CN105267257A - 一种银杏叶提取物的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种银杏叶提取物的制备方法，包括以下步骤：1)乙醇加热回流提取；2)调pH至碱性，冷藏放置；3)过大孔树脂柱；4)微孔滤膜过滤，灭菌，获得银杏叶提取物。其中，步骤3)中使用25%的乙醇和10%乙酸钠溶液洗脱杂质峰，使用30～50%乙醇洗脱目标成分峰。本发明的有益效果在于：有效地去除了有害成分总银杏酸，降低了类过敏反应的发生，提高了安全性；提高目标成分纯度，提高产品质量；实现了自动在线检测。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域，具体涉及一种银杏叶提取物的制备方法。
背景技术
银杏叶是银杏科植物银杏(Ginkgobiloba)的叶，是当今地球上最古老的树种之一。银杏树为银杏科植物银杏(Ginkgobiloba.L.)又名公孙树，为我国特产植物，银杏叶提取物(GRE)主要含黄酮和内酯两类活性成分，黄酮以山柰酚(kaempferal)、槲皮素(quercetin)和异鼠李素(isorhamnetin)等甙类化合物为主，内酯以白果内酯及银杏内酯A、B和C(gimkgolideA.B.C)为主。由于银杏叶提取物在治疗冠心病、脑血栓、脑缺血、脑功能障碍、脑外伤后遗症、神经系统疾病的氧自由基清除等方面的疗效确切，目前已成为世界医药界研究的热点。
舒血宁注射液是银杏叶经提取制成的灭菌水溶液。主要的化学成分包括总银杏酸、内酯和黄酮等化合物。内酯和黄酮是有效活性成分，总银杏酸为有毒成分。目前，银杏叶提取物标准收载于《中国药典》2015年版一部。商务部中国医药保健品进出口商会正式对外发布的《银杏叶提取物国际商务标准》指出，国内外大量文献报道显示，总银杏酸具有细胞毒性、胚胎毒性、致敏性及致突变作用，被广泛认为是银杏叶提取物及其制剂中的毒性物质，WHO及多国药典(包括现行版EP和USP)要求银杏叶提取物中总银杏酸的含量不得大于5mg/kg，现行《中国药典》2015年版要求银杏叶提取物中含总银杏酸不得过10mg/kg，舒血宁注射液国家药品标准中对总银杏酸的限量已与国际接轨。控制总银杏酸的含量即可降低不良反应的发生，提高产品安生性。总银杏酸是公认的致敏物质，总银杏酸的去除，可使舒血宁注射液产品质量上升一个新台阶。
中国专利200710098492.2(名称：一种银杏叶提取液/物的制备方法)公开了一种银杏叶提取液/物的制备方法。该发明采用乙醇加热回流提取和大孔树脂柱纯化对银杏叶进行处理，从而获得银杏叶提取液/物。该发明提供的技术方案虽然能够制得符合质量标准要求的银杏叶提取液/物，但其所得银杏叶提取液/物中仍然存在有银杏酸，而且在大孔树脂柱纯化过程中使用了高浓度的乙醇(60～80%)，造成了资源的浪费。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种银杏叶提取物的制备方法。
为了达到上述目的，本发明是通过如下方案实现的：一种银杏叶提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)取银杏叶饮片粉碎，加入银杏叶重量10倍(v/w)的60～75%乙醇浸泡2～3小时，60～70℃加热回流提取2～3小时，过滤，得药渣和提取液；
(2)向步骤(1)所得药渣中加入银杏叶重量8倍(v/w)的60～75%乙醇，60～70℃加热回流提取1～2小时，过滤，得药渣和提取液；
(3)将步骤(1)和(2)所得提取液合并，当温度降至30～40℃时，用20%NaOH溶液调节pH至7.9～8.1，冷藏放置12～72小时，过滤，滤液于60～70℃浓缩回收乙醇，并浓缩至1～3g银杏叶/mL，加纯化水至银杏叶重量的10倍(v/w)，在温度小于40℃时用HCl调pH至2.0～3.0，在10～15℃的条件下静置2～8小时，过滤至滤液澄清，所述滤液浓缩至近红外光谱仪在线检测总黄酮醇苷含量大于5mg/mL，得浓缩物；
(4)①将步骤(3)所得浓缩物以1.0～1.6BV/h的流速加入到大孔树脂柱中，用1～3BV的纯化水以1.2～2.5BV/h的流速冲洗大孔树脂柱；
②用2～4BV的10%的乙酸钠溶液以1.0～4.0BV/h的流速冲洗大孔树脂柱；
③用纯化水以1.0～3.0BV/h的流速将大孔树脂柱冲洗至中性；
④用1～3BV的25%乙醇以1.0～3.0BV/h的流速冲洗大孔树脂柱；
⑤用2～6BV的30～60%乙醇以1.0～2.0BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，得到银杏叶提取物，所述银杏叶提取物经检测不含总银杏酸。
作为优选地，所述制备方法还包括以下步骤：将步骤(4)所得银杏叶提取物过滤，滤液于60～70℃浓缩回收乙醇至无醇味，并浓缩至4g银杏叶/mL，再加入乙醇使含醇量达到80%，用10%NaOH调pH至7.9～8.1，静置12～36小时，取上清液过滤，滤液浓缩回收乙醇至无醇味，浓缩物加注射用水稀释至总黄酮醇苷的含量为0.90～1.10mg/mL、银杏内酯A的含量为0.06～0.90mg/mL、银杏内酯B的含量为0.04～0.60mg/mL、银杏内酯C的含量为0.04～0.50mg/mL，用HCl调pH至2.0～3.0，过滤，滤液灌装于容器中，115℃、30分钟灭菌，冷冻，缓化，过滤，滤液用40%NaOH溶液调pH5.7～6.0，混匀，待温度下降至50℃以下，过滤，滤液灌装于容器中，经115℃、30分钟灭菌。
进一步优选地，在浓缩物加注射用水稀释的过程中使用近红外光谱仪进行在线检测。
优选地，步骤(4)中大孔树脂柱的洗脱液流出口安装有近红外光谱仪的样品流通池，所述洗脱液从样品流通池流过而被近红外光谱仪在线检测。
优选地，步骤(4)中第⑤步为用5BV的40%乙醇以1.0～2.0BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，所得洗脱液经检测不含总银杏酸。
优选地，步骤(3)中冷藏放置时间为24～48小时。
优选地，步骤(3)中所述过滤为采用3层中速滤纸过滤。
优选地，步骤(5)中所述过滤为采用0.45～0.80μm微孔滤膜过滤。
本发明中所述浓缩为真空旋转浓缩。
作为优选地，本发明中所述浓缩还可以为真空刮板浓缩。
在本发明提供的制备方法中，使用了近红外光谱仪对银杏叶提取物进行实时、多组分的在线分析检测。因近红外光谱法检测不需要对样品进行前处理，因此其不消耗样品，也不需要其它试剂，检测过程中无污染，安全性好。近红外光谱法实时获得检测结果，保证了银杏叶提取物制备过程的连续性，节约了时间。
与现有技术相比本发明提供的技术方案其优点在于：有效地去除了有害成分总银杏酸，降低了类过敏反应的发生，提高了安全性；提高目标成分纯度，提高产品质量；实现了自动在线检测。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作详细阐述，所述的实施例仅是对本发明的技术方案进行解释和说明，而不是对本发明的技术方案进行限制。
实施例1
(1)取银杏叶饮片1kg，粉碎，过8目筛，加入银杏叶重量10倍(v/w)的70%乙醇浸泡2小时，70℃加热回流提取2小时，采用3层中速滤纸过滤，得药渣和取液；
(2)向步骤(1)所得药渣中加入银杏叶重量8倍(v/w)的70%乙醇，70℃加热回流提取2小时，用3层中速滤纸过滤，得药渣和提取液；
(3)将步骤(1)和(2)所得提取液合并，当温度降至30℃时，用20%NaOH溶液调节pH至7.9，用3层中速滤纸过滤，滤液于70℃真空旋转浓缩回收乙醇，并浓缩至1g银杏叶/mL，加纯化水至银杏叶重量的10倍(v/w)，在35℃时用HCl调节pH至2.0，在10～15℃的条件下静置2小时，用3层中速滤纸过滤至滤液澄清，滤液于65℃真空旋转浓缩至近红外光谱在线检测总黄酮醇苷含量大于5mg/mL；
(4)将步骤(3)中的浓缩物以1.2BV/h的流速加入到大孔树脂柱中，用1BV的纯化水以1.3BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，记作样1；用2BV的10%的乙酸钠溶液以1.0BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，记作样2；用纯化水以1.0BV/h的流速将大孔树脂柱冲洗至中性，收集洗脱液，记作样3；用1.5BV的25%乙醇以1.2BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，记作样4；用6BV的30%乙醇以1.0BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，记作样5。所述洗脱液经近红外光谱仪的样品流通池进入收集瓶中，红外光谱仪对流经流通池的样品进行在线检测，所述样5为低杂质的银杏叶提取物；
(5)将所述银杏叶提取物用0.80μm微孔滤膜过滤后，70℃真空旋转浓缩回收乙醇至无醇味，并浓缩至4g银杏叶/mL，再加入乙醇使含醇量达到80%，用10%NaOH调pH至7.9，静置24h，取上清液0.65μm微孔滤膜过滤，滤液于65℃真空旋转浓缩回收乙醇至无醇味，浓缩物加注射用水稀释至经近红外光谱仪在线检测：总黄酮醇苷含量为0.90～1.10mg/mL、银杏内酯A的含量为0.06～0.90mg/mL、银杏内酯B的含量为0.04～0.60mg/mL、银杏内酯C的含量为0.04～0.50mg/mL，用HCl调pH至2.0，用0.45μm微孔滤膜过滤后，灌装于适宜的容器中，115℃、30分钟灭菌，冷冻，缓化，用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液用40％NaOH溶液调pH至5.7，混匀，待温度下降至50℃以下，0.45μm微孔滤膜过滤，灌装于适宜容器中，经115℃、30分钟灭菌。
实施例2
(1)取银杏叶饮片1kg，粉碎，过8目筛，加入银杏叶重量10倍(v/w)的75%乙醇浸泡3小时，60℃加热回流提取3小时，采用3层中速滤纸过滤，得药渣和取液；
(2)向步骤(1)所得药渣中加入银杏叶重量8倍(v/w)的75%乙醇，60℃加热回流提取2小时，用3层中速滤纸过滤，得药渣和提取液；
(3)将步骤(1)和(2)所得提取液合并，当温度降至40℃时，用20%NaOH溶液调节pH至8.1，冷藏放置12小时，冷藏后有沉淀产生，用3层中速滤纸过滤，滤液于60℃真空旋转浓缩回收乙醇，并浓缩至2g银杏叶/mL，加纯化水至银杏叶重量的5倍(v/w)，在30℃时用HCl调节pH至3.0，在10～15℃的条件下静置8小时，用3层中速滤纸过滤至滤液澄清，滤液于65℃真空旋转浓缩至近红外光谱在线检测总黄酮醇苷含量大于5mg/mL；
(4)将步骤(3)中的浓缩物以1.0BV/h的流速加入到大孔树脂柱中，用3BV的纯化水以1.2BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，记作样1；用4BV的10%的乙酸钠溶液以2.5BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，记作样2；用纯化水以1.2BV/h的流速将大孔树脂柱冲洗至中性，收集洗脱液，记作样3；用1BV的25%乙醇以1.0BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，记作样4；用2BV的60%乙醇以2.0BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，收集洗脱液，记作样5。所述洗脱液经近红外光谱仪的样品流通池进入收集瓶中，所述样5为低杂质的银杏叶提取物；
(5)将所述银杏叶提取物用0.65μm微孔滤膜过滤后，65℃真空旋转浓缩回收乙醇至无醇味，并浓缩至4g银杏叶/mL，再加入乙醇使含醇量达到80%，用10%NaOH调pH至8.1，静置12h，取上清液采用0.65μm微孔滤膜过滤，滤液于60℃真空旋转浓缩回收乙醇至无醇味，浓缩物加注射用水稀释至经近红外光谱仪在线检测：总黄酮醇苷含量为0.90～1.10mg/mL、银杏内酯A的含量为0.06～0.90mg/mL、银杏内酯B的含量为0.04～0.60mg/mL、银杏内酯C的含量为0.04～0.50mg/mL，用HCl调pH至3.0，用0.45μm微孔滤膜过滤后，灌装于适宜的容器中，115℃、30分钟灭菌，冷冻，缓化，用0.65μm微孔滤膜过滤，滤液用40％NaOH溶液调pH至5.8，混匀，待温度下降至50℃以下，0.45μm微孔滤膜过滤，灌装于适宜容器中，经115℃、30分钟灭菌。
实施例3
(1)取银杏叶饮片1kg，粉碎，过8目筛，加入银杏叶重量10倍(v/w)的60%乙醇浸泡2小时，68℃加热回流提取2小时，采用3层中速滤纸过滤，得药渣和取液；
(2)向步骤(1)所得药渣中加入银杏叶重量8倍(v/w)的60%乙醇，70℃加热回流提取1小时，用3层中速滤纸过滤，得药渣和提取液；
(3)将步骤(1)和(2)所得提取液合并，当温度降至35℃时，用20%NaOH溶液调节pH至8.0，冷藏放置24小时，冷藏后有沉淀产生，用3层中速滤纸过滤，滤液于68℃真空刮板浓缩回收乙醇，并浓缩至3g银杏叶/mL，加纯化水至银杏叶重量的10倍(v/w)，在30℃时用HCl调节pH至2.6，在10～15℃的条件下静置4小时，用3层中速滤纸过滤至滤液澄清，滤液于65℃真空刮板浓缩至近红外光谱在线检测总黄酮醇苷含量大于5mg/mL；
(4)将步骤(3)中的浓缩物以1.6BV/h的流速加入到大孔树脂柱中，用2BV的纯化水以2.5BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，记作样1；用3BV的10%的乙酸钠溶液以1.3BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，记作样2；用纯化水以3.0BV/h的流速将大孔树脂柱冲洗至中性，收集洗脱液，记作样3；用3BV的25%乙醇以3.0BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，记作样4；用5BV的40%乙醇以1.2BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，记作样5。所述洗脱液经近红外光谱仪的样品流通池进入收集瓶中，所述样5为低杂质的银杏叶提取物；
(5)将所述低杂质的银杏叶提取物用0.65μm微孔滤膜过滤后，68℃真空刮板浓缩回收乙醇至无醇味，并浓缩至4g银杏叶/mL，再加入乙醇使含醇量达到80%，用10%NaOH调pH至8.0，静置36h，取上清液采用0.65μm微孔滤膜过滤，滤液于68℃真空刮板浓缩回收乙醇至无醇味，浓缩物加注射用水稀释至经近红外光谱仪在线检测：总黄酮醇苷含量为0.90～1.10mg/mL、银杏内酯A的含量为0.06～0.90mg/mL、银杏内酯B的含量为0.04～0.60mg/mL、银杏内酯C的含量为0.04～0.50mg/mL，用HCl调pH至2.4，用0.45μm微孔滤膜过滤后，灌装于适宜的容器中，115℃、30分钟灭菌，冷冻，缓化，用0.65μm微孔滤膜过滤，滤液用40％NaOH溶液调pH至5.8，混匀，待温度下降至50℃以下，0.45μm微孔滤膜过滤，灌装于适宜容器中，经115℃、30分钟灭菌。
实施例4
(1)取银杏叶饮片1kg，粉碎，过8目筛，加入银杏叶重量10倍(v/w)的70%乙醇浸泡2小时，70℃加热回流提取2小时，采用3层中速滤纸过滤，得药渣和取液；
(2)向步骤(1)所得药渣中加入银杏叶重量8倍(v/w)的70%乙醇，70℃加热回流提取1.5小时，用3层中速滤纸过滤，得药渣和提取液；
(3)将步骤(1)和(2)所得提取液合并，当温度降至30℃时，用20%NaOH溶液调节pH至7.9，冷藏放置48小时，冷藏后有沉淀产生，用3层中速滤纸过滤，滤液于68℃真空刮板浓缩回收乙醇，并浓缩至2g银杏叶/mL，加纯化水至银杏叶重量的10倍(v/w)，在35℃时用HCl调节pH至3.0，在10～15℃的条件下静置2小时，用3层中速滤纸过滤至滤液澄清，滤液于68℃真空刮板浓缩至近红外光谱在线检测总黄酮醇苷含量大于5mg/mL；
(4)将步骤(3)中的浓缩物以1.5BV/h的流速加入到大孔树脂柱中，用1BV的纯化水以1.5BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，记作样1；用2BV的10%的乙酸钠溶液以4BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，记作样2；用纯化水以1.5BV/h的流速将大孔树脂柱冲洗至中性，收集洗脱液，记作样3；用1.5BV的25%乙醇以1.0V/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，记作样4；用5BV的40%乙醇以1.0BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，记作样5。所述洗脱液经近红外光谱仪的样品流通池进入收集瓶中，所述样5为低杂质的银杏叶提取物；
(5)将所述低杂质的银杏叶提取物用0.80μm微孔滤膜过滤后，60℃真空刮板浓缩回收乙醇至无醇味，并浓缩至4g银杏叶/mL，再加入乙醇使含醇量达到80%，用10%NaOH调pH至7.9，静置15h，取上清液0.65μm微孔滤膜过滤，滤液于70℃真空刮板浓缩回收乙醇至无醇味，浓缩物加注射用水稀释至经近红外光谱仪在线检测：总黄酮醇苷含量为0.90～1.10mg/mL、银杏内酯A的含量为0.06～0.90mg/mL、银杏内酯B的含量为0.04～0.60mg/mL、银杏内酯C的含量为0.04～0.50mg/mL，用HCl调pH至3.0，用0.45μm微孔滤膜过滤后，灌装于适宜的容器中，115℃、30分钟灭菌，冷冻，缓化，用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液用40％NaOH溶液调pH至6.0，混匀，待温度下降至50℃以下，0.45μm微孔滤膜过滤，灌装于适宜容器中，经115℃、30分钟灭菌。
实施例5
(1)取银杏叶饮片1kg，粉碎，过8目筛，加入银杏叶重量10倍(v/w)的60%乙醇浸泡2小时，70℃加热回流提取2小时，采用3层中速滤纸过滤，得药渣和取液；
(2)向步骤(1)所得药渣中加入银杏叶重量8倍(v/w)的60%乙醇，70℃加热回流提取1.5小时，用3层中速滤纸过滤，得药渣和提取液；
(3)将步骤(1)和(2)所得提取液合并，当温度降至30℃时，用20%NaOH溶液调节pH至8.0，冷藏放置72小时，冷藏后有沉淀产生，用3层中速滤纸过滤，滤液于65℃真空旋转浓缩回收乙醇，并浓缩至1g银杏叶/mL，加纯化水至银杏叶重量的10倍(v/w)，在30℃时用HCl调节pH至2.0，在10～15℃的条件下静置8小时，用3层中速滤纸过滤至滤液澄清，滤液于65℃真空旋转浓缩至近红外光谱在线检测总黄酮含量大于5mg/mL；
(4)将步骤(3)中的浓缩物以1.2BV/h的流速加入到大孔树脂柱中，用1BV的纯化水以1.8BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，记作样1；用2BV的10%的乙酸钠溶液以1.2BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，记作样2；用纯化水以1.5BV/h的流速将大孔树脂柱冲洗至中性，收集洗脱液，记作样3；用1.5BV的25%乙醇以1.2BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，记作样4；用5BV的30%乙醇以1.0BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，记作样5。所述洗脱液经近红外光谱仪的样品流通池进入收集瓶中，所述样5为低杂质的银杏叶提取物；
(5)将所述低杂质的银杏叶提取物用0.80μm微孔滤膜过滤后，70℃真空旋转浓缩回收乙醇至无醇味，并浓缩至4g银杏叶/mL，再加入乙醇使含醇量达到80%，用10%NaOH调pH至8.1，静置24h，取上清液0.65μm微孔滤膜过滤，滤液于65℃真空旋转浓缩回收乙醇至无醇味，浓缩物加注射用水稀释至经近红外光谱仪在线检测：总黄酮醇苷含量为0.90～1.10mg/mL、银杏内酯A的含量为0.06～0.90mg/mL、银杏内酯B的含量为0.04～0.60mg/mL、银杏内酯C的含量为0.04～0.50mg/mL，用HCl调pH至3.0，用0.45μm微孔滤膜过滤后，灌装于适宜的容器中，115℃、30分钟灭菌，冷冻，缓化，用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液用40％NaOH溶液调pH至5.7，混匀，待温度下降至50℃以下，0.45μm微孔滤膜过滤，灌装于适宜容器中，经115℃、30分钟灭菌。
含量测定实验
1、对上述实施例中步骤(3)中用20%NaOH溶液调节pH，冷藏放置后，过滤所得的滤液进行总黄酮醇苷、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和总银杏酸的含量测定：
总黄酮醇苷含量测定：分别取上述实施例中的冷藏放置后过滤所得滤液20mL，加甲醇-25%盐酸溶液(4:1)的混合溶液25mL，置水浴中加热回流30分钟，迅速冷却至室温，转移至50mL量瓶中，用甲酵稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品。其余步骤按《中国药典》2015年版一部银杏叶提取物含量测定项下的总黄酮醇苷的测定方法进行。所得结果见表1。
银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C的含量测定：分别取上述实施例中的冷藏放置后过滤所得滤液10mL，加2%盐酸溶液2滴，用乙酸乙酯振摇提取4次(15mL、10mL、10mL、10mL)，合并提取液，用5%醋酸钠溶液20mL洗涤，分取醋酸钠液，再用乙酸乙酯10mL洗涤，合并乙酸乙酯提取液及洗涤液，用水洗涤2次，每次20mL，分取水液，用乙酸乙酯10mL洗涤，合并乙酸乙酯液，回收溶剂至干，残液用甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品。其余步骤按《中国药典》2015年版一部银杏叶提取物含量测定项下的萜类内酯的测定方法进行。所得结果见表1。
总银杏酸含量测定：分别取上述实施例中的冷藏放置后过滤所得滤液10mL，浓缩至2mL，用甲醇定容至10mL，滤过，取续滤液，得供试品溶液。其余步骤按《中国药典》2015年版一部银杏叶提取物检查项下的总银杏酸的测定方法进行。所得结果见表1。
表1
由实施例和上表可看出随着冷藏时间的增加，总银杏酸的含量大幅下降，而总黄酮醇苷、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量下降并不明显，说明冷藏放置对总银杏酸的去除是有益的。
2、使用1中的方法对实施例中步骤(4)中样5的总黄酮醇苷、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和总银杏酸的含量进行测定，所得结查见表2。
表2
3、使用1中的方法对实施例中步骤(4)中样1至样4的总银杏酸含量进行测定，结果见表3。
表3
由表2和表3可以看出，在大孔树脂柱纯化过程中总银杏酸主要存在于样1至样4中，由于实施例1在步骤(3)中未进行冷藏放置，所以在样5中存在有少量的总银杏酸；实施例2至5在步骤(3)中进行了冷藏放置，通过大孔树脂柱纯化处理，总银杏酸在样1至样4中被完全洗脱出，在样5中不含总银杏酸。在表2中显示使用30～60%的乙醇洗脱可获得较好的黄酮醇苷和银杏内酯含量。
类过敏反应试验
1、试验材料
（1）0.6%依文思蓝生理盐水；
（2）0.1ng/mL总银杏酸对照品；
（3）生理盐水；
（3）实施例1至5中第5步所得银杏叶提取物；
（4）SD大鼠，SPF级，雌雄兼用。
2、试验方法
将大鼠背部和脊柱两侧的毛剃去，给大鼠经静脉注射含0.6%依文思蓝的生理盐水2mL/kg.。于静脉注射依文思蓝后10min，经腹腔注射戊巴比妥30mg/kg使之麻醉，分别在每只大鼠的脊柱两侧皮下注射总银银杏酸、实施例1至5中第5步所得银杏叶提取物和生理盐水对照，注射量为50μL。60min后处死大鼠，剪下背部皮肤，测量蓝斑大小。将蓝斑对应的皮肤剪碎，用甲酰胺萃取皮肤内的依文思蓝。将萃取的样本于3000r/min离心15min后，取上清液于610nm测吸光度。再根据依文思蓝标准曲线，计算依文思蓝渗出量。蓝斑直径和依文思蓝渗出量均计算各组平均值和标准差，采用方差分析进行组间比较P<0.05为有显著性差异。所得结果见表4。
表4
由上表可以看出，与生理盐水比较，实施例2至5中蓝斑直径和依文思蓝渗出量都无显著性差异；与总银杏酸和实施例1相比，实施例2至5中的蓝斑直径和依文思蓝渗出量都具有显著性差异。
根据本发明提供的技术方案制备的银杏叶提取物，未使大鼠受试部位皮肤血管的通透性增高，未发生类过敏反应。
Claims (10)
1.一种银杏叶提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)取银杏叶饮片粉碎，加入银杏叶重量10倍(v/w)的60～75%乙醇浸泡2～3小时，60～70℃加热回流提取2～3小时，过滤，得药渣和提取液；
(2)向步骤(1)所得药渣中加入银杏叶重量8倍(v/w)的60～75%乙醇，60～70℃加热回流提取1～2小时，过滤，得药渣和提取液；
(3)将步骤(1)和(2)所得提取液合并，当温度降至30～40℃时，用20%NaOH溶液调节pH至7.9～8.1，冷藏放置12～72小时，过滤，滤液于60～70℃浓缩回收乙醇，并浓缩至1～3g银杏叶/mL，加纯化水至银杏叶重量的10倍(v/w)，在温度小于40℃时用HCl调pH至2.0～3.0，在10～15℃的条件下静置2～8小时，过滤至滤液澄清，所述滤液浓缩至近红外光谱仪在线检测总黄酮醇苷含量大于5mg/mL，得浓缩物；
(4)①将步骤(3)所得浓缩物以1.0～1.6BV/h的流速加入到大孔树脂柱中，用1～3BV的纯化水以1.2～2.5BV/h的流速冲洗大孔树脂柱；
②用2～4BV的10%乙酸钠溶液以1.0～4.0BV/h的流速冲洗大孔树脂柱；
③用纯化水以1.0～3.0BV/h的流速将大孔树脂柱冲洗至中性；
④用1～3BV的25%乙醇以1.0～3.0BV/h的流速冲洗大孔树脂柱；
⑤用2～6BV的30～60%乙醇以1.0～2.0BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，得到银杏叶提取物，所述银杏叶提取物经检测不含总银杏酸。
2.根据权利要求1所述的银杏叶提取物的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括以下步骤：将步骤(4)所得银杏叶提取物过滤，滤液于60～70℃浓缩回收乙醇至无醇味，并浓缩至4g银杏叶/mL，再加入乙醇使含醇量达到80%，用10%NaOH调pH至7.9～8.1，静置12～36小时，取上清液过滤，滤液浓缩回收乙醇至无醇味，浓缩物加注射用水稀释至总黄酮醇苷的含量为0.90～1.10mg/mL、银杏内酯A的含量为0.06～0.90mg/mL、银杏内酯B的含量为0.04～0.60mg/mL、银杏内酯C的含量为0.04～0.50mg/mL，用HCl调pH至2.0～3.0，过滤，滤液灌装于容器中，115℃、30分钟灭菌，冷冻，缓化，过滤，滤液用40％NaOH溶液调pH5.7～6.0，混匀，待温度降至50℃以下，过滤，滤液灌装于容器中，经115℃、30分钟灭菌。
3.根据权利要求2所述的银杏叶提取物的制备方法，其特征在于，在浓缩物加注射用水稀释的过程中使用近红外光谱仪进行在线检测。
4.根据权利要求1所述的银杏叶提取物的制备方法，其特征在于，步骤(4)中大孔树脂柱的洗脱液流出口安装有近红外光谱仪的样品流通池，所述洗脱液从样品流通池流过而被近红外光谱仪在线检测。
5.根据权利要求1所述的银杏叶提取物的制备方法，其特征在于，步骤(4)中第⑤步为用5BV的40%乙醇以1.0～2.0BV/h的流速冲洗大孔树脂柱，收集洗脱液，所得洗脱液经检测不含总银杏酸。
6.根据权利要求1所述的银杏叶提取物的制备方法，其特征在于，步骤(3)中冷藏放置时间为24～48小时。
7.根据权利要求1所述的银杏叶提取物的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述过滤为采用3层中速滤纸过滤。
8.根据权利要求2所述的银杏叶提取物的制备方法，其特征在于，步骤(5)中所述过滤为采用0.45～0.80μm微孔滤膜过滤。
9.据权利要求1或2所述的银杏叶提取物的制备方法，其特征在于，所述浓缩为真空旋转浓缩。
10.据权利要求1或2所述的银杏叶提取物的制备方法，其特征在于，所述浓缩为真空刮板浓缩。
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Cited By (5)
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|---|---|---|---|---|
| CN106166164A (zh) * | 2016-07-29 | 2016-11-30 | 湖南绿蔓生物科技股份有限公司 | 一种高纯度银杏叶标准提取物的制备方法及其制品 |
| CN106214708A (zh) * | 2016-08-31 | 2016-12-14 | 重庆万物春生制药有限公司 | 一种银杏的提取方法 |
| CN107315058A (zh) * | 2017-05-04 | 2017-11-03 | 黑龙江珍宝岛药业股份有限公司 | 一种检测银杏叶提取液中总银杏酸的方法 |
| CN108272833A (zh) * | 2018-04-27 | 2018-07-13 | 万邦德制药集团股份有限公司 | 一种银杏叶提取物及其提取方法 |
| CN109883987A (zh) * | 2019-01-16 | 2019-06-14 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种银杏内酯a或银杏内酯b的含量测定方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102302525A (zh) * | 2011-09-02 | 2012-01-04 | 黑龙江珍宝岛药业股份有限公司 | 一种银杏叶组合物及其制备方法 |
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Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102302525A (zh) * | 2011-09-02 | 2012-01-04 | 黑龙江珍宝岛药业股份有限公司 | 一种银杏叶组合物及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 吴海霞等: "大孔树脂纯化银杏叶黄酮的研究", 《现代医药科技》 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106166164A (zh) * | 2016-07-29 | 2016-11-30 | 湖南绿蔓生物科技股份有限公司 | 一种高纯度银杏叶标准提取物的制备方法及其制品 |
| CN106166164B (zh) * | 2016-07-29 | 2020-01-10 | 湖南绿蔓生物科技股份有限公司 | 一种银杏叶提取物的制备方法及其制品 |
| CN106214708A (zh) * | 2016-08-31 | 2016-12-14 | 重庆万物春生制药有限公司 | 一种银杏的提取方法 |
| CN107315058A (zh) * | 2017-05-04 | 2017-11-03 | 黑龙江珍宝岛药业股份有限公司 | 一种检测银杏叶提取液中总银杏酸的方法 |
| CN108272833A (zh) * | 2018-04-27 | 2018-07-13 | 万邦德制药集团股份有限公司 | 一种银杏叶提取物及其提取方法 |
| CN109883987A (zh) * | 2019-01-16 | 2019-06-14 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种银杏内酯a或银杏内酯b的含量测定方法 |
| CN109883987B (zh) * | 2019-01-16 | 2021-07-27 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种银杏内酯a或银杏内酯b的含量测定方法 |
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