3、将双歧杆菌发酵液4℃、8000rpm离心10min，弃上清液、收集菌体细胞，用pH6.5的PBS缓冲液洗涤菌体2次；用超声波细胞破碎仪冰上破碎30min，破碎条件：功率200W，超声时间2s，间隔时间3s，工作次数30次，超声破碎结束后，破碎液放置冰上备用。
4、20-30℃条件下，在细胞破碎液中加入硫酸铵至饱和度为10％-50％，调pH为4.5-4.6，4-8℃静置6-8h；离心，弃去上清液，将蛋白沉淀加入pH6.0的醋酸－醋酸钠缓冲液中溶解，得到含β-葡萄糖苷酶的粗酶液；粗酶液再用Sephadex G-200凝胶过滤柱层析纯化，洗脱液为pH6.8的磷酸盐缓冲液，重复多次，分离得到β-葡萄糖苷酶，以聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析其分子量，其分子量大小约为106kDa(见图1)。
图1是实施例1从双歧杆菌中分离纯化后的双歧杆菌β-葡萄糖苷酶聚丙烯酰胺凝胶电泳结果；图中，1表示硫酸铵分级沉淀结合等电点沉淀后的获得的β-葡萄糖苷酶，2表示柱层析分离纯化后的β-葡萄糖苷酶；Marker为蛋白质分子量标准；与GenBank数据库中序列号为CP006715.1的β-葡萄糖苷酶序列预测蛋白的分子量比对分析，结果显示纯化的β-葡萄糖苷酶分子量大小与理论值(106kDa)一致。
5、β-葡萄糖苷酶活性测定
Folin-酚法测定分离纯化的蛋白质的含量，再测定β-葡萄糖苷酶的活性，具体方法为：以对-硝基苯基-β-D-葡糖苷(pNPG)为底物，对硝基苯酚(pNP)为产物测定酶的活性。取200μLβ-葡萄糖苷酶，加入200μL pNPG(10mM)，pH6.5，55℃，孵育2h后，加入等体积200mmol/L Na2CO3，405nm测定pNP。1个酶活力单位(U)定义为1min释放1μmol pNP。结果显示β-葡萄糖苷酶Km值为1.23×10-3mol/L，β-葡萄糖苷酶具有很强的水解葡萄糖苷的活性。
实施例2
称取适量人参皂苷Rb1于少量甲醇中溶解，再与0.02mol/L、pH4.0-6.0的醋酸-醋酸钠缓冲液混合，配制成浓度为10mg/mL人参皂苷Rb1溶液；将实施例1中制备的β-葡萄糖苷酶液配制成20U/mL的酶液；再将人参皂苷Rb1溶液与20U/mL的β-葡萄糖苷酶液按照体积比10:1的比例混合，pH为5.0，45℃条件下反应24h，然后置于80℃水浴中灭活20min，25℃条件下8000rpm离心5min，取上清液在60℃下烘干，得到稀有人参皂苷CK。
实施例3
称取适量人参皂苷Rb1于少量甲醇中溶解，再与0.02mol/L、pH4.0-6.0的醋酸-醋酸钠缓冲液混合，配制成浓度为10mg/mL人参皂苷Rb1溶液；将实施例1中制备的β-葡萄糖苷酶液配制成20U/mL的酶液；再将人参皂苷Rb1溶液与20U/mL的β-葡萄糖苷酶液按照体积比10:1的比例混合，pH为4.5，55℃条件下反应24h，然后置于80℃水浴中灭活20min，25℃条件下8000rpm离心5min，取上清液在60℃下烘干，得到稀有人参皂苷CK。
实施例4
称取适量人参皂苷Rb1于少量甲醇中溶解，再与0.02mol/L、pH4.0-6.0的醋酸-醋酸钠缓冲液混合，配制成浓度为10mg/mL人参皂苷Rb1溶液；将实施例1中制备的β-葡萄糖苷酶液配制成20U/mL的酶液；再将人参皂苷Rb1溶液与20U/mL的β-葡萄糖苷酶液按照体积比10:1的比例混合，pH为4.0，35℃条件下反应24h，然后置于80℃水浴中灭活20min，25℃条件下8000rpm离心5min，取上清液在60℃下烘干，得到稀有人参皂苷CK。
实施例5
称取适量人参皂苷Rb1于少量甲醇中溶解，再与0.02mol/L、pH4.0-6.0的醋酸-醋酸钠缓冲液混合，配制成浓度为10mg/mL人参皂苷Rb1溶液；将实施例1中制备的β-葡萄糖苷酶液配制成20U/mL的酶液；再将人参皂苷Rb1溶液与20U/mL的β-葡萄糖苷酶液按照体积比25:1的比例混合，pH为5.0，55℃条件下反应24h，然后置于80℃水浴中灭活20min，25℃条件下8000rpm离心5min，取上清液在60℃下烘干，得到稀有人参皂苷CK。
实施例6
称取适量人参皂苷Rb1于少量甲醇中溶解，再与0.02mol/L、pH4.0-6.0的醋酸-醋酸钠缓冲液混合，配制成浓度为10mg/mL人参皂苷Rb1溶液；将实施例1中制备的β-葡萄糖苷酶液配制成20U/mL的酶液；再将人参皂苷Rb1溶液与20U/mL的β-葡萄糖苷酶液按照体积比25:1的比例混合，pH为4.5，35℃条件下反应24h，然后置于80℃水浴中灭活20min，25℃条件下8000rpm离心5min，取上清液在60℃下烘干，得到稀有人参皂苷CK。
实施例7
称取适量人参皂苷Rb1于少量甲醇中溶解，再与0.02mol/L、pH4.0-6.0的醋酸-醋酸钠缓冲液混合，配制成浓度为10mg/mL人参皂苷Rb1溶液；将实施例1中制备的β-葡萄糖苷酶液配制成20U/mL的酶液；再将人参皂苷Rb1溶液与20U/mL的β-葡萄糖苷酶液按照体积比25:1的比例混合，pH为4.0，45℃条件下反应24h，然后置于80℃水浴中灭活20min，25℃条件下8000rpm离心5min，取上清液在60℃下烘干，得到稀有人参皂苷CK。
实施例8
称取适量人参皂苷Rb1于少量甲醇中溶解，再与0.02mol/L、pH4.0-6.0的醋酸-醋酸钠缓冲液混合，配制成浓度为10mg/mL人参皂苷Rb1溶液；将实施例1中制备的β-葡萄糖苷酶液配制成20U/mL的酶液；再将人参皂苷Rb1溶液与20U/mL的β-葡萄糖苷酶液按照体积比50:1的比例混合，pH为5.0，35℃条件下反应24h，然后置于80℃水浴中灭活20min，25℃条件下8000rpm离心5min，取上清液在60℃下烘干，得到稀有人参皂苷CK。
实施例9
称取适量人参皂苷Rb1于少量甲醇中溶解，再与0.02mol/L、pH4.0-6.0的醋酸-醋酸钠缓冲液混合，配制成浓度为10mg/mL人参皂苷Rb1溶液；将实施例1中制备的β-葡萄糖苷酶液配制成20U/mL的酶液；再将人参皂苷Rb1溶液与20U/mL的β-葡萄糖苷酶液按照体积比50:1的比例混合，pH为4.5，45℃条件下反应24h，然后置于80℃水浴中灭活20min，25℃条件下8000rpm离心5min，取上清液在60℃下烘干，得到稀有人参皂苷CK。
实施例10
称取适量人参皂苷Rb1于少量甲醇中溶解，再与0.02mol/L、pH4.0-6.0的醋酸-醋酸钠缓冲液混合，配制成浓度为10mg/mL人参皂苷Rb1溶液；将实施例1中制备的β-葡萄糖苷酶液配制成20U/mL的酶液；再将人参皂苷Rb1溶液与20U/mL的β-葡萄糖苷酶液按照体积比50:1的比例混合，pH为4.0，55℃条件下反应24h，然后置于80℃水浴中灭活20min，25℃条件下8000rpm离心5min，取上清液在60℃下烘干，得到稀有人参皂苷CK。
实施例11
HPLC测定方法
将实施例2-10中所得的酶反应液与未加入酶液的底物反应液在25℃下8000-10000rpm离心5min，取上清液在60℃下烘干，然后分别用适量的甲醇超声波溶解，以0.45μm滤膜过滤后，定容，HPLC测定含量。根据反应底物和产物摩尔比例关系计算人参皂苷Rb1的转化率，计算结果如表1所示。
HPLC测定条件为：色谱柱为Diamonsil C18柱(150mm×4.6mm，5μm)；流动相为乙腈-50mmol/L磷酸氢二钾/磷酸二氢钾10∶90(V/V)(磷酸调pH至4.0)；流速为1.0mL/min；柱温为30℃，检测波长为202nm。
实施例5中，人参皂苷Rb1转化为CK的TLC结果见图2。图2中a表示β-葡萄糖苷酶与Rb1反应0h的结果，b表示β-葡萄糖苷酶与Rb1反应12h的结果，c表示β-葡萄糖苷酶与Rb1反应24h的结果，s表示人参皂苷Rb1、Rd、F2和CK对照品；
实施例5中，人参皂苷Rb1转化为CK的HPLC结果见图3。图3中a表示β-葡萄糖苷酶与Rb1反应0h的结果，b表示β-葡萄糖苷酶与Rb1反应12h的结果，c表示β-葡萄糖苷酶与Rb1反应24h的结果，d表示人参皂苷Rb1、Rd、F2和CK对照品。
综合上述实施例的结果表明，本发明的利用双歧杆菌所生产的β-葡萄糖苷酶可以将人参皂苷Rb1转化为稀有人参皂苷CK，且转化率可以达到62-68％。所采用的方法操作简单、成本低、收率高，且绿色环保。本方法能实现稀有人参皂苷CK的产业化制备，能够满足医药和食品行业的市场需要，具有很高的市场应用价值。
表1 β-葡萄糖苷酶转化人参皂苷Rb1生成CK的转化率分析
| CK转化率(％) | |
| 实施例2 | 62.4 |
| 实施例3 | 63.6 |
| 实施例4 | 65.8 |
| 实施例5 | 66.2 |
| 实施例6 | 68.1 |
| 实施例7 | 66.9 |
| 实施例8 | 63.6 |
| 实施例9 | 65.1 |
| 实施例10 | 62.9 |
由表1可以看出，在双歧杆菌所生产的β-葡萄糖苷酶的作用下，反应24h，人参皂苷Rb1转化为稀有人参皂苷CK的转化率较高，可以达到62-68％，远远高于现有技术的水平。
Claims (6)
1.一种转化人参皂苷Rb1制备稀有人参皂苷CK的方法，其特征在于：通过β-葡萄糖苷酶实现转化，所述的β-葡萄糖苷酶来自B.breve ATCC 15700双歧杆菌；包括以下步骤：
（1）将双歧杆菌菌株厌氧培养24-48h后；超声波破碎细胞后离心，20-30℃条件下，上清液中加入硫酸铵至饱和度为10%-50%，调pH为4.5-4.6，4-8℃静置6-8h；离心，弃去上清液，将蛋白沉淀加入醋酸－醋酸钠缓冲液中溶解，得到含β-葡萄糖苷酶的粗酶液；
（2）含β-葡萄糖苷酶的粗酶液用凝胶过滤柱层析纯化，重复2~10次，分离得到β-葡萄糖苷酶；
（3）将人参皂苷Rb1溶于甲醇中，再与醋酸-醋酸钠缓冲液混合，配制成浓度为10mg/mL的人参皂苷Rb1底物溶液，将步骤（2）所得β-葡萄糖苷酶配制成20U/mL的酶液，再将人参皂苷Rb1底物溶液与β-葡萄糖苷酶液按照体积比为（10-50）:1的比例混合，pH4-5，35-55℃条件下反应24-48h，然后置于80-100℃水浴中灭活15-20min，室温条件下8000-10000rpm离心5-10min，取上清液在50-60℃下烘干，得到稀有人参皂苷CK。
2.根据权利要求1所述的转化人参皂苷Rb1制备稀有人参皂苷CK的方法，其特征在于：所述的厌氧培养，温度为30-40℃。
3.根据权利要求1所述的转化人参皂苷Rb1制备稀有人参皂苷CK的方法，其特征在于：所述步骤（1）的醋酸－醋酸钠缓冲液，pH为6。
4.根据权利要求1所述的转化人参皂苷Rb1制备稀有人参皂苷CK的方法，其特征在于：所述的凝胶过滤柱层析，凝胶为Sephadex G-200凝胶，洗脱液为pH6.8的磷酸盐缓冲液。
5.根据权利要求1所述的转化人参皂苷Rb1制备稀有人参皂苷CK的方法，其特征在于：所述步骤（3）的醋酸-醋酸钠缓冲液，浓度为0.02mol/L，pH为4.0-6.0。
6.权利要求1至5任一项所述的方法在转化人参皂苷Rb1制备稀有人参皂苷CK中的应用。
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| CN106047978B (zh) * | 2016-06-06 | 2019-08-27 | 浙江大学 | 一种利用天然皂苷生物转化合成稀有人参皂苷ck的方法 |
| CN108430596B (zh) * | 2016-12-14 | 2020-10-30 | 邦泰生物工程(深圳)有限公司 | 一种人参皂苷Rh2的纯化方法 |
| JP6859099B2 (ja) * | 2016-12-28 | 2021-04-14 | 小林製薬株式会社 | 男性ホルモン増加促進用組成物 |
| CN109750075B (zh) * | 2019-01-25 | 2020-12-01 | 山东省分析测试中心 | 一种稀有人参皂苷的转化方法 |
| CN111118095B (zh) * | 2019-12-10 | 2023-10-24 | 武汉克鲁金生物科技有限公司 | 乳酸克鲁维酵母菌水解人参皂苷生产人参皂苷ck提取物的方法 |
| CN111803533A (zh) * | 2020-07-01 | 2020-10-23 | 陕西巨子生物技术有限公司 | 降血糖、降血脂组合物、制备方法及其应用 |
| CN114507676B (zh) * | 2022-02-11 | 2023-06-16 | 湖南工程学院 | 一种人参皂苷合成调节的PgJAR1基因及其编码蛋白与应用 |
| CN114634939B (zh) * | 2022-05-07 | 2023-06-16 | 湖南工程学院 | 一种调节人参中茉莉酸甲酯合成的PgJMT1基因及其应用 |
| CN115120559B (zh) | 2022-07-22 | 2023-07-25 | 江南大学 | 一种提高人参皂苷Rg3和CK包埋率及纳米乳液稳定性的方法 |
| CN116426391B (zh) * | 2023-03-28 | 2024-02-23 | 陕西省微生物研究所 | 一株出芽短梗霉Aureobasidium pullulans P1及其应用 |
| CN116889583B (zh) * | 2023-08-26 | 2024-07-23 | 琛蓝(美国)营养制品股份有限公司 | 一种富含稀有人参皂苷的人参提取物的制备方法及其应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101820854A (zh) * | 2007-10-31 | 2010-09-01 | 株式会社太平洋 | 来自高丽参的黑色素生物合成抑制剂及含有该抑制剂的化妆品组合物用于皮肤增白的用途 |
-
2015
- 2015-11-18 CN CN201510802369.9A patent/CN105296587B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101820854A (zh) * | 2007-10-31 | 2010-09-01 | 株式会社太平洋 | 来自高丽参的黑色素生物合成抑制剂及含有该抑制剂的化妆品组合物用于皮肤增白的用途 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Purification and characterization of ginsenoside Rb1-metabolizing β-glucosidase from Fusobacterium K-60, a human intestinal anaerobic bacterium;Park SY等;《Biosci.Biotechnol.Biochem.》;20011231;第65卷(第5期);1163-1169 |
| 稀有人参皂苷IH901在体内外的生物转化及其生物活性;童宇星等;《生物工程学报》;20120625;第28卷(第6期);684-695 |
Also Published As
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