CN105267212A

CN105267212A - 依达拉奉与（-）-2-莰醇组合物的新应用

Info

Publication number: CN105267212A
Application number: CN201410318082.4A
Authority: CN
Inventors: 不公告发明人
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2014-07-04
Filing date: 2014-07-04
Publication date: 2016-01-27

Abstract

本发明涉及一种依达拉奉与(-)-2-莰醇组合物的新应用，本发明所述的依达拉奉与(-)-2-莰醇组合物用于制备治疗脑血管病药物，尤其是用于制备治疗缺血性脑血管病或者脑梗塞药物中的新应用。本发明在治疗脑血管病时，具有协同作用，可以显著增加治疗效果。

Description

依达拉奉与（-）-2-莰醇组合物的新应用

技术领域

本发明涉及依达拉奉与(-)-2-莰醇组合物在制备治疗和/或脑血管病药物中的新应用。

背景技术

脑血管病是一组严重危害人类健康的疾病，目前已成为人类致残和死亡的重要原因之一。

脑血管病(cerebrovasculardisease，简称CVD)是指由于脑血管异常导致的脑部病变。脑卒中(stroke)—般指急性脑血管疾病。

脑血管病可简单分为两类，一类是由于血液流动的减少或断流造成的缺血性脑血管病，另一类是由于血管破裂造成出血性脑血管病。缺血性脑血管病主要是脑梗塞(包括脑血栓形成和脑栓塞)，除了脑梗塞以外，还有一种在24小时内可以完全恢复，不留任何后遗症的缺血性脑血管病，被称为短暂性脑缺血发作或一过性脑缺血发作，医生习惯简称为TIA，也叫作小中风。出血性脑血管病也分为两类，一类是血管破裂，血液流入脑实质内，称为脑出血或脑溢血。另一类是血管破裂，血液流人包绕脑周围的蛛网膜下腔，称为蛛网膜下腔出血，医生简称为SAH。

3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮，又称依达拉奉，其化学结构式为

分子式、分子量为：C₁₀H₁₀N₂O、174.19

3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮是一种脑保护剂，可清除自由基，抑制脂质过氧化，从而抑制脑细胞、血管内皮细胞、神经细胞的氧化损伤。大鼠在缺血/缺血再灌注后静脉给予3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮，可阻止脑水肿和脑梗塞的进展，并缓解所伴随的神经症状，抑制迟发性神经元死亡。3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮临床成人用量为60mg/d(毫克/天)，研究发现其有一定的副作用，如程度不明的急性肾功能衰竭、肝功能异常、血小板减少及弥漫性血管内凝血等不良反应。

(-)-2-莰醇的化学结构式如式为

分子式、分子量为：C₁₀H₈O、154.25

动物实验及离体实验表明：(-)-2-莰醇具有促进药物透过血脑屏障的作用。

并且，现有技术中也未见将3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮与(-)-2-莰醇作为治疗脑血管病药物同时使用的报道。

发明内容

本发明的目的是提供依达拉奉与(-)-2-莰醇药物组合物的新应用，二者配合使用时具有协同作用，可以提高治疗脑血管病的效果。

依达拉奉与(-)-2-莰醇药物组合物用于制备治疗脑血管病药物。

优选地，依达拉奉与(-)-2-莰醇的重量比为优选的重量比为

优选地，依达拉奉与(-)-2-莰醇药物组合物用于制备治疗缺血性脑血管病或者脑梗塞药物中的新应用。

本发明所提供依达拉奉与(-)-2-莰醇的药物组合物，在治疗脑血管病时，具有协同作用，可以显著增加治疗效果。

具体实施方式

实施例1:对局灶性脑缺血再灌损伤的保护的作用

1、3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮/(-)-2-莰醇对局灶性脑缺血再灌损伤的作用

1.1材料与方法

1.1.1实验动物

Sprague-Dawley(SD)大鼠，雄性，清洁级，体重260-290g

1.1.2受试药品

3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮原料药，纯度99％以上

(-)-2-莰醇原料药，纯度99％以上

3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮注射液，规格10mg/5ml

1.1.3方法

1.1.3.1脑缺血模型的制备

采用颈内动脉线栓法制备大脑中动脉阻塞(Middlecerebralarteryocclusion，MCAO)脑缺血再灌注模型。大鼠用7％水合三氯乙醛(6ml/kg)麻醉后，俯卧位固定于手术台上，消毒皮肤，颈部正中切开，分离右侧颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉，轻轻剥离迷走神经，结扎并剪断颈外动脉，循颈内动脉向前，结扎翼腭动脉。夹闭颈总动脉近心端，从颈外动脉的结扎线的远端作一切口，插入外径为0.285mm的尼龙线，进过颈总动脉分叉进入颈内动脉，然后徐徐插入至有轻微阻力为止(自分叉处约20mm)，阻断大脑中动脉的所有血供，右侧脑缺血2.Oh后，轻轻拔出尼龙线，恢复血供进行再灌注，缝合皮肤，消毒。

1.1.3.2动物分组与给药

实验动物分为三个组方比例组(3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮/(-)-2-莰醇重量比例分别为3mg/kg:6mg/kg、3mg/kg:3mg/kg、3mg/kg:1.5mg/kg)，阳性药3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮3mg/kg组及模型组，共5组。制备脑缺血模型后，将动物机率均等单盲分配至各组。动物于再灌注后立即静脉给药1次，模型组动物给于等体积的生理盐水。脑缺血后24小时评价神经缺陷症状，而后处死动物，取脑，染色，拍照测定脑梗死面积。

1.1.3.3神经缺陷症状评分及脑梗死面积的测定

采用改良Bederson5分制法进行神经缺陷症状评价。采用单盲法评价脑缺血后大鼠的神经缺陷症状，即由试验设计者将动物按组标记，对神经缺陷症状进行评分的试验者不知道动物的分组情况，评分结束后，评分者将各种标记的评分结果呈交设计者，由设计者揭盲，获得各试验组每只动物的评分。

附：神经缺陷症状评分Bederson5分制法

0：提尾悬空吋，动物的两前肢均伸向地板方向，且无其他行为缺陷

1：提尾悬空时，动物的手术对(左)侧前肢表现为腕肘屈曲、肩内旋、肘外展、紧贴胸壁

2：将动物置于光滑平板上，推手术侧肩向对侧移动时阻力降低

3：动物自由行走时，向手术对侧环行或转圈

脑梗死程度的测定，动物处死后，断头取脑，去除嗅球、小脑和低位脑干，用生理盐水冲洗大脑表面血迹，吸去表面残留水迹，于-20℃放置20min，取出后立即于视线交叉平面垂直向下作冠状切面，并向后每隔2mm切一片，将脑片置于2％TTC染液中孵育(37℃90min)，正常脑组织染成深红色，缺血脑组织则呈苍白色，用生理盐水冲洗后，迅速将脑片从前向后按顺序排成一排，吸干表面残留水迹，拍照。

照片用图像分析软件处理，根据公式计算左脑相应的体积以及梗死灶体积，求出梗死灶百分比。

梗死体积计算法：

V＝t(A₁+A₂+A₃..............+A_n)

t为切片厚度，A为梗死面积。

％I＝100％×(VC-VL)/VC

％I为梗死体积百分比，VC为对照侧(左脑半球)脑体积，VL为梗死侧(右脑半球)非梗死区域体积。

1.1.3.4统计学分析

定量资料表示为均值±标准差。脑梗死面积和神经缺陷症状评分采用单因素方差分析，Scheffe's检验测定两组间的差异显著性。将差异P<0.05定义为差异显著。

1.2实验结果

1.2.1对神经缺陷症状的影响

神经缺陷症状的程度见表1，与模型组相比，3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮/(-)-2-莰醇三种重量比例：2:1、1:1、2:1均能显著改善神经缺陷症状(p＝0.001，0.002，0.000)。3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮组与模型组比较，虽有改善神经缺陷症状的趋势，但未达到显著水平。

表1.3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮与(-)-2-莰醇复方用药对神经缺陷症状的影响

表1

其中，X±SD，*，与模型组相比，p<0.05。

1.2.2对脑梗塞面积的影响

对脑梗塞面积的影响见表2，与模型组相比，3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮/(-)-2-莰醇重量比例3mg/kg:6mg/kg、3mg/kg:3mg/kg、3mg/kg:1.5mg/kg均能显著减小动物缺血再灌后脑梗塞面积(p＝0.002，0.000)。3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮组与模型组比较，虽有减小脑梗面积的趋势，但未达到显著水平。

表2.3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮与(-)-2-莰醇复方用药对脑梗面积的影响

表2

其中，X±SD，*，与模型组相比，p<0.05。

2、3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮/(-)-2-莰醇(重量比2:1、:1:1、2:1)对局灶性脑缺血再灌损伤的作用

2.1材料与方法

2.1.1实验动物

Sprague-Dawley(SD)大鼠，雄性，清洁级，体重260-290g

2.1.2受试药品

3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮原料药，纯度99％以上

(-)-2-莰醇原料药，纯度99％以上

3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮注射液，规格10mg/5ml

2.1.3方法

实验方法及分析评价方法同1.1.3.

2.2实验结果

2.2.1对神经缺陷症状的影响

神经缺陷症状的程度见表3，与模型组相比，3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮/(-)-2-莰醇三种重量比例3mg/kg:3mg/kg、3mg/kg:1.5mg/kg、3mg/kg:0.75mg/kg均能显著改善神经缺陷症状(p＝0.001，0.000，0.009)。3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮组与模型组比较，虽有改善神经缺陷症状的趋势，但未达到显著水平。

表3.3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮与(-)-2-莰醇复方用药对神经缺陷症状的影响

表3

其中，X±SD，*，与模型组相比，p<0.05。

2.2.2对脑梗塞面积的影响

对脑梗塞面积的影响见表4，与模型组相比，3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮/(-)-2-莰醇重量比例2:1、4:1均能显著减小动物缺血再灌后脑梗塞面积(p＝0.000，0.007)。

表4.3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮与(-)-2-莰醇复方用药对脑梗面积的影响

表4

其中，X±SD，*，与模型组相比，p<0.05。

实施例2：取3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮2g，(-)-2-莰醇0.25g，加入200g的聚乙二醇400溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml，即得。

实施例3：取3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮2g，(-)-2-莰醇0.5g，加入200g的聚乙二醇400溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml，即得。

实施例4：取3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮2g，(-)-2-莰醇lg，加入200g的聚乙二醇400溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml，即得。

实施例5：取3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮2g，(-)-2-莰醇2g，加入200g的聚乙二醇400溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml，即得。

实施例6：取3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮2g，(-)-2-莰醇4g，加入200g的聚乙二醇400溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml，即得。

实施例7：取3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮2g，(-)-2-莰醇8g，加入200g的聚乙二醇400溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml，即得。

实施例8：取3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮2g，(-)-2-莰醇0.5g，加入200g的丙二醇溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml，即得。

实施例9：取3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮2g，(-)-2-莰醇1g，加入200g的丙二醇溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml，即得。

实施例10：取3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮2g，(-)-2-莰醇2g，加入200g的丙二醇溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml，即得。

实施例11：取3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮2g，(-)-2-莰醇0.5g，加入200g的聚乙二醇200溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml，即得。

实施例12：取3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮2g，(-)-2-莰醇1g，加入200g的聚乙二醇200溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml，即得。

实施例13：取3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮2g，(-)-2-莰醇2g，加入200g的聚乙二醇200溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml，即得。

Claims

1.一种依达拉奉与(-)-2-莰醇组合物的新应用，其特征在于，所述的3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮与(-)-2-莰醇组合物用于制备治疗脑血管病药物。

2.根据权利要求1所述的依达拉奉与(-)-2-莰醇组合物的新应用，其特征在于，所述脑血管病为缺血性脑血管病。

3.根据权利要求1所述的依达拉奉与(-)-2-莰醇组合物的新应用，其特征在于，所述脑血管病为脑梗塞。

4.根据权利要求所述的依达拉奉与(-)-2-莰醇组合物的新应用，其特征在于，所述依达拉奉和(-)-2-莰醇的重量比为

5.根据权利要求4所述的依达拉奉与(-)-2-莰醇组合物的新应用，其特征在于，所述依达拉奉与(-)-2-莰醇的重量比为