CN105248832A - 一种从菠菜中提取铁蛋白的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从菠菜中提取铁蛋白的方法，将采集来的新鲜菠菜进行表面杀菌，经榨汁、酶解后通过蛋白质沉淀、离心分离再通过溶解、透析得到最终产物。本发明制得的铁蛋白成品的含铁量可达31.6mg/kg，因此本发明能充分把菠菜中的铁提取出来，解决了贫血病人“补铁”难的问题。
Description
技术领域
本发明涉及生物提取技术，具体是一种从菠菜中提取铁蛋白的方法。
背景技术
铁是几乎所有生物体所必须的元素。铁含量在地壳中居第四位，但在生物体中的含量则很低，这与三价铁离子易形成难溶的化合物导致生物对铁的吸收利用程度降低有关。铁蛋白是一种铁结合和储存蛋白，广泛存在于动物、植物和微生物体内，是生物体内的一种保守性较高的多功能亚基蛋白。
菠菜又叫波斯菜，赤根菜，属于耐寒性绿叶类蔬菜，是我国早春淡季供应的主要蔬菜之一。菠菜有“营养模范菜”之称，它富含类胡萝卜素、维生素C、铁、钙、镁等多种营养素。因此，人们又称菠菜为“补铁菜”，医生对贫血病人总是提醒多吃菠菜用以补铁。但因菠菜中含铁元素的量很小，吃菠菜达不到真正补铁的目的，如果说吃菠菜达到补铁的目的，那么，一个人一次需要吃100斤或更多才能达到补铁的量，因此，通过吃菠菜补铁的作用微乎其微。本发明采用生物提取技术将菠菜中的铁元素提取出来，解决了人们食用菠菜补铁的不方便，同时提取的铁元素易于吸收。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从菠菜中提取铁蛋白的方法，将采集来的新鲜菠菜进行表面杀菌，经榨汁、酶解后通过蛋白质沉淀、离心分离再通过溶解、透析得到最终产物。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种从菠菜中提取铁蛋白的方法，包括以下步骤：
（1）先将采集来的菠菜去除黄叶及虫咬部分，用清水冲洗干净后，放入含70%-75%的酒精溶液中浸泡，然后在筛网上沥干酒精溶液，放入无菌水中洗去酒精药液，在筛网上沥干，再用无菌水重复洗一次以保证无酒精溶液残留；
（2）为了减少微生物的污染，将杀菌清洗后的菠菜立即送入无菌工作室内进行后续处理，先用切草机将菠菜切成1-2cm的小段，然后放入榨汁机中进行榨汁，榨汁后加入纤维素酶和果胶酶，混合均匀，置于45-55℃环境温度下进行酶促反应，反应过程中保持温度不变，持续时间为25-35min；
（3）将经过酶促反应的溶液用灭菌的塑料容器收集，利用真空过滤机对其进行真空脱气过滤，以脱去溶液中溶解的氧，真空脱气后能够有效防止溶液中的活性物质和营养成分被溶液中溶解的氧所氧化；
（4）将经过真空过滤后的溶液倒入容器中，在75℃恒温水浴环境中加热时间持续15min，并注意缓慢匀速搅拌使溶液受热均匀，使不耐热的杂蛋白变性沉淀，保持溶液处于静置状态4℃环境中冷却过夜；
（5）用离心管取经过冷却过夜的溶液在高速冷冻离心机中以15000g的离心力离心30min，弃沉淀，用广口容器取上清液；以35g硫酸胺/100ml液体的比例缓慢地向上清液中加入硫酸胺粉末，同时缓慢搅拌，沉淀蛋白质，保持溶液处于静置状态置4℃环境中再冷却过夜；
（6）取经过再次冷却过夜后的溶液置于离心管中，然后在高速冷冻离心机中以15000g的离心力离心30min，弃上清，取黄色沉淀于大烧杯中，加入0.025mol/L的Tris-HCL缓冲液溶解，边加入边搅拌直至沉淀完全溶解后，停止加入0.025mol/L的Tris-HCL缓冲液；
（7）将经过溶解沉淀后的的溶液移至透析袋中，保持4℃环境温度不变；将溶液在0.025mol/L的Tris-HCL缓冲液中透析，并多次更换缓冲液以除去盐类，得到黄色的铁蛋白溶液；
（8）将透析后的溶液用小型真空减压浓缩器进行浓缩处理，将经浓缩后的铁蛋白溶液在空气压力0.3MPa，进口温度140-160℃，出口温度65-75℃工艺条件下用离心喷雾干燥机进行喷雾干燥，即得粉末状米黄色铁蛋白成品。
作为本发明进一步的方案：所述步骤（2）中，酶促反应的温度为50℃，持续时间为30min。
作为本发明进一步的方案：所述步骤（6）和步骤（7）中，Tris-HCL缓冲液的pH=7.25。
作为本发明进一步的方案：所述步骤（8）中，喷雾干燥的进口温度为150℃，出口温度为70℃。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：菠菜中的铁是生态植物铁，由于植物中的含量很少，人们食用菠菜达不到补铁的目的，本发明通过提取透析等手段，能充分把菠菜中的铁提取出来，解决了贫血病人“补铁”难的问题。本发明制得的铁蛋白成品经安徽省阜阳市产品质量监督检验所检测，结果显示其含铁量可达31.6mg/kg。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本发明实施例中，一种从菠菜中提取铁蛋白的方法，包括以下步骤：
（1）先将采集来的菠菜去除黄叶及虫咬部分，用清水冲洗干净后，放入含70%-75%的酒精溶液中浸泡，然后在筛网上沥干酒精溶液，放入无菌水中洗去酒精药液，在筛网上沥干，再用无菌水重复洗一次以保证无酒精溶液残留；
（2）为了减少微生物的污染，将杀菌清洗后的菠菜立即送入无菌工作室内进行后续处理，先用切草机将菠菜切成1-2cm的小段，然后放入榨汁机中进行榨汁，榨汁后加入纤维素酶和果胶酶，混合均匀，置于45℃环境温度下进行酶促反应，反应过程中保持温度不变，持续时间为35min；
（3）将经过酶促反应的溶液用灭菌的塑料容器收集，利用真空过滤机对其进行真空脱气过滤，以脱去溶液中溶解的氧，真空脱气后能够有效防止溶液中的活性物质和营养成分被溶液中溶解的氧所氧化；
（4）将经过真空过滤后的溶液倒入容器中，在75℃恒温水浴环境中加热时间持续15min，并注意缓慢匀速搅拌使溶液受热均匀，使不耐热的杂蛋白变性沉淀，保持溶液处于静置状态4℃环境中冷却过夜；
（5）用离心管取经过冷却过夜的溶液在高速冷冻离心机中以15000g的离心力离心30min，弃沉淀，用广口容器取上清液；以35g硫酸胺/100ml液体的比例缓慢地向上清液中加入硫酸胺粉末，同时缓慢搅拌，沉淀蛋白质，保持溶液处于静置状态置4℃环境中再冷却过夜；
（6）取经过再次冷却过夜后的溶液置于离心管中，然后在高速冷冻离心机中以15000g的离心力离心30min，弃上清，取黄色沉淀于大烧杯中，加入0.025mol/L的Tris-HCL缓冲液（pH=7.25）溶解，边加入边搅拌直至沉淀完全溶解后，停止加入0.025mol/L的Tris-HCL缓冲液（pH=7.25）；
（7）将经过溶解沉淀后的的溶液移至透析袋中，保持4℃环境温度不变；将溶液在0.025mol/L的Tris-HCL缓冲液（pH=7.25）中透析，并多次更换缓冲液以除去盐类，得到黄色的铁蛋白溶液；
（8）将透析后的溶液用小型真空减压浓缩器进行浓缩处理，将经浓缩后的铁蛋白溶液在空气压力0.3MPa，进口温度160℃，出口温度75℃工艺条件下用离心喷雾干燥机进行喷雾干燥，即得粉末状米黄色铁蛋白成品。
实施例2
本发明实施例中，一种从菠菜中提取铁蛋白的方法，包括以下步骤：
（1）先将采集来的菠菜去除黄叶及虫咬部分，用清水冲洗干净后，放入含70%-75%的酒精溶液中浸泡，然后在筛网上沥干酒精溶液，放入无菌水中洗去酒精药液，在筛网上沥干，再用无菌水重复洗一次以保证无酒精溶液残留；
（2）为了减少微生物的污染，将杀菌清洗后的菠菜立即送入无菌工作室内进行后续处理，先用切草机将菠菜切成1-2cm的小段，然后放入榨汁机中进行榨汁，榨汁后加入纤维素酶和果胶酶，混合均匀，置于55℃环境温度下进行酶促反应，反应过程中保持温度不变，持续时间为25min；
（3）将经过酶促反应的溶液用灭菌的塑料容器收集，利用真空过滤机对其进行真空脱气过滤，以脱去溶液中溶解的氧，真空脱气后能够有效防止溶液中的活性物质和营养成分被溶液中溶解的氧所氧化；
（4）将经过真空过滤后的溶液倒入容器中，在75℃恒温水浴环境中加热时间持续15min，并注意缓慢匀速搅拌使溶液受热均匀，使不耐热的杂蛋白变性沉淀，保持溶液处于静置状态4℃环境中冷却过夜；
（5）用离心管取经过冷却过夜的溶液在高速冷冻离心机中以15000g的离心力离心30min，弃沉淀，用广口容器取上清液；以35g硫酸胺/100ml液体的比例缓慢地向上清液中加入硫酸胺粉末，同时缓慢搅拌，沉淀蛋白质，保持溶液处于静置状态置4℃环境中再冷却过夜；
（6）取经过再次冷却过夜后的溶液置于离心管中，然后在高速冷冻离心机中以15000g的离心力离心30min，弃上清，取黄色沉淀于大烧杯中，加入0.025mol/L的Tris-HCL缓冲液（pH=7.25）溶解，边加入边搅拌直至沉淀完全溶解后，停止加入0.025mol/L的Tris-HCL缓冲液（pH=7.25）；
（7）将经过溶解沉淀后的的溶液移至透析袋中，保持4℃环境温度不变；将溶液在0.025mol/L的Tris-HCL缓冲液（pH=7.25）中透析，并多次更换缓冲液以除去盐类，得到黄色的铁蛋白溶液；
（8）将透析后的溶液用小型真空减压浓缩器进行浓缩处理，将经浓缩后的铁蛋白溶液在空气压力0.3MPa，进口温度140℃，出口温度65℃工艺条件下用离心喷雾干燥机进行喷雾干燥，即得粉末状米黄色铁蛋白成品。
实施例3
本发明实施例中，一种从菠菜中提取铁蛋白的方法，包括以下步骤：
（1）先将采集来的菠菜去除黄叶及虫咬部分，用清水冲洗干净后，放入含70%-75%的酒精溶液中浸泡，然后在筛网上沥干酒精溶液，放入无菌水中洗去酒精药液，在筛网上沥干，再用无菌水重复洗一次以保证无酒精溶液残留；
（2）为了减少微生物的污染，将杀菌清洗后的菠菜立即送入无菌工作室内进行后续处理，先用切草机将菠菜切成1-2cm的小段，然后放入榨汁机中进行榨汁，榨汁后加入纤维素酶和果胶酶，混合均匀，置于50℃环境温度下进行酶促反应，反应过程中保持温度不变，持续时间为30min；
（3）将经过酶促反应的溶液用灭菌的塑料容器收集，利用真空过滤机对其进行真空脱气过滤，以脱去溶液中溶解的氧，真空脱气后能够有效防止溶液中的活性物质和营养成分被溶液中溶解的氧所氧化；
（4）将经过真空过滤后的溶液倒入容器中，在75℃恒温水浴环境中加热时间持续15min，并注意缓慢匀速搅拌使溶液受热均匀，使不耐热的杂蛋白变性沉淀，保持溶液处于静置状态4℃环境中冷却过夜；
（5）用离心管取经过冷却过夜的溶液在高速冷冻离心机中以15000g的离心力离心30min，弃沉淀，用广口容器取上清液；以35g硫酸胺/100ml液体的比例缓慢地向上清液中加入硫酸胺粉末，同时缓慢搅拌，沉淀蛋白质，保持溶液处于静置状态置4℃环境中再冷却过夜；
（6）取经过再次冷却过夜后的溶液置于离心管中，然后在高速冷冻离心机中以15000g的离心力离心30min，弃上清，取黄色沉淀于大烧杯中，加入0.025mol/L的Tris-HCL缓冲液（pH=7.25）溶解，边加入边搅拌直至沉淀完全溶解后，停止加入0.025mol/L的Tris-HCL缓冲液（pH=7.25）；
（7）将经过溶解沉淀后的的溶液移至透析袋中，保持4℃环境温度不变；将溶液在0.025mol/L的Tris-HCL缓冲液（pH=7.25）中透析，并多次更换缓冲液以除去盐类，得到黄色的铁蛋白溶液；
（8）将透析后的溶液用小型真空减压浓缩器进行浓缩处理，将经浓缩后的铁蛋白溶液在空气压力0.3MPa，进口温度150℃，出口温度70℃工艺条件下用离心喷雾干燥机进行喷雾干燥，即得粉末状米黄色铁蛋白成品。
菠菜中的铁是生态植物铁，由于植物中的含量很少，人们食用菠菜达不到补铁的目的，本发明通过提取透析等手段，能充分把菠菜中的铁提取出来，解决了贫血病人“补铁”难的问题。本发明实施例3制得的铁蛋白成品经安徽省阜阳市产品质量监督检验所检测，结果显示其含铁量为31.6mg/kg。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (4)
1.一种从菠菜中提取铁蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）先将采集来的菠菜去除黄叶及虫咬部分，用清水冲洗干净后，放入含70%-75%的酒精溶液中浸泡，然后在筛网上沥干酒精溶液，放入无菌水中洗去酒精药液，在筛网上沥干，再用无菌水重复洗一次；
（2）将杀菌清洗后的菠菜立即送入无菌工作室内进行后续处理，先用切草机将菠菜切成1-2cm的小段，然后放入榨汁机中进行榨汁，榨汁后加入纤维素酶和果胶酶，混合均匀，置于45-55℃环境温度下进行酶促反应，反应过程中保持温度不变，持续时间为25-35min；
（3）将经过酶促反应的溶液用灭菌的塑料容器收集，利用真空过滤机对其进行真空脱气过滤，以脱去溶液中溶解的氧；
（4）将经过真空过滤后的溶液倒入容器中，在75℃恒温水浴环境中加热时间持续15min，并注意缓慢匀速搅拌使溶液受热均匀，使不耐热的杂蛋白变性沉淀，保持溶液处于静置状态4℃环境中冷却过夜；
（5）用离心管取经过冷却过夜的溶液在高速冷冻离心机中以15000g的离心力离心30min，弃沉淀，用广口容器取上清液；以35g硫酸胺/100ml液体的比例缓慢地向上清液中加入硫酸胺粉末，同时缓慢搅拌，沉淀蛋白质，保持溶液处于静置状态置4℃环境中再冷却过夜；
（6）取经过再次冷却过夜后的溶液置于离心管中，然后在高速冷冻离心机中以15000g的离心力离心30min，弃上清，取黄色沉淀于大烧杯中，加入0.025mol/L的Tris-HCL缓冲液溶解，边加入边搅拌直至沉淀完全溶解后，停止加入0.025mol/L的Tris-HCL缓冲液；
（7）将经过溶解沉淀后的的溶液移至透析袋中，保持4℃环境温度不变；将溶液在0.025mol/L的Tris-HCL缓冲液中透析，并多次更换缓冲液以除去盐类，得到黄色的铁蛋白溶液；
（8）将透析后的溶液用小型真空减压浓缩器进行浓缩处理，将经浓缩后的铁蛋白溶液在空气压力0.3MPa，进口温度140-160℃，出口温度65-75℃工艺条件下用离心喷雾干燥机进行喷雾干燥，即得粉末状米黄色铁蛋白成品。
2.根据权利要求1所述的从菠菜中提取铁蛋白的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，酶促反应的温度为50℃，持续时间为30min。
3.根据权利要求1所述的从菠菜中提取铁蛋白的方法，其特征在于，所述步骤（6）和步骤（7）中，Tris-HCL缓冲液的pH=7.25。
4.根据权利要求1所述的从菠菜中提取铁蛋白的方法，其特征在于，所述步骤（8）中，喷雾干燥的进口温度为150℃，出口温度为70℃。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107712525A (zh) * | 2017-11-15 | 2018-02-23 | 杨秀丽 | 从食叶草中提取蛋白质的方法及利用该蛋白质制作的饮料 |
| CN111616256A (zh) * | 2020-06-15 | 2020-09-04 | 宁翠平 | 一种提取食叶菜蛋白的方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101617784A (zh) * | 2008-07-01 | 2010-01-06 | 宋俊文 | 一种紫菜中食用级藻胆蛋白的制备方法 |
| CN102008654A (zh) * | 2010-12-12 | 2011-04-13 | 杨军 | 一种铁皮石斛鲜汁原液的制作方法 |
| CN102127166A (zh) * | 2010-01-14 | 2011-07-20 | 中国科学院地质与地球物理研究所 | 一种从生物组织或工程菌中分离纯化铁蛋白的方法 |
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101617784A (zh) * | 2008-07-01 | 2010-01-06 | 宋俊文 | 一种紫菜中食用级藻胆蛋白的制备方法 |
| CN102127166A (zh) * | 2010-01-14 | 2011-07-20 | 中国科学院地质与地球物理研究所 | 一种从生物组织或工程菌中分离纯化铁蛋白的方法 |
| CN102008654A (zh) * | 2010-12-12 | 2011-04-13 | 杨军 | 一种铁皮石斛鲜汁原液的制作方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| SUK-HEUNG OH等: "Purification and Characterization of Phytoferritin", 《J.BIOCHEM.MOL.BIOL》 * |
| 徐宜为: "《实验免疫学技术》", 31 July 1979, 科学出版社 * |
| 黄耀江等: "《蛋白质工程原理及应用》", 31 August 2007, 中央民族大学出版社 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107712525A (zh) * | 2017-11-15 | 2018-02-23 | 杨秀丽 | 从食叶草中提取蛋白质的方法及利用该蛋白质制作的饮料 |
| CN111616256A (zh) * | 2020-06-15 | 2020-09-04 | 宁翠平 | 一种提取食叶菜蛋白的方法 |
Also Published As
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