CN105287488A - 汉黄芩素在治疗急性肾损伤中的用途及其制备的治疗急性肾损伤药物 - Google Patents

Abstract

，涉及汉黄芩素的医药新用途，具体涉及汉黄芩素有效降低急性肾损伤所引起的炎症反应，进而发挥肾脏保护作用。

Description

汉黄芩素在治疗急性肾损伤中的用途及其制备的治疗急性肾损伤药物

技术领域

本发明属于药物工业领域，涉及汉黄芩素的医药新用途，具体涉及汉黄芩素在治疗急性肾损伤时的用途。

背景技术

急性肾损伤(AcuteKidneyInjury,AKI)是临床常见危重疾病，可导致肾脏不完全修复、持续慢性炎症和进展性纤维化，是引起继发性慢性肾脏病、肾衰竭及住院患者死亡的重要原因。迄今为止AKI尚无任何有效治疗措施，因此，寻找可以减轻组织损伤、促进修复、防止慢性纤维化发生的肾脏保护药物具有重要意义。

汉黄芩素(Wogonin)是从唇形科植物黄芩、半枝莲及夹竹桃科植物鳝藤等植物中分离得到的一种重要的黄酮类化合物，它主要存在于以上植物的根和茎中。以往研究结果显示，汉黄芩素具有广泛的生物活性，如抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒及神经保护作用等，其中抗肿瘤活性是目前国、内外研究的热点之一，但其防治急性肾损伤时的药理学作用尚未报道。

发明内容

本发明的目的在于提供汉黄芩素新的药物用途，具体涉及汉黄芩素在防治急性肾损伤时的用途。

一种汉黄芩素，分子式为C₁₆H₁₂O₅，其化学结构式如下：

其作为防治急性肾损伤药物的应用。

所述的汉黄芩素制备的治疗急性肾损伤药物，其特征在于：该药物由所述的汉黄芩素以及药学上可接受的辅助剂制得。

所述的利用汉黄芩素制备的治疗急性肾损伤药物，其特征在于其剂型为注射剂、片剂、丸剂、胶囊、悬浮剂或乳剂。

本发明的有益效果为：实验结果证实汉黄芩素可有效减轻急性肾损伤，保护肾功能，其作用机制与汉黄芩素降低炎症因子水平有关，应用前景广泛。

附图说明

图1汉黄芩素(wog)减轻体外实验中顺铂(Cisplatin)引起的肾小管上皮细胞损伤。如图(a)：MTT结果表明汉黄芩素明显减轻顺铂对HK2细胞的生长抑制作用；图(b)：WesternBlot及半定量分析结果显示汉黄芩素可抑制顺铂刺激的肾脏损伤分子(KIM-1)的蛋白表达水平。

图2汉黄芩素(wog)抑制体外实验中顺铂(Cisplatin)诱导的炎症因子水平。图(a)：Real-timePCR结果表明汉黄芩素能明显降低顺铂诱导HK2细胞中TNF-α的mRNA水平；图(b)：汉黄芩素能明显降低顺铂诱导HK2细胞中IL-1β的mRNA水平。

图3汉黄芩素(wog)降低小鼠急性肾损伤模型中血肌酐和血尿素氮水平，提示其对肾功能的保护作用。图(a)：不同浓度的汉黄芩素可不同程度地降低小鼠急性肾损伤模型中血肌酐的含量；图(b)：汉黄芩素降低小鼠急性肾损伤模型中血尿素氮的含量。

图4汉黄芩素(wog)降低小鼠急性肾损伤模型肾脏组织中的炎症因子水平。图(a)：Real-timePCR结果显示汉黄芩素能明显降低小鼠急性肾损伤模型中TNF-αmRNA水平；图(b)：汉黄芩素明显降低小鼠急性肾损伤模型中IL-1βmRNA水平。

具体实施方式

实施案例1：汉黄芩素在体外对顺铂诱发肾小管上皮细胞损伤的保护作用；

MTT法：将人肾小管上皮细胞(HK2)细胞接种于96孔板中，接种密度约为4000个细胞/孔。培养24h，换用无血清培养基饥饿12小时后，分组加入顺铂和汉黄芩素，分别为正常组(NC)、模型组(Cisplatin3.0μg/ml)、汉黄芩素低剂量(Cisplatin3.0μg/ml+Wog0.625μg/ml)、中剂量(Cisplatin3.0μg/ml+Wog1.25μg/ml)、高剂量组(Cisplatin3.0μg/ml+Wog2.5μg/ml)，继续培养24h。培养结束后每孔加入5g·L^-1的MTT溶液20μL，继续培育4h。吸去培养基，每孔加入150μL的DMSO，振荡，混匀。用酶标仪在492nm处测定各孔OD值，记录结果。以细胞存活率(Cellviability)对剂量作图。结果计算：细胞存活率＝(试验组细胞OD值-空白组细胞OD值)/(对照组细胞OD值-空白组细胞OD值)×100％。

WesternBlot：将对数生长期的HK2细胞接种于6孔板中，分别分为正常组(NC)、模型组(Cisplatin3.0μg/ml)和汉黄芩素组(Cisplatin3.0μg/ml+Wog2.5μg/ml)，每组重复3-4次实验。接种密度约为1.0×10⁵个细胞/ml，孵育24小时用无血清培养基饥饿12小时后分别加入刺激及药物。继续培养24小时。PBS洗三遍，收集细胞，提取总蛋白，通过WesternBlot法检测肾脏损伤分子KIM-1的蛋白表达并进行半定量分析。

实验结果如图1中图(a)，即MTT结果显示，顺铂刺激的HK2细胞经过低、中、高浓度的汉黄芩素处理后，该细胞的相对存活率值从顺铂刺激组的46.44％分别升高到76.72％、68.12％和84.32％，存活率增加约1.8倍。说明汉黄芩素对顺铂刺激的肾小管上皮细胞具有较好的保护作用。

图(b)即WesternBlot及半定量分析结果显示，顺铂刺激的HK2细胞经过汉黄芩素处理后，肾脏损伤分子KIM-1的蛋白表达水平明显受到抑制，证明汉黄芩素对顺铂引起肾小管上皮损伤的保护作用。

实施案例2：汉黄芩素对体外顺铂诱导炎症因子的抑制作用；

将HK2细胞接种于12孔板中，分别分为正常组(NC)、模型组(Cisplatin3.0μg/ml)和汉黄芩素组(Cisplatin3.0μg/ml+Wog2.5μg/ml)，每组重复3-4次实验。接种密度约为0.5×10⁵个细胞/孔，孵育24小时用无血清培养基饥饿12小时后分别加入刺激及药物。继续培养24小时。PBS洗三遍，收集细胞，提RNA，逆转录，扩增。

RealtimePCR结果如图2中图(a)，顺铂明显诱导肾小管上皮细胞中TNF-αmRNA水平的升高，而汉黄芩素处理组TNF-αmRNA表达明显被抑制，图(b)结果显示肾小管上皮细胞受到顺铂刺激后经汉黄芩素处理，其IL-1βmRNA表达明显下降，提示汉黄芩素可显著抑制顺铂诱发的炎症反应。

实施案例3：汉黄芩素对急性肾损伤模型中血肌酐(Creatinine)和血尿素氮(BUN)的影响。

将6-8周龄C57BL/6小鼠适应性培养1-2天，分为正常对照组(NC)、模型组(Cisplatin20mg/kg)、汉黄芩素低剂量组(Cisplatin20mg/kg+Wog12.5mg/kg)、中剂量组(Cisplatin20mg/kg+Wog25mg/kg)、高剂量组(Cisplatin20mg/kg+Wog50mg/kg)，每组6-10只。小鼠腹腔注射20mg/kg顺铂建立急性肾损伤模型并注射低、中、高剂量的汉黄芩素进行药物干预，3天后麻醉状态下收取血清样本及肾组织，并根据血肌酐和尿素氮试剂盒说明书检测动物模型血清中肌酐和尿素氮的含量(购自南京建成生物工程研究所)，

肌酐测试

肌酐含量(μmol/L)＝[(测定A2-K*测定A1)-(空白A2-K*空白A1)]/[(标准A2-K*标准A1)-(空白A2-K*空白)]*标准品浓度(442μmol/L)

注：稀释因子K＝(加样量+酶溶液A体积)/(加样量+酶溶液A体积+酶溶液B体积)＝186/246

尿素氮测试

尿素氮含量(mmol/L)＝(测定OD值-空白测定值)/(标准OD值-空白OD值)*标准浓度(10mmol/L)*样本测试前稀释倍数

实验结果如图3中图(a)显示，顺铂诱导模型组中血肌酐含量明显升高，肾功能恶化，而不同浓度的汉黄芩素有效降低模型组血肌酐水平，图(b)结果同样显示不同浓度的汉黄芩素有效降低模型组尿素水平，进一步证实汉黄芩素对急性肾损伤时肾功能具有保护作用。

实施案例4：汉黄芩素对急性肾损伤模型中炎症的抑制作用；

将6-8周龄C57BL/6小鼠适应性培养1-2天，分为正常对照组(NC)、模型组(Cisplatin20mg/kg)、汉黄芩素低剂量组(Cisplatin20mg/kg+Wog12.5mg/kg)、中剂量组(Cisplatin20mg/kg+Wog25mg/kg)、高剂量组(Cisplatin20mg/kg+Wog50mg/kg)，每组6-10只。小鼠腹腔注射20mg/kg顺铂建立急性肾损伤模型并注射低、中、高剂量的汉黄芩素，3天后麻醉状态下收取血样及肾组织，提取组织RNA，逆转录，扩增。

Real-timePCR结果如图4中图(a)，急性肾损伤模型中炎症因子TNF-αmRNA水平显著上升，而汉黄芩素可明显降低炎症因子水平，改善炎症，图(b)结果同样显示，汉黄芩素可降低顺铂引起的模型组肾脏IL-1βmRNA高表达，这可能是汉黄芩素保护急性肾损伤的作用机制之一。

Claims (3)

1.一种汉黄芩素，分子式为C₁₆H₁₂O₅，其化学结构式如下：

其作为防治急性肾损伤药物的应用。

2.一种利用如权利要求1所述的汉黄芩素制备的治疗急性肾损伤药物，其特征在于：该药物由所述的汉黄芩素以及药学上可接受的辅助剂制得。

3.根据权利要求2所述的利用汉黄芩素制备的治疗急性肾损伤药物，其特征在于其剂型为注射剂、片剂、丸剂、胶囊、悬浮剂或乳剂。